Nrf2在烧伤脓毒症肺中的动态表达研究

-目的探讨Nrf2在烧伤脓毒症大鼠肺组织中的表达规律。方法将Wistar大鼠分为正常对照组、单纯烫伤组、烫伤复合金葡菌脓毒症组和烫伤复合绿脓杆菌脓毒症组。依不同时相（2、8、24h）,分为三个亚组,检测肺脏组织中Nrf2mRNA、Nrf2的蛋白质表达情况。结果正常大鼠肺组织中Nrf2mRNA较高表达（74．0±7．0）;单纯烫伤大鼠肺组织中Nrf2mRNA表达明显下调,分别为34．5±1．9、50．4±2．2、32．1±1．4（t=5．69～14．63,P〈0．01）;金黄色葡萄球菌所致烫伤脓毒症大鼠肺组织中Nrf2mRNA明显下调,分别为53．1±5．0、14．4±1．6、48．5±1．9,其中伤后8h达峰值（t=5．59-29．3,P〈0．01）;绿脓杆菌所致烫伤脓毒症大鼠伤后2hNff2mRNA表达无明显下降（71．0±8．1,P〉0．05）,但伤后8、24h均明显下调（24．8±2．1、4．1±2．0,t=21．33,68．1,P〈0．01）。结论Nrf2直接参与了烧伤后免疫应答反应。     

严重烫伤后早期大鼠胃黏膜组织中热休克蛋白70表达变化及胰岛素干预作用

目的研究热休克蛋白（HSP70）在严重烫伤早期大鼠胃黏膜组织中动态表达变化及胰岛素和HSP70对严重烫伤早期大鼠胃黏膜组织的保护作用，探讨胰岛素促进HSP70表达的可能机制。方法采用大鼠烫伤模型，以免疫组织化学的方法和显微图像分析方法观察伤后3、6、12、24和48h不同时相点胃黏膜组织中HSP70的表达情况及胃黏膜组织的病理形态学变化。结果治疗组除12h时相点（9．40±1．52，P=0．065）外其余不同时相点HSP70的表达水平分别高于烫伤组相同时相点HSP70的表达水平[（6．80±1．10，8．60±0．55，10．80±1．64，11．40±1．34），P〈0．05]，治疗组各时相点胃黏膜损伤指数分别低于烫伤组相同时相点损伤指数[（4．05±O．36，11．97±1．15，20．98±2．83，13．92±O．94，1．60±0．55），P〈0．05]。病理形态学变化显示对照组胃黏膜组织结构完整无损伤，烫伤早期SD大鼠胃黏膜组织损伤明显，治疗组SD大鼠胃黏膜组织损伤较烫伤组明显减轻。相关分析结果显示，HSP70与胃黏膜损伤指数、血糖之间呈正相关（r=0．904，0．961，P〈0．01）。结论胰岛素能够明显增强严重烫伤早期SD大鼠胃黏膜组织内HSP70的表达，促进胃黏膜组织HSP70的合成，可能是胰岛素保护胃黏膜组织的重要机制之一。     

机械力对骶韧带成纤维细胞细胞外基质mRNA表达的调节

目的观察机械力在盆底功能障碍性疾病中的作用,探讨机械力对子宫骶韧带成纤维细胞形态及细胞外基质mRNA表达的调节。方法选择本院因非POP行子宫切除手术患者的骶韧带,进行成纤维细胞的原代培养,并进行鉴定。选取13例3—4代的骶韧带成纤维细胞加载、加力,采用荧光实时定量PCR测量机械力对I、III型胶原、基质金属蛋白酶-1（matrixmetalloproteinase-1,MMP-1）、基质金属蛋白酶抑制剂（tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达量的调节。结果以静态不加力组（Oh）为对照组,应力刺激下,细胞的形态和伸展方向发生改变;加载力4、15hI型胶原mRNA表达量（0．7774-0．251,0．730±0．248）较0h（1．000±0．284）下降（q=4．5786,4．6458,P〈0．05）,24hmRNA表达量（1．102±0．308）回升,与0h差异无统计学意义（P〉0．05）。IⅡ型胶原mRNA4、15、24h表达量（4．771±0．879,6．146±1．109,5．022±0．907）较0h（1．001±0．284）升高（q=15．9481,21．7647,17．0099,P〈0．01）。MMP-1mRNA4h、15h、24h表达量（6．420±2．143,23．695±2．221,20．169±2．794）较0h（1．000±0．414）升高（q=9．3421,39．1178,33．0403,P〈0．01）。TIMP-14、15hmRNA表达量（0．455±0．370,0．481±0．386）较0h（1．000±0．425）下降（q=6．5265,6．3106,P〈0．05）,24hmRNA表达量（0．883±0．536）回升,与0h差异无统计学意义（P〉0．05）。结论子宫骶韧带成纤维细胞的形态、伸展方向及合成功能受机械力的调节,盆底基质重塑可能是对机械力的适应性改变。     

