不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

  目的  探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。  方法  建立Meth（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。  结果  天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低 （P < 0.001、P < 0.01或P < 0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低 （P < 0.01或P < 0.05） 、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P < 0.01或P < 0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P < 0.01）。  结论  天麻素干预对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的神经炎症具有保护作用,且与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路密切相关。     

儿童肺炎支原体感染对免疫功能影响的研究

目的探讨儿童肺炎支原体（MP）感染对机体免疫功能的影响。方法选取2019年1月至2022年1月嘉兴市第二医院收治的儿童MP肺炎84例为研究对象,其中重症组39例,轻症组45例,另选同期本院健康体检儿童40名作为对照组。抽取3组儿童静脉血,采用乳胶增强免疫散射比浊法检测超敏C-反应蛋白（hs-CRP）水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平,速率散射比浊法检测IgA、IgG、IgM水平,流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+T及CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）水平,Westernblot法检测Toll样受体4（TLR4）/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平;采用Pearson相关分析TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白与炎症因子、Ｔ淋巴细胞之间的相关性。结果重症组和轻症组患儿WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、CD8+、CD4+CD25+Treg水平均高于对照组,重症组患儿WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、IgM、CD8+、CD4+CD25+Treg水平均高于轻症组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。重症组和轻症组患儿IgA、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于对照组,重症组患儿IgA、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于轻症组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。重症组和轻症组患儿TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκB-α）水平均高于对照组,重症组患儿TLR4、MyD88、p-NF-κBp65、p-IκB-α水平均高于轻症组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关分析显示,TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κBp65、p-IκB-α表达水平分别与WBC、hs-CRP、IL-6、TNF-α、CD4+CD25+Treg均呈正相关（均P＜0.01）,与CD4+/CD8+均呈负相关（均P＜0.01）。结论MP感染可以激活患儿机体TLR4/NF-κB信号通路,促进炎症因子释放,引起Ig变化及淋巴细胞亚群失调,且与感染的严重程度相关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

乌司他丁减轻失血性休克大鼠肺炎性损伤的机制

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎性介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法72只SD大 鼠,随机分为休克不复苏组（SR,n=24）,醋酸钠林格液组（AR,n=24）及乌司他丁组（UR,n=24）。通过股动脉放血将3组制成休 克模型（平均动脉压维持在30~40 mmHg）,SR组休克制备成功后不予复苏,并分别于休克后1、4、6 h（若大鼠死亡则大鼠死亡即 刻）取大鼠肺组织;AR组、UR组分别系维持休克60 min后应用醋酸钠林格液、醋酸钠林格液联合乌司他丁进行30 min液体复 苏,并分别于复苏后1、4、6 h取大鼠肺组织。利用实时荧光定量PCR法检测各组肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、 IL-10的mRNA含量以及通过Western blot检测TLR4、MyD88、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p65、IRAK4、p-IRAK4（Thr345、Ser346）、 p-IRAK4（Thr342）、TRAF6的蛋白相对表达量。在光镜下观察3组肺组织病理学变化。结果与休克组相比,醋酸钠林格液组 肺组织炎症浸润程度稍减轻,其中miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平升高（P<0.05）,IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4 (Thr345、ser346)的蛋白表达增加（P<0.05）;TNF-α、IL-1和IL-6的水平降低（P<0.05）,TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK- 4及TRAF6的蛋白表达减少（P<0.05）。与醋酸钠林格液组比较,乌司他丁组的肺组织炎性损伤得到了进一步改善,升高了miR- 146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平（P<0.01）及IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达（P<0.01）,降低 了TNF-α、IL-1和IL-6的水平（P<0.01）和TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达（P<0.01）。结论乌 司他丁联合醋酸钠林格液复苏创伤失血性休克大鼠可能是通过增强miR-146a的表达,负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路,进而 调节体内促炎因子和抗炎因子平衡,以达到保护肺组织的作用。     

