山莨菪碱对兔失血性休克合并内毒素血症诱发肝脏损伤的保护机制研究

目的研究山莨菪碱(654-2)对失血性休克合并内毒素诱发肝脏损伤可能的保护机制。方法通过失血性休克和内毒素双向打击制备家兔休克模型,采用原位杂交法(ISH)结合原位定量分析检测肝枯否细胞(KC)中HSP70和NF-κB的mRNA表达,并进行肝脏组织的病理学光镜检查。结果休克组KC中HSP70mRNA的表达为(0.1565±0.0260),NF-κBmRNA表达为(0.1659±0.0103),均较正常对照组HSP70mRNA和NF-κBmRNA的表达[分别为(0.0328±0.0201)(0.0256±0.0043)]显著增高(P<0.01)。654-2能明显提高休克动物KC中HSP70的表达(0.2019±0.0396)同时能显著抑制NF-κBmRNA的表达(0.1276±0.0083)(P<0.01),并能缓解肝脏的损伤程度。结论654-2可能通过激活HSP70的表达,从而抑制NF-κB的活性发挥对失血性休克继发肝脏损害的保护作用。     

糖皮质激素应用于肝脏严重创伤中的效果评价

目的 探讨糖皮质激素在预防严重肝脏创伤后继发性损害中的作用。方法 以某院收治的19例创伤性肝损伤患者为研究对象，随机分成治疗组(用糖皮质激素)和对照组(未用糖皮质激素)，在用药前、后不同时期检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALb)和乳酸脱氢酶(LDH)，于术中及术后第2～3d(活检)取肝组织观察两组病理变化。结果 肝脏损伤早期两组ALT及LDH均升高，随时间延长治疗组明显下降，对照组则进一步升高；ALb虽在正常范围，但对照组呈下降趋势，而治疗组未下降；两组AST无明显变化。治疗组肝脏病理改变轻于对照组。结论 糖皮质激素应用于严重肝脏创伤治疗可减轻肝脏继发性损害，且表现出一定的时效关系。     

大鼠肝再生增强因子真核表达质粒对急性肝损伤的治疗作用

目的 研究肝再生增强因子真核表达质粒对急性肝损伤的保护作用。方法 将大鼠肝再牛增强因子基因与真核表达载体pcDNA3构建的重组质粒扩增、纯化后，以50μg／kg和2(10μg／kg的剂量分腹腔、静脉及腹腔和静脉联合途径注射给50％CCl4复制的急性肝损伤大鼠，检测血清AST、ALT水平、肝组织病理学变化及肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况，观察肝再生增强因子对大鼠急性肝损伤的保护作用。结果 光镜下观察肝组织病理损害均不同程度地减轻，各治疗组肝组织PCNA指数明显高于模型组；血清酶学结果表明重组质粒可显著降低外周血AST、ALT水平，200μg／kg比50μg／kg效显著，且以静脉注射效果最佳，其次为混合注射，腹腔注射效果最差。结论 pcDNA3-ALR重组质粒通过促进肝细胞增殖，降低血清AST、ALT水平发挥抗急性肝损伤的作用。     

阿维菌素原药诱导大鼠肝组织热应激蛋白70基因表达的研究

目的研究阿维菌素原药诱导大鼠肝组织HSP70基因表达的变化,为阿维菌素原药环境污染早期监控及暴露人群的保护提供依据。方法将清洁级Wistar大鼠随机分成3个染毒组和1个对照组,每组12只,雌雄各半,3个染毒组每日经口灌胃不同浓度阿维菌素原药植物油稀释液,最终染毒剂量分别为2.5、1.25、0.625 mg/kg,连续染毒14 d,对照组给予等量花生油。观察大鼠一般状况,测定血清总蛋白(TP),并运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70 mRNA表达的变化。结果2.5 mg/kg剂量组雌性大鼠血清TP低于对照组(P<0.05);各染毒组动物肝组织HSP70 mRNA表达呈剂量-效应关系,2.5 mg/kg及1.25 mg/kg剂量组HSP70 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论阿维菌素原药能够敏感地诱导HSP70基因的表达,提示检测HSP70基因表达可作为阿维菌素原药早期监控的指标之一。     