牵拉性脊髓损伤后FK506对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3凋亡通路的干预作用

目的：探讨大鼠脊髓牵拉性损伤后应用FK506对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）凋亡通路的干预作用。方法：成年雄性Wistar大鼠96只，随机分为脊髓牵拉性损伤后应用FK506治疗组和应用生理盐水对照组．于伤后不同时间点（6h、1、3、7、14、21d）取材，应用尼氏染色观察神经元病理变化，免疫组化和图像定量分析法检测Caspase-3蛋白表达，四肽酶荧光底物法检测Caspase-3活性水平，原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导duTP标记技术观察神经细胞凋亡。结果：尼氏染色显示治疗组病理学改变明显轻于对照组；治疗组和对照组均存在Caspase-3的表达和神经细胞凋亡，两者都于伤后7d达高峰，但治疗组较对照组明显减少（P〈0．05，P〈0．01）；Caspase-3活性检测治疗组与对照组相比显著降低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：FK506能抑制Caspase-3蛋白的表达，降低Caspase-3活性，减少神经细胞凋亡从而减轻继发性脊髓损害。     

Snail mRNA及E—cadherin mRNA在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨Snail mRNA及E—cadherin mRNA在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法应用原位杂交技术测30例乳腺单纯性增生、30例乳腺导管内癌和70例乳腺浸润性导管癌组织中Snail mRNA及E—cadherin mRNA的表达。结果Snail mRNA及E—cadherin mRNA在乳腺单纯性增生、乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率分别为23．3％、46．7％、81．4％和96．7％、66．7％、35．7％,差异有统计学意义（P〈0．01）;Snail mRNA及E-cadherin mRNA在同组间表达差异有统计学意义（P〈0．05）;Snail mRNA表达与年龄、肿瘤大小和组织学分级无关（P〉0．05）,淋巴结转移与否Snail mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．01）;E-cad mRNA表达与年龄、肿瘤大小无关（P〉0．05）,淋巴结转移与否、不同组织学分级E-cad mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．01）;Snail mRNA与E-cadherin mRNA的表达呈负相关（r=-0．56,P=0．00）。结论Snail mRNA过表达与E-cadherin mRNA低表达可能参与乳腺癌浸润转移的发生,并与淋巴结转移密切相关,因而检测两者的表达对判断乳腺癌预后、转移有重要价值。     

低分子肝素对脓毒症大鼠腹主动脉内皮细胞蛋白C受体和蛋白酶活化受体1表达的影响

目的观察低分子肝素（LMWH）对脓毒症大鼠腹主动脉内皮细胞（VEC）蛋白C受体（EPCR）和蛋白酶活化受体1（PARl）表达的影响。方法采用组织贴块法培养24只Wister大鼠腹主动脉VEC,1：3传代至第4代,分为对照组（n=6）、脓毒症组（LPS1μg／ml,n=6）、LMWH组（LPS1μg/ml＋LMWH5μg/ml,n=6）。分别在第1、3、5天采用流式细胞术（FCM）检测VEC表面的EPCR和PARl的表达。结果脓毒症组EPCR和PARl的表达各时间点均较对照组有明显下降（P〈0．05或P〈0．01）,以第5天最为明显（26．53±7．21VS39．26±2．62,q=6．45,P〈0．01：53．214±15．10VS86．54±11．34,q=6．94,P〈0．01）。LMWH组EPCR和PARl的表达各时间点均高于脓毒症组（P〈0．05）;与对照组比较,EPCR在第1天仍有明显降低（40．86±1．63VS45．41.1±2．82,q=3．51,P〈0．05）,但第3、5天接近对照组水平（41．20±3．32VS42．83±2．66,P〉0．05;39．23±3．33VS39．26±2．62,P〉0．05）,PARl各时问点与对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论LMWH能有效改善脓毒症内皮细胞EPCR和PARl表达抑制的状态。     

