化学发光免疫法检测AFP的分析灵敏度核实实验及评价

目的核实Bayer Centaur 240全自动化学发光仪甲胎蛋白(AFP)的分析灵敏度。方法用甲胎蛋白配套稀释液作为空白样品,将合适浓度的新鲜血清重复测定5次,计算其均值。用稀释液作系列稀释,组成0,0.94,1.90,2.80,3.80,5.60 ng/ml的甲胎蛋白系列检测样品,重复测定10次,记录光强度值(RLUs)。结果按99.7%的可信限计算,AFP检测低限为0.94 ng/ml;按照国际纯粹和应用化学联合会的规定,AFP检测低限1.15 ng/ml,生物检测限在1.90~2.80 ng/ml之间,功能灵敏度为1.9 ng/ml。结论实验两种方法计算的检测低限均小于厂家所给检测低限1.3 ng/ml。     

化学发光免疫法检测AFP的空白限、检出限和定量检测限的建立与评价

目的 建立并评价化学发光免疫法检测甲胎蛋白（AFP）的空白限（LoB）、检出限（LoD）和定量检测限（LoQ）。 方法 参考CLSI EP17-A文件,将AFP空白样品和系列低浓度样品在Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统上进行检测,依据数据的分布规律,采用相应的统计学方法,确定血清AFP的LoB、LoD和LoQ,同时用传统方法建立AFP的检测低限(LLD)、生物检测限(BLD)和功能灵敏度(FS)。 结果 用EP17-A方案建立的LoB为0.80 ng/ml,LoD为2.60 ng/ml,LoQ为3.30 ng/ml;应用常规方法建立的LLD为1.00 ng/ml,BLD为2.20 ng/ml,FS为2.20 ng/ml。 结论 应用两种方法建立的LoB和LLD均低于仪器说明书声明的灵敏度性能,Bayer Centaur 240化学发光免疫系统检测AFP的分析灵敏度得到验证确认;实验室在验证仪器声明的LoB时,应同时建立检测系统的LoD和LoQ,以便为临床提供更为可靠的检验结果。两种评价方案均具有实用性,国内实验室可视具体情况选择不同的评价方案。     

化学发光法检测超敏促甲状腺素分析灵敏度的性能验证

目的 对西门子Centaur cp全自动化学发光分析仪测定超敏促甲状腺素(TSH3-Ultra)分析灵敏度的性能进行验证.方法 用促甲状腺素配套稀释液作为空白样品,并以此稀释液对低浓度(浓度值为0.010 0 mIU/L)的新鲜患者血清进行稀释,配置成低浓度系列样品作为分析灵敏度的实验样品.空白样品批内重复测定10次,其他系列样品日间重复测定10次,记录每次检测的发光强度(RLUs),计算检测低限、生物检测限、功能灵敏度等.结果 按99.7%可信限计算,TSH3-Ultra检测低限为0.001 0 mIU/L;按照国际纯粹和化学联合会的规定TSH3-Ultra检测低限为0.001 1 mIU/L,与生产厂家产品说明书声明一致;生物检测限为0.005～0.006 mIU/L,功能灵敏度为0.006 mIU/L,低于生产厂家产品说明书声明的功能灵敏度(0.008 mIU/L).结论 西门子Centaur cp全自动化学发光分析仪检测TSH3-Ultra分析灵敏度的性能与厂家声明性能基本一致.     

某型号免疫化学发光仪TSH生物检测低限与功能灵敏度的验证

目的 对Beckman coulter DXI800免疫化学发光仪检测促甲状腺素(TSH)的生物检测低限、生物检测限与功能灵敏度进行验证.方法 按照公司样品稀释的规定要求,制备系列浓度TSH样品,参照相关文献进行检测,按检测低限=A0+3s0与生物检测限=A-3sA(>3s0)公式计算.功能灵敏度为变异系数20%所对应的TSH平均浓度.结果 由Beckman coulter DXI800免疫化学发光仪检测出的TSH生物检测限与生物检测低限分别为0.004 5、0.015 μIU/mL,功能灵敏度为0.015 μIU/mL,与厂商公布结果基本一致.结论 对检测低限、生物检测限与功能灵敏度的验证对于临床低浓度的TSH检测结果评价具有重要意义.     

