脑缺血诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白Cpp32基因表达的初步研究

目的：探讨急性全缺脑血损伤后大鼠海马神经细胞凋亡及相关蛋白Cpp32的基因表达、分布。方法：运用DNA梯形电泳、免疫印迹，免疫组化分析了全脑缺血后海马神经细胞损伤、Cpp32蛋白含量变化及其分布，结果：15min急性全脑缺血复灌24h后，大鼠海马呈明显细胞凋亡特征，且天胱蛋白（Cpp32）基因被持续激活表达，尤其是锥体神经细胞表现最为明显。结论：急性全脑缺血能诱导海马神经细胞凋亡及Cpp32基因基因表达，其中锥体神经细胞表现最显。     

胆红素诱导海马区神经细胞凋亡实验研究

目的:从分子水平探讨胆红素对神经细胞的毒性机理,为新生儿胆红素脑病的防治提供新的途径。方法:制作高胆红素血症动物模型,观察海马区神经细胞的组织学改变,检测脑组织胆红素浓度及海马区神经细胞凋亡率,并探讨其间相关性。结果:高胆红素血症时,海马区神经细胞出现凋亡的组织学改变,神经细胞凋亡率明显增高,与脑组织胆红素浓度呈正相关。结论:胆红素通过诱导海马区神经细胞凋亡介导其神经毒性的产生。     

抗抑郁药对新生大鼠海马细胞的保护作用

目的：研究不同种类的抗抑郁药对谷氨酸和过氧化氢所致新生大鼠海马细胞损伤的保护作用。方法：建立Glu对新生大鼠海马神经细胞的急、慢性损伤模型及H2O2对大鼠海马神经细胞的急性损伤模型。观察文拉法辛、度洛西汀、氟西汀、地西帕明和DOV对海马神经细胞是否有保护作用，并采用流式细胞仪测定细胞内钙浓度，初步探讨急性Glu损伤及各类抗抑郁药物的神经保护作用和细胞内钙超载的相关性。     

虾青素促进丙烯酰胺所致大鼠海马神经细胞损伤的恢复

目的从细胞水平上研究虾青素对丙烯酰胺所致海马神经细胞损伤恢复的影响。方法通过B27无血清培养法进行SD乳鼠的大脑海马神经细胞的分离、培养及其鉴定;MTT法检测细胞存活率,比色法测定细胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性,线粒体的MDA及NO的含量。结果虾青素能提高丙烯酰胺损伤过的海马神经细胞的存活率,提高了丙烯酰胺损伤后细胞SOD、CAT活性、GSH-Px的活力,并降低了细胞线粒体中的MDA和NO的含量。结论虾青素对丙烯酰胺造成的高海马神经细胞损伤有促进恢复的作用。     

DHM reduces hippocampal neuronal apoptosis,Aβ and p-Tau proteins by inhibiting JNK signaling in T2DM rats北大核心CSCD

海马神经元是中枢神经系统的重要细胞之一,与认知功能有密切的联系[1]。二型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠海马损伤与其海马Tau蛋白磷酸化和Aβ沉积有关[2]。二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)是一种黄酮类物质,具有抗炎、抗氧化等作用[3]。研究显示:减少海马神经细胞凋亡的重要机制之一是抑制JNK信号[4]。本实验通过高糖高脂和低浓度STZ喂养SD大鼠复制T2DM大鼠模型,探讨DHM通过抑制JNK信号降低T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau水平。     

慢性铝染毒大鼠脑及其雌激素受体的变化

目的　探讨慢性铝染毒对大鼠端脑皮质和海马组织细胞、雌激素受体亚型表达及血清雌激素水平的影响 ,比较上述变化与阿尔茨海默病病变的相似性。方法　用长期腹腔注射AlCl3 溶液使大鼠染毒 ,用放射免疫法测定血清雌二醇水平 ,用HE染色和免疫组化观察大鼠端脑和海马组织细胞结构及雌激素受体亚型的表达。结果　慢性铝染毒大鼠血清雌二醇水平降低到 (7 67± 1 80 )pg ml(P <0 0 0 0 1 ) ,端脑皮质和海马出现神经细胞水肿 ,卫星增多现象 ,胶质细胞增多 ,噬神经元现象和神经元丢失 ;海马神经细胞排列紊乱 ,层数和神经细胞数目减少 ,CA3 CA4区神经细胞脱失 ,胶质细胞浸润。ERα和ERβ免疫阳性颗粒普遍存在于正常大鼠端脑皮质Ⅱ～Ⅵ层神经细胞内 ,ERα免疫阳性颗粒存在于细胞核、ERβ免疫阳性颗粒存在于胞浆。慢性铝染毒后 ,端脑皮质ERα免疫阳性神经细胞数量明显减少 ,多数神经细胞内ERα的表达降低或呈阴性 ;端脑皮质中ERβ免疫阳性神经细胞数量变化不明显 ,但表达量增强。结论　慢性铝染毒可以导致端脑皮质和海马神经细胞损伤丢失 ,端脑皮质雌激素受体亚型表达量异常 ,血液雌激素水平降低。这些变化和阿尔茨海默病变化具有一定的相似性     

