2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。     

AG490对谷氨酸诱导PCI2细胞磷酸化STAT3活性上调的抑制作用

目的研究AG-490拮抗谷氨酸对PCI2细胞中P-STAT3活性的上调作用及其抗凋亡意义。方法谷氨酸诱导PCI2细胞凋亡。Hoehest荧光染色观察PCI2细胞形态。流式细胞仪（FCM）分析评价凋亡百分率。Westernblot测定P-STAT3蛋白表达量，M，丌检测PCI2细胞存活率。结果谷氨酸诱导PCI2细胞中STAT3蛋白表达上调（P：0．000），如予Jak/STAT3信号通路阻断剂AG-490预处理，则其表达被下调（P=0．002），细胞凋亡率减低（P=O．000），细胞存活率升高（P=0．000）。结论AG-490拮抗谷氨酸诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与STAT3活化有关。     

跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导恶性黑色素瘤细胞B16凋亡的作用。方法采用脂质体转染法分别将前期构建的模拟肽疫苗稳定转染B16细胞，加入终浓度为2．5μg／ml、5μg／ml、10μg／ml及20μg／ml的抗血型A单克隆抗体培养72h，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率。结果P／F-M-pIRES组的B16细胞经10μg/ml抗血型A单克隆抗体诱导后凋亡率为74．74％，转染有模拟肽／Fas融合基因的P／F-M-pIRES组和P／F-pIRES组凋亡率明显高于未转染的M-pIRES组和pIRES组。析因设计的方差分析显示不同实验分组之间的差异主效应差异有统计学意义（F=669．707，P〈0．01），不同浓度分组之间的主效应差异有统计学意义（F=106．596，P〈0．01），不同实验分组不同浓度之间的交互效应差异也有统计学意义（F=34．806，P〈0．01）。结论跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗可诱导黑色素瘤细胞B16凋亡，在黑色素瘤治疗中可能是一种有潜在价值的方法。     

氟中毒氧化应激与细胞凋亡关系的研究

目的 研究氟、硒对大鼠肝细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法 大鼠经钦水加氟化钠（150mg／L）或／和亚硒酸钠（2mg／L）10周后，检测肝细胞凋亡百分率、细胞周期构成比、活性氧（ROS）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量以及脂质过氧化物（LPO）水平。结果 氟可使肝细胞凋亡百分率明显升高，S期细胞数增多，ROS和LPO水平升高，GSH含量下降；硒通过稳定细胞GSH含量可拮抗氟的毒性作用，使组织中ROS、LPO水平下降，GSH含量升同，凋亡百分率下降。结论 硒可部分拮抗氧化物诱导的肝细胞脂质过氧化和凋亡，氧化应激参与了介导细胞凋亡的过程。     

大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响,同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化,免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内,大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％],与对照组[（2．01±20．92）％]相比,差异均有统计学意义（F=531．85,P〈0．01）;大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖,使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％],与对照组[（35．45±0．38）％]相比,差异均有统计学意义（F=524．64,P〈0．01）。大黄素作用48h后,BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01）,easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53）,呈浓度依赖性,与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比,差异均有统计学意义（F=216．23、224．83,P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡,其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。     

肌酐代谢产物对人肾小管上皮细胞毒性作用的比较研究

目的比较观察甲基胍、1。甲脲乙醇酸酐对人肾小管上皮细胞的毒性作用。方法HK．2细胞作为研究对象,分为三组培养：正常对照（A）组,甲基胍（B）组、1－甲脲乙醇酸酐（C）组,用MTr比色试验法检测细胞增殖,NAG酶释放检测对细胞的毒性,Hoechst染色及AnnexinV—FITC／PI流式细胞术检测凋亡。结果HK－2细胞加入甲基胍、1－甲脲乙醇酸酐后,较正常对照组吸光度值显著下降（0．188±0．011,0．176±0．010VS0．545±0．021,F=1557．74,P〈0．01）,NAG酶浓度显著上升（20．488±0．473,22．225±0．565VS5．1254-0．198,F：3848．22,P〈0．01）。Hoechst33258染色显示凋亡细胞呈现核固缩,染色加深,并出现凋亡小体。流式细胞术显示B组、C组HK-2细胞凋亡率显著高于A组（18．23±1．1581,20．22±1．1433VS2．4734-0．321,F=526．06,P〈0．01）。C组吸光度值显著低于B组（0．176±0．010VS0．1884-0．011,t=2．26,P〈0．05）,NAG酶浓度显著高于B组（22．225±0．565VS20．488±0．473,t=－6．67．P〈0．01）,凋亡率显著高于B组（20．224-1．1433VS18．23±1．1581,t=－2．762,P〈0．05）。结论1．甲脲乙醇酸酐对肾小管上皮细胞的毒性作用强于甲基胍。     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