Roche电化学发光免疫法检测NT-proBNP的检测限值和功能灵敏度研究

目的 探讨电化学发光免疫法检测N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)的检测限值和功能灵敏度.方法 参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP-17A文件制备空白样品及系列低浓度样品.空白样品采用配套的稀释液,系列低浓度样品采用倍比稀释的方法获得.样品制备后用Roche Cobas E601电化学发光免疫系统检测NT-proBNP浓度,以确定该方法的空白限、检出限和功能灵敏度.结果 NT-proBNP的空白限为2.53 pg/ml,检出限为7.75 pg/ml,10％ CV时的功能灵敏度为8.82 pg/ml.结论 建立了Roche Cobas E601电化学发光免疫系统检测NT-proBNP的空白限、检出限和功能灵敏度,为临床诊断和治疗提供了更有价值的信息.     

临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法

目的建立临床化学发光免疫检验方法学性能验证方案和实验方法。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件和相关文献，结合工作实际，设计验证方案，并对Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统测定血清AFP的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围、临床可报告范围和生物参考区间6大分析性能进行验证和评价，并将实验结果与厂家（德国拜尔公司）提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果AFP含量在77．4、168．0ng／ml时，日间不精密度分别为5．70％和4．84％，与厂商日间不精密度（4．9％和5．0％）基本一致；4个浓度校准品检测结果与靶值的相对偏倚均〈5％，5份室间质评控制品检测结果与靶值的相对偏倚在-3．4％-11．9％之间；检测低限为1．04ng／ml，略低于厂商的检测低限（1．30ng／ml），生物检测限在2．65—3．53ng／ml之间，功能灵敏度为3．53ng／ml；分析测量范围为3．53—912．00ng／ml（厂商线性范围1．3—1000．0ng／ml），临床可报告范围为3．53—182400．00ng／ml；生物参考区间验证结果为0．6—7．7ng／ml（厂商参考区间〈8．1ng／ml）。结论Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统检测AFP的分析性能符合临床要求，验证方案和实验方法简便易行。本研究对规范医学实验室建设和实验室认可，提高化学发光免疫检验质量有重要意义。     

五种肿瘤标志物分析灵敏度的建立

目的对糖抗原724(CA724)、糖抗原242(CA242)、甲胎蛋白(AFP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)进行研究,并建立分析灵敏度。方法通过化学发光法,对上述五种肿瘤标志物的生物检测限(BLD)、功能灵敏度(FS)及检测低限(LLD)进行计算。结果上述五种肿瘤标志物的实际定性检测低限与说明书之间存在一定差异性。结论通过对五种肿瘤标志物分析灵敏度的建立能够报告低限,能够对肿瘤患者的标志物检测结果提供帮助,均具备一定的临床价值。     

Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度的验证

目的对Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)项目的检测低限、功能灵敏度进行验证。方法对空白样品进行连续20 d在天间重复性实验,验证TSH检测低限;制备系列低浓度的TSH样品,验证其功能灵敏度。结果RocheE170检测系统测定TSH的最低检测限为0.005μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称的一致;其功能灵敏度该室验证值为0.011μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称有差异(0.014μIU/ml)。结论实验室必须验证和建立本实验室条件的分析灵敏度,为甲状腺患者提供准确可靠的促甲状腺激素(TSH)低值结果。     

时间分辨荧光分析法检测低值乙型肝炎病毒表面抗原的质量评价

目的评价时间分辨荧光分析法检测低值乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的性能。方法使用不同浓度试剂盒标准品、二级标准品进行重复测定,建立相应的数学模型,进行检测低限（lower limit of detection,LLD）、生物检测限（biologic limit of detection,BLD）、功能灵敏度（functional sensitivity,FS）、空白限（limit of blank,LoB）、检出限（limit of detection,LoD）、定量检出限（limit of quantifications,LoQ）的统计计算。结果 LLD为0.044ng/mL、BLD为0.18ng/mL、FS为0.18ng/mL、LoB为0.03ng/mL、LoD为0.108ng/mL,尝试计算低值HBsAg检测结果的不确定度,确定定量检出限（LoQ）约为0.5ng/mL。结论使用灵敏度性能和不确定度2种方法进行评价,该检测系统对低值HBsAg分析能够达到试剂盒规定的性能要求。     

