NF-κB抑制剂PDTC对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用PDTC 0、25、50、100μmol/L处理HL-60细胞24、48、72 h,CCK-8实验检测细胞增殖抑制率,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase 3)、cleaved caspase 8及NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞24、48、72 h后,同一时间点下随着PDTC浓度升高,细胞增殖抑制率越高(r=0.924,P 0.01),在同一PDTC浓度下,随着时间推移,细胞增殖抑制率增高(r=0.952,P 0.01)。在25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞48 h后,与对照组比较,PDTC能显著提高HL-60细胞凋亡率,并使细胞周期阻滞在G1期(P 0.01); PDTC能显著下调HL-60细胞BCL-2,cyclinD1、p-NF-κB p65表达(P 0.05),上调BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8表达(P 0.01); 50、100μmol/L PDTC能显著下调HL-60细胞p-NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达(P 0.01)。结论:PDTC能显著抑制急性白血病细胞HL-60的增殖,并诱导细胞凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人乳头瘤病毒(HPV)呈阳性表达的宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长抑制作用及其作用途径。方法在CaSki细胞与HeLa细胞的培养液中添加EGCG后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测两种宫颈癌细胞的生长曲线;4’,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光标记法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测病毒致癌基因E6(HPV E6)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、芳香化酶等蛋白的表达水平。结果 MTT法显示,培养液内添加EGCG能明显抑制CaSki细胞与HeLa细胞的生长,并且呈浓度和时间依赖性;DAPI荧光标记法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞24h后均呈典型的细胞凋亡形态学改变;Western blot法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞12、24、48h后,HPVE6、ERα、芳香化酶的蛋白表达量逐渐减低,ERβ的蛋白表达量增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论 EGCG在体外能有效抑制人宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长与增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调HPVE6、ERα、芳香化酶蛋白的表达量、上调ERβ的蛋白表达量有关。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

核因子-κB对胰腺AR42J细胞肿瘤坏死因子-α表达的调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胰腺腺泡AR42J细胞细胞因子表达的影响及其可能机制,进一步阐明急性胰腺炎的发病机制.方法 用不同质量浓度的LPS(0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L)刺激AR42J细胞18 h,同时用10mg/L的LPS刺激AR42J细胞不同时间(2,6,12,18,24h),RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)P65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化,放射免疫法(RIA)检测培养液上清TNF-α蛋白浓度的改变.对NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-α mRNA的表达进行相关和回归分析.结果 RT-PCR结果表明0.001 mg/L的LPS处理AR42J细胞时即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,且呈量效关系;用10 mg/L的IPS处理后,在2 h后即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,并且呈时效关系.RIA结果表明用0.01 mg/L的LPS处理AR42J细胞后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,且呈量效关系;用10mg/L的LPS处理后,在6 h后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,并且呈时效关系.TNF-α mRNA的表达与P65 mRNA的表达呈正相关.结论 LPS可以以时间剂量依赖方式地刺激AR42J细胞NF-κB(P65)和TNF-α的表达,NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-αmRNA的表达呈正相关.针对NF-κB靶点,抑制其活性,可为包括AP的治疗提供一条新的途径.     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

地塞米松对人外周血单核细胞核因子-κB活化和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DXM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人外周血单核细胞核因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)产生的影响。方法收集人外周血单核细胞接种于培养板后,分生理盐水对照组、LPS组、LPS DXM1μmol/L组、LPS DXM10μmol/L组。LPS诱导0、0.5、2、6、12、16h后留取细胞及细胞培养上清。采用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κBp65阳性表达率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果LPS诱导0.5h后NF-κB表达开始增加,2h达高峰。2h时TNF-α合成开始增加,6h达高峰。在2、6、12h时,LPS DXM1μmol/L组和10μmol/L组TNF-α含量均比LPS组各相应时间点低(P<0.05或0.01)。在0.5、2、6h时LPS DXM1μmol/L组NF-κB阳性表达率和在2、6h时LPS DXM10μmol/L组NF-κB阳性表达率均比LPS组低(P<0.05或0.01)。LPS DXM1μmol/L和10μmol/L组NF-κB阳性表达率和TNF-α含量在各时间点差异均无统计学意义。结论LPS在体外诱导人外周血单核细胞NF-κB的活化和TNF-α的产生;DXM通过抑制NF-κB的活化和TNF-α的释放而发挥抗炎作用,并且这种抑制效应可能不随剂量的增加而增强。     