虾青素对活性氧所致海马神经细胞氧化损伤的保护作用

目的从细胞水平上研究了虾青素对活性氧所致海马神经细胞损伤的保护作用。方法通过B27无血清培养法进行SD乳鼠的大脑海马神经细胞的分离、培养及其鉴定;MTT法检测细胞存活率,比色法测定细胞LDH的释放量,SOD、CAT活性、GSH-Px的活力及MDA的含量。结果虾青素能提高活性氧损伤过的海马神经细胞的存活率,减少细胞LDH的释放量,并增加细胞SOD、CAT活性、GSH-Px的活力,降低MDA的含量。结论虾青素对活性氧诱导的海马神经细胞损伤具有保护作用。     

灵芝孢子粉对戊四氮活化海马神经细胞bcl-2表达的研究

癫痫是一种短暂中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病,由于脑内神经元群过度放电所致的阵发性脑功能障碍。癫痫发作后可造成神经元死亡,而细胞凋亡是癫痫发作后神经元死亡的主要方式。灵芝孢子粉除了能清除自由基,发挥免疫调节作用、对神经系统还具有镇静和保护的作用。本实验研究灵芝孢子粉对戊四氮活化大鼠海马神经细胞bcl-2表达变化的影响,进一步探讨灵芝孢子粉的作用机制和癫痫与海马神经细胞凋亡调控基因之间的关系。     

糖皮质激素诱导的小鼠记忆功能低下及其作用机理

目的:研究糖皮质激素(GCOR)诱导小鼠记忆功能降低及其作用机理。方法:采用Fura-2/AM 钙离子荧光指示剂和双波长荧光分光光度计测定细胞内[Ca²⁺]i 浓度;用透射电镜和流式细胞仪分别检测细胞凋亡(PCD) 。结果:GCOR 可分别诱导成年及老龄小鼠机体免疫功能降低,胸腺及脾脏脏器指数减小,老龄动物记忆功能降低,胸腺、海马细胞内Ca²⁺ 超载,海马神细胞PCD细胞数增加。体外试验结果亦表明,GCOR 可直接诱导T 淋巴细胞和海马神经细胞[Ca2+]i 超载,细胞凋亡。结论:糖皮质激素可诱导小鼠记忆功能降低。细胞内[Ca²⁺]i 超载可能是引起小鼠免疫功能降低、智力水平下降、衰老和细胞凋亡的主要原因之一。     

皮质酮损伤培养的海马神经细胞并促进其电压依赖性钙内流(英文)

目的:研究皮质酮(Cor)对原代培养海马神经细胞存活和海马神经细胞电压依赖性钙通道(VDCC)的影响。方法:原代海马神经细胞存活率测定用MTT比色法。海马神经细胞上VDCC内向Ca~(2 )电流检测采用全细胞膜片箝技术。结果:Cor可浓度依赖地损伤原代海马神经细胞和皮层神经细胞,IC_(50)分别为3.2μmol·L~(-1)和85μmol·L~(-1),Cor(1μmol·L~(-1)-0.1mmol·L~(-1))喷射于海马神经细胞表面即刻显著促进电压依赖性Ca~(2 )内流,其最大升幅分别是53％,191％和84％,而且Cor诱导的钙内流增加是非浓度依赖和非电压依赖的。结论:Cor可显著促进海马神经细胞电压依赖性钙通道开放,该作用可能是Cor海马神经毒性作用的机制之一。     

脱氢表雄酮及其衍生物对谷氨酸致海马神经细胞损伤的保护作用

目的　观察脱氢表雄酮 (DHEA)及其衍生物 7 羰基 脱氢表雄酮 (7 oxo DHEA)对谷氨酸诱导的海马神经损伤的保护作用。方法　原代培养的SD大鼠海马神经细胞 ,MTT比色法检测细胞存活率 ;激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 + 及自由基随时间变化曲线 ;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)水平。结果　DHEA(0 1μmol·L-1)及 7 oxo DHEA(0 1μmol·L-1)预保护后的谷氨酸损伤海马神经细胞胞内Ca2 + 及自由基变化曲线均明显低于无预保护组 ,GSH水平明显高于无预保护组 (P <0 0 1)。结论　DHEA及 7 oxo DHEA对谷氨酸诱导海马神经细胞损伤有保护作用。     

