方法：首先,将不同浓度(200、400、600、800nmol/L)TSA作用HTFs共24h后,MTT法检测其对细胞活力的影响; 然后,不同浓度(400、600nmol/L)TSA与5ng/mL TGF-β1混合作用于HTFs共24h,MTT法检测其对细胞活力的影响; 最后,RT-PCR和Western-blot法分别检测不同浓度(400、600nmol/L)TSA与5ng/mL TGF-β1混合以及600nmol/L TSA对HTFsⅠ型胶原纤维的mRNA及蛋白表达的影响。
结果：MTT证实,与对照组相比,400nmol/L及以上浓度TSA作用组,HTFs活力显著下降(P<0.05); 两种浓度(400、600nmol/L)TSA均可减弱TGF-β1促HTFs增殖的作用(P<0.05); RT-PCR和Western-blot证实两种浓度(400、600nmol/L)TSA对TGF-β1诱导上调的Ⅰ型胶原纤维在基因转录及蛋白表达水平有逆转作用。
结论：TSA能够抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖,并减弱Ⅰ型胶原纤维基因转录及蛋白表达水平。 相似文献
目的：研究K-115对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响,并探讨其相关作用机制,为青光眼术后抗瘢痕治疗提供新思路。
方法：选取2018-09/2019-09于河北省人民医院行青光眼手术患者的Tenon囊组织,采用组织块法进行HTFs原代培养,应用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HTFs模拟青光眼滤过性手术后的细胞活化模型,并采用K -115处理细胞。将细胞分为4组：对照组采用溶剂二甲基亚砜(DMSO)处理; TGF-β1组采用10μg/L TGF-β1处理24h; TGF-β1+5 K-115组采用5μmol/L K-115预处理2h后加入10μg/L TGF-β1处理24h; TGF-β1+10 K-115组采用10μmol/L K-115预处理2h后加入10μg/L TGF-β1处理24h。通过细胞增殖实验观察细胞的增殖能力; 划痕试验检测细胞的迁移能力; 透射电子显微镜观察细胞内自噬小体的形成; Hoechst 33342/PI染色观察细胞凋亡情况。
结果：细胞增殖实验结果提示K-115可以抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖; 划痕试验提示K-115可以抑制TGF-β1诱导的HTFs迁移; 透射电子显微镜结果显示K-115可以增强TGF-β1诱导的HTFs自噬。Hoechst 33342/PI染色提示K-115并未诱导细胞凋亡。
结论：K-115可能是通过增加HTFs自噬而非诱导凋亡机制调控TGF-β1诱导的HTFs增殖及迁移能力。 相似文献
目的：探讨ALK5抑制剂EW-7197对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制。
方法：采用MTS法检测细胞增殖率，并摸索EW-7197最佳的作用浓度和作用时间。之后将细胞分为3个组，分别为正常对照组、TGF-β1诱导组和TGF-β1+EW-7197处理组，采用Transwell小室观察各组细胞迁移情况，采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。
结果：MTS结果显示，不同处理条件的EW-7197以6.0μmol/L作用24h的细胞增殖率最低(均P<0.01)。Transwell小室实验结果显示，TGF-β1诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0个/视野，明显高于正常对照组(149.0±15.0个/视野)和TGF-β1+EW-7197处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01)。Western blot检测结果显示，TGF-β1诱导组细胞中Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197处理组(均P<0.001)。
结论：EW-7197能够通过TGF-β/Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖和迁移。 相似文献
方法：幼年健康豚鼠(2周龄)10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR, RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β2及TGF-β2 mRNA的表达,分析不同光照形式与效应的关系。
