某区甲型H1N1流感病毒分离鉴定及同源性的分析

目的检测并分离甲型H1N1流感病毒,对开封地区首次分离到的病毒株进行全基因组序列测定及同源性分析,为研究流感病毒的流行及变异规律提供科学依据。方法采用Real-time RT-PCR方法检测,筛选确定出甲型H1N1流感病毒阳性标本;利用狗肾传代细胞分离得到甲型H1N1流感病毒株A/Kaifeng/01/2009(H1N1);测定并分析其全基因组序列;利用序列比对进行了同源性分析。结果从1828份流感样病例中检出甲型H1N1流感病毒阳性标本286份,阳性率15.6%。在开封地区首次获得甲型H1N1流感病毒株及全基因组序列。基因组序列分析表明:该毒株与2009年大流行株高度同源,为同一进化分支。与以往流行的猪流感病毒株对比发现,HA基因有12个碱基发生了点突变。结论 MDCK细胞对甲型H1N1流感病毒具有较高敏感性;开封地区首例甲型H1N1流感病例分离病毒株与北美流行株高度同源;相对于以往古典型猪流感代表株出现了HA蛋白抗原性漂移;为今后进一步开展甲型H1N1流感病毒分子生物学研究奠定基础。     

贵州省2010年H3N2亚型流感病毒HA1基因序列分析

目的 了解2010年贵州省H3N2亚型流感病毒HA1基因变异特征.方法 用MDCK细胞分离流感病毒,采用血凝抑制试验分型鉴定,随机选取8株H3N2亚型流感毒株进行RNA提取,逆转录扩增获得HA1基因产物,将其进行基因产物测序,测定的序列用相关的生物信息软件进行分析.结果 贵州省各代表株在同一分支.该分支与2008-2009年疫苗推荐株A/Brisbane/10/2007(H3N2)接近,与WHO 2010年疫苗推荐株A/Perth/16/2009 (H3N2)相距较远.结论 2010年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年我市H3N2亚型流感预防效果不好,以至于H3亚型在我省成为优势株,引起广泛流行.     

2012-2013年北半球流感流行季节使用流感疫苗成分的建议

2011年9月-2012年1月,全球分离到2009大流行甲型H1N1(甲型H1 N1 pdm09)、甲型H5N1、甲型H3N2变异株(v)、甲型H1N1v、甲型H1N2v和乙型流感病毒.北半球甲型H1N1pdm09流感病毒以很低水平传播,流感疫情较轻.对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明,甲型H1N1pdm09流感病毒呈抗原同质性,并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关.甲型H1N1pdm09流感病毒血凝素基因的序列分析表明,病毒属于抗原性不能区别的至少8个基因群.大多数新近分离的甲型H3N2病毒的抗原性和遗传性与类A/Victoria/361/2011参考病毒密切相关.大多数B/Yamagata/16/88谱系病毒的抗原性与类B/Wisconsin/1/2010病毒密切相关.     

贵州省2012年度禽流感病毒H5N1亚型HA-1基因分析

目的建立并完善贵州省禽流感病毒基因分析检测技术平台,了解贵州省禽流感病毒H5N1亚型HA1片断与WHO公布的流行株比对有否发生变异。方法收集禽流感H5N1亚型病毒毒株,提取病毒核酸RNA,通过RT-PCR扩增HA1片断,用电泳观察PCR产物目的条带大小,经过纯化、测序,用Biodeit、MEGA4相关软件进行序列比对,进行差异性分析,构建系统发育树。结果贵州省禽流感病毒H5N1亚型中鸭来源的禽流感病毒组成一个分支,组内差异性在0.00～5.00之间;鸡来源的禽流感病毒组成另外一个分支,组内高度同源,差异性为零。结论贵州省禽流感病毒在物种之间存在一定的种属特异性。并且与湖南省的禽流感病毒亲缘关系较近,这与两省之间地理交界有关。     

2010-2011年北半球流感流行季节使用流感疫苗病毒的建议

2009年9月-2010年1月,全球分离到甲型H1N1、甲型H3N2、甲型H5N1、甲型H9N2和乙型流感病毒.全球流感疫情比上年同期严重得多,由2009大流行甲型H1N1流感病毒传播所致.北半球有2009大流行甲型H1N1流感的广泛疫情,这比通常季节性流感出现得早.南半球大多数国家到9月,大流行流感疫情已减至散发病例状态.对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明,2009大流行甲型H1N1流感病毒呈抗原同质性,并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关.2009大流行甲型H1N1流感病毒的序列分析表明,病毒呈遗传同质性.大多数季节性甲型H1N1流感病毒的抗原性和遗传性与A/Brisbane/59/2007密切相关.许多新近分离的甲型H3N2流感病毒的抗原性与南半球现行疫苗病毒A/Pert]h/16/2009密切相关.大多数B/Victoria/2/87谱系病毒的抗原性与疫苗病毒B/Brisbane/60/2008密切相关.     

