谷氨酰胺对内毒素血症肠组织TLR2、4表达的影响

目的:探讨谷氨酰胺对TLR2、4表达的调节与肠组织损伤的关系.方法:将24只10日龄Wistar幼鼠随机分为对照组(n=8),ip生理盐水,1 mL/kg;LPS组(n=8),ip LPS,5 mg/kg;谷氨酰胺组(n=8),ip LPS 5 mg/kg 谷氨酰胺10 mL/kg,3 h后取肠组织,HE染色观察病理改变,RT-PCR检测肠组织TLR2、4 mRNA的表达.Western blot检测TLR蛋白表达.结果:对照组TLR2、4 mRNA均较LPS组弱(TLR2 mRNA:1.386±0.04 vs 4.093±0.90.TLR4 mRNA:9.872±0.36 vs 16.706±1.28.TLR2蛋白:22.28±0.96 vs 79.27±3.16.TLR4蛋白:35.07±0.17 vs 65.18±0.46):与LPS组相比,谷氨酰胺组TLR2、4mRNA和蛋白表达明显下调(TLR2 mRNA:3.055±0.51.TLR4 mRNA:3.920±0.5.TLR2蛋白:51.15±1.84.TLR4蛋白:43.25±0.27),肠组织损伤明显减轻.结论:谷氨酰胺通过抑制TLR2、4 mRNA的表达,减轻肠组织的损伤.     

肠三叶因子对肠组织TLR2、4和NF-κB的作用及其与肠损伤保护的关系

目的:探讨肠三叶因子(intestinal trefoil factor,ITF)对肠组织Toll样受体2、4(Toll-like eceptor2,4,TLR2、4)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的调节与肠损伤保护作用的关系.方法:24只10日龄的Wistar幼鼠随机分为正常对照组、内毒素血症(lipopolysaccharide,LPS)组和LPS+ITF组(n=8):对照组给予生理盐水1mL/kg;LPS组给予LPS(5mg/kg);LPS+ITF组给予重组肠三叶因子(rITF,0.5mg/只)+LPS5mg/kg.均采用腹腔注射给药.于腹腔注射后3h处死幼鼠,留取远端回肠组织,HE染色.光镜下观察肠组织病理改变,RT-PCR检测肠组织TLR2、4和NF-κBmRNA的表达.免疫组织化学检测肠组织TLR2、4及NF-κB蛋白的定位表达.结果:光镜下对照组肠组织结构正常,LPS+ITF组和LPS组均可见间质和上皮细胞水肿,LPS+ITF组较LPS组明显减轻;肠组织TLR2mRNA和蛋白定位表达LPS+ITF组较LPS组明显增高(7.453±1.90vs3.069±0.08...     

谷氨酰胺对幼年内毒素血症大鼠脑组织细胞凋亡超微结构的影响

目的 研究谷氨酰胺对内毒素血症所致脑损伤的保护作用.方法 将健康10日龄Wistar大鼠72只随机分为四组,对照组腹腔注射生理盐水,内毒素组腹腔注射内毒素+等量生理盐水;谷氨酰胺A组腹腔注射20% 的N-(2)-L-丙氨酰-L谷氨酰胺1.346 g/kg,1 h后腹腔注射上述剂量内毒素;谷氨酰胺B组同时腹腔注射上述剂量的谷氨酰胺和内毒素.于注射后2、6、72 h处死大鼠取大脑组织,利用透射电镜观察各组大鼠脑组织细胞超微结构改变.结果内毒素组注射内毒素后2 h时神经细胞明显肿胀,核膜模糊,不连续,内质网排列不规则,核糖体脱颗粒;6 h时神经细胞出现核染色质浓缩,核仁边集;72 h时出现神经细胞核破碎的凋亡改变.谷氨酰胺A组和B组脑组织均未见凋亡改变.结论 谷氨酰胺可通过减少神经细胞凋亡减轻内毒素血症所致脑损伤,此为临床相关疾病的治疗提供了理论依据.     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肠黏膜损伤的保护作用

