miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-1253对肺腺癌细胞增殖与迁移侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-1253 （miR-1253）在肺腺癌细胞株中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测肺腺癌A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及GLC-82细胞株中的miR-1253表达水平,将miR-1253 mimics和miR-1253 inhibitor分别转染至A973和NCI-H157细胞,以转染阴性对照质粒NC的细胞为阴性对照（NC）组。MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 迁移侵袭实验检测不同miR-1253表达对A973和NCI-H157细胞增殖、克隆形成及侵袭转移能力的影响。结果 QPCR检测结果显示,A549、NCI-H1299、NCI-H157、A973及GLC-82细胞中miR-1253相对表达量分别为0.92±0.06、0.06±0.03、1.10±0.26、0.03±0.01、0.45±0.08。A973细胞转染miR-1253 mimics后miR-1253相对表达量显著升高（P＜0.05）,NCI-H157细胞转染miR-1253 inhibitor后miR-1253相对表达量显著下降（P＜0.05）。与NC组比较,转染miR-1253 mimics能够显著抑制肺腺癌细胞A973的增殖活性、平板克隆形成能力（166.0±29.3 vs. 371.0±31.4,P=0.001）、迁移 （91.1±32.1 vs. 166.7±33.9,P=0.008）以及侵袭能力 （74.4±20.5 vs. 145.6±28.8,P=0.001）;而miR-1253 inhibitor 能够上调NCI-H157的增殖、平板克隆形成细胞数目（545.0±61.9 vs. 337.0±39.7, P=0.008）、迁移（246.7±36.7 vs. 151.1±32.9,P＜0.001）以及侵袭能力 （231.1±38.8 vs. 137.8±27.3,P=0.001）。结论 miR-1253可以抑制肺腺癌细胞的增殖与侵袭转移,可能作为肺腺癌基因治疗的有效靶点。     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制。方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-211和SATB2在NSCLC组织及癌旁组织中的表达情况;向A549细胞中转染miR-211 mimics、miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2,检验转染效率及转染后A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8实验和Transwell小室分别检测miR-211和SATB2表达变化对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:双荧光素酶报告系统结果提示SATB2 3' UTR是miR-211直接结合的靶位点。NSCLC组织中miR-211表达上调,SATB2表达下调,两者表达呈线性负相关(P＜0.05)。转染miR-211 mimics显著下调A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05);转染miR-211 inhibitor和pcDNA3.1-SATB2使A549细胞中SATB2 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。CCK-8实验显示,相较于对照组,miR-211过表达组的A549细胞增殖率显著增加(P＜0.05),miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞增殖能力下降(P＜0.05)。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,miR-211抑制组和SATB2过表达组的A549细胞迁移和侵袭能力明显降低(P＜0.05)。在miR-211过表达组共转染SATB2过表达,使miR-211介导的对A549细胞增殖、迁移及侵袭的促进作用受到抑制。结论:下调miR-211的表达可以增加NSCLC细胞中SATB2转录及转录后表达水平,从而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。     

miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响北大核心

目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

miR-204通过靶向调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、侵袭的体外实验研究

目的:探讨miR-204对急性淋巴细胞白血病(ALL)CEM/C1细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与SOX4的靶向关系。方法:选取ALL细胞株CEM/C1,对CEM/C1细胞进行转染,分为NC组(无处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-204组(转染miR-204-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-SOX4组(转染si-SOX4)、miR-204+pcDNA组(转染miR-204-mimic+pcDNA)及miR-204+pcDNA-SOX4组(转染miR-204-mimic+pcDNA-SOX4)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-204表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞SOX4表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光素酶实验验证miR-204与SOX4的靶向关系。结果:转染细胞48 h和72 h时,miR-204组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、miR-NC组(P＜0.05),凋亡率高于NC组、miR-NC组(P＜0.05)。si-SOX4组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、si-NC组(P＜0.05),凋亡率高于NC组、si-NC组(P＜0.05)。miR-204+pcDNA-SOX4组细胞48 h、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量均明显高于miR-204+pcDNA组、miR-204组（P＜0.05）,凋亡率低于miR-204+pcDNA组、miR-204组（P＜0.05）。与对照组相比,SOX4野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P＜0.05),SOX4突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论:miR-204可负性调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列（mimics-NC）、CXCR4过表达质粒（pcDNA3.1-CXCR4）、pcDNA3.1空载质粒（Vector）转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组（转染无义序列）、mimics组（转染miR-139-5p mimics）、mimics+Vector组（共转染miR-139-5p mimics和空载质粒）和mimics+CXCR4组（共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒）,另设置空白对照组（blank）。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC50值和耐药指数（resistance index,RI）;qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC50值分别为（208.87±27.89）μmol/L和（31.66±6.30）μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低（P＜0.05）,而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K（p110α）和p-AKT等蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。     