灯盏花素通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻后循环缺血性眩晕大鼠脑组织损伤

目的 探讨灯盏花素（Bre）对后循环缺血性眩晕（PCIV）大鼠脑组织损伤的影响及其机制。方法 将80只Wistar大鼠随机分为假手术（Sham）组、模型（PCIV）组、Bre组（2 mg/kg）、TAK242 ［Toll样受体4（TLR4）抑制剂］组（3 mg/kg）和Bre+TAK242组（2 mg/kg+3 mg/kg）,每组16只。采用结扎右侧颈总动脉和右侧锁骨下动脉的方法复制PCIV大鼠模型,各组分别1次/d腹腔注射（ip）给药治疗7 d。测定逃避电刺激潜伏期、前庭神经核血流量和血液流变学指标,通过HE染色和TUNEL染色观察海马神经元病理改变和神经元凋亡,比色法检测海马组织乳酸（Lac）、乳酸脱氢酶（LDH）和炎症因子（IL-1β、TNF-α、IFN-γ）含量,Western blot法检测TLR4、核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、IκBα、p-IκBα蛋白表达。结果 与PCIV组相比,Bre组和TAK242组逃避电刺激潜伏期缩短、前庭神经核血流量升高（P＜0.05）;全血（低切、中切、高切）黏度、血浆黏度、红细胞压积（HCT）、红细胞聚集指数（EAI）、血沉（ESR）降低且红细胞变形指数（EDI）升高（均P＜0.05）;海马神经元数量减少、排列疏松紊乱、胞核固缩偏移深染、边界不清等病理改变明显改善,神经元凋亡数量明显减少（均P＜0.05）;海马组织Lac、LDH、IL-1β、TNF-α、IFN-γ含量降低,TLR4表达量及NF-κB p65、IκBα磷酸化率（p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα）降低（均P＜0.05）。Bre+TAK242组对上述指标的作用明显优于Bre组和TAK242组（P＜0.05）。结论 Bre可减轻PCIV大鼠眩晕症状,改善前庭神经核血流量,减轻脑组织损伤,作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路介导炎症反应有关     

祛瘀消肿方对LPS刺激的巨噬细胞TLR-4信号通路调控机制的硏究

目的 本研究探讨了祛瘀消肿方在LPS诱导的乳腺炎过程中对巨噬细胞的影响及祛瘀消肿方在这一过程中对炎症的抑制作用和对TLR-4信号通路的调控机制。方法用含不同剂量（低、中、高）祛瘀消肿方血清预处理RAW264.7巨噬细胞,再进行LPS刺激,MTT检测细胞活性;DAPI染核检测细胞凋亡,同时qRT-PCR及Westernblot检测凋亡蛋白（Bax,Bcl2）表达;ELISA检测炎症细胞因子（TNF-α,IL-1β和IL-6）的水平。为了探讨与祛瘀消肿方有关的信号通路,通过qRT-PCR检测TLR4相对表达水平,并用Westernblotting检测TLR4,NF-κB-p65,p-NF-κB-p65,IκB-α和p-IκB-α蛋白的变化。结果 祛瘀消肿方可以增强LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞活性[（36.32±4.32）%、（51.69±4.08）%、（74.33±4.92）%比（21.36±4.08）%,P均<0.05],增多活细胞数目[（41.67±6.24）、（56.00±4.32）、（63.67±5.79）比（22.67±5.25）,P均<0.05],下调Bax mRNA水平[（1.91±0.06）、（1.68±0.06）、（1.35±0.04）比（2.19±0.13）,P均<0.05]与蛋白表达,上调Bcl2 mRNA水平[（0.46±0.05）、（0.62±0.04）、（0.87±0.05）比（0.22±0.07）,P均<0.05]与蛋白表达,减少细胞凋亡以及抑制炎症反应,TNF-α [（1126.67±61.28）pg/ml、（873.33±55.58）pg/ml、（456.67±67.98）pg/ml比（1916.67±102.74）pg/ml,P均<0.05]、IL-1β[（67.67±5.56）pg/ml、（58.67±2.87）pg/ml、（35.33±4.49）pg/ml比（87.33±5.25）pg/ml,P均<0.05]、IL-6[（72.69±7.93）pg/ml、（55.36±3.68）pg/ml、（44.96±3.74）pg/ml比（96.33±4.18）pg/ml,P均<0.05]水平显著下调。此外,祛瘀消肿方能够剂量依赖性地抑制与TLR4 / NF-κB通路相关的TLR4,pNF-κB-p65和pIκBα的激活,抑制TLR4,p-NF-κB-p65及 p-IκB-α表达;并使NF-κB-p65和IκB-α表达增加。结论 本研究阐明了祛瘀消肿方通过抑制TLR4 / NF-κB信号通路,产生抗炎作用,为中医药治疗乳腺炎提供了理论依据。     