目的:探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肠黏膜损伤的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为3组,即正常组(A组)、模型组(B组)及谷氨酰胺组(C组),模型组及谷氨酰胺组大鼠腹腔注射0.45 mg/m L的脂多糖(LPS)溶液,1 m L/100g,即4.5 mg/kg,10 min内分3次注射完毕进行造模。造模12 h后模型组给予25.2%(80 kcal)百普素溶液灌胃,5次/d,每次4 m L;谷氨酰胺组在上述造模12 h后除灌注百普素溶液外,另灌胃谷氨酰胺溶液3.75g/(kg·d)。模型组随机分为喂养36 h组(B1组)和喂养72 h组(B2组)。比较各组组织病理及肠组织谷氨酰胺水平。结果:(1)模型组肠组织谷氨酰胺浓度、绒毛长度及黏膜层厚度均低于正常组(均P0.05);模型组肠黏膜Chiu氏评分与正常组比较差异有统计学意义(P0.05)。(2)谷氨酰胺组肠组织谷氨酰胺浓度较模型组升高(P0.05);谷氨酰胺组肠黏膜Chiu氏评分、绒毛长度及黏膜层厚度较模型组有不同程度改善(均P0.05)。结论:脓毒症大鼠肠组织谷氨酰胺浓度下降,存在肠黏膜损伤,给予谷氨酰胺治疗能改善脓毒症大鼠的急性肠黏膜损伤。     

骨髓间充质干细胞移植对急性胰腺炎后肠黏膜屏障的影响

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在急性胰腺炎后肠黏膜损伤修复中的作用.方法 从雄性SD大鼠股骨骨髓腔获取并培养MSC.20只雌性SD大鼠分成3组:急性重症胰腺炎(SAP)组(n=6)和MSC治疗组(n=8),均分2次以腹腔内注射L-精氨酸(2 g/kg)造模,成模12 h后,MSC治疗组予尾静脉注射MSC 5×...     

谷氨酰胺和地塞米松对脓毒症幼年大鼠肝脏肿瘤坏死因子-α与基质金属蛋白酶3的影响

目的:通探讨谷氨酰胺(Gln)和地塞米松(Dex)对脓毒症肝损伤的保护作用方法:ip大肠杆菌脂多糖(LPS)制备幼年大鼠脓毒症模型,按照ip药物不同分为对照组(C,n =8,ip生理盐水1 mL/kg);内毒素组(L,n=40,ip LPS 4 mg/kg),治疗组(T,n=40,ip LPS 4 mg/kg后1 h ip Dex 5 mg/kg Gln 1 mL/kg),在注射内毒素后0 h(只限对照组),2,4,6,24和72 h取肝右叶,采用免疫组化的方法测定肝组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和基质金属蛋白酶3(MMP3)蛋白质合成水平。结果:与C相比,L组TNF-α蛋白质表达明显高于对照组(P<0.01),24 h达高峰,72 h虽然有所降低但仍明显高于对照组(P<0.05).T组各时点TNF-α蛋白质表达均高于对照组,但增高幅度明显低于L组(P<0.01),与对照组相比,L组MMP3蛋白质表达明显升高,24 h达高峰,72 h有所降低,但仍高于对照组(P<0.01);T组较L组明显减低(P<0.01)。L和T组肝脏组织中TNF-α与MMP3改变均呈明显正相关(r= 0.928,r=0.939)。结论:联合应用谷氨酰胺与地塞米松可以抑制TNF-α和MMP3的合成,从而减轻脓毒症幼年大鼠的肝脏损伤和重塑。     

重症急性胰腺炎大鼠肠—肝—肺轴免疫单核吞噬细胞变化

目的 观察重症急性坏死性胰腺炎（SAP）大鼠肠壁、肝脏和肺组织中免疫单核吞噬细胞分布的变化,并探讨谷氨酰胺对其的调节作用。方法　SD大鼠54只,随机分3组:假手术组（SO,n=18）;SAP组（SAP,n=18）;SAP谷氨酰胺治疗组（GLN,n=18）。采用5％牛磺胆酸钠溶液胆胰管内逆行注射诱导大鼠SAP模型。大鼠中心静脉置管,微量输液泵输注含等氮、等热卡的氨基酸溶液,GLN组加入3％丙氨酸-谷氨酰胺双肽（相当于2％谷氨酰胺溶液,剂量0.5g.kg-1·d-1）。术后24h、48h、72h分批处死大鼠并留取标本,分别采用鲎试剂比色法及免疫组化法测定血浆内毒素水平、肠上皮淋巴细胞、肝脏和肺单核吞噬细胞分布的变化。结果 血浆内毒素在SAP组明显高于SO组（P<0.05）,且随着时间延长而递升;GLN治疗组血浆内毒素较SAP组显著下降（P<0.05）。SAP组肠上皮中淋巴细胞数较SO组明显减少（P<0.05）;GLN治疗组则较SAP组明显上升（P<0.05）。溶菌酶组织化学染色显示,SO组肝脏和肺脏中单核吞噬细胞呈散在分布;而SAP组中单核吞噬细胞聚集成团,以术后24h最为显著;GLN治疗组阳性染色细胞聚集状态减弱。结论 肠道局部免疫功能的变化及由于内毒素等物质刺激而导致的肝、肺单核吞噬细胞过度活化促进了SAP的进一步发展。谷氨酰胺通过调节肠道局部、肝脏和     

