叶酸对胎鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法检测细胞增殖状态;设立正常对照组,叶酸低、高剂量(培养液中添加叶酸4.0 40 mg/L)和叶酸缺乏组(培养液中添加叶酸拮抗剂甲氨蝶呤0.4mg/L);通过nestin+BrdU免疫荧光双标记和绘制细胞生长曲线(MTT法)检测叶酸对细胞增殖状态的影响。结果无血清培养液中可形成大量呈nestin抗原阳性细胞组成的神经球,BrdU免疫标记证实培养的NSCs具有增殖能力。免疫荧光双标记和MTT结果显示,两个叶酸干预组NSCs增殖能力较对照组显著增强。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs具有增殖和自我更新的能力;叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进神经干细胞的生长。     

cdk5、p35和p53基因在砷诱导的神经细胞凋亡中的改变

目的 研究cdk5、p35和p53基因表达量在As2O3诱导的神经细胞凋亡中的改变,为探讨As2O3神经毒性的机制提供基础资料.方法 将原代培养的大鼠神经元分为未处理对照组,DMSO溶剂对照组,1、5、10 μmol/L As2O3染毒组,分别用1、5、10 μmol/L As2O3溶液染毒,未处理对照组只加入培养液.染毒8h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测神经细胞活力,用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测cdk5、p35、p53基因的表达.结果 1、5、10 μmol/L As2O3染毒组神经细胞活力抑制率分别为16.77％、19.72％、27.81％.与未处理对照组和溶剂对照组相比,5和10μmol/L As2O3染毒组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组cdk5、p35、p53基因的表达量随着染毒剂量的增加而升高,各组间p35基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05);cdk5和p53基因表达量的组间差异有统计学意义(P＜0.05),5和10 μmol/L As2O3染毒组cdk5基因表达量明显高于未处理对照组和溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、5和10 μmol/L As2O3染毒组p53表达量明显高于未处理对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);其中10 μmol/L As2O3染毒组p53基因表达量明显高于DMSO溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cdk5、p35和p53可能参与了As2O3诱导的神经细胞凋亡过程.     

乙醇与铅单独及联合染毒对胎鼠脑新皮质神经干细胞自我更新的抑制作用

目的研究乙醇和乙酸铅联合染毒对胎鼠脑新皮质神经干细胞自我更新的影响及其机制。方法取SpragueDawley胎鼠脑新皮质的神经干细胞悬液,分设对照组、乙醇(25、50 mmol/L)单独染毒组、乙酸铅(0.01、0.1、1μmol/L)单独染毒组和乙醇+乙酸铅联合染毒组。培养48 h后,采用台盼蓝试验检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞周期,采用qRT-PCR法检测神经干细胞标志物nestin和细胞周期相关基因p16和p21 mRNA表达。结果乙醇与乙酸铅联合染毒组胎鼠脑新皮质神经干细胞存活率下降,细胞周期延缓、G0/G1期阻滞和S期DNA合成抑制,nestin mRNA表达下降均存在协同效应(P0.05);对p16和p21 mRNA表达水平增高亦呈一定协同作用(P0.05)。结论乙醇和乙酸铅联合染毒能抑制胎鼠脑新皮质神经干细胞的自我更新,并且存在一定协同作用。     

产前束缚应激对子代大鼠听力及耳蜗核Fas／FasL表达的影响

目的 确定产前束缚应激刺激对子代大鼠听性脑干反应(Auditory Brainstem evoked Response,ABR)和耳蜗核中Fas和FasL表达的影响.方法 在母鼠怀孕的13～19d,每天进行3次束缚应激,每次45min.大鼠7天龄时测ABR和对脑组织切片应用免疫组化方法检测耳蜗核中Fas和FasL的表达.结果 S组ABR反应阈为59±7.18dB nHL,对照组ABR反应阈为30±5.68dB nHL.S组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ～Ⅱ、Ⅱ～Ⅲ、Ⅰ～Ⅲ波间期明显延长.应激组Fas的表达强于对照组(P＜0.05),FasL的表达强于对照组(P＜0.05),Fas和FasL的表达两组间没有显著性差异(P＞0.05).结论 产前束缚应激刺激可使子代大鼠耳蜗核神经元中Fas/FasL表达上调,并引起耳蜗核细胞凋亡的发生,从而使子代大鼠ABR阈值升高和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ～Ⅱ、Ⅱ～Ⅲ、Ⅰ～Ⅲ波间期延长,因而产前慢性应激对子代听力有损伤.     