侧脑室注射rAAV-HIF-1α治疗阿尔茨海默病模型鼠的实验研究

目的观察侧脑室注射rAAV-HIF-1α对AD模型鼠HIF-1α蛋白含量及海马神经细胞凋亡率的影响。方法侧脑室注射Aβ25-35构建老年性痴呆大鼠模型,1周后侧脑室注射rAAV-HIF-1α,采用Western blot技术检测大鼠海马HIF-1α蛋白的表达,流式细胞术检测海马神经细胞凋亡百分率。结果 AD模型大鼠侧脑室注射rAAV-HIF-1α海马神经细胞HIF-1α蛋白表达显着升高(P<0.05),海马神经细胞凋亡百分率显着降低(P<0.05)。结论 rAAV-HIF-1α能够转染AD模型大鼠海马神经细胞持续稳定表达HIF-1α蛋白并抑制AD模型大鼠海马神经细胞凋亡。     

血管性痴呆小鼠海马神经细胞钙稳态及石杉碱甲的影响

目的观察石杉碱甲对VD小鼠海马神经细胞钙稳态的影响。方法制备VD动物模型,并设立假手术组作,选用石杉碱甲为治疗组。进行学习、记忆成绩测试,在LSCM下观察海马神经细胞静息态[Ca2+]i及其在去极化时的动态变化。结果模型组的学习和记忆成绩低于假手术组及治疗组;而模型组静息态[Ca2+]i显著高于假手术组、治疗组,并且海马神经细胞[Ca2+]i升高幅度明显降低,恢复时间明显延长。结论 VD小鼠海马神经细胞钙稳态变化参与了其发病机制,石杉碱甲可改善海马神经细胞钙稳态变化。     

哈巴苷对急性脑缺血小鼠神经细胞及caspase非依赖性凋亡通路的影响

目的研究哈巴苷对急性脑缺血小鼠海马神经细胞、线粒体功能及caspase非依赖性细胞凋亡通路的影响。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠急性脑缺血模型。造模后,各组分别立即尾静脉注射哈巴苷(4、8、12 mg·kg~(-1))、依达拉奉(3.2 mg·kg~(-1)),模型组及假手术组同法给予等量生理盐水(10 m L·kg~(-1))。造模6 h后,采用流式细胞术检测MCAO小鼠海马神经细胞凋亡率及线粒体膜电位;透射电镜观察MCAO小鼠海马神经细胞线粒体内外膜的清晰度、线粒体嵴的完整性、线粒体基质电子密度的高低变化及线粒体肿胀情况;采用Western blot法检测MCAO小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G的蛋白表达;采用q PCR法检测MCAO小鼠海马组织中AIF及Endo G mRNA的表达。结果造模6 h后,与假手术组相比,模型组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显增加(P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构受损严重,线粒体结构松散,可见明显肿胀;脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显降低,线粒体AIF及Endo G蛋白释放增加(P<0.01);海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显增加(P<0.01);与模型组相比,哈巴苷各剂量组小鼠脑组织海马神经细胞凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01);海马神经细胞线粒体膜电位明显升高(P<0.01);神经细胞线粒体超微结构明显改善;哈巴苷8、12 mg·kg~(-1)组小鼠脑组织线粒体中AIF及Endo G蛋白表达明显增加,线粒体AIF及Endo G蛋白释放减少(P<0.05,P<0.01),哈巴苷4 mg·kg~(-1)组小鼠脑组织线粒体中Endo G蛋白表达明显增加,线粒体Endo G蛋白释放明显减少(P<0.05);哈巴苷8、12 mg·kg~(-1)组小鼠海马组织AIF及Endo G mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论哈巴苷对急性脑缺血有保护作用,其机制可能与保护大脑神经细胞及线粒体生理活性,抑制caspase非依赖性细胞凋亡通路相关。     

雌激素对卵巢切除动物认知功能的影响及对海马神经元的保护作用(英文)

在整体水平观察卵巢切除 ,雌激素替代对小鼠学习和记忆行为的影响及脑内单胺递质含量的变化 ,同时进一步从离体水平观察了雌激素对过氧化氢 (H2 O2 )致原代培养海马神经细胞的保护作用 .通过避暗实验 (被动回避反应 )观察了雌激素对学习记忆行为的影响 ,高效液相色谱法电化学检测器检测了脑内单胺递质含量的变化 ,MTT法观察了雌激素对原代培养海马神经细胞存活率的影响 .在避暗实验中 ,卵巢切除小鼠记忆保持率明显下降 ,脑内多巴胺及 5 羟色胺含量亦明显降低 .雌激素替代对上述指标有明显的改善作用 .雌激素提前 2h给予可显著拮抗H2 O2 所致胚胎大鼠原代培养海马神经细胞存活率的降低 .雌激素缺乏可影响学习记忆功能 ,且与脑内单胺递质含量变化具有密切关系 .进一步研究表明 ,雌激素具有直接的神经保护作用 ,保护神经元免受氧化应激的损伤 .     