内毒素血症大鼠肠黏膜免疫细胞的变化及通腑颗粒的干预作用

目的探讨内毒素血症大鼠肠黏膜免疫细胞的变化及中药通腑颗粒对其影响,为临床治疗提供理论依据。方法 120只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、内毒素血症组（B组）及中药治疗组（C组）三组。B组及C组采取尾静脉一次性注射给药方法,注射1%LPS溶液（给药量为10 mg/kg）制作内毒素血症模型,A组注射等量生理盐水（1 mL/kg）;C组尾静脉注射给药后即刻给予50%通腑颗粒溶液（给药量为5 g/kg）灌胃,A组及B组给予等量蒸馏水灌胃。造模后在第2、6、12、24 h时间点分批（每次10只）麻醉后处死动物,取小肠组织进行检测。采用HE染色观察肠黏膜病理变化,采用免疫组织化学及TUNEL染色方法,分别标记并计数各组大鼠肠黏膜免疫细胞及凋亡淋巴细胞。结果与A组比较,B组肠黏膜M细胞、DC细胞、CD8＋T细胞及IgA＋B细胞计数明显减少,而CD4＋T细胞、Tr细胞及淋巴细胞凋亡计数明显增多;C组肠黏膜M细胞、CD8＋T及Tr细胞计数无明显改变,DC细胞、IgA＋B细胞及淋巴细胞凋亡计数明显减少,而CD4＋T细胞计数明显增多;与B组比较,C组肠黏膜M细胞无明显改变,Tr细胞及淋巴细胞凋亡计数明显减少,而DC细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞及IgA＋B细胞计数明显增多。结论内毒素血症时肠黏膜损伤,肠免疫不同阶段的免疫细胞均发生损害,Th1/Th2比例失调,淋巴细胞凋亡增多,导致肠黏膜局部免疫发生抑制。应用通腑颗粒可以减轻肠黏膜损伤,减轻免疫细胞损伤,改善Th1/Th2比例,减少淋巴细胞凋亡,保护局部免疫功能。     

甘氨酸对非酒精性脂肪性肝炎肠组织巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:研究探讨甘氨酸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肠组织巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:将36只雄性SD大鼠,常规饲养1周后,随机分为3组:正常对照组大鼠(采用普通饲料喂养+生理盐水腹腔注射);模型组大鼠(采用高脂饮食+腹腔注射氧四环素);治疗组大鼠(采用高脂饮食+腹腔注射氧四环素+5%甘氨酸),造模4周、8周后分批处死。取肝脏标本做HE染色、观察肝脏形态学变化;检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转氨酶(ALT、AST)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和门静脉血浆内毒素(ET)水平;取肠组织做HE染色,并用免疫组化的方法检测肠组织中MIF表达水平。结果:4周、8周时模型组大鼠门静脉ET水平、血浆TNF-α、AST、ALT、IL-6、IL-10均与对照组大鼠比较,差异有显著性意义(P0.05),治疗组大鼠与同期模型组相比较差异有显著性意义(P0.05);4周、8周时模型组大鼠肠组织MIF的表达水平较同期对照组大鼠有明显增多(P0.05),治疗组大鼠肠组织MIF的表达水平与同期模型组相比较,差异有显著性意义(P0.05)。结论:①采用高脂饮食结合氧四环素腹腔注射制备的大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型伴有肠源性内毒素血症(IETM)的形成。②在NASH发生发展过程中肠组织MIF表达逐渐增高,可能与肠免疫屏障受损有关;③甘氨酸可拮抗内毒素,下调肠组织MIF的表达水平。     