2,3,7,8-四氯二苯并-p-二恶英诱导肺癌SPC-A1细胞凋亡的研究

目的研究2，3，7，8-四氯二苯并-p-二恶英（TCDD）在体外诱导肺癌细胞系SPC-A1细胞凋亡的作用。方法用MTT法测定TCDD对SPC-Al细胞的毒性，采用流式细胞仪对细胞凋亡进行分析，通过HE染色观察细胞形态变化。结果SPC—A1细胞生长曲线表明，随着TCDD浓度增高，SPDAl细胞生长率明显下降；细胞凋亡可在TCDD浓度为10nmol／L，0．1μmol／L，1μmol／L处理24h后出现；TCDD诱导SPC-A1细胞的凋亡具有时间和浓度依赖性；凋亡细胞主要表现为细胞体积缩小，核染色质固缩，亚二倍体峰出现。结论TCDD在体外能有效诱导SPC—A1细胞发生凋亡。     

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌BGC-823细胞周期及凋亡的影响

目的 利用人胃癌BGC-823细胞体外培养实验，观察不同浓度ω-3多不饱和脂肪酸（EPA、DHA）对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。方法 采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 30和45μg／ml的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率（P〈0．001）；Hoechst33258染色和透射电镜可见细胞凋亡现象；流式细胞检测bcl-2基因蛋白表达明显下降（P〈0．05），G0／G1细胞明显增加，G2／M和S期细胞明显减少（P〈0．05）。结论 ω-3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和阻滞细胞在G0／G1期，细胞增殖受到抑制。     

玉米赤霉烯酮对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的 观察真菌雌激素玉米赤霉烯酮（ZEA）对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法 用噻唑蓝比色法观察ZEA对MCF-7细胞增殖活力流式细胞术观察ZEA对MCF-7细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;用凋亡DNA片段检测试剂盒和流式细胞术从不同方面检测ZEA对细胞凋亡的影响;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹技术检测ZEA对bcl-2和bax mRNA和蛋白质表达的影响。结果 MCF-7细胞生长为雌激素依赖性：溶剂对照组（外源性雌激素缺乏且内源性雌激素耗尽的条件下）细胞增殖活力为100％,10nmol／L雌二醇组细胞增殖活力为257．6％;另外,以溶剂对照组发生凋亡率为100％来计,10nmol／L雌二醇组细胞凋亡率只有为10．8％。ZEA对MCF-7细胞生物学效应的影响同雌二醇类似：在2～96nmol／L浓度范围内,ZEA可快速恢复MCF-7细胞增殖活力（96nmol／L组细胞增殖活力为对照组的2．4倍）,提高S期细胞分布比例（96nmol／L组S期细胞分布比例为对照组的2．3倍）,降低凋亡百分率（96nmol／L组细胞细胞凋亡率为对照组的23．7％）,并呈现出良好的剂量-效应关系。RT-PCR和蛋白印迹结果分析显示,ZEA能够促进bcl-2 mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出抑制作用。结论 同雌激素类似,ZEA可提高MCF-7细胞增殖活力并促进有丝分裂指数;通过对bcl-2和bax表达的调节作用,ZEA可抑制雌激素耗尽所诱导的MCF-7细胞凋亡。     

