交链孢酚和交链孢酚单甲醚对大鼠不同器官细胞DNA损伤的器官亲和性研究

用污染食管癌高发现场粮食的优势菌互隔交链孢霉(Alternaria alternata)的主要毒素交链孢酚(AOH)和交链孢酚单甲醚(AME),诱发大鼠不同器官细胞的程序外DNA合成(UDS)。结果表明,AOH及AME在最高有效浓度时,诱发肝细胞掺入指数分别为0.45及0.55;诱发食管上皮细胞掺入指数分别为2.32和1.75;诱发肺细胞掺入指数分别为1.7和1.05;该结果提示,AOH及AME对食管上皮细胞具有显著的器官亲和性,大鼠食管可能为AOH及AME的重要靶器官之一。     

互隔交链孢霉毒素引起大鼠肝细胞DNA单链断裂的作用

应用碱性洗脱荧光分析法对互隔交链孢霉产生的两种主要毒素——交链孢酚单甲醚(Alternariol Monomethyl Ether.AME)和交链孢酚(Alternariol.AOH)引起大鼠肝细胞DNA单链断裂效应进行了研究。实验结果表明:二者都能引起大鼠肝细胞DNA单链断裂,并有明显的剂量效应关系.DNA在滤膜上的存留分数明显低于溶剂对照组.具有统计学意义(P<0.01)。结果提示AME和AOH有致突变作用,二者可能是林县食管癌的病因之一。     

交链孢酚诱发人胚食管上皮鳞癌的研究

互隔交链孢霉是食管癌高发区林县粮食中的优势污染菌,我们曾证明该菌产生的毒素之一交链孢酚(Alternariol,AOH)能引起大鼠肝细胞的DNA单链断裂,激活人胚食管上皮的H-ras和myc癌基因,与人食管上皮DNA的各种碱基呈共价结合。为研究AOH能否引起人食管上皮癌,将水囊引产的胎儿食管在体外培养一周后,用AOH处理,再培养2周,     

互隔交链孢霉毒素AME和AOH合成物的诱变性

对互隔交链孢霉毒素——交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)和交链孢酚(Alternariol.AOH)的合成物进行了细菌回复突变试验.检测其诱变性。结果表明:AME和AOH提取物和合成物(不加S_9)对鼠伤寒沙门氏菌TA102菌株和大肠菌ND-160菌株.均显示致突变效应.而后者对AME和AOH更为敏感。用相同剂量.AOH对大肠杆菌ND—160菌株诱变比值(MR)比AME高2～7倍,表明AOH的诱变性更强。合成物与提取物相比,合成物的诱变作用较强。     

交链孢酚单甲醚对细胞免疫的影响

交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethylether,AME)是食管癌高发区林县粮食中分离的优势污染菌互隔交链孢霉(亦称链格孢菌)的毒素之一。多年的研究证实,该毒素具有致突变性和致癌性。为了进一步探讨其对免疫     

交链孢酚诱发人胚食管上皮癌的研究

将体外培养的水囊引产的人胎儿食管用交链孢酚(Alternariol,AOH)处理24h,再培养两周,分别接种于裸小鼠皮下和腹腔内。皮下接种的3个食管组织块中之一形成鳞状细胞癌,其余2个和接种于腹腔的2个食管组织块上皮细胞呈明显增生或乳头状增生。空白对照组的食管组织块未见增生。溶剂对照组者仅呈轻度增生。结果提示互隔交链孢霉在人食管癌病因学中起着重要作用。     

交链孢酚对人胎儿食管和胃上皮脂质过氧化的影响

采用硫队巴比妥酸试验测定丙二醛含量反映脂质过氧化程度。用林县粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢物交链孢酚(AOH,体外攻击人胎儿食管及胃上皮后观察对相应组织脂质过氧化的影响,AOH可使4人胎儿食管及胃上皮丙二醛含量明显升高(P?0.01),其程度与AOH剂量有关,并随时间延长,其程度增高,4～5h达高峰、食管对AOH反应较胃强烈,提示AOH可引发食管及胃上皮组织的脂质过氧化,并有一定的器官选择性。据结果可推测AOH可能是林县地区人食管癌病因之一。     

交链孢酚单甲醚在大鼠小鼠体内的分布

对食管癌高发区粮食中分离的互隔交链孢霉的毒素交链孢酚单甲醚(AME)在大鼠、小鼠体内的分布进行研究。给动物腹腔内注射氚标记的交链孢酚单甲醚(~3H-AME),然后在不同时间测各脏器的放射性。结果表明:在所测9个脏器中,2h肝脏含量最高,食管下段在大小鼠分别居第四和第三。但大小鼠分别在72、24h则以食管下段最高,说明AME及其代谢物在此清除较慢,即对其有较高的亲和力。     

