CCL19下调β-链蛋白、细胞周期蛋白D1抑制结肠癌

目的:研究趋化因子CCL19对SW1116结肠癌细胞增殖、周期及5-FU疗效的影响。方法 :构建慢病毒LV5-CCL19转染结肠癌细胞株,获得过表达CCL19结肠癌细胞株——SW1116-CCL19。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、流式细胞技术、裸鼠体内成瘤实验,分别检测上调CCL19后对SW1116细胞增殖、细胞周期的影响。Western印迹检测细胞内β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达。不同浓度5-FU处理细胞,检测处理后细胞存活率。结果:CCL19上调组SW1116细胞较阴性对照组及空白对照组增殖受抑,同时上调CCL19亦可将细胞周期阻滞在G1期。Western印迹显示CCL19上调组肠癌细胞内β-catenin、cyclin D1较阴性对照组明显降低。上调CCL19可抑制裸鼠皮下肿瘤生长。5-FU作用后,CCL19上调组细胞存活率较阴性对照组降低。结论:CCL19可通过抑制β-catenin、cyclin D1的表达抑制结肠癌的发生发展,提高5-FU的抗肿瘤疗效。     

靶向抑制XIAP基因后结肠癌细胞对凋亡诱导配体耐药性的变化

目的 观察应用短发夹RNA(shRNA)干扰质粒靶向抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因后,结肠癌细胞SW1116对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药性的变化.方法 采用脂质体包裹方法,将干扰质粒转染结肠癌细胞SW1116,48 h后检测转染前后XIAP蛋白表达和结肠癌细胞生长活性的变化;应用TRAIL药物25、50、100、200 μg/L梯度浓度作用于结肠癌细胞,24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测抑制XIAP表达后结肠癌细胞对TRAIL敏感性的变化,并利用蛋白印迹方法检测细胞内凋亡相关因子Caspase-3活性的改变.结果 转染干扰质粒后XIAP的表达能够得到有效抑制(抑制率60%),细胞的生长活性得到抑制(抑制率24%),结肠癌细胞对TRAIL的耐药得到逆转,对TRAIL的敏感性显著提高,在200μg/L浓度下细胞生长抑制率可达64%,肿瘤细胞内的Caspase-3的表达活性得到提高.结论 靶向抑制XIAP基因的表达能够恢复和增强结肠癌细胞对TRAIL的敏感性.     

shRNA抑制HSF-1表达增强17-aag抗结肠癌疗效的体外实验研究

目的:探讨热休克蛋白HSP90拮抗剂17-烯丙胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-aag)对体外结肠癌细胞株SW1116增值的抑制作用及其作用方式,并分析热休克因子-1(HSF-1)对17-aag诱导凋亡的影响。方法:将不同浓度的17-aag作用于野生型SW1116细胞株24、48、72 h,应用CCK-8法测定各处理组细胞的活性,计算增值抑制效应,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡比例。构建针对HSF-1的shRNA质粒,通过瞬转质粒及药物干预的不同将肿瘤细胞分为4组,即HSF-1(-)17-aag(-)组、HSF-1(-)17-aag(+)组、HSF-1(+)17-aag(-)组、HSF-1(+)17-aag(+)组。注:HSF-1(-)代表转染了含目的干扰片段质粒,HSF-1(+)代表转染了空载质粒,17-aag(-)代表未受17-aag干预,17-aag(+)代表受17-aag干预。每组细胞经相应处理后,通过FCM测定各组在处理后的细胞凋亡比例,比较各处理因素对结肠癌细胞株SW1116的杀伤作用。通过Western印迹检测各组中HSP90、HSP70、HSP27的表达量,评价细胞凋亡比例的高低与热休克蛋白的表达量是否有关。结果:17-aag对野生型SW1116细胞增殖具有明显的抑制作用,可诱导G2/M期周期阻滞和细胞凋亡。转染组细胞后,HSF-1(-)17-aag(-)组与HSF-1(+)17-aag(-)组间细胞凋亡比例差异无统计学意义;HSF-1(-)17-aag(+)组较HSF-1(+)17-aag(+)组细胞凋亡比例高,而细胞内HSP90、HSP70、HSP27表达量均较HSF-1(+)17-aag(+)组降低。结论:17-aag可诱导体外结肠癌SW1116细胞发生凋亡和周期阻滞。在干扰HSF-1表达后,17-aag诱导细胞凋亡的作用明显增强。     

TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的:探讨TXNDC9基因在结肠直肠癌组织和细胞中的表达,以及沉默TXNDC9高表达后对细胞株SW1116增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:分别应用免疫组织化学技术、免疫印迹法观察TXNDC9在结肠直肠癌组织和细胞中的表达水平:应用小干扰RNA瞬时转染TXNDC9高表达的结肠癌细胞株SW1116,用实时PCR筛选最高效率的干扰片段,并用Western印迹法检测基因沉默效果:最后研究瞬时转染后SW1116细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:结肠直肠癌组织中TXNDC9的表达明显高于对照的癌旁正常组织(P<0.01),细胞迁移和侵袭能力亦有明显下降(P<0.01)。结论:TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜上皮,并与肿瘤的大小和浸润深度相关,SW1116是TXNDC9基因高表达的细胞株之一,下调TXNDC9表达能显著抑制该细胞的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力。TXNDC9基因对维持肿瘤细胞的增殖和运动能力有重要作用,并可能成为抑制肿瘤生长和转移的有效途径。     

钙黏蛋白12在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的：研究钙黏蛋白12（cadherin-12,CDH-12）在结肠癌细胞株与结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株增殖、侵袭、迁移的影响。方法：应用实时PCR和Western印迹法在7株结肠癌细胞株中筛选CDH-12高表达细胞株;shRNA瞬转干扰高表达细胞株SW1116,Western印迹法验证干扰效果;CCK-8检测癌细胞增殖活性变化;transwell实验验证癌细胞迁移、侵袭能力的变化;组织芯片免疫组织化学技术检测CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达。结果：实时PCR和Western印迹结果显示CDH-12在细胞株中表达,SW1116和LoVo两个细胞株高表达CDH-12,在成功下调SW1116细胞中CDH-12表达之后,SW1116结肠癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力较对照组明显下降;免疫组化染色结果显示,CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织中的表达。结论：CDH-12在结肠直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,证实了CDH-12为癌基因的可能性;下调CDH-12在结肠癌细胞株SW1116的表达可明显抑制细胞的增殖、迁移、侵袭能力,显示其在肿瘤细胞生长和转移中的重要作用。     

Cortactin过表达对结肠癌细胞转移能力的影响

目的:通过诱导皮层肌动蛋白(cortactin)的过表达分析其在结肠癌细胞侵袭迁移以及肝转移过程中的作用。方法:构建含CTTN基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体,转染293T细胞。取含CTTN基因和绿色荧光蛋白的病毒上清液转染结肠癌细胞株SW1116使cortactin稳定表达。蛋白印迹实验检测cortactin的表达,通过Transwell实验评估结肠癌细胞侵袭迁移能力的改变。利用SW1116细胞株使裸鼠皮下成瘤,取肿瘤组织种植新一批裸鼠结肠壁并观察结肠癌肝转移的情况。结果:成功构建cortactin过表达的SW1116细胞。侵袭和迁移实验中,过表达组穿膜细胞数分别为(147±12)个、(286±17)个,而阴性对照组为(83±10)个、(112±11)个,空白对照组为(75±7)个、(103±9)个,后两组与过表达组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:上调cortactin的表达能显著促进结肠癌细胞的侵袭迁移和肝转移能力,提示cortactin在结肠癌的转移过程中发挥重要作用。     