miR-106a下调MAP3K2抑制骨肉瘤细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-106a对骨肉瘤细胞增殖的影响及机制。方法:利用Real-time PCR比较了正常成骨细胞（hFOB11.9）及三种骨肉瘤细胞（MG-63、U-2OS和HOS）中miR-106a的表达情况；将NC（negative control)、miR-106a mimics及miR-106a inhibitor分别转染MG-63细胞；转染后通过CCK-8实验、平板克隆形成实验检测miR-106a对细胞增殖的影响；通过生物信息学软件预测miR-106a的靶基因-蛋白激酶2（MAP3K2）；分别构建MAP3K2 3'-UTR结合区野生型和突变型载体，通过荧光素酶报告基因实验检测miR-106a对MAP3K2的调控；在转染了NC以及miR-106a mimics的MG-63细胞中，利用Western blot检测MAP3K2的蛋白水平。结果:与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS和HOS中miR-106a的表达明显降低（P＜0.05）；CCK-8生长曲线表明，转染48、72和96小时后，与NC相比，miR-106a mimics能够显著抑制MG-63细胞的生长（P＜0.05），而miR-106a inhibitor则能促进肿瘤细胞的生长（P＜0.05）;平板克隆形成实验也表明miR-106a mimics能够抑制MG-63的生长，miR-106a inhibitor发挥相反作用；荧光素酶报告基因实验表明转染了克隆MAP3K2 3'-UTR的荧光素酶质粒组中，荧光素酶活性受到miR-106a mimics的明显抑制（P＜0.05），而在MAP3K2 3'-UTR突变组中，荧光素酶活性与对照相比无显著差异（P=0.877）；与NC组相比，转染miR-106a mimics后，MAP3K2的表达明显降低（P＜0.05）。结论:miR-106a可能通过下调MAP3K2的表达抑制骨肉瘤细胞的生长。     

miR -450a -5p 对人卵巢癌 SKOV3细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-450a-5p对体外培养的人浆液性卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡机制的影响,分析miR-450a-5p对人卵巢癌SKOV3细胞肿瘤生物学行为的影响。方法:运用Hiperfect转染试剂介导的转染法将miR-450a-5p mimics转染人卵巢癌SKOV3细胞,设阴性对照组(NC组)及空白对照组(blank组)。采用MTT法、Transwell迁移及侵袭实验、划痕实验、流式细胞术,分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力、周期及凋亡。结果:MTT实验:miR-450a-5p mimics组细胞增殖活性与NC组、blank组无明显差异(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示转染miR-450a-5p mimics后,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱(P<0.05)。划痕后miR-450a-5p mimics组细胞迁移能力较NC组、blank组降低(P<0.05)。流式细胞术:转染miR-450a-5p mimics后,mimics组细胞周期明显被阻滞于G1期(P<0.05)。miR-450a-5p mimics组、NC组、blank组凋亡结果无明显差异(P>0.05)。结论:过表达miR-450a-5p可能对人卵巢癌细胞系SKOV3的侵袭及迁移能力存在负性调控,可能将SKOV3细胞周期阻滞于G1期。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

miR-582-5p靶向抑制Rab27a对肺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨microRNA-582-5p（miR-582-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响，以及对Rab27a基因的靶向调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细胞株、人正常支气管肺上皮细胞株BEAS-2B中miR-582-5p的表达水平。采用miR-582-5p inhibitor（anti-miR-582-5p）和miR-582-5p mimics（mim-miR-582-5p）转染A549细胞，另分别转染miRNA inhibitor无关系列（anti-NC）和miRNA mimics无关系列（mim-NC）作阴性对照。采用双荧光素酶报告实验验证Rab27a与miR-582-5p的关系。采用MTT法和Transwell小室法检测各组细胞增殖、侵袭能力；采用QPCR和Western blotting检测各组A549细胞中Rab27a mRNA和蛋白水平。结果 NSCLC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达水平分别为0.26±0.09和0.83±0.10；A549细胞株和BEAS-2B细胞株中miR-582-5p表达水平分别为0.63±0.08和1.17±0.09，差异均有统计学意义（P＜0.05）。anti-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为（115.68±4.34）％、（130.48±5.48）％、（138.95±5.55）％、（147.03±5.69）％，明显高于anti-NC组；mim-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为（91.31±4.18）％、（86.74±3.23）％、（79.45±3.20）％、（75.22±4.09）％，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Transwell小室结果显示，anti-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为189±19，明显高于anti-NC组；mim-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为55±8，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-582-5p可抑制野生型Rab27a 3’-UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型Rab27a 3’-UTR的荧光素酶活性无影响。anti-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为2.01±0.29和0.85±0.12，高于anti-NC组；mimi-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.08和0.21±0.05，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-582-5p表达可抑制Rab27a表达，从而抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭活性，miR-582-5p有望成为肺癌新的治疗靶点。     

circ_0001721/miR-198对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨circ_0001721/miR-198分子轴对人前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响及相关作用机制。方法:应用qRT-PCR法检测circ_0001721、miR-198的表达量;DU145细胞转染si-circ_0001721、miR-198 mimics、anti-miR-198以及相应的对照（si-NC、miR-NC、anti-miR-NC）;CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、克隆、凋亡、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证circ_0001721与miR-198的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,circ_0001721在前列腺癌组织中高表达（P＜0.05）,而miR-198在前列腺癌组织中低表达（P＜0.05）;与转染si-NC或转染miR-NC相比,si-circ_0001721或miR-198 mimics可以提高细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平（P＜0.05）,降低克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平（P＜0.05）;circ_0001721可靶向结合miR-198;与共转染si-circ_0001721和anti-miR-NC相比,共转染si-circ_0001721和anti-miR-198降低了细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平（P＜0.05）,而增加了克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平（P＜0.05）。结论:敲低circ_0001721可通过上调miR-198抑制前列腺癌细胞的生长和转移。     