大鼠实验性胃炎中PGP9．5、C—kit及胃泌素、生长抑素表达的观察研究

目的通过观察胃炎大鼠组织PGP9．5及c—kit与胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）表达变化，探讨胃cajal间质细胞（ICC）、肠神经及胃肠激素在胃炎发病中的作用。方法45只大鼠分胃炎A组、胃炎B组、对照组3组，分别灌喂幽门螺杆菌（Hp）SS1菌株、2％阿司匹林和0．6N盐酸1：1混合液、生理盐水，处死后取胃窦及胃体组织PGP9．5染色及检测胃体黏膜C-kit及胃窦黏膜GAS、SS表达，测量胃壁神经元胞体、c—kit阳性表达的ICC最长直径（Dmax，μm）、平均面积（μm^2）及光密度（nm）以及GAS、SS表达的积分光密度，并进行比较。结果（1）胃炎A组、B组胃壁神经元表达PGP9．5细胞平均面积、光密度均低于对照组（P〈0．01），胃炎A组与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）胃炎A组GAS表达明显高于对照组，而SS表达则低于对照组（P〈0．05）。胃炎B组与对照组比较两项表达结果差异均无统计学意义（P〉0．05）。直线相关分析显示SS与GAS呈负相关（r=-0．333，P〈0．01）；（3）胃炎A组、B组C-kit表达细胞分布面积和直径均明显小于对照组（P〈0．05），胃炎A组与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05），三组c—kit表达细胞的积分光密度比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Hp感染和NSAID可能改变胃壁神经元及ICC的形态结构。Hp感染可明显抑制胃窦SS分泌，而增加GAS分泌；NSAID诱导的胃炎对GAS与SS的影响不显著。     

miRNAlet7、Ras在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNAlet7（1et7）、Ras在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义。方法利用原位杂交方法检测let7、免疫组化方法检测Ras在68例非小细胞肺癌（肺癌组）及20例癌旁正常肺组织（对照组）中的表达。结果let7在肺癌组中的阳性表达率（39．7％）低于对照组（75．0％）（P〈0．05）、Ras在肺癌组中的阳性表达率（66．2％）高于对照组（25．0％）（P〈0．01）;let7阳性率与患者年龄、性别及肿瘤组织类型、分化程度、分期无关（P〉0．05）,Ras阳性率与吸烟史、患者性别及肿瘤组织类型有关（P〈0．01）,与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期无关（P〉0．05）;let7与Ras在非小细胞肺癌组织中表达呈明显负相关（r=-0．627,P〈0．01）;let7阳性表达组2年生存率明显优于阴性表达组（X2=4．84,P〈0．05）;Ras阳性表达与阴性表达组2年生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论let7的低表达、Ras的高表达参与了肺癌的发生发展,let7阳性表达与预后密切相关;Ras可协同参与肺癌的发生发展。     

二甲双胍对大鼠2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝治疗作用的实验研究

目的探讨二甲双胍对大鼠2型糖尿病（T2DM）并发非酒精性脂肪肝（NAFLD）的治疗作用。方法高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立T2DM并发NAFLD大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、二甲双胍治疗组,每组16只,并设立正常对照组20只。治疗组给予二甲双胍125mg／（kg·d）灌胃治疗。于实验第16（治疗后8周）、20周（治疗后12周）末分批处死大鼠,检测肝功能、空腹血糖、血清胰岛素和血脂水平,光镜下观察大鼠肝脏组织学形态,分别以免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肝组织UCP-2蛋白和UCP-2mRNA的表达情况。结果模型组大鼠血清转氨酶、空腹血糖、血清胰岛素及血脂水平均较正常组明显升高,胰岛素敏感指数较正常组明显下降（P〈0．01）;肝脏于第16周末出现不同程度脂肪变性,第20周末出现严重脂肪变性;肝组织UCP-2蛋白表达高于正常组（P均〈0．01）,UCP-2mRNA表达于第16周末[（1．789±0．301）VS（0．245±0．087）,t=11．02,P〈0．011和20周末[（1．989±0．207）VS（0．262±0．058）,t=17．93,P〈0．01]均高于正常组,以20周末更为明显。在16周末（治疗后8周）和20周末（治疗后12周）,治疗组大鼠血清转氨酶、血糖及血脂水平均有改善,胰岛素敏感指数明显升高（P〈0．01或P〈0．05）,肝细胞脂肪变性明显减轻。治疗组肝组织UCP-2蛋白表达在16周末和20周末均明显低于模型组（P均〈0．01）,UCP．2mRNA表达在16周末[（0．665±0．088）VS（1．789±0．301）,t=7．81,P〈0．01]和20周末[（0．610±0．102）VS（1．989±0．207）,t=9．98,P〈0．01]均明显低于模型组,差异有统计学意义。结论二甲双胍可降低T2DM并发NAFLD大鼠肝脏脂肪含量,调控肝脏UCP-2的适度表达,对治疗2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝具有一定的作用。     