推拿对膝骨性关节炎大鼠滑膜TRAF6、 NF-κBp65 mRNA及蛋白的影响*

目的对建立的大鼠膝骨性关节炎模型行推拿治疗,观察其滑膜TRAF6、NF-κBp65 mRNA及蛋白表达,探讨推拿治疗膝骨性关节炎的效果及其机制。方法采用随机化的原则,抽取10只大鼠为空白组,余下40只大鼠采用木瓜蛋白酶关节注射建立大鼠膝骨性关节炎模型,待造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、推拿组、灌胃组、推拿加灌胃组,每组10只。空白组常规饲养,推拿组一指禅手法治疗,灌胃组塞来昔布灌胃,推拿加灌胃组予以上两种治疗。治疗4周后取材,对膝关节滑膜行荧光定量PCR、Western blot检测TRAF6、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达水平。结果①荧光定量PCR结果显示,与空白组相比,模型组、推拿组、灌胃组的TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,推拿加灌胃组与空白组相比TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达几乎无差异,稍上调（P＞0.05）;与模型组相比,各治疗组TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达下调,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,且各治疗组TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达量：推拿加灌胃组﹤推拿组﹤灌胃组,差异具有统计学意义（P﹤0.05）。②Western blot结果显示,与空白组相比,其余各组TRAF6、NF-κBp65蛋白的表达上调,差异具有统计学意义（P﹤0.05）;与模型组相比,其余各组TRAF6、NF-κBp65蛋白的表达下调,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,且各治疗组TRAF6、NF-κBp65蛋白表达量：推拿加灌胃组﹤推拿组﹤灌胃组,差异具有统计学意义（P﹤0.05）。结论推拿通过下调膝骨性关节炎大鼠滑膜组织TRAF6、NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达,减轻滑膜炎症反应,从而起到消炎止痛的作用,最终达到防治膝骨性关节炎的目的。     

TLR4/MyD88/NF-κB通路基因及相关炎症因子在继发性脊髓损伤患者中的表达

目的: 探讨Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子（MyD88）/NF-κB通路基因及相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6在继发性脊髓损伤（SSCI）患者中的表达及与预后的相关性。方法: 回顾性分析2017年7月至2018年6月浙江省台州医院收治的105例SSCI患者及40名健康体检者的临床资料。根据Frankel脊髓损伤分级评估结果将SSCI患者分为完全损伤组和不完全损伤组,根据日本矫形外科学会（JOA）患者神经功能改善率将SSCI患者分为预后优良组和预后不良组。对比SSCI患者与健康体检者、完全损伤组与不完全损伤组、预后优良组与预后不良组外周血单个核细胞（PBMC）中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平;采用Logistic回归分析法分析导致SSCI患者预后不良的危险因素,并采用Pearson相关性分析法分析JOA改善率与上述指标的相关性。结果: SSCI患者PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达量及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均高于健康体检者（均P < 0.01）,完全损伤组上述指标均高于不完全损伤组,且预后不良组高于预后优良组（均P < 0.01）。预后不良组Frankel分级A级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度超过4 cm患者的比例均高于预后优良组（均P < 0.01）,且经Logistic回归分析证实Frankel分级、脊髓水肿或出血、脊髓损伤长度及PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量、血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均是导致SSCI患者预后不良的危险因素（P < 0.05或P < 0.01）。Pearson相关性分析结果显示,JOA改善率与PBMC中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量以及血清TNF-α、IL-12、IL-6水平均呈负相关（P < 0.05或P < 0.01）。结论: TLR4/MyD88/NF-κB通路激活及其相关炎症因子TNF-α、IL-12、IL-6表达上调参与SSCI疾病进展且与神经炎症损伤关系密切,可作为评估SSCI患者预后的参考指标。     