毒死蜱诱导大鼠肝组织热休克蛋白70基因表达的研究

目的 研究毒死蜱诱导大鼠肝组织热休克蛋白70(HSP70)基因表达的变化,为毒死蜱环境污染早期监控及暴露人群的保护提供依据.方法 将Wistar大鼠随机分成17、8.5及4.25 mg/kg毒死蜱染毒组及阴性对照组,每组12只,雌雄各半,每日经口灌胃不同浓度毒死蜱水稀释液,连续染毒14 d,运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70mRNA表达的变化,并进行血清胆碱酯酶(CHE)活力测定.结果 各剂量组动物肝组织HSP70 mRNA表达及CHE活力呈剂量-效应关系,8.5及17 mg/kg组HSP70 mRNA表达明显增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);4.25 mg/kg组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).17mg/kg组血清CHE活力明显下降,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HSP70基因是毒死蜱所致环境污染的敏感基因,提示HSP70基因表达可作为毒死蜱污染早期监控的生物标志物.     

低分子量肝素对重症急性胰腺炎大鼠肝组织的影响

目的观察低分子量肝素(LMWH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肝组织热休克蛋白70(HSP70)表达及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和IL-8水平的影响,探讨其对SAP肝损伤保护机制。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、LMWH组,检测术后24 h和72 h肝组织HSP70的表达、血清ALT、TNF-α、IL-6和IL-8水平及胰腺和肝组织形态学变化。结果镜下可见:假手术组胰腺和肝细胞形态正常;模型组胰腺和肝细胞呈片状坏死及大量炎细胞浸润;LMWH组胰腺和肝细胞有少量的炎细胞浸润及点状坏死。24 h与72 h肝HSP 70表达:24 h比72 h多,依次为:假手术组(0.212±0.051,0.207±0.039),模型组(0.371±0.064,0.314±0.048),LMWH组(0.262±0.062,0.232±0.049),LMWH组表达明显下调与模型组比较(P0.01)。血清ALT、TNF-α、IL-6和IL-8水平72 h比24 h低,LMWH组与模型组比较(P0.01),进一步分析,肝HSP 70表达与血清ALT、TNF-α、IL-6和IL-8间呈正相关。结论 LMWH通过下调肝组织HSP70表达,降低血清ALT、TNF-α、IL-6和IL-8水平,减轻SAP肝损伤。     

硝酸铅诱导大鼠肝组织及L-02细胞热应激蛋白70基因表达的研究

目的 研究铅诱导热应激蛋白70(HSP70)基因表达的变化.方法 以5、10、20μmol/L硝酸铅染毒胚胎肝细胞株L-02细胞,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增技术观察HSP70 mRNA表达的变化.将Wistar大鼠以180、60、20mg/kg3个剂量染毒硝酸铅,并设正常对照组,每组16只,雌雄各半,连续染毒28 d;运用RT-PCR扩增技术观察肝组织HSP70 mRNA表达的变化,并用原子吸收光谱法检测动物肝脏铅含量.结果 在L-02细胞未出现明显细胞毒作用的20μmol/L染铅组HSPT0基因表达明显上调.大鼠肝组织HSP70 mRNA表达与硝酸铅浓度呈剂量-反应关系,180、60 mg/kg染铅组HSP70 mRNA表达明显增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);20 mg/kg染铅组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).各染铅组大鼠肝脏铅含量较对照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 硝酸铅能够诱导大鼠肝组织及L-02细胞HSP70 mRNA表达明显增强.     

妊娠期肝内胆汁淤积症患者肝功能、胎盘组织中HSP70、HIF-1α的表达变化及其意义

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者肝功能指标、胎盘组织中热休克蛋白70(HSP70)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达变化及其意义。方法选取陕西省核工业二一五医院2015年1月—2017年1月收治的ICP患者69例作为ICP组,同期正常妊娠妇女60例作为对照组,检测两组的肝功能指标、胎盘组织中HSP70、HIF-1α的表达,并按照病情将ICP组分为轻度组、重度组进行分层分析。结果 ICP组患者的血清甘胆酸(GC)、总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)水平均显著高于对照组(P0.05),ICP组患者的HSP70、HIF-1α蛋白表达程度、阳性表达率均显著高于对照组(P0.05),重度ICP组患者的血清GC、TBA、ALT、AST、TBIL水平均显著高于轻度ICP组(P0.05),重度ICP组患者的HSP70、HIF-1α蛋白表达程度显著高于轻度ICP组(P0.05)。结论 ICP患者血清GC、TBA、ALT、AST、TBIL水平及胎盘组织中HSP70、HIF-1α蛋白表达均显著的升高,并且与病情程度密切相关。     