结果：免疫细胞化学法显示各组TGF-β2表达均为阳性,病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度(optical density,OD)值进行半定量分析,聚焦光组明显高于其它各组,组间比较有统计学差异(F=11.08,P<0.05); RTFQ-PCR法显示,聚焦光组TGF-β2mRNA表达水平较其它各组明显增加,组间比较有统计学差异(F=133.01,P<0.05)。
结论：不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β2表达,以聚焦光最明显。 相似文献
目的：探讨Mcc950对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)炎性损伤的保护作用。
方法：将ARPE-19细胞分为正常对照组、H2O2损伤组、单纯Mcc950给药组、Mcc950预处理+H2O2损伤组,采用 CCK-8法检测细胞活力并确定H2O2和Mcc950合适的实验浓度,ELISA法检测细胞分泌的IL-1β浓度,免疫印迹(Western blot)法检测细胞中NLRP3炎性小体相关蛋白的表达情况,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况。
结果：细胞活力随H2O2刺激浓度的增加逐渐下降,H2O2浓度为400μmol/L时细胞活力显著降低; 而0.1、1μmol/L Mcc950对细胞活力无显著影响,故选取400μmol/L H2O2和1μmol/L Mcc950作为合适的实验浓度。与正常对照组相比,H2O2损伤组细胞活力显著降低,细胞上清液中IL-1β浓度显著升高,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),而与H2O2损伤组比较,Mcc950预处理+H2O2损伤组细胞活力明显升高,细胞上清液中IL-1β浓度和细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,H2O2能够促进细胞中NLRP3、Pro-caspase1和caspase1的表达,而Mcc950预处理+H2O2损伤组细胞中NLRP3、Pro-caspase1依然保持高表达,但caspase1表达水平得到明显抑制,表明Mcc950能有效抑制NLRP3炎性小体的激活从而干扰具有细胞凋亡作用的成熟caspase1的产生。
结论：Mcc950能够有效抑制H2O2诱导的NLRP3炎性小体激活,恢复细胞活力,抑制细胞凋亡。 相似文献
目的：探究吡咯脘二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对转化生长因子-beta2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)上皮-间充质转化(EMT)的逆转机制。
方法：TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT,并给予不同浓度PDTC处理TGF-β2诱导的LECs。CCK-8、划痕试验检测细胞增殖与迁移,Western Blot检测EMT标志物E-cadherin、α-SMA和NF-κB信号传导通路相关蛋白表达,以及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3、细胞周期蛋白D1的表达。
结果：TGF-β2处理组细胞增殖和迁移活力明显高于未添加TGF-β2的实验组; E-cadherin表达下调,α-SMA表达上调。在TGF-β2的作用下NF-κB p65和磷酸化的NF-κB p65表达增加(P<0.05)且在TGF-β2 10 ng/mL刺激浓度时LECs表现出较强的增殖活力和迁移能力。PDTC逆转EMT和诱导细胞凋亡的机制研究表明,PDTC干预处理后细胞活力和迁移能力都显著降低,PDTC抑制IκB的磷酸化进而抑制NF-κB核移位,NF-κB信号通路中NF-κBp65/p-NF-κB p65、Iκκ-α/p-Iκκ-α表达下调(P<0.05),诱导促凋亡蛋白BAX/Caspase-3表达上调、抑凋亡蛋白BCL-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达下调,NF-κB/IκB mRNA表达下调,凋亡相关mRNA BAX表达上调BCL-2表达下调。
结论：PDTC可显著逆转由TGF-β2诱导的LECs细胞EMT过程,可能与抑制NF-κB信号通路活化使NF-κB p65/IκB/Iκκ-α表达降低以及激活凋亡相关蛋白表达有关,PDTC可通过抑制NF-κB信号通路达到逆转EMT的进程并使异常增殖的细胞发生凋亡,这将为后发性白内障的治疗提供新的潜在的治疗药物。 相似文献
方法：取本院眼库新鲜眼球(<6h)的Tenon's囊组织,用组织块培养法进行成纤维细胞体外培养; 流式细胞仪测定HCPT和丝裂霉素C(MMC)对HTFs细胞周期的影响; 台盼蓝染色法鉴定HCPT和MMC对HTFs的抑制作用是否由药物的细胞毒性引起; RT-PCR检测HCPT、MMC作用24h后HTFs的Smad7 mRNA基因表达。