低剂量艾司氯胺酮通过TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻肢体缺血再灌注损伤

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化初级反应基因88（myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路在低剂量艾司氯胺酮预处理的肢体缺血再灌注损伤中的作用。方法 将28只大鼠分为对照组、模型组、实验1组（艾司氯胺酮，5mg/kg）、实验2组（艾司氯胺酮，10mg/kg），每组各7只。实验组大鼠腹腔注射艾司氯胺酮，其余两组同样方法给予生理盐水，造模成功后取血清测定白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量；取骨骼肌测定湿/干重比值，测定TLR4、MyD88基因表达水平和NF-κB蛋白含量，病理切片观察骨骼肌改变。结果 与对照组相比，模型组湿/干重比值、IL-6、IL-1、TNF-α、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及NF-κB蛋白均显著升高（P<0.05）；与模型组相比，实验1组和实验2组的上述各项指标均显著降低（P<0.05）；而实验1组和实验2组的上述各项指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 艾司氯胺酮可通过TLR4/MyD88/NF-κB通路降低相关炎症因子表达，从而减轻肢体缺血再灌注损伤，且低剂量的艾司氯胺酮即可起到抗炎保护作用。     

替格瑞洛对急性心肌梗死患者TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响研究

目的 探讨替格瑞洛对急性心肌梗死患者Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/NF-κB信号通路的影响。方法 选择南京中医药大学附属常州市中医医院于2021年1月至2022年6月收治的142例急性心肌梗死患者,采用随机数字表法分为观察组与对照组各71例。对照组采用常规药物治疗,观察组在对照组基础上加用替格瑞洛片治疗。治疗疗程4周。比较两组疗效,治疗前后心功能,血小板聚集率,TLR4、MyD88和NF-κB mRNA相对表达量和蛋白表达水平。结果 观察组总有效率高于对照组（P<0.05）。相比治疗前,两组治疗后左心室射血分数（LVEF）均显著升高,左心室后壁厚度（LVPWT）、左心室舒张末期内径（LVDD）、血小板聚集率均显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB相对表达量均显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB mRNA蛋白表达灰度值均显著降低,差异均有统计学意义（均P<0.05）。治疗后观察组LVEF显著升高,LVPWT、LVDD、血小板聚集率显著降低,TLR4、MyD88、NF-κB mRNA相对表达量显著降低,TLR4、MyD88和NF-κB蛋...     

瑞马唑仑对颅脑损伤大鼠脑组织损伤及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨瑞马唑仑(Rem)对颅脑损伤(BI)大鼠脑组织损伤及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:构建BI大鼠模型;将所有大鼠分为对照组(Control组)、颅脑损伤组(BI组)、瑞马唑仑低、中、高剂量组(Rem-L、Rem-M、Rem-H组)、瑞马唑仑高剂量+TLR4激活剂LPS组(Rem-H+LPS组);检测大鼠脑组织含水量;ELISA检测大鼠脑组织中的炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠脑组织的形态学变化;TUNEL法检测脑组织神经元凋亡情况;Western blot法检测大鼠脑组织TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果:与Control组相比,BI组大鼠脑组织神经元变性坏死,数量减少,体积缩小,损伤严重,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达升高,Bcl-2表达降低...     