血小板活化因子受体拮抗剂对幼年大鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白的影响

目的:探讨血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)受体拮抗剂对肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的影响．方法:18日龄Wistar大鼠,随机分为对照组,内毒素组(LPS组)和PAF受体拮抗剂组(预防组和治疗组)．LPS组和对照组分别腹腔注射内毒素 (5 mg/kg)和生理盐水(1 mL/kg)．预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS前、后30 min 腹腔注射PAF受体拮抗剂BN52021(5 mg/kg)．按时间点分别处死动物,取回肠用于电镜观察,免疫组化及RT-PCR检测ZO-1．结果:电镜下对照组肠微绒毛及细胞间紧密连接未见异常．实验组上皮细胞连接增宽;微绒毛变细、稀疏,部分断裂、脱落;细胞器受损．拮抗剂组改变较实验组减轻．紧密连接蛋白ZO-1正常时均匀一致地分布于小肠上皮细胞连接处的尖端,呈蜂巢状,实验组ZO-1 分布不均,染色变淡．免疫组化平均光密度值及RT-PCR结果可见LPS组ZO-1表达明显低于对照组,6 h表达最低,光密度从对照组 0．224 7降至LPS组0．198 5,ZO-1 mRNA从1．18 降至0．16(P<0．01)．预防组及治疗组变化趋势同LPS组,6 h预防组及治疗组光密度分别为 0．199 2和0．203 8,ZO-1 mRNA分别为0．47和 0．53,与对照组相比均有显著差异(P<0．01)．各时相点ZO-1较LPS组高,预防组较治疗组 ZO-1略低,无统计学差异．结论:PAF可降低肠道紧密连接蛋白ZO-1,从而损害肠道的屏障功能,而PAF受体拮抗剂可减轻肠道屏障功能损伤的程度．     

蛙皮素对内毒素致肠黏膜损伤的保护作用

目的:探讨蛙皮素对内毒素致肠黏膜损伤的影响.方法:大鼠96只随机分成3组:A生理盐水组(ip生理盐水1 mL/kg),B内毒素组(ip LPS 5 mg/kg),C蛙皮素组(实验前1 wk每天sc蛙皮素10μg/kg,每天3次,至第7天ip LPS 5 mg/kg).在注射LPS 2,6,24h后,各组处死大鼠8只,留取肠组织.光镜下观察肠组织病理形态学改变,生化法检测肠组织匀浆丙二醛(MDA)和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量,采腹腔静脉血,双抗夹心法(ELISA)检测血清IL-6和IL-10.结果:肉眼和光镜可见C组肠黏膜损伤较B组明显减轻.C组MDA含量在2、6、24 h时间点均较B组降低(3.4092±0.7765vs8.43594±0.5589;4.6588±0.3311vs10.9375±1.00094;4.6324±0.2278 VS 10.5074±1.0142,均P<0.01),但仍较A组高:C组GSH-PX活力单位较B组显著升高(2 h:1231.834±74.68 VS 766.67±57.94;6 h:2113.34±81.42 vs 749.09±56.72;24 h:1950.48±72.74vs785.62±62.43.均P<0.01):C组IL-6水平于2、6 h较B组降低(2h:553.70±23.03 vs 652.81 4±27.09;6 h:494.52±40.68 VS 606.68±43.60;24 h:571.56±52.54vs602.734±25.19,均P<0.01),但仍高于A组:C组IL-10水平于各时间点均较B组升高(2 h:601.58±30.65 vs 478.76±23.49;6 h:653.77±35.75 vs 469.35±11.27;24 h:714.04±29.55vs635.174±29.15,P<0.01).结论:蛙皮素具有抗氧化损伤及抗炎症反应的作用.     