单核细胞趋化蛋白1 mRNA在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后脑组织趋化因子单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达，探讨其在HIBD中的作用。方法采用结扎7d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8％氧气环境2．5h，制作HIBD模型。采用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应，动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中MCP—1在HIBD后不同时间点表达的变化。假手术组为对照组。结果HIBD后6h右侧脑组织MCP-1 mRNA表达至高峰，显著高于对照组（P〈0．05）。12h组仍高于对照组（P〈0．05）。24h～72h降至接近对照组水平（P〉0．05）。结论HIBD后MCP-1 mRNA表达显著升高，推测MCP-1参与了缺氧缺血脑组织损伤的过程。     

三氟乙醚致大鼠反复惊厥后海马caspase-3、FasL的动态表达

目的研究幼年大鼠反复惊厥后海马组织caspase-3、FasL表达的变化。方法72只20日龄健康Sprague—Dawley（SD）大鼠随机分为2组：正常对照组、惊厥组。通过三氟乙醚反复吸入（1次／d，连续6d），制作幼年大鼠惊厥动物模型。用免疫组化（SP）法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7d海马组织中caspase-3和FasL蛋白的表达，RT—PCR方法检测各时相点海马组织中caspase-3 mRNA的表达。结果反复惊厥结束后1、3、7d海马组织caspase-3、FasL的表达和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论caspase-3、FasL参与了幼年期惊厥性脑损伤的病理过程。     

大鼠弥漫性轴索损伤后丘脑NGBmRNA的表达

目的研究弥漫性轴索损伤后大鼠丘脑组织中脑红蛋白（NGB）mRNA的表达变化,初步探讨NGB与颅脑损伤的关系。方法选择改进的Mamarou法制作弥漫性轴索损伤模型,采用RT-PCR检测颅脑损伤后不同时间丘脑组织中NGBmRNA的表达情况,并对所得数据进行分析。结果在伤后30min脑组织中NGBmRNA的表达明显升高,而24h时则有所下降,48h又上升达高峰。结论弥漫性颅脑损伤后,丘脑组织中NGBmRNA表达升高,提示其可能参与神经元损伤后应激及继发缺血、缺氧性脑损伤的应答机制。     

脊髓损伤后大鼠甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的表达及甲基强的松龙干预后的变化

目的：研究大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶（glycylproline dipeptidyl aminopeptidase,GPDA）基因表达变化的影响。方法：Sprague-Dawley大鼠36只。将所有大鼠随机分为三组,假手术组、脊髓损伤未使用药物干预组（创伤组）、脊髓损伤＋甲强龙干预组（甲强龙组）。在大鼠脊髓损伤后24h将损伤的脊髓组织切取,进行逆转录PCR反应并检测GDPA的表达。结果：假手术组GDPA的mRNA的表达的相对丰度为1.5403±0.1604;脊髓损伤24h后创伤组GDPA的表达的相对丰度为0.5994±0.3414,与假手术组相比差异有非常显著统计学意义（P〈0.01）;GDPA在脊髓损伤后使用甲强龙干预组中的表达相对丰度为1.8432±0.1294,与创伤组比较差异有非常显著统计学意义（P〈0.01）。结论：大剂量甲基强的松龙的早期使用能促进脊髓损伤后甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表达恢复,发挥细胞保护作用。     