TLR9、MyD88及NF-κB在过敏性紫癜中的表达及意义

目的 探讨免疫上游因子TLR9、MyD88、NF-κB及免疫下游细胞因子IL-6、TNF-α在HSP组与正常对照组间的差异及相关性。方法 采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达量,ELISA法检测血浆IL-6、TNF-α水平。结果 1HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达均显著高于正常对照组;2HSP组血浆IL-6、TNF-α水平较对照组水平显著增高;3HSP组中TLR9与MyD88、TLR9与NF-κB、MyD88与NF-κB、NF-κB与IL-6以及NF-κB与TNF-α均存在线性正相关关系。结论HSP患儿TLR9、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均较正常儿童显著升高。TLR9-MyD88-NF-κB信号通路参与HSP发病,并在其中起重要作用。     

推拿对腰间盘突出症大鼠的治疗作用及对TLRs/MyD88信号通路的影响

目的观察推拿对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠的治疗作用及对Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子(MyD88)信号通路的影响。方法取45只大鼠采用自体髓核移植法建立LDH大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、模型+抑制剂组、推拿组、推拿+激活剂组,每组10只,剩余10只为假手术组。模型+抑制剂组给予TLR4抑制剂TAK-242,推拿组施用推拿手法,推拿+激活剂组施用推拿手法并给予TLR4激活剂脂多糖(LPS),模型组、假手术组固定的同时给予生理盐水。测定各组大鼠造模后1、7、14、21 d机械性缩足反射阈值(PWMT)、热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);造模21 d处死各组大鼠,观察背根神经节病理变化,并比较背根神经节肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β水平及髓核组织TLR4、MyD88、核转录因子κB(NF-κB)p65 mRNA及蛋白相对表达量。结果与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组7、14、21 d PWMT及PWTL升高(P<0.05),推拿+激活剂组7、14、21 d PWMT及PWTL降低(P<0.05)。HE染色显示,模型组、推拿+激动剂组背根神经节细胞肿胀,形状不规则,有空泡变性,尼氏小体排列不均;推拿组、模型+抑制剂组背根神经节病理形态较模型组有所改善,细胞排列较清晰,存在少数细胞空泡变性,尼氏小体较均匀。与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量降低,且推拿组低于模型+抑制剂组(P<0.05),推拿+激活剂组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论推拿可能通过抑制TLR4/MyD88信号通路发挥消炎止痛作用,改善LDH症状。     

清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法 将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.02425mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）和白细胞介素-6（IL-6）表达,Toll样受体7（TLR7）及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白表达。结果 清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.02425mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著（P＜0.01）;清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著（P＜0.01）。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.0485mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7 mRNA、MyD88 mRNA表达显著（P＜0.01）;清透邪热方0.02425mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著（P＜0.01）;清透邪热方0.0485mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著（P＜0.01）,清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著（P＜0.01）。结论 清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。      

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨金双歧对慢性肾脏病大鼠肠黏膜屏障的影响

目的 探讨金双歧对慢性肾脏病大鼠肠黏膜屏障的作用及机制。方法 30只大鼠随机分为对照组、模型组和金双歧组,每组10只。模型组和金双歧组以阿霉素、腺嘌呤复制慢性肾脏病模型。模型复制成功后,金双歧组采用金双歧治疗4周。测定各组大鼠的24 h尿蛋白及血肌酐、尿素氮、D-乳酸、内毒素、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。HE染色观察各组大鼠的肾脏、结肠病理变化,Masson染色观察各组大鼠肾脏纤维化改变,透射电镜观察各组大鼠结肠黏膜超微结构,免疫荧光法检测各组大鼠结肠Occludin蛋白表达,Westernblotting检测各组大鼠结肠Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB P65(NF-κB P65)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组大鼠结肠TLR4、MyD88、NF-κB P65 mRNA表达。结果 与对照组比较,模型组、金双歧组大鼠的肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、肾间质损伤评分均升高（P <0.05）,肾间质纤维化相对面积增加（P <0.05）;模型组与金...     