谷氨酰胺和盲肠造口/结肠灌洗对猪急性重症胰腺炎后肠源性细菌/内毒素易位的影响

目的观察静脉内滴注谷氨酰胺(Gln)对急性重症胰腺炎(ASP)后肠源性细菌/内毒素易位的保护作用.方法选健康长白种猪27头,体重17kg～22kg,雌雄不限,随机分为5组. 组Ⅰ:假手术对照组(n=5);组Ⅱ:ASP对照组(n=5);组Ⅲ:ASP+甘氨酸(Gly)组(n=5);组Ⅳ:ASP+Gln组(n=6);组Ⅴ:ASP+Gln+盲肠造口、结肠灌洗组(n=6). 在麻醉状态下,进腹向胰总管内注入1mL/kg 50g/L牛磺胆酸钠混合液[内含胰蛋白酶(8～10)×106 BAEEU/L,pH 7.6]诱导ASP. 以9g/L NaCl磷酸盐缓冲液取代50g/L牛磺胆酸钠混合液即为假手术对照组. 采集腔静脉血作内毒素测定(鲎试剂法). ASP后72h,采集门、腔静脉血作系列细菌定量培养和细菌鉴定. 然后推注100g/L氯化钾20mL处死后立即进胸腹取大小肠系膜淋巴结、肺组织、肺门淋巴结、胰腺组织,称重后研磨成组织匀浆,并作细菌定量培养和细菌鉴定.结果静脉内直接输注Gln后可使血浆中Gln浓度较组Ⅰ、组Ⅱ明显升高(P均＜0.01). 静脉内Gln支持或Gln+盲肠造口、结肠灌洗均可明显降低血浆内毒素水平,且使血液和组织器官中易位的细菌数量均出现非常显著的下降.结论静脉内Gln支持可显著地升高血浆Gln水平. 同时可显著地减轻ASP后肠源性细菌/内毒素易位.     

乌司他丁对大鼠重症急性胰腺炎肠黏膜屏障功能的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障的影响及其作用机制。方法 SD大鼠60只分成对照组、假手术(SO)组、SAP组和UTI组。制模后每隔8 h进行腹腔内注射UTI(浓度1.5万IU/kg)作为UTI组。各治疗组检测制模后8、24、72 h血浆内毒素水平,通过RT-PCR法和免疫组化法对肠黏膜Toll样受体(TLR)4表达进行检测,并在电镜下观察肠黏膜组织。结果对照组肠黏膜未见TLR4表达。与对照组相比,SAP组在制模后8 h血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达即出现升高,并随时间的延长而继续进行性增高。血浆内毒素与肠黏膜TLR4二者明显相关。UTI组同时点内毒素、TLR4低于SAP组,电镜下检查发现病理损伤也同时减轻,24 h时最为明显。结论 UTI能有效保护SAP发生时的肠屏障功能,其保护机制可能与肠黏膜TLR4的表达下调有关。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肠道功能障碍的保护作用

目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肠道功能障的保护作用。方法S 将SD大鼠随机分为3组,即正常组(A组),模型组(B组)及谷氨酰胺组(C组), 模型组及谷氨酰胺组大鼠腹腔注射0.45mg/ml的LPS溶液,1ml/100g,即4.5mg/Kg,10分钟内分3次注射完毕进行造模。模型组造模后12小时给予5次/天灌注百普素溶液灌胃;谷氨酰胺组造模后12小时给予5次/天灌注百普素溶液,浓度为25.2％(80 kcal),每次4ml,另灌胃谷氨酰胺3.75g/Kg/d。模型组随机分为喂养36小时组(B1组)和喂养72小时组(B2组)。对各组进行组织病理观察,同时检测各组肠组织谷氨酰胺浓度。结果1. 模型36小时组、模型72小时组肠组织谷氨酰胺浓度低于正常组(P<0.05);模型36小时组、模型72小时组、谷氨酰胺组肠黏膜Chiu氏评分、绒毛长度及黏膜层厚度与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);模型组肠黏膜组织超微结构变化较谷氨酰胺组明显。2. 谷氨酰胺组肠组织谷氨酰胺浓度较模型36小时组、模型72小时组升高(P<0.05);谷氨酰胺组肠组织超微结构变化较模型组不同程度减轻。结论S脓毒症大鼠肠组织谷氨酰胺浓度下降,存在肠功能障碍,给予谷氨酰胺后急性肠道功能障得到保护。     