槲皮素衍生物HPS5对酒精诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨槲皮素衍生物HPS5对酒精导致的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法酒精诱导PC12细胞建立模型,MTT法检测细胞的抑制率,比较治疗后乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)的水平,Western-Blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果与模型组比较,25、50、100 mmol/L HPS5能显著下调酒精对PC12细胞增殖的抑制作用[(28.87±2.34)%、(16.49±2.13)%、(10.31±1.17)%],减少LDH的漏出[(36.47±3.29)、(31.67±3.25)、(29.34±2.87)U/L],降低MDA水平[(1.89±0.14)、(1.61±0.51)、(1.48±0.41)nmol/mg],升高GSH[(81.25±8.33)、(92.14±9.34)、(96.24±11.24)mg/g]、SOD[(3.26±0.69)、(4.17±0.68)、(4.24±0.71)NU/mg]的水平,下调Bax蛋白[(0.31±0.03)、(0.29±0.03)、(0.27±0.03)]表达,升高Bcl-2蛋白[(0.34±0.01)、(0.31±0.02)、(0.28±0.02)]表达水平。尤其中高剂量组更加明显,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 HPS5对酒精诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,增强细胞的抗氧化能力以及上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达可能是其作用的机制之一。     

叔丁基对苯二酚对百草枯神经细胞毒性和氧化应激的拮抗作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理对百草枯(PQ)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性和氧化应激的拮抗作用.方法 将PC12细胞分为溶剂对照组及100、300 μmol PQ处理组.用终浓度为40 μmol/LtBHQ预处理PC12细胞4 h再分别用终浓度0、100、300 μmol/L PQ处理细胞24或48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性,用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μ,mol/L PQ处理PC12细胞24 h细胞存活率分别较100、300 μmol/L PQ组增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100μmol/LPQ处理PC12细胞48 h细胞存活率较100μmol/LPQ处理组细胞存活率增高,差异有统计学意义(P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/PQ处理PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别较100、300 μmol/L PQ下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/LPQ处理PC12细胞24 h后,MDA含量分别较100、300 μmol/L PQ组下降,MDA含量分别为相应对照组的0.61、0.57倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ预处理可削弱PQ致PC12细胞的细胞毒性、细胞凋亡以及氧化应激作用.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of the tert-butylhydroquinone (tBHQ)pretreatment on neurotoxicity and oxidative stress induced by paraquat (PQ) in PC12 cells. Methods Cytoyoxicity of PC12 cells was measured by MTT assay, following the PC12 cells treatment with different concentrations of 100, 300 μmol/L PQ for 24 h and 48 h. PC12 cells were pretreated with or without 40 μmol/L tBHQ for 4 h, PC 12 cells were exposed to PQ at the doses of 0, 100, 300 μmol/L for 24 h and 48 h, respectively.The viability of PC 12 cells was measured by MTT assay, the apoptosis rates of PC 12 cells were detected by flow cytometry (FCM) and the malondialdehyde (MDA) levels of PC 12 cells were examine by thiobarbituric acid (TBA) method. Results When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the viability of PC 12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC 12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). When the exposure dose of PQ was 100μmol/L for 48 h, the viability of PC12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.01). When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the apoptosis rates and MDA levels of PC12 cells pretreated with tBHQ were significantly lower than those of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions tBHQ preteatment can reduce the cytotoxicity, apoptosis and oxidative stress induced by PQ in PC12 cells.     

乳清蛋白酶解物对PC12细胞氧化损伤防护作用的体外研究

目的研究乳清蛋白酶解物对由过氧化氢引起的PC12细胞氧化损伤的防护作用。方法采用胃蛋白酶-胰蛋白酶双酶酶解乳清蛋白得到乳源性多肽;通过细胞存活率、细胞形态、细胞抗氧化酶活性、丙二醛等指标,分析探讨乳清蛋白酶解物对细胞损伤的防护作用。结果双酶酶解所得乳清蛋白抗氧化肽相对分子量主要分布在369～1980 u;酶解物浓度100～400μg/ml时,可使H2O2诱导损伤的PC12细胞存活率提高20%～30%,提高PC12细胞中抗氧化系统(包括酶、非酶系统)水平及细胞膜的完整性。结论乳清蛋白酶解产物对过氧化氢诱导氧化损伤的PC12细胞具有显著的防护作用,可作为食源性抗氧化剂。     