结果：HTFs 体外生长良好,可用于实验研究。不同浓度HCPT(0,0.25,1,4mg/L)作用后的HTFs细胞周期与对照组相比,G2期细胞百分数的组间差异均有统计学意义(P<0.05); 不同浓度MMC(0,0.025,0.1,0.4mg/L)作用后的HTFs细胞周期与对照组相比,G1期细胞百分数的组间差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度HCPT和MMC作用后的HTFs活细胞率和空白对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。4mg/L HCPT,0.4mg/L MMC作用HTFs 24h后,Smad7 mRNA表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：HCPT将HTFs阻滞于G2期,MMC将HTFs阻滞于G1期; HCPT,MMC抑制HTFs的作用和药物的细胞毒性无关; HCPT抑制HTFs的增殖可能是通过上调Smad7 mRNA的表达阻断TGF-β信号通路实现的。 相似文献
方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H2O2处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H2O2对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19,再用200μmol/L H2O2处理24h,观察细胞活性变化。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平变化,免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB蛋白表达变化。
结果：CCK8法检测结果显示：当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时,ARPE-19活性无明显变化; 当浓度达到16μmol/L时,细胞活性开始下降(P<0.05)。H2O2诱导后,当α-倒捻子素浓度在0～16μmol/L之内时,α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性。ROS结果表示：H2O2诱导后,ROS表达量增高(P<0.05); 8和12μmol/L α-倒捻子素预处理,均可有效清除H2O2诱导产生的ROS(P<0.05)。Western blot结果显示：H2O2诱导后NF-κB蛋白表达增高(P<0.05),12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H2O2诱导后ARPE-19的NF-κB蛋白表达(P<0.05)。
结论：H2O2诱导ARPE-19细胞氧化损伤,造成细胞活性下降,ROS表达量增加,经过α-倒捻子素预处理后,可有效提高细胞活性,清除ROS,活化NF-κB。 相似文献
方法：进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度(0,1.0,2.0,4.0,8.0μmol/L)分别作用于ACC-2细胞,用Rh123染色,流式细胞仪检测8.0μmol/L As2O3作用前、后(24h),ACC-2细胞的线粒体膜电位(△ψm)变化; 用多功能酶标仪进行Caspase 3活性检测。
结果：空白对照组ACC-2细胞内Rh123荧光强度最强,8.0μmol/L As2O3处理组ACC-2细胞内Rh123荧光强度减弱,其差异有显著性(P<0.05); 随着As2O3药物浓度的增高(0, 1, 2, 4, 8μmol/L),ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加。
结论：As2O3作用于ACC-2细胞,可通过降低线粒体膜电位从而引起细胞凋亡。随着As2O3药物浓度的增高,ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加,Caspase 3被激活,细胞可发生不可逆转的凋亡过程。 相似文献
目的：探讨葡萄糖关键代谢酶在高糖诱导的人晶状体上皮(HLEB3)细胞中的表达情况。
方法：将体外培养的HLEB3细胞分为正常对照组(采用DMEM培养液培养,含葡萄糖5mmol/L)、氧化应激组(采用含H2O2 200μmol/L的DMEM培养液培养)、高糖诱导组(采用含葡萄糖30mmol/L的培养液培养),培养24h后检测细胞凋亡情况和细胞活力及6种葡萄糖关键代谢酶(6-磷酸果糖激酶-1、丙酮酸激酶、己糖激酶、柠檬酸合成酶、α-酮戊二酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶)的mRNA表达情况。