互隔交链孢酚致DNA聚合酶β基因突变的实验研究

目的观察互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞中DNA聚合酶β(DNApolβ)基因突变的影响,研究互隔交链孢酚致癌可能的机制。方法NIH/3T3细胞分为两组:①各正常细胞组;②AOH组,AOH浓度为8μmol·L-1。用RTPCR方法从细胞全RNA中扩增出DNA聚合酶β基因cDNA序列,应用TA克隆技术,克隆至pGEMTeasy载体后进行测序,分析序列变化。结果测序后发现正常组DNA聚合酶β基因序列无任何变化,AOH组中228位点发生TC突变(导致39号氨基酸由Tyr变为His),319位点也有TC突变(导致69号氨基酸由IIe变为Thr)。结论AOH可导致NIH/3T3细胞中的DNA聚合酶β发生点突变,推测AOH的致癌作用可能与引发细胞中DNA聚合酶β基因突变有关。     

互隔交链孢霉毒素诱发人胎食管上皮组织c-Ha-ras点突变的研究

体外培养的人胎儿食管上皮组织经互隔交链孢霉毒素AME或AOH短时间(4h)处理后,提取该组织高分子量DNA;同时提取未经处理的人胎儿食管上皮组织DNA(空白对照)以及食管癌组织和癌旁组织DNA。提取的高分子量DNA作为模板进行PCR反应,扩增含c-Ha-ras癌基因第12位密码子的104bp片段。该片段中第12位密码子处存在限制性内切酶     

Etiological role of Alternaria alternata in human esophageal cancer.

In this paper, the mutagenicity and carcinogenicity of alternariol monomethyl ether (AME), alternariol (AOH), and their relevance to the etiology of human esophageal cancer were studied. These mycotoxins were produced by Alternaria alternata which was the main contaminating fungi isolated from the grain in Linxian County, an area with high incidence of esophageal cancer. This study demonstrated that: 1. AME and AOH might cause cell mutagenicity and transformation; 2. AME and AOH could combine with the DNA isolated from human fetal esophageal epithelium, activate the oncogens, c-H-ras and c-mys in it, and promote proliferation of human fetal esophageal epithelium in vitro; 3. squamous cell carcinoma of the fetal esophagus could be induced by AOH. According to the results of the studies of AME and AOH mentioned above, we consider that Alternaria alternata plays an important role in the etiology of human esophageal cancer.

     

酶联免疫吸附试验检测食管癌高、低发区粮食中交链孢酚单甲醚的研究

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，分别对食管癌高发区林县和低发区商丘各６４份粮食（玉米３２份、小麦３２份）中交链孢酚单甲醚（ＡＭＥ）进行检测。结果：林县６４份粮食中检出ＡＭＥ２５份，阳性率为４０．３％；商丘６４份粮食中有１５份阳性，阳性率为２３．４％。两者比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。不论是小麦还是玉米，ＡＭＥ含量林县均高于商丘，这与粮食中互隔交链孢霉污染情况相符。结果提示：ＡＭＥ可能是人食管癌的病因之一。     

交链孢酚单甲醚对人胚食管上皮的作用

用人胚食管上皮体外培养,经交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)处理后,食管上皮底层细胞比对照组的层次明显增多,细胞排列紧密紊乱,细胞核浆比增加,核不规则,大小不等.浓染,可见核分裂相,且有乳头状向内增生。该变化与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和甲基苯基亚硝胺(MPNA)所诱发的人胚食管上皮癌前病变相类似。结果提示,AME与人的食管癌发生很可能有关。     

交链孢酚单甲醚对鼠肝脂质过氧化及谷胱甘肽过氧化物酶的影响

用食管癌高发区林县的粮食中分离出的互隔交链孢霉的代谢物之一——交链孢酚单甲醚(AME)注入小鼠体内,观察对鼠肝中脂质过氧化及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响。试验结果显示:AME可以导致丙二醇含量增加(P<0.01),谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P<0.01)。丙二醛含量的增高与AME剂量呈显著正相关(r=0.957,P<0.05),酶活性与丙二醛水平呈明显负相关(r=-0.973,P<0.05)。结果表明:AME可以引发脂质过氧化反应,谷胱甘肽过氧化物酶活性下降,本实验结果为该霉菌极可能是引起食管癌病因之一学说提供的积极佐证。