吗啡戒断性焦虑大鼠边缘系统CaMK II含量及其磷酸化水平的改变

目的:观察吗啡戒断大鼠焦虑产生时其边缘系统主要脑区/核团―海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK II的含量和磷酸化水平的改变. 方法 :48只大鼠随机分为生理盐水对照组(n=18)、模型组(n=18)、丁螺环酮组(n=12).模型组和丁螺环酮组用剂量递增法建立大鼠吗啡依赖模型,停药后,丁螺环酮组给予丁螺环酮,模型组给予生理盐水.在吗啡自然戒断的72 h,用高架十字迷宫检测其焦虑行为,然后再用蛋白免疫印迹技术检测各组大鼠海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK II的含量和磷酸化水平. 结果 :与生理盐水对照组和丁螺环酮组比较,模型组CaMK II蛋白含量和β亚基磷酸化水平均显著升高(均P<0.01). 结论 :吗啡戒断大鼠的边缘系统海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK II 含量、CaMK II β亚基磷酸化水平的增高,这可能是吗啡依赖戒断焦虑行为产生的分子机制之一.     

吗啡戒断性焦虑大鼠边缘系统CaMK Ⅱ含量及其磷酸化水平的改变

目的:观察吗啡戒断大鼠焦虑产生时其边缘系统主要脑区/核团、海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ的含量和磷酸化水平的改变。方法:48只大鼠随机分为生理盐水对照组(n=18)、模型组(n=18)、丁螺环酮组(n=12)。模型组和丁螺环酮组用剂量递增法建立大鼠吗啡依赖模型,停药后,丁螺环酮组给予丁螺环酮,模型组给予生理盐水。在吗啡自然戒断的72 h,用高架十字迷宫检测其焦虑行为,然后再用蛋白免疫印迹技术检测各组大鼠海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ的含量和磷酸化水平。结果:与生理盐水对照组和丁螺环酮组比较,模型组CaMK Ⅱ蛋白含量和β亚基磷酸化水平均显著升高(均P<0.01)。结论:吗啡戒断大鼠的边缘系统海马、杏仁核、前额叶皮质神经细胞CaMK Ⅱ含量、CaMK Ⅱβ亚基磷酸化水平的增高,这可能是吗啡依赖戒断焦虑行为产生的分子机制之一。     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的 研究不同剂量果糖二磷酸锌（ZnFDP）对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响。方法 采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞，在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP，使之终浓度分别为2．5、12．5、125μg.ml^01，通过细胞形态学观察，神经元突起和胞体生长状况的定量比较，不同培养期细胞存在活数和培养液中乳酸脱氢酶（LDH）渗漏量的测定，分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响。结果 培养36h后与对照组比，中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多，突起长度增加，胞体长径没有显著性变化；低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别；高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化。培养3d、7d、10d，中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组；培养7d、10d，中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组。结论 一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育。     

用RT-PCR方法定量检测中枢学习记忆功能有关基因的表达

目的　建立定量检测中枢学习记忆功能有关基因表达的方法。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法定量检测了小鼠海马和皮层内学习记忆功能有关基因糖皮质激素受体 (GR)、盐皮质激素受体 (MR)、bcl 2、c fos、神经细胞粘附分子 (NCAM )等基因的表达水平。结果　RT PCR具有灵敏度高、专一性好、简便快速等特点 ,尤其适合于定量检测微量样品和表达水平较低的基因。结论　RT PCR是一种较好的定量检测中枢学习记忆功能有关基因表达水平的方法     

茯苓多糖对癫痫大鼠海马神经细胞凋亡及Nrf2ARE信号通路的影响

目的 探讨茯苓多糖(PPC)对癫痫大鼠海马神经细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法 将SD大鼠分为NC组、Model组、茯苓多糖、中、高低剂量组(PPC-L组，50 mg/kg; PPC-M组，100 mg/kg; PPC-H组，200 mg/kg),每组12只。除NC组外，其他组均需构建癫痫大鼠模型。建模成功后，给药处理，1次/d,连续14 d。比较5组大鼠癫痫发作潜伏期的差异；通过Morris水迷宫实验检测各组大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数；超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测海马组织中CAT、SOD、GSH水平；TUNEL染色检测神经细胞凋亡；western blot检测大鼠海马组织中活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bax、核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素氧化酶(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。结果 与NC组比较，Model组大鼠逃避潜伏期延长，穿越平台次数减少，海马组织中SOD、CAT、GSH水平及Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达水平显著降低，神经细胞凋亡率、Cle...