谷氨酰胺对饥饿大鼠内毒素移位和肠黏膜免疫功能的影响

目的：探讨饥饿后大鼠肠黏膜形态学结构的变化规律,并动态观察GLN肠内补充对饥饿大鼠内毒素移位和肠黏膜免疫功能的影响.方法：采用饥饿大鼠模型,将90只3月龄♂SD大鼠随机分为正常对照组N：(给予正常饮食n =10)、饥饿组A(n=40)、谷氨酰胺组B(n= 40)3个大组,分别于饥饿后3,5,7,9d,取门静脉血测血浆内毒素的变化,在光镜下观察肠组织的组织形态学改变,利用免疫组化技术检测肠黏膜组织中SIgA的表达和CD4~ 、CD8~ T细胞的数量.结果：A组大鼠饥饿后,3d可见小肠黏膜明显萎缩,绒毛变短、变稀.部分黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落,绒毛横径增宽,高度缩短；至饥饿后9d上述变化更加明显.B组在饥饿后3d较同时间点A组肠黏膜损伤有明显的改善,小肠的黏膜厚度、绒毛数量、高度增加,至饥饿后5d基本恢复至N组水平.随着饥饿时间的延长小肠黏膜再次出现黏膜萎缩、绒毛变短、变稀,黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落.但明显轻于同时间点的A组.饥饿后各时间点血浆内毒素与N组相比明显升高,A,B组均在饥饿后7d达到高峰,B组在饥饿后3,5,7,9d较A组降低且有非常显著性差异(322.4±65.1,389.4±32.6,464.4±76.6,413.7±67.2EU/L vs 527.1±74.9,546.3±65.7,623.9±85.9,587.5±140.8EU/L,均P＜0.01).与N组比较,A组大鼠肠黏膜SIgA及CD4~ ,CD8~ T细胞数量明显减少,差异有显著性性(P＜0.05,P＜0.01).补充GLN后,SIgA及CD4~ ,CD8~ T细胞数量明显升高,B组与A组比较差异非常显著(P＜0.01).结论：大鼠饥饿后早期确有肠黏膜组织结构受损,发生内毒素移位,同时伴有肠黏膜免疫学屏障受损.早期给予GLN可减轻肠黏膜的受损,明显降低内毒素移位,增强肠黏膜的免疫功能发挥肠黏膜的保护作用.     

间充质干细胞对内毒素诱导急性肺损伤大鼠NF-κB的影响

目的探索NF-κB在内毒素诱导急性肺损伤的发病机理及间充质干细胞治疗机理中的作用。方法 90只SD大鼠随机分为5组:A组:正常对照组(n=18)尾静脉注射等量生理盐水;B组:内毒素组(LPS)(n=18):经尾静脉注射LPS 5 mg/kg;C组:高剂量干细胞组(BMSCH组)(n=18):经尾静脉注射LPS 5 mg/kg+BMSC 2×106/ml 0.5 ml;D组:低剂量干细胞组(BMSCL组)(n=18):LPS 5 mg/kg+BMSC 1×106/ml 0.5 ml;干细胞对照组(BMSC组)(n=18):骨髓间充质干细胞2×106/ml 0.5 ml。分别于造模后6、24、72 h,处死动物收取标本,每个时间点6只(LPS的24 h组因1只死亡固只处死5只)。取肺组织于生理盐水中迅速漂洗干净后,立即放入液氮中冷冻,后转入-70℃冰箱中保存备用,分别测定肺组织TNF-α、IL-1β及肺组织细胞核内的NF-κB表达。结果 TNF-ɑ、IL-1β及NF-κB不同组之间存在显著差异,各组同一时间点的比较:B组均较A组显著性升高,P<0.05;C、D组低于B组,差异有统计学意义;E组与A组差异无统计学意义。结论 NF-κB在尾静脉注射内毒素诱导急性肺损伤大鼠的肺组织中表达升高。注射内毒素后立即经尾静脉注射小鼠骨髓间充质干细胞显著降低急性肺损伤大鼠的肺组织中的NF-κB的活性。     

谷氨酰胺对急性胰腺炎大鼠肠黏膜胰岛素样生长因子表达及肠黏膜屏障的影响

目的 观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时肠黏膜屏障的损伤情况,以及谷氨酰胺（Gln）和胰岛素样生长因子（IGF）对肠黏膜屏障的保护作用.方法 成功诱导ANP模型雄性Wistar大鼠48只,随机分为ANP组和Gln组各24只,另取假手术组24只作为对照.Gln组每日以Gln灌胃2次,剂量为1.5g/（kg·d）;ANP组和假手术组以同等量的生理盐水灌胃.分别在模型制作术后3、6、24、48 h时间点杀死大鼠,取胰头和末端回肠3～5 cm放入液氮中保存.观察胰腺和肠黏膜组织形态学改变,测定肠黏膜中IGF-1的表达、血清中二氨氧化酶（DAO）活性和内毒素浓度.结果 ANP组大鼠肠黏膜屏障功能严重破坏,肠道通透性明显增加,肠黏膜损伤评分明显增加;血清内毒素浓度、DAO活性明显升高（P均＜0.01）.与ANP组比较,Gln组动物肠黏膜损伤减轻,损伤评分有所下降,血清内毒素水平、DAO活性下降（P均＜0.05）.ANP组IGF-1表达水平明显下降（P ＜0.05）;Gln组明显升高（P＜0.05）,同时肠黏膜屏障功能得到一定的改善.结论 ANP时肠黏膜屏障结构和功能存在严重破坏;Gln能一定程度上减轻肠黏膜屏障损伤并能维护其功能;IGF-1参与Gln对ANP肠黏膜屏障损伤的修复和维持.     