Punica granatum protects against oxidative stress in PC12 cells and oxidative stress-induced Alzheimer's symptoms in mice

Alzheimer's disease (AD) is a progressive degenerative brain disorder that is characterized by neuronal loss, neurofibrillary tangles, and the abnormal deposition of senile plaque and amyloid β peptide (Aβ). The brains of AD patients are under intense oxidative stress. The overproduction of Aβ leads to Aβ-associated free radical oxidative stress. In this study, the antioxidative and neuronal protective effects of Punica granatum extract were investigated against oxidative stress-induced cytotoxicity in PC12 cells. The ethanol extracts of P. granatum protected PC12 cells from hydrogen peroxide (H?O?-induced oxidative stress. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide reduction assays revealed a significant increase in cell viability when oxidatively stressed PC12 cells were treated with the P. granatum extract. To examine the effects of P. granatum on Aβ????-induced learning and memory impairment in mice, in vivo behavioral tests were performed. Treatment with the extract of P. granatum increased step-through latency in mice injected with Aβ????. The results of this study suggest that the ethanol extract of P. granatum mitigated H?O?-induced oxidative stress in PC12 cells. In addition, the extract inhibited neuronal cell death caused by Aβ-induced oxidative stress and Aβ-induced learning and memory deficiency.     

外周血单核细胞血红素加氧酶1表达与糖尿病肾病的氧化应激机制的研究

目的探讨糖尿病肾病患者外周血单核细胞（PBMC）血红素加氧酶-1（HO-1）的表达与糖尿病肾病的关系及其可能机制。方法2型糖尿病患者伴或不伴糖尿病肾病各20例,正常对照组20例。比较各组空腹血糖、糖化血红蛋白（HbAlc）等基本资料,并检测三组血清中丙二醛（MDA）含量、外周血单核细胞活性氧（ROS）水平、HO-1mRNA水平、HO-1蛋白表达水平。结果在正常对照组、糖尿病组、糖尿病肾病组中,血清MDA水平分别为（14．23±5．07）nmoL／ml、（24．90±7．12）nmol／ml、（43．83-i-16．97）nmot／ml,三组相比,差异有统计学意义（F=37．022,P〈0．01）;PBMC的ROS水平分别为113．18±58．59、364．54±88．67、524．35±162．51,三组相比,差异有统计学意义（F=68．369,P〈0．01）;HO．1蛋白表达水平分别为22．84±9．98、36．72±15．85、58．1±15．93,三组相比,差异有统计学意义（F：31．302,P〈0．01）。HO-1mRNA的水平及蛋白表达水平与MDA水平均呈正相关（r=0．407,0．429,P〈0．05）。结论糖尿病肾病患者与糖尿病非肾病患者相比处于更严重的氧化应激状态并诱导的HO-1代偿性增高。提高HO-1表达将可能是改善糖尿病肾病患者氧化应激状态的可能途径。     

氧化应激对鱼藤酮PC12细胞中的毒性作用

目的探讨氧化应激在鱼藤酮多巴胺能神经元PC12细胞中的毒性作用。方法用高分化的PC12细胞作为多巴胺能神经元的细胞模型,经不同浓度的鱼藤酮处理,观察细胞形态及其超微结构,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性和增殖抑制及细胞代谢状态,生化分析法检测SOD活力、MDA含量,特异性DCF-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。结果经鱼藤酮处理24 h后PC12细胞突起样结构消失,细胞体积变小、形态变圆,部分细胞呈悬浮状态;细胞线粒体代谢和超微结构发生改变;PC12细胞增殖抑制,细胞活性降低;细胞内的SOD活力下降,MDA含量增高;荧光探针标记显示PC12细胞荧光强度增加,细胞内ROS含量增加。结论鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,可抑制细胞增殖,影响线粒体代谢,氧化应激可能在鱼藤酮的多巴胺神经元毒性机制中起作用。     

小鼠2.5 s神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的 建立神经生长因子（NGF）对2,5-己二酮（HD）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制.方法 以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测p53蛋白表达,比较各组间的差异.结果 随NGF浓度增加,细胞存活率升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;DNA断裂减少;细胞凋亡率减小（P＜0.01）;p53表达量下降（P＜0.05）.结论NGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护PC12细胞免于2,5-HD诱导的损伤以及具有抗凋亡作用.     