核转录因子-κB诱导肿瘤坏死因子-α在肝肺综合征大鼠肺血管内巨噬细胞中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸对其表达的影响

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠肺血管内巨噬细胞(PIM)内的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)对其表达的影响.方法 SD大鼠随机分4组:对照组、PDTC对照组、CCI4组、CCI4+PDTC组.取动脉血作血气分析,静脉血测内毒素和肝功能.取肠系膜淋巴结作细菌培养.应用免疫组化方法 观察PIM的粘附、聚集情况,以及TNF-α和NF-κB的蛋白表达和定位.非放射性凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测NF-κB活性,SYBR Green I实时定量PCR方法 检测肺组织中TNF-α的mRNA表达.结果 CCl4组发展成肝肺综合征(HPS)模型,表现为PaO2、PaCO2降低和肺泡一动脉血氧分压(A-aDO2)升高,肝功能异常,内毒素血症.CCl4组肠系膜淋巴结培养阳性率为62.5%(5/8),与CCl4+PDTC组的66.7%(6/9)比较差异无统计学意义(P>0.05).CCl4组超过10个巨噬细胞的血管为60.8%(292/480),而CCl4+PDTC组仅为19.6%(106/540),两组比较差异有统计学意义(P<0.01).对照组和PDTC对照组中肺血管内无巨噬细胞聚集.免疫组化染色NF-κB和TNF-α蛋白均在CCl4组的PIM中表达.CCl4组的NF-κB活性和TNF-α的mRNA表达明显高于对照组、PDTC对照组和CCl4+PDTC组(均P<0.05).结论 NF-κB诱导PIM内TNF-α表达在HPS中发挥重要作用,PDTC通过抑制PIM中NF-κB的活性,降低PIM活性以及其中TNF-α表达,从而改善HPS.     

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15 min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L DZX和500μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V/PI流式检测凋亡细胞,Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;②与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot检测显示Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

调控A20对NF-κB表达及Jurkat细胞的影响

目的:探讨在急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药Jurkat细胞株中,调控A20对NF-κB表达以及Jurkat细胞生物学特性的影响。方法:CCRF CEM和Jurkat细胞中分别加入100、10、1、0.1、0.01和0.001μmol/L地塞米松(DEX),培养24、48和72 h,应用CCK-8检测细胞增殖抑制的变化。构建A20质粒,设计并合成A20-siRNA,分别通过脂质体转染Jurkat细胞,CCK-8检测不同浓度DEX处理组、不同浓度DEX联合A20质粒和A20-siRNA处理组的Jurkat细胞增殖率。应用RT-qPCR检测NF-κB的m RNA表达水平,Western bolt检测蛋白表达水平,采用流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡。结果:不同浓度地塞米松(DEX)对CCRF CEM细胞生长的抑制作用呈显著的时间依赖性(r=0.984,P0.05)和浓度依赖性(r=0.966,P0.05);CCRF CEM细胞在24 h时,IC50接近1μmol/L,Jurkat细胞在1μmol/L和10μmol/L开始出现较大差异。由于1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞增殖率无明显变化,故选取1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞为对照组。检测显示A20质粒转染联合不同浓度DEX处理组细胞增殖率较DEX组及A20-siRNA联合DEX组低(P0.05)。A20质粒转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P0.05),细胞凋亡率较对照组明显增高(P0.05);A20-siRNA转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05),A20-siRNA组细胞的凋亡率与对照组无明显改变(P0.05)。结论:Jurkat细胞对DEX耐药,A20过表达联合DEX可增加对DEX耐药细胞的敏感性,降低Jurkat细胞增殖率;下调Jurkat细胞中NF-κB的表达水平,促进Jurkat细胞的凋亡。     

