2015—2016年济南市活禽市场禽流感病毒监测分析

目的 了解济南市活禽市场外环境样本中甲型禽流感病毒动态分布状况,分析禽流感病毒污染特征.方法 2015年11月至2016年10月,选择济南市所属槐荫区活禽批发市场与历城区活禽零售市场进行外环境样本采集,样本类型包括禽处理台表面擦拭物、笼具表面擦拭物、粪便标本、清洗禽类的污水、禽类饮用水等.应用荧光定量RT-PCR方法对样本进行甲型流感病毒核酸检测,阳性样本进一步进行H5、H7及H9亚型检测.采用x2检验比较不同类型活禽市场、不同类型样本各亚型禽流感病毒核酸阳性率差异.结果 全年共采集2943份禽流感外环境样本,甲型禽流感病毒核酸阳性样本检出率为13.73%(404份),H5、H7与H9亚型检出率分别为4.52%(133份)、0.07%(2份)和8.49%(250份).五种不同类型样本中,甲型禽流感病毒阳性率最高的为禽处理台表面擦拭物(21.88%),最低的为禽类粪便(9.64%)(x2=38.535,P<0.001).但在活禽批发市场中,甲型禽流感病毒阳性率最高的样本为禽类饮用水(46.60%),零售市场中阳性率最高的样本为禽处理台表面擦拭物(18.65%).环境样本中甲型禽流感病毒的波动呈季节性趋势,冬春季节阳性率较高,最高为12月份,5—9月呈低发平缓趋势.结论 济南市活禽市场环境存在禽流感病毒的污染,并以H5和H9亚型为主.活禽市场中禽类饮用水与零售市场中禽类处理台面的病毒检出率最高.     

2011-2012年肇庆市禽流感职业暴露人群及外环境病毒分布监测分析

目的了解肇庆市禽类职业暴露人群禽流感病毒感染状况以及外环境禽流感病毒的分布情况。方法采集禽类职业暴露人员血清样本,用红细胞血凝抑制试验（HI）检测H5N1流感抗体;采集外环境样本,用荧光定量PCR法检测禽流感病毒FluA、H5、H7和H9核酸。结果2011-2012年共采集职业暴露人员血清样本400份,检测H5N1抗体均为阴性;共采集外环境有效样本202份,检出FluA阳性25份,阳性率为12．38％,其中AH9亚型阳性14份（56．00％）。AH7亚型阳性1份（4．00％）,A未分型10份（40．00％）,未检出AH5亚型。结论肇庆市职业暴露人群尚未发现感染高致病性禽流感H5N1病毒．夕h环境存在禽流感病毒的污染,H9亚型是主要的病原体。     

2017~2018年成都市三区县外环境禽流感监测分析

目的 监测四川省成都市三区县外环境中禽类流行性感冒（禽流感）病毒的分布状况,为人禽流感防控提供参考依据。方法 我中心在2017年5月~2018年5月采用实时荧光定量PCR检测成都市三区县外环境中甲型流感通用病毒,再将阳性标本进行H5、H7、N9和H9分型,采用χ2检验比较定性资料。结果 在497份样本中,甲型流感病毒阳性标本87份,检出率为17.91%;分型实验中,H5、H7、N9和H9分别检出7份、6份、12份和41份,其阳性检出率依次为1.41%、1.21%、2.41%、8.25%,未分型成功23份,占总样本的4.63%。结论 成都市三区县外环境存在禽流感病毒污染,有人感染禽流感风险;需加强对外环境及高危人群禽流感监测,并规范对市场的管理机制,落实消毒和检疫准入等预防措施。     

2004-2012年我国禽流感流行情况

禽流感病毒(AIV)是一类可以引起禽类感染和(或)致病的A型流感病毒,它能引起大多数家禽、野生水禽的感染.部分禽流感病毒已经跨种属传播感染人群,1997年香港第一次报道禽流感H5N1亚型病毒能感染人类,不断出现的H9N2、H7N2、H7N3、H7N7等禽流感亚型感染人类的报道,并显示不同程度的致病性和病死率[1-3].2013年3月在中国首次报道新的基因重组H7 N9亚型禽流感病毒直接感染人类,导致重症肺炎引起死亡[4].     