结果：高糖诱导HLEB3细胞凋亡,高糖诱导组(63.43%±3.40%)细胞活力低于正常对照组(100.00%±0.00%)和氧化应激组(91.90%±5.11%),且高糖诱导组细胞6种葡萄糖代谢关键酶的mRNA表达水平均低于正常对照组和氧化应激组(均P<0.05)。
结论：高糖可以诱导HLEB3细胞葡萄糖关键代谢酶的表达水平降低,诱导细胞凋亡,影响细胞活性。 相似文献
方法：建立CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧模型,并分为以下5组：正常组(细胞正常培养,不加任何处理)、缺氧模型组(200μmol/L CoCl2)、空白血清组(200μmol/L CoCl2+空白血清)、低剂量含药血清组(200μmol/L CoCl2+10%含药血清)、高剂量含药血清组(200μmol/L CoCl2+20%含药血清)。CCK-8检测细胞活性; 试剂盒检测细胞上清液中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平; ELISA检测细胞培养基中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量; 实时荧光定量PCR(qPCR)检测VEGF、HIF-1α和脯氨酰羟化酶-2(PHD-2)的mRNA水平; Western Blot法检测VEGF、HIF-1α和PHD-2的表达情况。
结果：采用200μmol/L的CoCl2浓度可成功建立ARPE-19细胞缺氧模型。低剂量和高剂量黄芪含药血清可抑制缺氧诱导的ARPE-19细胞增殖(P<0.05),升高ARPE-19细胞缺氧损伤中GSH水平,降低MDA含量(P<0.05)。低剂量和高剂量黄芪含药血清可抑制ARPE-19细胞缺氧损伤上清液中HIF-1α和VEGF的表达(P<0.05),以及ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α、PHD-2的mRNA表达和蛋白表达(P<0.05)。
结论：低剂量和高剂量黄芪含药血清通过抗氧化作用减轻CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧损伤。 相似文献
方法：体外培养ACC-2细胞,分为实验组和对照组,向培养至指数生长期的ACC-2细胞加入不同浓度(2、4、6、8μmol/L)的含As2O3的细胞培养液作为实验组,对照组给予等量的细胞培养液,加入As2O3后分别培养不同时间。倒置显微镜下密切观察各时间点不同浓度As2O3对ACC-2细胞的生长抑制作用和细胞凋亡的形态变化,应用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学技术检测MDM2基因(24、48h)和蛋白(24、48、72h)的表达变化。
结果：经As2O3处理后ACC-2细胞体积缩小变圆,核质固缩,悬浮凋亡细胞增多,存活细胞数量明显减少。RT-PCR及免疫细胞化学结果一致显示,ACC-2细胞随着药物浓度的增加及作用时间的延长,MDM2表达明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度不同时间各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05),MDM2蛋白表达量与浓度及时间呈显著负相关性(r<-0.7,P<0.05),即呈浓度和时间依赖性。
结论：As2O3对ACC-2细胞具有生长抑制和诱导凋亡的作用,且As2O3能够下调腺样囊性癌ACC-2细胞中癌基因MDM2 mRNA及蛋白的表达,可能是其诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡的机制。 相似文献
目的：研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF165 及VEGF165b 表达的情况。
方法：正常接种并体外培养人视网膜色素上皮细胞,待细胞稳定生长后以150μmol/L CoCl2 和25mmol/L 葡萄糖浓度分别模拟细胞缺氧和高糖环境,将接种细胞分为正常组(5.56mmol/L 葡萄糖)、缺氧组(5.56mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl2)、高糖组(25mmol/L 葡萄糖,不加CoCl2)、联合组(25mmol/L 葡萄糖+150μmol/L CoCl2)共四组。每组分别于12、24、36、48h提取RNA。MTT 比色法检测细胞活力及增长趋势; RT-PCR 法检测不同时间点四组RPE 细胞VEGF165 mRNA 和VEGF165b mRNA 的相对表达量。