2010-2011年北半球流感流行季节使用流感疫苗病毒的建议

2009年9月-2010年1月,全球分离到甲型H1N1、甲型H3N2、甲型H5N1、甲型H9N2和乙型流感病毒.全球流感疫情比上年同期严重得多,由2009大流行甲型H1N1流感病毒传播所致.北半球有2009大流行甲型H1N1流感的广泛疫情,这比通常季节性流感出现得早.南半球大多数国家到9月,大流行流感疫情已减至散发病例状态.对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明,2009大流行甲型H1N1流感病毒呈抗原同质性,并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关.2009大流行甲型H1N1流感病毒的序列分析表明,病毒呈遗传同质性.大多数季节性甲型H1N1流感病毒的抗原性和遗传性与A/Brisbane/59/2007密切相关.许多新近分离的甲型H3N2流感病毒的抗原性与南半球现行疫苗病毒A/Pert]h/16/2009密切相关.大多数B/Victoria/2/87谱系病毒的抗原性与疫苗病毒B/Brisbane/60/2008密切相关.     

2010年流感流行季节使用流感疫苗成分的建议

2009年2-9月,全球分离到甲型流感(H1N1)、甲型流感(H3N2)、甲型流感(H5N1)和乙型流感病毒.全球流感疫情比上年同期严重,由季节性流感病毒和大流行甲型流感(H1N1)2009病毒流行所致.北半球许多国家流感疫情广泛.南半球大部分地区疫情加剧.对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明,大流行甲型流感(H1N1)病毒呈抗原同质性,并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关.大流行甲型流感(H1N1)病毒序列分析表明,病毒呈遗传同质性.大多数季节性甲型流感(H1N1)病毒的抗原性和遗传性与A/Brisbane/59/2007密切相关.许多新近分离的甲型流感(H3N2)病毒的抗原性与现行疫苗病毒A/Brisbane/10/2007和A/Uruguay/716/2007密切相关.但越来越多病毒的抗原性和遗传性与疫苗病毒不同,而与A/Perth/16/2009和A/Hong Kong/1985/2009参考病毒密切相关.     

2010-2011年北半球流感流行季节使用流感疫苗病毒的建议

2009年9月-2010年1月,全球分离到甲型H1N1、甲型H3N2、甲型H5N1、甲型H9N2和乙型流感病毒.全球流感疫情比上年同期严重得多,由2009大流行甲型H1N1流感病毒传播所致.北半球有2009大流行甲型H1N1流感的广泛疫情,这比通常季节性流感出现得早.南半球大多数国家到9月,大流行流感疫情已减至散发病例状态.对流感病毒分离株的抗原性和遗传学分析表明,2009大流行甲型H1N1流感病毒呈抗原同质性,并与疫苗病毒A/California/7/2009密切相关.2009大流行甲型H1N1流感病毒的序列分析表明,病毒呈遗传同质性.大多数季节性甲型H1N1流感病毒的抗原性和遗传性与A/Brisbane/59/2007密切相关.许多新近分离的甲型H3N2流感病毒的抗原性与南半球现行疫苗病毒A/Pert]h/16/2009密切相关.大多数B/Victoria/2/87谱系病毒的抗原性与疫苗病毒B/Brisbane/60/2008密切相关.     

贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列分析

目的对贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列进行分析。方法提取核酸,PCR扩增,测序分析、比对。结果同源性分析和系统发育树都说明了相同(或相近)年份的毒株核苷酸序列同源性较高,亲缘关系较近;不同年份的毒株核苷酸序列的同源性较低,亲缘关系较远;3株H3N2毒株共有59各位点核苷酸替换。结论通过序列测定分析,结果表明1995-2005年纵向比较,贵州省甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列发生了变异;通过与Genbank上相应年份标准株横向比较,贵州省3株甲3(H3N2)亚型流感病毒的血凝素基因HA1区序列未发生大的变异,仅有少数核苷酸的替换。     