转化生长因子β1Ⅱ型受体在大鼠慢性胰腺炎中的表达及氧化苦参碱对其的影响

目的:探讨转化生长因子β1Ⅱ型受体(TβRⅡ)在慢性胰腺炎(CP)纤维化病理进程中的作用,研究氧化苦参碱(OM)对胰腺纤维化的作用机制.方法:40只Wistar♂大鼠随机分为4组,即阴性对照组(NC组,n=10),CP模型组(CP组,n=10),OM干预组(OP组,n=10)和OM治疗组(OT组,n=10).NC组隔日给予腹腔注射生理盐水300mg/kg;其他每组均隔日腹腔注射二乙基硫代氨基甲酸盐(DDC)700mg/kg,30d停止.另外OP组于注射DDC同日开始每日腹腔注射OM100mg/kg,OT组于注射DDC1wk后开始每日腹腔注射OM100mg/kg,分别于注射DDC20d、40d后处死动物.胰腺组织行HE染色和Masson胶原染色并进行病理学评分,Western blot检测胰腺组织TβRⅡ的表达.结果:Masson染色测定结果显示,在20d、40d时CP组胶原纤维含量显著高于其余各组(20d:22.54%±4.45%vs13.16%±1.84%,19.58%±2.78%,2.45±0.24%;40d:35.14%±3.27%vs25.14%±3.67%,28.68%±2.55%,3.0%±0.3...     

血管活性肠肽对重症急性胰腺炎肠屏障保护作用的实验研究

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠屏障的保护作用及其机制.方法 54只SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO)、SAP组和VIP干预组,采用微泵逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠制备SAP动物模型,SAP制模后5 min腹腔注射VIP 5×10-9nmol作为VIP干预组.各组在制模后1 h、6 h、12 h检测血浆内毒素水平,逆转录(RT)-PCR法及免疫组化法检测肠黏膜Toll样受体4(TLR4)表达,并对肠黏膜组织行电镜检查.结果 与SO组相比,SAP组血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达在制模1 h即开始增高,并随制模时间的延长而进行性增高.两者具有明显的相关性.电镜检查肠黏膜有明显的病理损伤.VIP干预组与SAP组同时点相比,血浆内毒素和肠黏膜TLR4表达降低,病理损伤减轻,制模后6 h尤为明显.SO组肠黏膜未见TLR4表达.结论 VIP能有效保护SAP肠屏障功能,其机制可能与下调肠黏膜TLR4的表达有关.     

血管活性肠肽对急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对ANP大鼠肠黏膜损伤的影响.方法 54只SD大鼠随机分成假手术组(SO)、ANP组和VIP组,每组分制模后1 h、6 h、12 h 3个时间点,各6只.采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备ANP模型,VIP组在制模后5 min腹腔内注射VIP 5 nmol.ELISA法检测血浆及肠组织匀浆VIP水平;MB-80微生物快速动态检测系统检测血浆内毒素水平;RT-PCR法检测肠黏膜组织TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达;肠黏膜行病理学检查.结果 ANP组肠黏膜结构损害明显,VIP组病变减轻.ANP组血浆及肠黏膜VIP水平在制模后6 h分别为(49.582 ±3.735)pg/ml和(87.731 ±4.601)pg/g pro,均显著低于SO组(P＜0.05),制模后12 h分别为(65.192±5.785)pg/ml和(110.978 ±6.420)pg/g pro,高于SO组;ANP组制模后6 h血浆内毒素水平、肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-10mRNA表达量分别为(29.570±5.127)pg/ml、0.861±0.081、1.150±0.187和0.786±0.102,均显著高于SO组(P＜0.05).VIP组制模后6 h血浆内毒素水平、肠黏膜TNF-α、IL-6 mRNA表达分别为(20.486 ±2.811)pg/ml、0.707 ±0.095和0.889 ±0.136,均较ANP组下降(P＜0.05);IL-10 mRNA表达为0.992 ±0.126,较ANP组增高(P＜0.05).结论 VIP对ANP大鼠肠黏膜损伤具有明显的保护作用.