膜型Fas和p53在丝裂霉素C诱导表浅性膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨膜型Fas(mFas)和p53在丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法　采用免疫组化SP法、Westernblot、末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)分别检测MMC(0 .5mg/ml)灌注组和非灌注组各 30例表浅性膀胱癌组织中Fas和 p53蛋白表达、凋亡率、凋亡指数 (AI)。结果　灌注组和非灌注组癌组织中mFas蛋白表达分别为 53 .3 %、2 0 0 % (P <0 .0 5) ;p53蛋白表达分别 40 0 %、36 .7%。在mFas+ / p53- 情况下 ,凋亡率、AI分别为 53 .3 %、(1 1 .2 3± 1 .35) % ;1 3 .3 %、(6 .52± 0 .93) % ,两组凋亡率、AI比较差别有显著性意义(P均 <0 .0 5)。T1 高分级癌组织以mFas- / p53+ 表达为主 ,表现为对MMC耐药。结论　mFas和 p53正常表达在MMC诱导表浅性膀胱癌细胞凋亡中具有重要作用     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂对氢醌致人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)特异性抑制剂N-(6-氧-5,6-二氢菲啶-2-羟基)-N,N-二甲基乙酰胺-盐酸(PJ34)对氢醌(HQ)所致人胚肺成纤维细胞(HLF细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法将离体传代培养的HLF细胞分为阴性对照组、阳性对照组(HQ组)、3个PJ34组和3个PJ34 HQ组。按PJ34不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)分为PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用4 h后检测结果;按PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组浓度及作用4 h后再分别加入HQ(80μmol/L)分为PJ34 HQ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用24 h检测结果;HQ组仅用HQ24 h处理。采用PARP-1单克隆抗体荧光标记,流式细胞术检测HLF细胞中PARP-1蛋白表达、细胞凋亡和细胞复制后期(G2)细胞数情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定HLF细胞相对存活率。结果各组给予不同剂量的PJ34 4 h后,HLF细胞的存活(增殖)明显受抑制(P<0.05),随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强;PARP-1蛋白表达阳性的HLF细胞百分数均明显低于阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测显示HQ作用24 h后均可引起HLF细胞的调亡,可出现明显的亚二倍体峰,且随着PJ34预处理浓度的增加,其峰值也逐渐增加;HQ可导致细胞周期出现G2期阻滞,PJ34 HQⅠ、Ⅱ、Ⅲ组G2期阻滞减少且差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论PARP-l抑制剂PJ34明显抑制HLF细胞PARP-1表达,增加HQ所致细胞凋亡,并通过诱导HLF细胞凋亡抑制其增殖。     

胃肠道间质细胞瘤p53基因表达与细胞增殖、凋亡及血管形成的关系

目的 研究胃肠道间质细胞瘤(GIST)中p53基因表达与细胞增殖、凋亡及血管形成的关系.方法 检测86例GIST中p53基因表达,同时检测核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)、增殖细胞核抗原(PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki-67(Ki-67)反映细胞的增殖,检测细胞凋亡指数(API)反映细胞的凋亡,检测微血管密度(MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)反映血管形成.结果 p53基因阳性表达47例(p53阳性表达组),阴性表达39例(p53阴性表达组). p53阳性表达组的AgNORs、PCNA、Ki-67表达明显高于p53阴性表达组(P<0.01);p53阳性表达组的API明显低于p53阴性表达组(P<0.01);p53阳性表达组的MVD、VEGF表达明显高于p53阴性表达组(P<0.01).结论 突变型p53基因能够促进GIST增殖、抑制凋亡、增加血管形成,与肿瘤的形成、发生与发展密切相关.     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的研究PBDE-47对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期、凋亡和p53蛋白表达的影响。方法用低、中、高剂量(0、0.5、2.5、5μg/ml)的PBDE-47对体外培养的SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后采用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Westernblot检测p53蛋白的表达水平。结果与对照组相比,低、中、高剂量染毒组G0/G1期细胞数均明显增加,S期细胞数均明显减少(P0.001)。与对照组相比,高剂量染毒组细胞凋亡率明显升高(P0.001),中、高剂量染毒组p53蛋白表达水平均明显升高(P0.01)。结论 PBDE-47可导致SH-SY5Y细胞在G0/G1期发生阻滞及细胞凋亡,并诱导p53蛋白表达增加,PBDE-47导致的细胞周期阻滞与凋亡可能与p53蛋白表达水平增加有关。     