时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎血清标志物分析灵敏度的建立与分析

[目的]乙型肝炎表面抗原和表面抗体定量测定试剂盒。[方法]时间分辨荧光免疫分析法的分析灵敏度进行建立与分析，以便更好的指导临床诊断和进行流行病学研究。[结果]通过实验研究，乙型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒和表面抗体定量检测试剂盒的检测低限分别为0．0356ng／ml和0．548mIU／ml，生物检测限分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，功能灵敏度分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，线性范围分别为0．200ng／ml-300ng／ml和5．00mIU／ml～1200mIU／ml，并达到中国药品生物制品检定所检定要求。[结论]时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎病毒定量检测试剂盒具有灵敏度高，线性范围宽，特异性强的特点，已能有效应用于临床体外诊断和流行病学研究。     

化学发光免疫法检测B型利钠肽的检测限值和功能灵敏度研究

目的 探讨西门子ADVIA Centaur 240化学发光免疫系统检测B型利钠肽(BNP)的检测限值和功能灵敏度.方法 参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP-17A文件和有关文献,选择BNP通用稀释液作为空白标本,批内重复测定10次,计算光量子值的均数、标准差和变异系数(CV),用以确定检测低限(LLD);同时,空白标本每天上、下午各检测1批,每批重复检测3次,连续检测5 d,共获得30个空白结果,用非参数方法确定空白限(LoB).制备接近1～4倍LoB浓度的系列实验标本,各浓度每天上、下午各检测1次,连续检测5 d,计算每个浓度水平光量子值的均数、标准差和CV,用以确定生物检测限(BLD)和CV值为10%条件下的功能灵敏度(FS);同时对所有80个测定结果,按EP-17A文件采用非参数方法确定检出限(LoD).结果 ADVIA Centaur 240检测系统BNP的LLD为1.47 pg/mL,LoB为0.86 pg/mL,均低于厂家声明的灵敏度;BLD为3.27～3.71 pg/mL,LoD为3.54 pg/mL,10%CV条件下的FS为4.64 pg/mL.结论厂商声明的LLD和BLD得到验证,同时建立了实验室BNP检测的LoB、LoD和FS,为临床提供了准确、可靠的检验结果.建议临床实验室使用EP-17A文件确定LoB和LoD,并确定在一定精密度条件下的FS.     

时间分辨荧光免疫法检测胎盘生长因子的方法建立及性能评价

目的 建立检测胎盘生长因子（placental growth factor, PLGF) 的时间分辨荧光免疫分析法（time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA）,并对其性能进行评价。方法 利用捕获 PLGF 单克隆抗体包被微孔板,铕标记检测 PLGF单克隆抗体,建立一种双抗体夹心TRFIA 定量测定孕妇血清中的 PLGF 浓度。对该方法的检测低限、生物检测限、功能灵敏度、精密度、线性、干扰试验、交叉反应试验和HOOK 效应等性能指标进行评价。选择125 例孕期在9 ～ 40周,无溶血、黄疸和脂血的孕妇血清剩余样本,用于方法学比对研究,比对试验结果的相关性采用线性回归分析。结果 该方法的捕获抗体包被浓度为7.0 μg/ml,铕标记物使用工作稀释度为1:500,样本最适反应时间为90 min,检测低限为1.00 pg/ml,生物检测限为8.00 pg/ml,功能灵敏度为10.00 pg/ml,批内CV 和批间CV 均在5.00% 以内,线性范围为9.00 ～ 10 500.00 pg/ml,分别在低浓度和高浓度质控品中添加有干扰物质的16 种干扰样本与基础样本检测结果的相对偏倚在-3.49% ～ 2.20% 内;检测5 000 pg/ml 糖基化 PLGF-1,5 000 pg/ml 糖基化 PLGF-2,5 000 pg/ml 未糖基化PLGF-3,10 000 pg/ml 未糖基化血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/ PLGF-1 异二聚体,50 000pg/ml 糖基化VEGF165 和40 000 pg/ml 可溶性FMS 样酪氨酸激酶-1,交叉反应率分别为41.82%,27.86%,19.68%,0.042%,0.063% 和0.004 5%;检测样品 PLGF 浓度高达115 000 pg/ml 时仍未出现HOOK 效应;样本 PLGF 浓度在5.74 ～4 197.00 pg/ml 间,与电化学发光法（electrochemiluminescence,ECL）检测结果的线性回归方程为Y=1.070 9X-30.192,（r=0.980 6, tr=55.42,P ＜ 0.05）。结论 该方法灵敏度高、精密度好、线性范围宽、抗干扰能力强、特异度好、检测范围宽,与参比方法检测结果的相关性良好,可以满足临床需要。     