新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶抑制剂细胞水平评价体系的建立

本文旨在建立以2009新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶 (neuraminidase, NA) 为靶点的神经氨酸酶抑制剂 (neuraminidase inhibitors, NAIs) 细胞水平评价体系。NA有促进流感病毒释放的作用, 本研究应用重组病毒技术, 通过将表达NA [A/California/04/2009 (H1N1)] 的质粒、表达流感病毒血凝素蛋白HA (hemagglutinin) 的质粒以及表达敲除外壳基因并带有荧光素酶报告基因的HIV-1基因组共转染至病毒生成细胞, 产生以HA、NA为外壳蛋白包裹HIV-1核心的重组病毒。在病毒释放前加入不同浓度的化合物, 收集病毒上清液感染细胞, 通过测定感染率来反映化合物对重组病毒NA的抑制作用。经用阳性对照药物奥司他韦及其羧酸盐证实本模型能够反映化合物对病毒NA的抑制作用; 在此基础上, 本研究还建立了奥司他韦耐药株评价模型。本研究所建立的体系可用于针对新型甲型H1N1流感病毒及其临床耐药株神经氨酸酶抑制剂的寻找和评价。     

The 2008-2009 H1N1 influenza virus exhibits reduced susceptibility to antibody inhibition: Implications for the prevalence of oseltamivir resistant variant viruses

A naturally-occurring H275Y oseltamivir resistant variant of influenza A (H1N1) virus emerged in 2007, subsequently becoming prevalent worldwide, via an undetermined mechanism. To understand the antigenic properties of the H275Y variant, oseltamivir resistant and susceptible strains of H1N1 viruses were analyzed by hemagglutination inhibition (HI) and microneutralization assays. HI analysis with H1-positive sera obtained from seasonal flu vaccine immunized and non-immunized individuals, and H1-specific monoclonal antibodies, revealed that resistant strains exhibited a reduced reactivity to these antisera and antibodies in the HI assay, as compared to susceptible strains. Neutralization assay testing demonstrated that oseltamivir resistant H1N1 strains are also less susceptible to antibody inhibition during infection. Mice inoculated with a resistant clinical isolate exhibit 4-fold lower virus-specific antibody titers than mice infected with a susceptible strain under the same conditions. Resistant and sensitive variants of 2009 pandemic H1N1 virus did not exhibit such differences. While HA1 and NA phylogenetic trees show that both oseltamivir resistant and susceptible strains belong to clade 2B, NA D354G and HA A189T substitutions were found exclusively, and universally, in oseltamivir resistant variants. Our results suggest that the reduced susceptibility to antibody inhibition and lesser in vivo immunogenicity of the oseltamivir resistant 2008-2009 H1N1 influenza A virus is conferred by coupled NA and HA mutations, and may contribute to the prevalence of this H1N1 variant.     

贵州省A(H1N1)亚型流感病毒HA基因系列分析

目的:了解贵州省A(H1N1)流感病毒血凝素抗原的基因变异情况.方法:对贵州省分离的部分A(H1N1)流感病毒株利用聚合酶链反应进行扩增,将扩增产物进行序列测定,然后进行基因系列分析.结果:2001-2005年贵州省分离的A(H1N1)流感病毒株有以下位点发生变异:202G>R、203D>N、225R>K、268M>R...     

甲型流感病毒血凝素基因变异与抗原变异关系研究

目的 了解甲型流感病毒流行株的血凝素基因变异和抗原变异及两者间的关系,结合流行病学资料分析基因变异和抗原变异的吻合情况.方法 从2005-2007年上海市季节性流感样病例分离到的甲型流感病毒株中,选取H1N1、H3N2两个亚型中部分有代表性的病毒株,并同WHO北半球流感疫苗推荐株一起,进行血凝素全基因序列测定后做基因进化树分析.同时用灭活的全病毒抗原免疫金黄地鼠,通过血凝抑制试验测定病毒的血凝效价,对血凝抑制结果进行聚类分析,绘制病毒的抗原变异图.结果 H3N2分离株与WHO北半球疫苗推荐株A/Sydney/5/97、A/Fujian/411/2002处于不同的基因进化分枝上,时间间隔越久,进化距离越远,同样的结果也出现在抗原变异分析中.而H1N1分离株的基因变异情况和抗原变异情况则不一致,在基因变异中,与疫苗推荐株A/New Caledonia/20/1999的距离远近受到分离时间的影响,抗原变异还与病毒是否从散发病例或聚集性病例分离有关.结论 流感病毒血凝素的基因变异和抗原变异的结果基本吻合,采用流行株免疫血清的血凝抑制试验能更好地反映病毒的变异和进化情况.     