银杏叶提取物对氯化镉损伤人肾近曲小管细胞的保护作用实验研究

目的探讨银杏叶提取物对氯化镉所致人肾近曲小管细胞损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养人肾近曲小管细胞系HK-2细胞,以氯化镉处理细胞建立损伤模型。设对照组(仅细胞)、1个单染镉组(40μmol/L)、3个银杏叶提取物干预组(40μmol/L氯化镉+28μg/ml银杏叶提取物、40μmol/L氯化镉+56μg/ml银杏叶提取物、40μmol/L氯化镉+84μg/ml银杏叶提取物),共同处理HK-2细胞24小时,噻唑蓝比色法(MTT)检测HK-2细胞活力,流式细胞术检测HK-2细胞凋亡,试剂盒检测HK-细胞内活性氧水平、脂质过氧化产物丙二醛含量,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞凋亡相关因子p53、Bax、Bcl-2 mRNA基因表达水平。结果 (1)与对照组相比,氯化镉单独处理组HK-2细胞存活率降低(P0.01),早期凋亡率上升(P0.05),细胞内活性氧、丙二醛含量升高(P0.05),细胞内p53、BaxmRNA基因的表达水平上升(P0.05),细胞内Bcl-2 mRNA基因表达水平下降(P0.05);(2)与氯化镉单独处理组相比,56μg/ml、84μg/ml银杏叶提取物干预组HK-2细胞存活率上升(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞内活性氧、丙二醛含量降低(P0.05),细胞内p53、Bax基因表达水平下降(P0.05),Bcl-2基因表达水平上升(P0.05)。结论 56μg/ml～84μg/ml银杏叶提取物对氯化镉所致的人肾近曲小管细胞生长抑制、细胞凋亡有保护作用,其保护作用机制与抗氧化应激有关。     

大鼠胚胎脑新皮质神经干细胞的体外分离培养方法研究

目的建立大鼠胚胎脑新皮质神经干细胞的体外分离培养方法。方法从孕14天SD大鼠胚胎脑分离新皮质,通过机械吹打改善细胞分散状态、优化无血清培养基条件,从而改进神经干细胞的培养方法。利用神经干细胞标志蛋白(nestin和SOX2)、增殖和克隆成球能力以及多向分化能力测试三方面对神经干细胞进行鉴定。结果以该法培养的神经干细胞nestin蛋白呈强阳性表达,SOX2阳性表达率达99%以上,BrdU掺入阳性,培养3天后细胞量为接种量的10.55倍,6日克隆成球率为(33.00±4.40)%。经相应特异性标志蛋白检测证实神经干细胞经诱导分化后可形成神经元(MAP2)、星形胶质细胞(GFAP)和少突胶质细胞(O4)。结论获得的神经干细胞纯度和细胞产出率高,具有强自我更新和多向分化能力。     

维生素E对低温暴露大鼠血清GPT、GOT和LDH活性的影响

本实验观察补充维生素E的大鼠低温暴露后血清GPT、GOT和LDH活性的变化,探索维生素E对低温暴露动物的影响。将体重70～120g雄性大鼠随机分为甲、乙、丙三组,饲以基础饲料,甲组动物每两天腹腔注射维生素E5mg(5mg/ml),5次(10天)后,将甲、丙两组移入低温室(-1±1℃)连续暴露48小时,乙组作为常温对照留在室温下(20±1℃)。低温暴露结束时,立即测定三组动物血清中GPT、GOT和LDH活性。结果是:丙组动物血清中三种酶活性最高,乙组最低,甲组稍高于乙组但明显低于丙组。说明低温暴露动物补充维生素E后血清中三种酶活性稍有改善。     

妊娠中晚期神经系统病症与血清VitB_(12)水平的相关性研究

目的:探讨妊娠中晚期神经系统病症与血清维生素B12(VitB12)水平的关系,观察补充VitB12治疗的临床效果。方法:采用病例对照法,将出现神经系统症状的妊娠中晚期妇女60例按症状不同程度分为症状明显组(Ⅰ组)和症状轻微组(Ⅱ组),30例正常孕妇做为对照组(Ⅲ组),采用化学发光法进行血清VitB12水平的测定,Ⅰ组、Ⅱ组分别给予肌内注射及口服VitB12治疗后,检测血清VitB12水平,观察其变化情况并做疗效分析。结果:Ⅰ组、Ⅱ组血清VitB12水平分别为98.7±37.8pmol/L和158.9±46.8pmol/L,明显低于Ⅲ组334.4±109.3pmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后Ⅰ组、Ⅱ组血清VitB12水平分别为289.7±44.4pmol/L和212.5±48.1pmol/L,与治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ组分别有86.67%、63.33%神经系统症状较治疗前明显缓解,两组有效率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:妊娠中晚期神经系统症状的发生与血清VitB12水平降低有关。必要的VitB12治疗对改善妊娠中晚期VitB12缺乏症有良好的临床疗效。     