TLR4、MyD88、NF-κB在乙型肝炎病毒肝硬化患者中的表达及其临床意义

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κ（NF-κB）信号通路在乙型肝炎病毒所致肝硬化中的表达及临床意义。方法 选取2017年1月—2019年1月华北石油管理局总医院收治的130例乙型肝炎肝硬化患者为研究对照（肝硬化组），选择同期130例乙型肝炎患者为乙型肝炎组，选择130例健康人群为对照组。其中肝硬化组进一步根据ChildPugh分为A级（49例），B级（47例），C级（34例）；根据肝硬化程度分为：代偿期肝硬化（49例），失代偿期肝硬化（48例），原发性肝癌（33例）。比较3组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）的差异，比较3组单核细胞表面TLR4阳性率及血清MyD88、NF-κB水平，以及不同程度肝硬化患者TLR4、MyD88、NF-κB表达水平。采用Spearman或Pearson分析法分析TLR4、MyD88、NF-κB与ChildPugh分级、AST、ALT及TBIL的相关性，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析ALT、AST、TBIL、TLR4、MyD88及NF-κB对肝硬化致原发性肝癌的诊断价值。结果 肝硬化组、乙型肝炎组、对照组AST、ALT、TBIL水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；TLR4、MyD88、NF-κB水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；ChildPughA级、B级、C级患者TLR4、MyD88、NF-κB水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；不同程度肝硬化患者TLR4、MyD88、NF-κB比较，差异有统计学意义（P <0.05）。TLR4、MyD88及NF-κB与ChildPugh分级、AST、ALT及TBIL均呈正相关（P <0.05）。ROC曲线结果显示，ALT截断值为101.44 u/L时，AUC为0.738；AST截断值为136.74 u/L时，AUC为0.706；TBIL截断值为51.86 μmol/L 时，AUC为0.746；TLR4截断值为32.342%时，AUC为0.896；MyD88截断值为931.402 pg/ml时，AUC为0.897；NF-κB截断值为1 243.620 pg/ml时，AUC为0.875。结论 TLR4、MyD88、NF-κB信号通路与乙型肝炎病毒所致肝炎及肝硬化病理进程密切相关，且TLR4、MyD88、NF-κB的检测在诊断肝硬化致原发性肝癌中具有一定临床价值。     

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。     

神经肽P物质诱导高糖条件下人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的分子机制

目的 探讨神经肽P物质(SP)诱导高糖培养环境中的人皮肤成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)的分子机制.方法 采用高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞,加入同一浓度(10 nmol/L) SP孵育不同时间,Western blotting检测细胞中核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)和磷酸化NF-κB亚单位p65 (p-NF-κBp65)的表达,免疫荧光方法观测细胞p-NF-κBp65表达和转位情况.将高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、SP组和SP+ NF-κB抑制剂(MG132)组(以MG132预处理细胞60 min),Western blotting检测各组细胞内p-NF-κBp65的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液中MCP-1的浓度.结果 随着SP作用时间的延长,成纤维细胞IκBα的表达量显著减少,p-IkBα的表达量显著增加(P＜0.05);同时p-NF-κBp65的表达量在SP作用后显著增加(P＜0.05),并保持递增趋势;免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察证实SP作用后细胞胞核内p-NF-κBp65表达增强.与SP组比较,SP+ MG132组细胞p-NF-κBp65表达及细胞培养上清液中MCP-1浓度均显著降低(P＜0.05).结论 SP促进人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的作用机制可能与NF-κB信号通路激活有关.     

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs) Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P <0.01),抑制IL-4、 IL-10的生成(P <0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF... 更多