创伤性休克大鼠肝组织HSP70 mRNA表达变化及甘氨酸的干预影响

目的观察创伤性休克大鼠肝组织HSP70 mRNA表达变化及甘氨酸的干预影响。方法检测甘氨酸治疗组、休克组和对照组肝组织HSP70 mRNA表达；观察肝组织病理改变并测定血清ALT和AST水平。结果休克组和治疗组肝组织HSP70 mRNA表达分别于复苏后6、12h达高峰。血清ALT、AST随时间延长逐渐增高；光镜下病理改变也随时间延长而损害加重。与休克组比较，治疗组肝组织HSP70 mRNA表达明显增强、血清ALT和AST明显降低且肝组织光镜下病理损害明显改善（P均〈0．05）。结论甘氨酸可增强肝组织HSP70表达，减轻创伤性休克后继发的肝脏损害。     

补体C5aR受体在UUO大鼠模型肾组织中的表达

目的动态检测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中补体C5a受体（C5aR）的表达变化,从而探讨其在肾小管间质纤维化发展中的可能作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为UUO组及假手术（SOR）组,每组18只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第5、10、15天分别处死每组中6只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化检测肾组织C5aR的表达,RT-PCR检测C5aR的基因表达情况。结果UUO组第5天肾小管扩张,小管间质细胞部分变性,梗阻后第10天小管间质细胞可见坏死,间质纤维增多,第15天可见弥漫的肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点显著高于SOR组（P〈0．01）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中仅有少量C5aR表达,UUO组术后第5、10及15天C5aR表达[（7．94±2．67）IOD,（12．39±2．64）IOD,（13．37±0．98）IOD]显著高于对应时间点的SOR组[（4．50±2．32）IOD,（5．69±1．73）IOD,（4．30±1．45）IOD]（P〈0．05,P〈0．01）,术后第10天明显高于第5天（P〈0．01）,而从第10天到第15天仅稍有增高。C5aRmRNA在UUO组从术后第5天到第10天梗阻侧肾脏C5aRmRNA表达明显增多（0．10±0．02到0．34±0．10）,而从第10天到第15天表达未见明显增多,甚至有降低的趋势（第15天为0．32±0．06）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中C5aR的表达在早期随着梗阻时间延长而上调,晚期则增多缓慢,其基因水平表达情况同蛋白基本一致,提示C5aR可能在肾脏局部通过与循环系统中的C5a结合在肾间质纤维化早期起作用。     

大鼠急性脊髓损伤后引起肺损伤肺中NMDA受体的表达及意义

目的探讨大鼠急性SCI后引起肺损伤肺组织中NMDA受体的表达及其意义。方法36只Wister大鼠SCI造模后分为模型组（A组）和MK-801处理组（B组）,在12h、1d、3d 3个时间点（各6只）处死大鼠,B组动物均于处死前6h腹腔给予0．1mg／kg MK-801。另设6只为对照组,取肺组织测W／D、肺泡灌洗液中细胞和蛋白漏出量,并观察肺显微形态的变化。结果病理结果示A组大鼠伤后12h即有出血、水肿,伤后3d达到高峰,MK-801可以改善上述情况且可明显减轻SCI后W／D、红、白细胞记数及蛋白含量的升高（P〈0．05）。结论大鼠急性SCI后早期出现肺组织出血和水肿,这可能是早期呼吸功能衰竭和肺部感染的病理基础,并可能以激活上调NMDA受体而引起急性肺损伤。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究

目的 探讨间充质干细胞（MSCS）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响.方法 选取SD大鼠4只作骨髓间充质细胞的分离与培养,提取MSCS;60只大鼠制做脊髓横断损伤模型,细胞移植组24只,PBS（磷酸盐缓冲液）液组24只,空白对照组12只.于脊髓损伤后第7天,无菌条件下,细胞移植组以微量注射器缓慢注入含MSCS的培养液5μl,PBS组注入缓冲液体5 μl,对照组未加任何干预因素.分别于术后7、14、28 d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓,细胞移植组与磷酸盐缓冲组取出损伤节段的脊髓（8只/时点）,空白对照组于同一节段取出相应脊髓（4只/时点）.应用免疫组化法观察MSCS移植后大鼠脊髓损伤区BDNF的表达变化.结果 细胞接种24 h后贴壁生长,72 h细胞增殖,有细胞团形成,在传代过程中,4代以前的细胞倍增时间约为4～6 d,至10代以后细胞增殖能力有所减弱,胞体变得扁平,若加入碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,则可维持基增殖能力和形态.脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,间充质干细胞移植术后第7、14及28天,细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达,与缓冲液组相比较差异有统计学意义（14 d：0.31±0.03 vs 0.25±0.04,P＜0.01）.结论 间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生可能是治疗脊髓损伤的重要机制.