葛根素对铅中毒大鼠肝组织损害治疗的实验研究

目的:了解葛根素对铅中毒大鼠肝的保护作用,为中医治疗铅中毒肝损害提供实验依据。方法:选取6月龄健康大鼠80只分成对照组(Normal)、铅中毒模型组(LPD)、葛根素+铅中毒组1(P+LPD组1)和葛根素+铅中毒组2(P+LPD组2)各20只,8周后麻醉大鼠取左心血,处死后取肝脏。肝切片光镜观察肝组织形态结构,并对血清的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)及肝匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和超氧阴离子自由基(O2.)进行测定,数据进行统计学分析。结果:与Normal组比较,LPD组血清AST、ALT和GST及肝匀浆MDA和O2.明显升高(P<0.01),而肝匀浆的SOD明显降低(P<0.01);与LPD组比较,P+LPD组1和P+LPD组2的血清AST、ALT和GST及肝匀浆MDA和O2.明显降低(P<0.01),而肝匀浆的SOD明显升高(P﹤0.01)。LPD组肝组织切片有明显肝组织损害病理改变,P+LPD组1和P+LPD组2肝组织病理改变明显改善,P+LPD组2改善最为显著。结论:铅中毒可引起大鼠肝损害,葛根素对铅中毒大鼠肝损害有保护作用,葛根素保护作用表现对剂量依赖性。     

高温作用后大鼠视网膜热休克蛋白70的表达

目的观察高温作用后大鼠视网膜热休克蛋白70(HSP 70)的表达和分布.方法SD大鼠在高温环境生存2 h,分别于4、18、24、48 h后摘除眼球,用免疫组织化学方法观察大鼠视网膜中HSP 70的表达和分布.结果高温后及正常对照组视网膜各层的均有HSP 70的表达,各层高温后18 h与对照组比较差异均有非常显著性(P＜0.01),随时间的延长而逐渐降低.结论高温可诱导视网膜各层组织HSP 70的表达增高.     

HSP 70各亚型在染尘体外细胞模型中表达

目的 观察染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞热休克蛋白70(HSP 70)各亚型(HSP70-1、HSP70-2、HSP 70-hom)表达的影响.方法 采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)构成体外模型,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测二氧化硅粉尘处理AMs 24 h的培养上清液刺激HELF细胞的HSP 70各亚型表达情况.同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照.结果 HSP 70-1、HSP 70-2、HSP 70-hom基因表达与粉尘浓度的相关系数(R)依次为0.931(P<0.01)、0.923(P<0.01)、0.818(P<0.05),呈现明显的剂量-反应关系.结论 受染尘肺泡巨噬细胞上清液刺激的人胚肺成纤维细胞HSP 70各亚型在转录水平呈表达增加,且可能参与了矽尘致细胞氧化应激过程.     

严重烫伤后早期大鼠胃黏膜组织中热休克蛋白70表达变化及胰岛素干预作用

目的研究热休克蛋白（HSP70）在严重烫伤早期大鼠胃黏膜组织中动态表达变化及胰岛素和HSP70对严重烫伤早期大鼠胃黏膜组织的保护作用，探讨胰岛素促进HSP70表达的可能机制。方法采用大鼠烫伤模型，以免疫组织化学的方法和显微图像分析方法观察伤后3、6、12、24和48h不同时相点胃黏膜组织中HSP70的表达情况及胃黏膜组织的病理形态学变化。结果治疗组除12h时相点（9．40±1．52，P=0．065）外其余不同时相点HSP70的表达水平分别高于烫伤组相同时相点HSP70的表达水平[（6．80±1．10，8．60±0．55，10．80±1．64，11．40±1．34），P〈0．05]，治疗组各时相点胃黏膜损伤指数分别低于烫伤组相同时相点损伤指数[（4．05±O．36，11．97±1．15，20．98±2．83，13．92±O．94，1．60±0．55），P〈0．05]。病理形态学变化显示对照组胃黏膜组织结构完整无损伤，烫伤早期SD大鼠胃黏膜组织损伤明显，治疗组SD大鼠胃黏膜组织损伤较烫伤组明显减轻。相关分析结果显示，HSP70与胃黏膜损伤指数、血糖之间呈正相关（r=0．904，0．961，P〈0．01）。结论胰岛素能够明显增强严重烫伤早期SD大鼠胃黏膜组织内HSP70的表达，促进胃黏膜组织HSP70的合成，可能是胰岛素保护胃黏膜组织的重要机制之一。     