c-Met在结直肠癌细胞株中的表达及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的探讨c-Met在结直肠癌细胞株中的表达以及其配体肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌SW480细胞系增殖、侵袭能力的影响。方法应用RT-PCR及Western blot技术检测HGF受体c-Met在不同结直肠癌细胞中的表达,筛选出c-Met高表达细胞系;用不同浓度(0、20、40、70 ng/m L)的HGF作用SW480细胞48 h,分别用MTT法、Transwell法检测其对SW480细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 1 RT-PCR及Western blot检测结果均表明,c-Met在不同结直肠癌细胞系中均有表达,其中体外培养的结肠癌细胞系SW480中存在c-Met和蛋白高表达。2 MTT实验结果显示,HGF可增强SW480细胞的增殖能力,且在一定范围内随浓度增高作用增强,呈剂量依赖性关系。3 Transwell实验结果显示,HGF处理后的SW480细胞侵袭能力增强。结论 c-Met在结肠癌SW480细胞中存在高表达,HGF可促进结直肠癌细胞的增殖及增加其体外侵袭能力。     

cFLIP蛋白在大肠癌细胞中的表达及其对大肠癌细胞凋亡的影响

目的检测细胞型Fas相关死亡区域蛋白样β白细胞介素1转换酶抑制蛋白(cFLIP)在大肠癌细胞中的表达,探讨其在大肠癌细胞凋亡中的作用。方法应用Western蛋白印迹法检测3株人大肠癌细胞株中cFLIP蛋白的表达及大分子合成抑制剂放线菌素D(ActD,10μg/L)对SW620细胞cFLIP表达的影响,并运用四唑盐比色法(MTT法)检测cFLIP对SW620细胞凋亡的影响。结果SW1116及SW620细胞株cFLIP蛋白呈阳性表达,而LoVo细胞株呈阴性表达。ActD(10μg/L)可明显下调SW620细胞中cFLIP蛋白的表达水平,其作用1h以后,cFLIP表达水平开始下降(为0h的86%),作用24h后下降最明显(为0h的59%)。同时,抗Fas抗体(1mg/L)可最大程度地诱导28.8%的SW620细胞发生凋亡。结论cFLIP蛋白在大肠癌细胞中表达并可能在抑制大肠癌细胞凋亡中发挥重要作用。     

生长抑素施他宁对结肠癌SW480细胞生长抑制和凋亡作用的实验研究

目的:探讨应用生长抑素类似物施他宁对人结肠癌细胞株SW480细胞的生长抑制和凋亡作用,及细胞周期的影响.方法:采用MTT比色法测定不同浓度施他宁对SW480细胞增殖的抑制作用;漉式细胞仪洲定SW480细胞细胞周期分布、增殖指教、凋亡率.结果:生长抑素施他宁能够明显抑制人结肺癌细胞株SW480细胞增殖(P<0.01),且呈浓度和时间依赖性(P<0.01,P<0.01).结论:生长抑素施他宁可押制人结肠癌细胞株SW480的生长;生长抑素可能通过押制G1/G2期SW480细胞进入S期及促进细胞凋亡两种途径抑制人结肠癌细胞株SW480增殖,影响其凋亡.     

沉默MAD2基因对结肠癌细胞的影响

目的:研究沉默MAD2基因对结肠癌细胞的影响。方法 :采用RT-PCR和Western印迹法筛选MAD2基因在7种结肠癌细胞中的高表达细胞株,并用siRNA瞬时转染以降低MAD2表达,随后采用CCK-8法检测结肠癌细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,transwell实验评估转染后结肠癌细胞迁移能力的改变。结果:SW1116细胞在mRNA和蛋白水平均呈现高表达MAD2,转染靶向MAD2的siRNA可显著降低MAD2在SW1116细胞中的表达。下调MAD2后,SW1116细胞的增殖能力较对照组有明显下降(P<0.05)。干扰siRNA组细胞凋亡比例较对照组增加,而细胞周期未见统计学差异。transwell实验中,siRNA干扰组穿膜细胞数为(45±2)个,显著低于阴性对照组[(185±5)个]和空白对照组[(195±5)个](P<0.01)。结论:SW1116高表达MAD2基因,沉默MAD2基因显著降低肠癌细胞增殖,诱导凋亡,并抑制细胞迁移。MAD2基因很可能成为新的预防结肠癌转移的目的基因。     

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