限制能量摄入对小鼠的生长、发育和耐力的影响

本文报告了以我国昆明种小鼠为对象,研究限制能量摄入对动物生长、发育和耐力影响的有关结果。72只断奶雄性小鼠随机分为三组:Ⅰ组,自由摄食组;Ⅱ组,能量摄入为Ⅰ组的80％;Ⅲ组,能量摄入为Ⅰ组的65％。各组动物摄入的蛋白质、脂肪、维生素和无机盐均相等。经42天限食后发现:1)限食第1周,Ⅰ组动物生长正常,体重增加;Ⅱ组动物生长停滞;Ⅲ组动物体重下降。可见限食初期,被限食动物生长发育受影响,限食越苛,影响越大;2)经过一周的调整期后,动物体重开始增长。在此后的5周内,Ⅱ组动物每周平均增重2.44±0.52g,与Ⅰ组(每周增重2.32±0.67g)比较无显著差异(P>0.2),但略高于Ⅰ组。Ⅲ组动物体重增加缓慢,平均每周增重1.24±0.38g,与Ⅰ、Ⅱ组比较,P<0.001;3)各组动物身长、尾长和脏器发育等情况和上述体重变化情况基本一致;4)各组动物在缺氧条件下的生存时间有差异,其差异主要由体重差异所造成。游泳时间相差较大,但P>0.05,需待进一步研究;5)各组动物的心、肝中过氧化脂质无显著差异(P>0.05),说明在本研究中,限食未能影响体内自由基的产生或清除能力。     

米索前列醇口服和阴道给药用于宫颈扩张的随机比较试验

本研究旨在随机比较负压吸宫术前3h一次口服米索前列醇400μg或阴道给药对于早孕妇女宫颈扩张的临床效果。共征集对象150例,组Ⅰ(口服)、组Ⅱ(阴道给药)和组Ⅲ(对照组)各50例。结果显示组Ⅰ、Ⅱ对象中Hegar氏扩张器无阻力通过宫颈内口最大直径分别为6.15±0.35mm((?)±s,下同)和6.12±0.37mm,明显大于对照组(4.85±0.35mm,P<0.001),而术中出血组Ⅰ和组Ⅱ则分别为14.92±5.39ml和13.61±4.29ml,与对照组(20.53±5.17ml)相比亦有显著差异(P<0.001)。且用药组术中恶心与腹痛的发生率明显低于对照组(P<0.001)。本研究提示米索前列醇无论口服或阴道给药,对于早孕妇女子宫颈均有明显扩张与软化作用,且可明显减少负压吸宫术中出血量。     

药物流产后加服米非司酮、米索前列醇对缩短阴道出血时间的临床观察

目的 :观察加服米非司酮、米索前列醇缩短药物流产后阴道出血时间的临床效果。方法 :将 4 90例早孕妇女随机分为对照组、观察Ⅰ组和观察Ⅱ组。常规药物流产用药后 ,对照组不加任何药 ,观察Ⅰ组于口服米索前列醇 2h后加米非司酮 5 0mg ,观察Ⅱ组于口服米索前列醇 6h后加服米索前列醇 6 0 0 μg。结果 :完全流产率 ,对照组89 3% ,观察Ⅰ组 97 4 6 % ,观察Ⅱ组 97 6 4 % ,对照组与观察组间有显著性差异 (P <0 0 1) ,两观察组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。平均阴道出血时间 ,对照组 15 5±5 4天 ,观察Ⅰ组 12 2± 3 5 3天 ,观察Ⅱ组 8 8± 4 15天 ,3组间有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论 :加服米非司酮、米索前列醇可提高完全流产率 ,缩短药物流产后阴道出血时间 ,且加服米索前列醇效果更好     

蛋白质水平对大鼠子代脑发育及功能的影响

孕前、妊娠期及哺乳期给予雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠含酪蛋白分别为４０％、２０％和８％的等能量饲料，观察对子代脑发育及脑功能的影响。结果表明，２０％酪蛋白营养水平不能充分满足哺乳期幼鼠脑生长发育的需要。妊娠及哺乳期严重的营养不良对脑发育所产生的损害，断乳后即使给予蛋白质补充，也未能使脑发育得到恢复。     