北京市通州区外环境禽流感病毒的流行分布及基因特征分析

目的通过对2021—2022年北京市通州区农贸市场的外环境及相关人员标本的禽流感病毒检测结果及基因特征分析, 为我市禽流感防控策略提供依据。方法 2021—2022年共采集外环境及食品涂抹标本2 184例, 相关人员咽拭子标本124例。利用实时荧光RT-PCR法对标本进行核酸检测, 采用illumina二代测序平台对病毒载量高的阳性标本进行全基因组测序, 分析其基因特征。结果实时荧光RT-PCR核酸检测结果显示, 外环境及食品涂抹标本检出2例H5N8阳性、78例H7N9阳性、177例H9N2阳性、2例H5N8和H9N2共感染、1例H7N9和H9N2共感染, 124例人员标本检测结果均为阴性。对病毒载量高的阳性标本进行全基因组测序分析, 1例H5N8病毒的HA基因属于为2.3.4.4分支, HA基因的HA0裂解位点序列为多个连续性碱性氨基酸(REKRRKR/ GLF), 2例H7N9病毒的HA基因与Yangtza river delta属于同一分支, HA基因的HA0裂解位点序列为多个连续性碱性氨基酸(VPKRKRTAR/GLF), 均属于高致病性禽流感病毒。遗传进化树分析提示, H5N...     

2015年甘肃省外环境禽流感病毒监测预警分析CSCD

目的 了解甘肃省外环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况,科学指导全省禽流感防控工作.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法（Real-time fluorescence quantitativePolymerase Chain Reaction,real-time PCR）对2015年全省14个市州采集的标本2 015份进行禽流感病毒核酸检测.结果 FluA、H5、H7、H9的检出率依次为：19.90％、0.05％、0和19.65％.FluA检出率最高的环境标本为宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本（31.09％）,最低的为粪便标本（13.85％）.FluA检出率在12月份最高（28.18％）,6、7月份最低（8.59％和8.66％）.定西市和陇南市禽流感病毒核酸FluA和H9的检出率显著高于其他市州（χ^2=4.523 - 88.059,P=0.000-0.043〈0.05）.结论 2015年甘肃省涉禽外环境中存在的禽流感病毒污染主要为H9亚型,未检出H7N9,应加强监测,做好禽流感预警.     

2016-2018年长沙市人群及活禽市场环境H5N6亚型禽流感病毒监测分析

目的开展2016-2018年长沙市人群感染和活禽市场(live poultry markets,LPMs)环境污染H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)监测,为防控人感染H5N6亚型AIV提供实验室数据。方法采集2016-2018年长沙市流感样病例和不明原因肺炎病例咽拭子6909份及LPMs环境样品1719份,利用实时RT-PCR进行A型、H5、H7、H9和N6亚型AIV核酸扩增,并对82份AIV核酸阳性样品进行高通量核苷酸测序,然后对测序结果进行BLAST比对和氨基酸(amino acids,aa)关键位点分析。结果从6909份病例的咽拭子样品中检出H5N6亚型AIV核酸阳性1份,从1719份LPMs环境样品中检出A型AIV核酸阳性927份(53.93%),H5N6亚型AIV核酸阳性193份(11.23%)。高通量核苷酸测序获得14株H5N6亚型AIV的基因组序列,aa关键位点分析显示病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白连接肽第338~347位出现6个碱性aa,对禽表现为高致病性的分子特征,受体结合位点(receptor binding site,RBS)第238~240位aa(对应H3型流感病毒第226~228位编码aa)为QSG或QRG,受体特征为禽源。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白第290位耐药基因位点aa未出现R290K突变现象,对NA抑制剂(达菲/磷酸奥司他韦)敏感;病毒PB2蛋白发生E627K和D701N(I)突变,表明病毒致病力强。结论长沙市人群感染H5N6亚型AIV为偶发,LPMs环境H5N6亚型AIV污染较重,需要进一步加强LPMs环境AIV监测。     

H9N2禽流感病毒一步法双重荧光RT-PCR检测方法的建立

目的 建立一种可同时检测禽流感病毒H9N2的HA和NA基因一步法双重荧光RT-PCR方法.方法 针对H9N2禽流感病毒的HA和NA基因保守区,设计相应的特异性引物以及探针,优化检测体系及反应条件,建立一步法双重荧光定量RT-PCR方法.对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行验证与评估,并对家禽粪便标本进行应用检测,以单重实时荧光RT-PCR方法作为参照,检测结果不一致的样本采用测序进行验证.结果 该方法特异性强,与H1、H3、H5、H7亚型禽流感病毒、鸡新城疫及鸡传染性支炎病毒均无交叉反应,对HA和NA基因的最低检出限分别可达50拷贝/μL和25拷贝/μL,组间与组内的变异系数在0.20 ～0.79％之间.对82份粪便标本进行检测,H9N2禽流感病毒的阳性率为8.14％ (7/82),与单重实时荧光RT-PCR法检测结果一致.结论 该方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可应用于临床禽流感样本的检测.     