化学发光免疫法检测PCT的分析测量范围和临床可报告范围研究

目的研究化学发光免疫法检测降钙素原（PCT）的分析测量范围（AMR）和临床可报告范围（CRR）。方法随机收集临床病人高、低值两份PCT新鲜标本,参照美国临床实验室标准化研究院（CLSI）发布的EP6-A文件要求制备不同实验样品,每个样品在罗氏CobasE601化学发光免疫分析系统上重复测定2次,利用多项式回归法确定PCT的分析测量范围;高值标本通过稀释回收实验确定最大稀释度,结合功能灵敏度和分析测量范围上限确定临床可报告范围。结果Co—basE601化学发光免疫分析系统的分析测量范围为0．02～108．375ng／ml,临床可报告范围为0．06-216．75ng／ml。结论厂商声明的CobasE601化学发光免疫系统检测PCT的分析测量范围得到验证确认,但对于超过分析测量范围的高值标本建议用低值血清1：2稀释。     

正常人群血清甲胎蛋白和癌胚抗原参考范围的建立

目的建立正常人群血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）的参考范围。方法采用电化学发光免疫分析技术对3222例健康体检人员（其中男880人、女2342人,年龄从20到93岁）的血清AFP和CEA进行检测,以百分位数法（≤P95）计算血清AFP及CEA的参考范围。结果血清AFP和CEA的检测结果均呈正偏态分布,参考范围分别为≤6.12ng/ml及≤3.94ng/ml。CEA测定男女组参考范围分别为≤4.65ng/ml和≤3.37ng/ml,男性组显著高于女性组（P〈0.001）。血清AFP及CEA浓度均随着年龄增加而显著升高。结论 AFP应按年龄分组建立参考范围,CEA则应按年龄和性别分组建立参考范围。     

Development of a competitive radioimmunoassay for glypican-3 and the clinical application in diagnosis of hepatocellular carcinoma

ObjectiveGlypican-3 (GPC3) is a promising specific tumor maker for hepatocellular carcinoma (HCC). The aim of this study is to establish a method to detect serum GPC3 and evaluate the clinical application on clinical diagnosis.Design and methodsA competitive radioimmunoassay for detecting serum GPC3 was developed. Clinical sera were detected by the proposed method and AFP, CA19-9 chemiluminescence immunoassay kit.ResultsThe proposed method with high sensitivity, specificity and precision had no or little detectable cross-reactivity with relating tumor markers in the dynamic range from 15 to 500 ng/mL, and the detection limit was 0.5 ng/mL. The level of GPC3 in HCC was obviously higher than that in normal liver or other liver diseases. Additionally, our method showed high shows higher sensitivity and specificity for GPC3 than AFP and combined AFP/CA19-9.ConclusionsThis paper provided an applicable competitive radioimmunoassay for GPC3 with high sensitivity, specificity and precision. In addition, using GPC3 for HCC diagnosis was more valuable than AFP.     

Simultaneous determination of percentage of Lens culinaris agglutinin-reactive alpha-fetoprotein and alpha-fetoprotein concentration using the LiBASys clinical auto-analyzer

BACKGROUND: Lens culinaris agglutinin (LCA)-reactive alpha-fetoprotein (AFP-L3) percentage of total AFP concentration [(AFP-L3/total AFP)x100] has been used as an effective marker for earlier diagnosis, for assessment of therapeutic effects and for predicting the prognosis of hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: A new clinical automatic analyzer, the "LiBASys", and an assay kit for the simultaneous determination of AFP-L3 percentage and concentration of AFP in human serum were developed. LiBASys performed automatic re-measurement and also met stat samples. Both AFP-L3 percentage and AFP concentration were calculated simultaneously and printed out continuously every 3.4 min per test. RESULTS: A linear dose-response relationship was observed up to 1000 ng/ml AFP concentration. The detection limit and functional sensitivity of LCA-nonreactive AFP (AFP-L1) and AFP-L3 concentrations were 0.4 and 0.8 ng/ml, and 0.4 and 1.0 ng/ml, respectively. Interassay CVs of AFP-L3 percentage and AFP concentration ranged from 2.8% to 13.4% and 2.6% to 4.6%, respectively. Assay results exhibited good correlations with those of commercially available lectin-affinity electrophoresis (r=0.984) for AFP-L3 percentage and with the RIA method (r=0.999) for AFP concentration. CONCLUSIONS: This method simultaneously yields both qualitative and quantitative results for AFP-L3 percentage and AFP concentration.     