核黄素对受冷大鼠增重、成活和有关激素的影响

方法：低温下（１０℃±２℃）饲养的大鼠仔鼠补充核黄素至６０日龄连续暴露７２小时后采血并摘取肾上腺，结果：１．各试验组和适温对照组成活率高，而低温对照组低。２．试验组增重效果优于对照组。３．试验组大鼠肾上腺皮质束状带宽度、细胞个数、髓质细胞数与适温对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。试验Ⅲ组束状带细胞个数与低温对照组之间差异显著（Ｐ＜０．０５）。４．各试验组的血清皮质醇（Ｃｏｒｔ）、Ｔ３、Ｔ４水平较低温对照组低；各试验组的生长激素（ＧＨ）水平虽较低温对照组稍高，但无显著性（Ｐ＞０．０５）；试验组的胰岛素（Ｉｎｓ）水平较两对照组高。提示日粮添加核黄素可以促进机体的冷适应，而且也有助于机体耐寒力的提高     

放置IUD出血子宫内膜中血管内皮生长因子及CD_(34)含量的研究

目的:探讨上环出血子宫内膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及内皮细胞的CD34的含量变化及意义。方法:利用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术,对三组受试者子宫内膜中VEGF及CD34进行检测。Ⅰ组为置IUD后有异常子宫出血妇女30例,其中金属“O”型环15例,“T”型环15例。Ⅱ组为置IUD后月经周期正常的妇女16例,其中金属“O”型环8例,“T”型环8例。Ⅲ组为无置器月经周期正常的妇女15例。结果:①VEGFⅠ组、Ⅱ组、Ⅲ组子宫内膜腺上皮阳性面积比分别为(3.99±0.15)%,(45.27±0.43)%,(45.36±0.56)%,Ⅰ组和Ⅱ组、Ⅲ组间子宫内膜腺上皮表达差异有显著性(P<0.05);②CD34标记的MVD在Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组的值分别为4.67±3.51、18.17±2.43、19.65±4.03,Ⅰ组明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),而Ⅱ、Ⅲ组间差异无显著性。金属“O”型环和“T”型环在Ⅰ组内无显著性差异(P>0.05)。结论:①VEGF及CD34在上环出血的子宫内膜中表达均下降,影响受损伤的子宫内膜血管的再生修复能力,引起IUD出血;②在放置金属“O”型环与“T”型环的子宫内膜中VEGF、CD34的表达无差异性。     

妊娠期糖尿病诊治与妊娠结局相关分析

目的探讨妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellilus，GDM）的血糖控制状况与妊娠结局的关系。方法回顾性分析240例GDM患者的临床资料，按治疗方式分为单纯饮食控制组145例（Ⅰ组），饮食控制加胰岛素治疗组60例（Ⅱ组），无系统治疗组35例（Ⅲ组），比较三组的妊娠结局。结果Ⅲ组的孕产妇并发症，剖宫产率，均较Ⅰ组和Ⅱ组明显升高，妊娠结局Ⅰ组和Ⅱ组较好，Ⅲ组较差，而Ⅰ组和Ⅱ组间无明显差异。结论妊娠期糖筛查妊娠期糖尿病孕期若能积极控制血糖，适时终止妊娠，母婴愈后良好。     

神经电生理在持续植物状态患者脊髓电刺激疗法中的应用

目的研究与观察神经电生理在持续植物状态患者脊髓电刺激疗法中的应用效果。方法选取2016年7月-2019年2月的39例采用脊髓电刺激疗法治疗的持续植物状态患者为研究对象,将其根据Cant分级分为Ⅰ级组12例、Ⅱ级组14例及Ⅲ级组13例。比较三组的临床疗效、治疗前后的脑血流指标,并采用Spearman等级相关分析处理Cant分级与临床疗效的关系。结果Ⅰ级组的临床疗效优于Ⅲ级组,Ⅱ级组优于Ⅲ级组,Ⅰ级的脑血流改善幅度大于Ⅱ级组及Ⅲ级组,Ⅱ级组则大于Ⅲ级组,差异有统计学意义(P<0.05),Spearman等级相关分析显示,Cant分级与临床疗效呈负相关(P<0.05)。结论神经电生理在持续植物状态患者脊髓电刺激疗法中的应用效果较好,对于本类治疗患者的指导与参考意义较高。