结果：缺氧和高糖环境下RPE 细胞分裂增殖受限,细胞活力降低。同一组细胞不同时间点比较,正常组VEGF165和VEGF165b随时间变化的表达差异无统计学意义(P >0.05),而缺氧组、高糖组、联合组VEGF165和VEGF165b的表达则随时间变化而变化,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时间点各组相互比较,在缺氧模型建立后12h 各组细胞间VEGF165和VEGF165b的表达差异无统计学意义(P >0.05),而24、36、48h 时各组细胞VEGF165和VEGF165b的表达差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：体外培养RPE细胞能够正常表达VEGF165b,缺氧和高糖是在转录水平诱导VEGF165 mRNA的表达上调,同时降低了VEGF165b mRNA的表达量。 相似文献
目的：比较高度近视黄斑裂孔性视网膜脱离(MHRD)行玻璃体切割联合内界膜剥离后玻璃体腔内分别行硅油或C3F8填充治疗的疗效观察。
方法：回顾性临床研究。2019-01/2022-08就诊于我院的45例45眼高度近视MHRD患者,根据手术方式分为硅油组(23例)及C3F8组(22例),两组患者均常规三切口玻璃体切割手术,内界膜剥离后行内界膜填塞、自体血覆盖,硅油填充组行硅油填充,C3F8组行15% C3F8气体填充。两组患者分别观察最佳矫正视力(BCVA)、多焦视网膜电图(mfERG)、裂孔的闭合及视网膜复位情况,统计两组患者术后并发症情况。
结果：C3F8组、硅油组患者裂孔闭合率为77%、83%(P>0.05),视网膜复位率分别为95%、96%(P>0.05)。C3F8组、硅油组术后视力分别为0.99±0.34、1.22±0.37,C3F8组视力优于硅油组(t=-2.156,P=0.037),两组均较术前显著提高。术后12 mo,两组患者mfERG一阶函数1环(C3F8组114.27±26.37 nV/deg2,硅油组98.08±24.36 nV/deg2)及2环(C3F8组80.45±14.94 nV/deg2,硅油组67.73±15.33 nV/deg2)P1波反应密度较术前(1环P1波反应密度：C3F8组58.13±13.96 nV/deg2、硅油组55.30±10.48 nV/deg2; 2环P1波反应密度：C3F8组51.18±8.19 nV/deg2、硅油组47.43±11.97 nV/deg2)明显增加(均P<0.05),C3F8组较硅油组增加明显(P<0.05)。硅油组与C3F8组患者术后并发症发生情况无差异(P>0.05)。
结论：玻璃体切割联合内界膜剥离后玻璃体腔内分别行硅油或C3F8填充均可促进高度近视MHRD患者视网膜复位及黄斑裂孔闭合,而且在视功能恢复C3F8填充优于硅油填充。 相似文献
目的：研究脂联素对缺氧损伤的恒河猴脉络膜/视网膜内皮(RF/6A)细胞的保护作用及相关机制。
方法：将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、缺氧损伤(CoCl2刺激诱导24h)组和缺氧损伤+脂联素(5、50、100μmol/L脂联素预处理6h)组。采用MTT法检测细胞活力,选择合适的脂联素内皮细胞保护作用浓度,并采用Western blot检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2的表达情况,同时测定细胞内活力氧簇(ROS)的表达水平。
结果：与对照组相比,缺氧损伤组和各浓度脂联素预处理的RF/6A细胞活力均下降(均P<0.01); 与缺氧损伤组相比,各浓度脂联素预处理后细胞活力均显著增加(均P<0.05),其中50μmol/L脂联素是较为合适的保护作用浓度。与对照组相比,缺氧损伤组细胞活力降低,Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低,ROS生成增加(P<0.01); 与缺氧损伤组相比,脂联素预处理后细胞活力增加,Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量增加,ROS生成减少(P<0.01)。
结论：脂联素可明显减轻缺氧造成的视网膜血管内皮细胞损伤和凋亡,其机制可能与脂联素减轻氧化应激有关。 相似文献
方法：利用显微镜下观察结合TUNEL计数法分别测定P2X7激动剂BzATP和拮抗剂OxATP对体外培养的正常视网膜毛细血管周细胞以及糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞存活率的影响。
结果：P2X7受体激动后可介导视网膜毛细血管周细胞死亡,糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞较正常视网膜毛细血管周细胞,在同等激动剂浓度下或在同样的时间点,能引起更多的细胞凋亡。而拮抗剂OxATP可以明显减轻BzATP对视网膜毛细血管周细胞的毒性作用,提高其存活率。
结论：P2X7受体活性对视网膜毛细血管周细胞凋亡有一定调控作用。 相似文献