热暴露不同时期大鼠肝与心肌细胞热休克蛋白70的表达

目的　研究热暴露不同阶段对大鼠肝与心肌细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的影响 ,为探讨HSP70在细胞水平的表达机制 ,以及HSP70对热暴露机体的意义提供实验依据。方法　采用人工热气候室 [(34± 1)℃、湿度 6 0 % ],建立热暴露动物模型。SD大鼠 80只分为对照组和热暴露组 ,每组又分为 2、7、14、2 8d 4个时段。取肝与心肌组织做免疫组化SP法染色 ,应用图像分析系统分析组织HSP70含量的变化。结果　在热暴露的 4个时段 ,热暴露组肝 (灰度值分别为 137.0± 5 .1、137.0± 5 .2、137.8± 7.1、139.2± 5 .2 )与心肌 (灰度值分别为 15 6 .1± 4 .4、15 5 .1± 6 .2、15 5 .4± 4 .5、15 6 .2±5 .1)细胞的HSP70表达均明显强于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;适应时段对HSP70的表达强度无明显影响。热暴露 2d时HSP70在核内表达强于胞浆 ,肝枯否氏细胞HSP70阳性表达率明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;热暴露 2d与 2 8d时血清中肝与心肌细胞胞内酶浓度明显增高。结论　受热早期机体的重要器官会产生损伤性改变 ;HSP70高表达可作为组织细胞受损伤的标志 ;延长受热时间 ,机体产生热暴露 ,HSP70的高表达在此期热暴露的产生中起到重要作用 ;过长时间受热 ,机体将失去对热的适应 ,HSP7     

二甲双胍对大鼠2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝治疗作用的实验研究

目的探讨二甲双胍对大鼠2型糖尿病（T2DM）并发非酒精性脂肪肝（NAFLD）的治疗作用。方法高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立T2DM并发NAFLD大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、二甲双胍治疗组,每组16只,并设立正常对照组20只。治疗组给予二甲双胍125mg／（kg·d）灌胃治疗。于实验第16（治疗后8周）、20周（治疗后12周）末分批处死大鼠,检测肝功能、空腹血糖、血清胰岛素和血脂水平,光镜下观察大鼠肝脏组织学形态,分别以免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肝组织UCP-2蛋白和UCP-2mRNA的表达情况。结果模型组大鼠血清转氨酶、空腹血糖、血清胰岛素及血脂水平均较正常组明显升高,胰岛素敏感指数较正常组明显下降（P〈0．01）;肝脏于第16周末出现不同程度脂肪变性,第20周末出现严重脂肪变性;肝组织UCP-2蛋白表达高于正常组（P均〈0．01）,UCP-2mRNA表达于第16周末[（1．789±0．301）VS（0．245±0．087）,t=11．02,P〈0．011和20周末[（1．989±0．207）VS（0．262±0．058）,t=17．93,P〈0．01]均高于正常组,以20周末更为明显。在16周末（治疗后8周）和20周末（治疗后12周）,治疗组大鼠血清转氨酶、血糖及血脂水平均有改善,胰岛素敏感指数明显升高（P〈0．01或P〈0．05）,肝细胞脂肪变性明显减轻。治疗组肝组织UCP-2蛋白表达在16周末和20周末均明显低于模型组（P均〈0．01）,UCP．2mRNA表达在16周末[（0．665±0．088）VS（1．789±0．301）,t=7．81,P〈0．01]和20周末[（0．610±0．102）VS（1．989±0．207）,t=9．98,P〈0．01]均明显低于模型组,差异有统计学意义。结论二甲双胍可降低T2DM并发NAFLD大鼠肝脏脂肪含量,调控肝脏UCP-2的适度表达,对治疗2型糖尿病并发非酒精性脂肪肝具有一定的作用。     