miR-30a通过靶向调控ZEB2抑制非小细胞肺癌的迁移与侵袭

目的:探讨miR-30a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达情况及miR-30a在肺癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及其机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-30a在不同NSCLC细胞株中的表达情况;采用脂质体2000转染miR-30a mimics和E盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2） siRNA;通过qRT-PCR检验miR-30a mimics和ZEB2 siRNA的转染效率及转染后ZEB2 mRNA的表达水平变化;Western blot检测转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后ZEB2蛋白表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-30a和ZEB2的相互作用机制;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-30a和干扰ZEB2对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:实验结果显示,与正常人支气管上皮细胞相比,在不同NSCLC细胞株中miR-30a的表达呈不同程度下调;NSCLC细胞转染miR-30a mimics和ZEB2 siRNA后均获得满意的转染效果:miR-30a mimics和ZEB2 siRNA明显降低了NSCLC细胞中ZEB2的mRNA和蛋白的表达水平,组间差异具有统计学意义。双荧光素酶报告实验验证miR-30a对ZEB2 3' UTR具有直接调控作用。细胞迁移实验和侵袭实验结果显示,与Blank组和NC组相比,miR-30a过表达组和ZEB2基因沉默组的A549细胞迁移和侵袭能力均明显降低,说明miR-30a mimics和ZEB2 siRNA均对A549细胞细胞迁移和侵袭有抑制作用。结论:上调miR-30a的表达水平可以负调控ZEB2转录后表达水平,通过抑制上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的进程来抑制肺癌细胞的转移和侵袭。     

miRNA-221对卵巢癌细胞生物学行为的影响分析

目的:探讨微小RNA-221（microRNA-221，miRNA-221)对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法:对人卵巢癌细胞系OVCAR3瞬时转染miR-221 mimics为实验组，转染miR-negative control mimics为阴性对照组，不进行任何转染为空白对照组，转染48 h后进行四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法实验、流式细胞实验、Transwell迁移实验，观察卵巢癌细胞OVCAR3生长状况。结果:实时定量PCR（real-time PCR）检测显示实验组miR-221的表达水平较阴性对照组与空白对照组均有增高(P＜0.05)。MTT检测显示，上调OVCAR3细胞内miR-221水平后，细胞增殖抑制率为（29.81±2.24）%，而阴性对照组与空白对照组分别为（2.49±0.28）%和（1.98±0.24）%，实验组与阴性对照组和空白对照组相比，细胞增殖抑制率增高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞术检测显示实验组OVCAR3细胞凋亡率为（30.33±2.39）%，而阴性对照组与空白对照组分别为（8.13±0.71）%和（6.89±0.58）%，实验组与阴性对照组和空白对照组相比，细胞凋亡率增高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Transwell迁移实验显示，转染miR-221 mimics后实验组、阴性对照组、空白对照组三组的细胞迁移能力差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:瞬时转染miR-221 mimics的上皮性卵巢癌（EOC）细胞系，细胞增殖受到抑制而对细胞的迁移没有影响，表明miR-221可能参与了EOC细胞增殖和凋亡过程。     

微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-149（miR-149）在非小细胞肺癌（NSCLC）中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物（mimics）及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照（未转染组）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC／PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果 QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为（16.51±2.49）％、（22.90±3.65）％和（31.43±5.27）％,均高于其余两组,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染48 h的凋亡率为（29.17±4.48）％,高于未转染组的（5.34±1.72）％和miR 149对照组的（7.62±1.59）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-149 转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义（P＜0.05）;双荧光素酶报告基因实验表明 miR-149可显著抑制野生型 FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。     

MicroRNA-653靶向调控OIP5基因介导mTOR信号通路对非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨microRNA-653（miR-653）靶向调控OIP5基因介导mTOR信号通路对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞生物学特性的影响。方法:选取人正常内皮细胞BEAS-2B和4种NSCLC细胞系（H1650、H1975、A549和H292）,分为control组、mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组进行瞬时转染,利用荧光定量PCR、蛋白印迹、MTT、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术等方法分析miR-653对NSCLC细胞中OIP5、mTOR信号通路相关基因表达及增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期分布的影响。结果:与control组、mimics-NC组和inhibitor-NC组相比,mimics组mTOR信号通路被抑制,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,凋亡率明显增加,细胞多停滞于G1期（均P＜0.05）;然而,inhibitor组mTOR信号通路被激活,细胞增殖、迁移、侵袭能力明显升高,而凋亡率明显降低,G1期细胞数量较少（均P＜0.05）。结论:miR-653可通过负调控OIP5基因抑制mTOR通路激活,从而阻止NSCLC的发生与发展。