化学发光免疫分析法快速检测血清登革热病毒NS1 抗原方法的建立及初步应用评价

目的 建立一种化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay,CLIA) 用于血清中登革热病毒（denguevirus,DENV）NS1 抗原的定量检测。方法 先制备NS1 单抗与吖啶酯发光剂的偶联物,同时活化磁珠并标记抗NS1的配对单抗,基于双抗体夹心检测方法的技术原理构建定量检测血清中NS1 抗原浓度的化学发光检测方法。通过对其灵敏度、特异度和参考区间等试验评估其检测性能。取85 例临床确诊的登革热阳性血清样本和20 份健康志愿者阴性血清样本,采用美国Cortez 公司的登革热NS1 快速检测试剂盒和该方法进行临床样本验证。结果 该方法对血清中NS1抗原的检测灵敏度为1.12ng/ml,线性范围在0.1 ～ 1 000ng/ml;与血清中常见干扰物质的交叉反应率均低于2%,检测特异度较好;参考区间的cut off 值为3.66ng/ml;对临床样本的检测准确度较高,与Cortez 公司NS1 检测试剂盒比较无显著性差异（χ2 检验P=1.000,一致性检验,Kappa=0.876）。结论 建立了一种可定量检测血清中登革热病毒NS1抗原的CLIA 法,该方法具有高灵敏度、高准确度、操作简单和方便快捷等优点,有望为登革热临床样品的早期准确筛查提供一种新的选择。     

化学发光法检测血清甲胎蛋白的方法学评价

目的对化学发光免疫分析法（CUA）测定甲胎蛋白（AFP）进行方法学评价。方法用CLIA测定178例血清的AFP值，同时也用酶联免疫吸附试验（ELISA）对AFP进行测定。结果CLIA测定AFP的灵敏度为1．3ng／mL，低、中、高浓度的批内CV分别为4．2％、2．3％、1．6％；批间CV分别为4．8％、3．2％、2．5％。回收率为96％～104％，理论值与实测值的回归方程为Y=0．1427＋0．9992X，相关系数r=0．9900（P〈0．001）。ROC曲线显示CLIA测定的敏感性和特异性均在90％以上，曲线下面积为0．992，显著高于ELISA法（P〈0．01）。结论CLIA是目前测定AFP较好的方法，适用于临床对AFP进行检测，可对原发性肝癌进行明确诊断。     

时间分辨免疫荧光法检测结核感染T细胞释放γ-干扰素的方法建立及初步临床应用

目的 建立一种检测结核感染T细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的时间分辨免疫荧光法(TRFIA)及初步临床应用。方法 选择73例结核分枝杆菌阳性的肺结核患者,77例结核分枝杆菌阴性的肺结核患者,25例肺外结核患者,52例呼吸道疾病以外的非结核患者,70例非结核呼吸道疾病(含肺癌)患者作为研究对象。利用早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为结核分枝杆菌特异性抗原,刺激患者全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞释放IFN-γ。植物血凝素L作为有丝分裂原,可非特异地刺激IFN-γ的产生。应用双抗体夹心TRFIA定量测定血浆中的IFN-γ浓度。评价TRFIA检测IFN-γ的精密度、检测低限、生物检测限、功能灵敏度、线性、准确度和特异度等分析性能指标,并与酶联免疫法(ELISA)进行比对试验研究。方法间结果差异比较采用χ²检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 TRFIA检测IFN-γ的捕获抗体包被浓度为5.0 μg/ml,生物素标记抗体使用工作稀释度为1:1 800和铕标记物使用工作稀释度为1:500; 实验内变异系数(CV)<5%,实验间CV<10%; 检测低限0.69 pg/ml,生物检测限0.90 pg/ml,功能灵敏度1.80 pg/ml; 线性范围2～5 000 pg/ml; 检测国际生物标准参考品的偏倚不超过5%; 其他常见的细胞因子和常见内源性干扰物(胆红素、血红蛋白和三酰甘油)样本对该方法检测结果无明显影响。TRFIA检测297例临床样本结果判断与临床诊断的一致率可达85.19%; TRFIA与ELISA的结果具有高度一致性(κ=0.9 931),且TRFIA与ELISA的阳性检出率结果差异无统计学意义(χ²=0,P>0.05)。结论 TRFIA检测IFN-γ的精密度好,灵敏度高,线性范围宽,准确度好,特异度强,临床符合率高,能满足临床检测需要。