外源性一氧化碳释放分子对体外培养PC12细胞的谷氨酸兴奋性神经毒性

  目的  探讨一氧化碳释放分子2（CORM-2）对PC12细胞谷氨酸信号通路的影响及作用机理,揭示急性一氧化碳中毒迟发性脑病（delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP）发生的可能机制,为CO的中毒及其后遗症的防治提供实验依据。
  方法  以高分化的PC12细胞为研究对象,经不同浓度的CORM-2暴露后,用MTS法检测细胞活力,确定合适的染毒浓度及染毒时间,收集细胞后用蛋白免疫印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体主亚基（NR1）及NMDA受体2B亚基（NR2B）蛋白的表达,检测细胞内钙离子浓度及细胞释放的谷氨酸含量,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。
  结果  随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低（P < 0.05）;各剂量与对照组相比,NMDA受体的NR1亚基的表达未发生显著的变化（P > 0.05）,250 μmol/L和300 μmol/L剂量组NR2B蛋白的相对表达水平以及Ca2+浓度、谷氨酸水平均高于对照组和200 μmol/L剂量组（P < 0.05）;随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的凋亡率也呈剂量依赖性增加（P < 0.05）。
  结论  随着COMR-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低。CORM-2可使PC12细胞谷氨酸信号通路激活。CORM-2可能通过激活谷氨酸信号通路引起Ca2+内流,进而导致细胞凋亡。这些结果对认识CO中毒机制具有重要意义。
     

桑椹提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤保护作用的初步研究

目的观察桑椹提取物(ME)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致PC12细胞损伤的保护作用,并初步探讨相关机制。方法将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及(25、50、100、200、400和800μg/ml)ME预孵育组(ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用MTT法确定ME的干预浓度。在此基础上,将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、ME组(200μg/ml ME作用24h)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及ME预孵育+Aβ25-35组(200μg/ml ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用分子探针DCFH-DA及Hoechst33342染色法分别进行细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡的测定。结果 (1)与对照组相比,Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P<0.05);与Aβ25-35组相比,100、200μg/ml ME预孵育组细胞存活率显著提高(P<0.05)。(2)与对照组相比,200μg/ml ME组细胞ROS的生成及细胞凋亡率无显著变化(P>0.05),而Aβ25-35组细胞内ROS的生成显著升高(P<0.05)、细胞凋亡率也明显增加(P<0.05);与Aβ25-35组相比,200μg/ml ME预孵育组细胞内ROS的生成显著减少(P<0.05)且细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论桑椹提取物对Aβ25-35致PC12细胞损伤有明显的保护作用,机制与其抗氧化及抑制凋亡作用有关。     

Effect of oxidative stress on fluoride-induced apoptosis in primary cultured Sertoli cells of rats

This study examined the effect of oxidative stress on the apoptosis of Sertoli cells induced by sodium fluoride (NaF). Cell viability, reactive oxygen species, malondialdehyde content, superoxide dismutase activity, mitochondrial membrane potential, and apoptosis were measured after the rat Sertoli cells were exposed to various concentrations of (0, 6, 12, and 24?μg/ml) sodium fluoride in the presence and absence of 2?mM N-acetylcysteine (NAC) for 24?h. The present study showed that decrease in cell viability and excessive oxidative stress were observed in NaF-treated cells. The treatment with NAC restored the decreased cell viability and excessive oxidative stress. Moreover, fluoride exposure decreased mitochondrial membrane potential and increased apoptosis in Sertoli cells. NAC was also found to suppress a loss of mitochondrial membrane potential and the percentage of apoptosis in NaF-treated Sertoli cells. This study proved that oxidative stress probably play a major role in NaF-induced apoptosis of Sertoli cells.