抗禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

目的:研制禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以H7亚型禽流感诊断抗原为免疫原免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验筛选阳性克隆。应用HI试验和Western blot试验测定mAb的反应性和特异性。结果:共获得4株分泌抗AIVH7亚型HAmAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为2E2、2A4、5F5、7G5。这些mAb的腹水HI效价在5×27～5×211之间,其中2E2属于IgM亚类,2A4属于IgG1亚类,5F5、7G5属于IgG2a亚类。Western blot分析结果显示,4株AIVH7亚型HAmAb能与AIVH7蛋白在Mr75000处反应,但不与新城疫病毒(NDV)蛋白发生反应,表明这些mAb能特异性识别AIVH7亚型HA。mAbHI反应性测定结果表明:4株mAb中,2E2、5F5、7G5只与H7亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、传染性支气管炎病毒(IBV)反应,显示出良好的特异性;而2A4除了与H7亚型AIV反应外,还与H15N8标准株发生低水平交叉反应。结论:这些mAb不仅为H7亚型AIV的HA结构分析提供了工具,而且为建立快速廉价的H7亚型禽流感诊断方法提供了核心试剂。     

不同亚型禽流感病毒红细胞凝集特性分析

目的了解不同亚型禽流感病毒与不同动物来源红细胞的凝集特性,为流感环境样本监测工作选择更适宜的检测用红细胞。方法选取2009-2016年我国禽流感环境监测中分离到的不同亚型的禽流感毒株,采用红细胞凝集试验,选用5种动物红细胞(鸡、火鸡、豚鼠、马和绵羊)进行检测;应用流式细胞仪检测不同动物红细胞表面唾液酸受体的表达及类型,通过氨基酸序列分析病毒血凝素蛋白受体结合区(receptor binding domain,RBD)的特征。结果本研究共检测了14种亚型的28株禽流感病毒。结果显示所有毒株均能与火鸡和豚鼠红细胞发生凝集,其余红细胞均出现不能与某些毒株产生凝集的现象;其中1株H9N2(A/环境/安徽/43762/2015)毒株与鸡红细胞不产生凝集反应;1株H1N1(A/环境/山东/76972/2014)和2株H9N2(A/环境/重庆/79449/2014和A/环境/安徽/43762/2015)毒株与马红细胞不产生凝集反应;2株H9N2(A/环境/重庆/79449/2014和A/环境/安徽/43762/2015)和2株H13N8(A/环境/青海湖/166/2012和A/环境/青海湖/13/2012)毒株与绵羊红细胞不产生凝集反应。流式检测结果显示在火鸡、鸡和豚鼠红细胞表面可检测到两种类型唾液酸受体α2,3和α2,6,但两种受体表达比例不同;马和绵羊红细胞表面唾液酸受体只检测到表达α2,3。序列分析提示病毒RBD关键区域的氨基酸替换可能是影响病毒红细胞结合特性的重要因素。结论在禽流感病毒检测中,火鸡和豚鼠红细胞在红细胞凝集试验中敏感性最好。不同来源的红细胞其受体表达及类型会显著影响不同亚型禽流感病毒的凝集反应,同时RBD关键区域的氨基酸变化也会影响病毒与不同红细胞的结合。     

高致病性禽流感的流行及其预防控制

禽流行性感冒（简称禽流感，Avian influenza，AI）也称禽流感综合征，是由A型流感病毒（Avian influenza vires，AIV）引起的急性、高度致死性、烈性传染病。该病已被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。AIV依据其外膜血凝素（Hemagglutinin，H）和神经氨酸酶（Neuraminidase，N）抗原性的不同，目前至少可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1-N9）。由H5和H7亚型毒株（以H5N1和H7N7为代表）所引起的禽类疾病称为高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HeM），其发病率和病死率都很高，危害极大。     