4种血清酶在三硝基甲苯染毒致大鼠肝损伤中的变化及意义

[目的]观察三硝基甲苯(TNT)染毒致大鼠肝损伤时血清乳酸脱氢酶(LDH)、谷氨酸氨基移换酶(ALT)、天门冬酸氨基移换酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的活力变化情况,并探讨其意义。[方法]以50、100和200mg/kg体重剂量的TNT对大鼠每天一次经口染毒,分别于染毒2、4、6和8周后处死,测定血和肝组织TNT代谢产物2,6-二硝基-4-氨基甲苯(DNAT)水平、血靛青绿(ICG)10min滞留率(ICG_(R10))和血清LDH、ALT、AST、ALP的变化情况。[结果]TNT染毒大鼠血和肝组织DNAT均比对照组有明显升高,TNT染毒剂量与大鼠血清或肝组织DNAT呈显著性相关(P<0.01),血清与肝组织DNAT呈显著性相关(P<0.01);各TNT染毒组大鼠血清ICG_(R10)明显高于对照组。TNT高剂量染毒组大鼠血清LDH、ALT、AST和ALP活力有所降低,其他剂量组与对照组相比未见显著性变化;血清或肝组织DNAT与血清LDH呈显著性负相关(P<0.05或0.01),与ALT、AST和ALP均负相关,但未见显著性(P>0.05)。[结论]血清LDH、ALT、AST和ALP指标对TNT染毒诱导的大鼠肝损伤的反应并不敏感,似与TNT代谢产物DNAT对血清4种酶活力可能具有的一定抑制作用有关。     

Cathepsin B 在大鼠酒精性肝病中的表达及其意义

目的探讨组织蛋白酶B(Cathepsin B Cat B)在大鼠酒精性肝病中的表达及其意义。方法酒精灌胃法制备大鼠酒精性肝病模型。检测大鼠肝指数及血清天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)含量、HE染色观察肝脏病理学改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化技术检测肝组织中Cat B mRNA水平及蛋白表达的变化。结果模型组肝细胞损伤明显,肝指数模型组较正常组显著升高(P﹤0.01),模型组血清ALT和AST较正常组明显升高(P﹤0.05);RT-PCR及免疫组化均显示,模型组肝组织中CatB表达较正常组显著上调(P﹤0.01)。结论 Cat B可能参与了酒精性肝病的发生、发展过程,并推测其在酒精性肝病肝细胞凋亡过程中可能发挥了重要的作用。     

银杏叶提取物预防大鼠酒精性肝损伤的机制研究

目的:观察银杏叶提取物(EGB)对大鼠酒精性肝损伤的预防作用,并研究其可能的分子机制。方法:无水乙醇灌胃13w,EGB采用预防性给药的方法,检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR检测肝组织中血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达水平。结果:与酒精组相比,EGB组ALT、AST活性均显著降低(P<0.05),MDA含量非常显著降低(P<0.01);SOD、GSH-Px活性和GSH含量较酒精组均显著升高(P<0.05);此外,EGB可以诱导HO-1mRNA高表达。结论:EGB通过减少酒精所致GSH的耗竭,增加抗氧化物质活性或含量,抑制脂质过氧化反应从而预防酒精性肝损伤,其机制可能与诱导HO-1表达有关。     

Comparing the Protective Effects of Curcumin and Ursodeoxycholic Acid after Ethanol-Induced Hepatotoxicity in Rat Liver

BackgroundAlcohol consumption can cause hepatitis and long-term cirrhosis of the liver. The aim of this study was to evaluate the protective effects of curcumin (CUR) and ursodeoxycholic acid (UDCA) alone and together in the prevention and treatment of liver damage caused by overuse of ethanol.MethodsAdult Wistar rats were divided into 8 groups of 5, including the control group and various combinations of ethanol, CUR and UDCA groups. Twenty-eight days after the oral treatment, serum levels of aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), gamma-glutamyl transferase (GGT) and Arginase I (ArgI) as well as serum levels of Albumin (Alb), total protein (TP) and Blood Urea Nitrogen (BUN) were measured, and liver tissue was evaluated histopathologically.ResultsThe solo administration of CUR, UDCA and CUR+UDCA had no effect on the blood parameters and liver tissue compared to the control group (p>0.05). The solo administration of CUR and UDCA in ethanol-treated rats significantly reduced ALT, AST, ALP, GGT, ArgI and BUN levels (p<0.05), while the solo administration increased Alb and TP levels compared to the ethanol group (p<0.05). In these groups, a significant decrease in cell necrosis and local inflammation of hepatocytes was observed, and the liver damage was mild. However, co-administration of ethanol, CUR and UDCA made significantly greater decrease in ALT, AST, ALP, GGT, ArgI and BUN levels (p>0.05), while the co-administration greatly increased Alb and TP levels compared to the ethanol group (p<0.05). Histopathologically, a decrease in structural changes in liver tissue and inflammation was observed, resulting in the improvement of liver tissue.ConclusionThe solo administration of CUR and UDCA could reduce ethanol-induced liver damage in rats and improve liver''s serum and blood parameters. However, the coadministration of CUR and UDCA has a greater efficacy.