甲型流感病毒血凝素基因变异与抗原变异关系研究

目的 了解甲型流感病毒流行株的血凝素基因变异和抗原变异及两者间的关系,结合流行病学资料分析基因变异和抗原变异的吻合情况.方法 从2005-2007年上海市季节性流感样病例分离到的甲型流感病毒株中,选取H1N1、H3N2两个亚型中部分有代表性的病毒株,并同WHO北半球流感疫苗推荐株一起,进行血凝素全基因序列测定后做基因进化树分析.同时用灭活的全病毒抗原免疫金黄地鼠,通过血凝抑制试验测定病毒的血凝效价,对血凝抑制结果进行聚类分析,绘制病毒的抗原变异图.结果 H3N2分离株与WHO北半球疫苗推荐株A/Sydney/5/97、A/Fujian/411/2002处于不同的基因进化分枝上,时间间隔越久,进化距离越远,同样的结果也出现在抗原变异分析中.而H1N1分离株的基因变异情况和抗原变异情况则不一致,在基因变异中,与疫苗推荐株A/New Caledonia/20/1999的距离远近受到分离时间的影响,抗原变异还与病毒是否从散发病例或聚集性病例分离有关.结论 流感病毒血凝素的基因变异和抗原变异的结果基本吻合,采用流行株免疫血清的血凝抑制试验能更好地反映病毒的变异和进化情况.     

上海地区在校中学生接种甲型H1N1流感疫苗前后抗体水平监测分析

 目的  了解上海地区在校中学生接种甲型H1N1流感疫苗前后的抗体水平;观察甲型H1N1流感疫苗对该人群的免疫保护作用。 方法    应用常规微量血凝抑制试验（micro-hemagglutination inhibition test, HIT）对上海地区在校中学生分3个时间段进行甲型H1N1流感病毒抗体的血清学监测,3个时间段的抗体阳性率比较采用Pearson χ2 检验进行分析。 结果  2009年甲型H1N1流感流行前上海地区在校中学生的血清抗体阳性率仅为1.3%。经过一段时间流行后,血清抗体阳性率升至8.5%。接种甲型H1N1流感疫苗后,血清抗体阳性率升至87.3%。经Pearson χ² 检验分析,3个时间段在校中学生的血清甲型H1N1流感抗体阳性率差异有统计学意义（χ²=243.7,P<0.05）。 结论  在甲型H1N1流感流行前,上海地区在校中学生对其几乎没有免疫力,接种甲型H1N1流感疫苗能为该人群提供较好的免疫保护作用。     

安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞分离及其流行特征分析

目的：观察安徽省淮南市2012-2013年流感病毒细胞培养分离结果,研究淮南市流感流行特征,为该市流感防控提供科学依据。方法实时荧光定量PCR法对哨点医院送检咽拭子标本进行核酸快速分型后采用狗肾（ MDCK）传代细胞培养法分离病毒,红细胞凝集试验（ HA）鉴定病毒滴度,红细胞凝集抑制试验（ HI）进行型和亚型的鉴定。结果从148份流感网络实验室实时定量PCR阳性标本中,分离出流感毒株68株,总分离率45．9％,其中 A1（H1N1）型26株,分离成功率56．5％,A3（H3N2）型25株,分离成功率33.3％;BY型4株,BV型13株,B型毒株分离成功率为63．0％;各型毒株的分离成功率差异有统计学意义（P＜0．05）。2012年淮南市流行株为BV型流感病毒,于3月份达到流行高峰;2013年流行株为A（H1N1）型流感病毒,流行高峰期则是12月份。结论淮南市2012-2013年甲型流感病毒抗原的变异性强;细胞培养分离病毒对流感流行的病原鉴定起决定性作用;流感病毒B型毒株和新A（H1N1）型毒株分离成功率较高。     

2009-2010年茂名市流感监测结果分析

目的 了解茂名市2009-2010年流感流行状况及毒株的型别分布,分析流感流行趋势,为流感防控提供科学依据.方法 收集茂名市哨点医院的流感样病例(ILI)资料、流感疫情资料和病原学监测结果进行分析.结果 2009年报告ILI3693例,ILI%为4.44%.2010年报告ILI1078例,ILI%为0.81%;2009...     

Oseltamivir-resistant influenza A(H1N1) 2009 virus in Greece during the post-pandemic 2010-2011 season

Information on the drug susceptibility of influenza epidemic strains is important for antiviral resistance monitoring. In Greece, the 2009-2010 pandemic waves were very mild and seroprevalence rates remained low after this influenza season, resulting in exclusive detection of the pandemic strain during the 2010-2011 influenza season. In the present study during the post-pandemic 2010-2011 season, 50 consecutive influenza A(H1N1) 2009 virus-positive samples from patients hospitalised in Greek hospitals were analysed for resistance to the neuraminidase inhibitor oseltamivir. All patients were hospitalised with severe influenza complications and had previously received oseltamivir. Influenza A(H1N1) 2009 virus detection and testing for oseltamivir resistance were performed with real-time PCR amplification assays. The H275Y substitution associated with resistance to oseltamivir was identified in two immunocompetent patients who received oseltamivir treatment for 3 days and 5 days, respectively. In both cases, patients were discharged in good condition despite development of resistance to antiviral treatment.