楚雄州2017—2022年流感病原学监测结果分析

目的分析楚雄州2017—2022年流感病原学监测结果, 掌握流感病毒流行特点, 为流感防控提供科学依据。方法采用real-time PCR检测技术和MDCK细胞培养法对2017—2022年哨点医院流感样病例(influenza-like cases , ILI)标本和暴发流感疫情病例标本进行流感病毒核酸检测和分离培养。结果 2017—2022年, 共检测7 302份病例标本, 阳性1 079份, 阳性率为14.78%, 2017—2022年年度的阳性率依次为14.71%、15.44%、20.11%、5.04%、10.90%和21.08%, 其中2020年阳性率最低;阳性率甲型高于乙型, 冬春季高于夏秋季, 检出H9N2人感染禽流感病毒1份。暴发疫情以B型流感为主, 甲型H3N2次之, 学生为易感人群。流感样病例以0～5岁组占比最高(64.16%), ≥60岁组占比最低(0.05%)。结论 2017—2022年楚雄州以甲型流感流行为主, 冬春季高发, 流感毒株呈现多样性, 各型别毒株交替流行。实施新冠防控措施可有效的降低流感病毒感染率。此外, 州内存在人感染禽流感病例, 应加强和继续完善...     

重组H9N2禽流感病毒的构建及其在不同细胞中的复制特性

目的利用反向遗传学技术构建具有感染性的H9N2亚型禽流感病毒,并揭示其在不同细胞中的复制特性。方法以A/Quail/Hong Kong/G1/97(H9N2)禽流感病毒基因组RNA为模板,用RT-PCR技术获得该病毒的8条完整基因片段,并分别将它们插入到p HW2000载体上,最终在293T细胞中包装产生重组H9N2病毒。并将重组的H9N2病毒感染不同细胞,观察病毒在不同细胞上的增殖状况来揭示该病毒在不同细胞上的复制特性。结果应用流感病毒8质粒反向遗传学技术,成功获得重组病毒,并揭示了该毒株在不同细胞(A549,MDCK,Vero)中的复制特性,发现A549人肺腺癌细胞更适宜H9N2病毒的正常复制。此外还分析总结了该毒株的与病毒毒力相关的重要位点特征。结论成功建立了H9N2禽流感病毒的反向遗传系统,该系统的建立为在分子水平研究H9N2病毒以及制备H9N2禽流感疫苗提供了依据。     

2021—2022年桂林地区急性呼吸道感染住院儿童病毒谱与流行特征

目的了解2021—2022年间桂林市急性呼吸道感染住院儿童病例中呼吸道病毒谱的构成, 探究不同呼吸道病毒的流行特征。方法收集2021年9月至2022年10月广西桂林市14岁以下急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)住院儿童作为研究对象, 共检测638例。采集的患儿咽拭子, 采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应的方法进行核酸检测, 对包括不同亚型在内15种常见种或型呼吸道病毒进行筛查, 分析急性呼吸道感染住院患儿病例的病毒谱特征。结果 638例标本中, 检出包括不同亚型在内的病毒12种, 有365例至少1种或型病毒检测结果为阳性, 阳性率为57.21% (365/638), 感染两种及以上病毒检出率12.85%(82/638)。不同季节的病毒检出率的差异有统计学意义(P<0.002)。不同年龄组样本的病毒阳性检出率以0～2岁组最高(40.66%), 其次为3～5岁组(34.80%)和≥6岁组(24.54%)。结论 2021年9月至2022年10月期间, 12种呼吸道病毒在桂林地区存在流行, 具有明显的夏季高峰特点, 提示当地夏季时应重点针对可...     

北京市1例人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查与分析

目的 分析北京市人感染H7N9禽流感疫情强化监测中发现的1例人感染H9N2禽流感病例流行病学调查情况,为今后科学防控人感染H9N2禽流感疫情提供参考.方法 采用现场流行病学和实验室检测相结合的方法,收集病例流行病学资料,采集并检测病例、暴露环境和密切接触者等标本,分析流行病学特征和可能的感染来源.结果 病例发病第3日和第7日咽拭子标本检测均为H9N2禽流感病毒核酸阳性.病例发病前10天内无禽类接触史,但病例平时活动有暴露于H9N2禽流感病毒污染环境的可能.密切接触者在医学观察期内均未出现流感样症状.结论 该病例为北京市首例成人感染H9N2禽流感确诊病例,同时也是北京市第二例H9N2禽流感确诊病例.医疗机构加强流感样病例监测是及时发现人感染H9N2禽流感病例的重要手段.     

潜在的流感大流行病毒:H9N2禽流感病毒

流感是一种由甲(A)、乙(B)和丙型(C)流感病毒引起的急性呼吸道传染病.根据甲型流感病毒的包膜糖蛋白,病毒可以分为1 ～16个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA)亚型,而这些均可从水禽体内分离出来[1].最近,人们又从蝙蝠的体内发现了H17亚型,但未能成功分离出病毒.按照病毒的致病性来分,可以将所有的H1-16亚型禽流感病毒分为高致病性、低致病性和无致病性禽流感病毒[2].至今为止,人们仅发现H5和H7两种高致病性禽流感病毒.H5、H9和H7等禽流感病毒被证实能够偶尔感染人[3].     

高致病性禽流感研究进展

禽流感（Avian influenza,AI or bird flu）是禽流行性感冒的简称,它是指由禽流感病毒引起的一种动物传染病,常发生在禽,有时也发生在低等哺乳类动物,至今在人仅有偶发病例。禽流感病毒（Avian influenza Virus，AIV），根据其对鸡致病性的不同分为高致病性、中致病性和低，非致病性的，而不是对人而言。高致病性的为H5和H7亚型病毒中一些毒株，中致病性的主要指H9N2和H6N8亚型毒株。其他的毒株均为低，非致病性的。     

北京市首例人感染H9N2禽流感病例的流行病学调查

目的 分析2016年12月北京市朝阳区确诊的l例人感染H9N2禽流感病例流行病学特征.方法 访谈病例发病前后的相关知情人,调查病例发病经过和可能感染来源.采集病例、密切接触者及环境标本,应用实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法,检测甲型流感病毒及H9N2禽流感病毒特异的核酸片段.对病例咽拭子标本和l件阳性环境标本中的H9N2禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因进行序列测定和分析.结果 病例表现为轻症流感样病例症状,发病前15天曾有活禽市场暴露史.该市场环境标本中H9N2禽流感病毒阳性率为18.2％ (2/11).病例咽拭子标本与市场环境标本中病毒的HA基因高度同源,氨基酸相似度为100％,在进化关系上同属于欧亚系的Y280分支.4名密切接触者在医学观察期内未出现过发热、咳嗽等呼吸道症状.结论 病例感染来源与活禽市场环境暴露有关.加强流感监测以及活禽市场的管理对于防控人感染禽流感疫情具有重要意义.     

利用反向遗传学技术构建H5N9重组流感病毒株

目的 利用反向遗传学技术构建来源人感染禽流感病毒H5N1和H7N9 HA和NA基因的H5N9亚型禽流感病毒.方法 全基因合成A/Beijing/01/2003(H5N1)禽流感病毒HA基因片段和A/Zhejiang/DTID-ZJU10/2013(H7N9)禽流感病毒NA基因片段,插入到pHW2000载体,与携带有A/Puerto Rico/8/34(H1N1)的6个内部基因的pHW2000重组质粒一起转染293T和MDCK混合细胞,拯救H5N9重组病毒.结果 核酸测序、HA和NA基因转录和表达检测、细胞病变分析确定利用该反向遗传学系统可以成功拯救H5N9病毒.重组H5N9病毒在MDCK细胞上复制增殖能力低于相同方法拯救H1N1病毒.结论 利用反向遗传学技术成功构建一株H5N9重组病毒.     

H7N9禽流感疫情引发人们的思考

2003–2004年,在亚洲广袤地区的家禽中流行了H5N1禽流感,并传染给人类,人们仍然记忆犹新。从2013年2月开始,在中国部分地区又掀起了不祥的波澜,H7N9和H10N8禽流感病毒袭击了人类。H7N9禽流感曾在禽类发现,但从未传染给人。2013年春天,该病毒首次袭击了人类。H7N9病毒对禽类致病力很低,禽作为传染源十分隐蔽。而人类患上H7N9禽流感后,易引发多脏器衰竭,病