艾拉莫德通过TLR4/NF-κB通路抑制骨关节炎软骨细胞模型凋亡及炎症反应

目的 研究艾拉莫德对骨关节炎(OA)软骨细胞模型凋亡及炎症反应的调控作用及机制。方法 培养软骨细胞株ATDC5,采用10 ng/mL白细胞介素(IL)-1β刺激的方法建立OA软骨细胞模型,给予不同浓度(0.6、1.2、1.8 mg/L)艾拉莫德处理,转染pcDNA质粒或pcDNA-Toll样受体4(TLR4)质粒。检测细胞增殖活力(以A₄₉₀表示)、凋亡率,裂解型caspase-3(Cleaved caspase-3)、TLR4、核因子-κB(NF-κB)p-p65表达水平,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8水平。结果 模型组A₄₉₀低于对照组,凋亡率、Cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p-p65、TNF-α、IL-6、IL-8水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度艾拉莫德组A₄₉₀高于模型组,凋亡率、Cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p-p65、TNF-α、IL-6、IL-8水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05...     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇（Res）对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E（p-eIF4E）、磷酸化4E结合蛋白1（p-4E-BP1）和半胱氨酸蛋白酶蛋白3（caspase-3）的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=93.76~637.22,P〈0.01）;在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=8.79~29.99,P〈0.01）。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少（t=14.93、4.78,P〈0.01）,caspase-3蛋白表达较对照组增加（t=10.68,P〈0.01）。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

阿奇霉素对香烟烟雾凝集物刺激的巨噬细胞炎症调控的机制研究

目的探讨阿奇霉素对香烟烟雾凝集物(CSC)刺激的巨噬细胞炎症调控的机制。方法体外培养人单核细胞系THP-1细胞,以PMA诱导分化为巨噬细胞。正常对照组不予特殊干预,实验组予以CSC刺激,以及加用不同浓度的阿奇霉素(0. 05μmol/L、0. 5μmol/L、5μmol/L)作用于巨噬细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。各组细胞提取核蛋白,比色法检测各组细胞组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性,Western blotting法检测各组细胞HDAC2、核因子κB(NF-κB) p65的表达。结果 CSC组与对照组比较,IL-8、TNF-α释放明显增加,HDAC活性和HDAC2的表达明显降低,NF-κB p65表达明显升高。与CSC组比较,阿奇霉素0. 5μmol/L、5μmol/L组IL-8、TNF-α浓度下降,HDAC活性和HDAC2表达升高,NF-κB p65表达降低。结论阿奇霉素可以抑制香烟烟雾刺激引起的巨噬细胞炎症因子释放,其中机制可能为上调HDAC2水平、抑制NF-κB通路,从而发挥抗炎作用。     

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。     

柔红霉素对HL-60细胞的促凋亡作用及其与ROS、CER、NF-κB关系的实验研究

目的：探讨柔红霉素（DNR）在体外作用于HL－60细胞时细胞发生凋亡的规律及一些相关机制。方法：应用光镜、流式细胞仪（FCM）及DNA电泳检测DNR诱导HL－60细胞的凋亡作用；用免疫细胞化学（IC）、FCM观察相关蛋白的变化。加入活性氧（ROS）抑制剂四氢吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）或神经酰胺（CER）合成酶抑制剂马廉菌素B1（FB1）后，观察DNR诱导的HL－60细胞凋亡率的变化。结果：当DNR浓度为0．2－2．0μmol/L时，HL－60细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的DNA梯度条带。当1．0μmol/L DNR作用于HL－60细胞后，细胞中Bcl-2与C－myc蛋白的荧光强度指数（FI)总的趋势降低，Bax、caspase-3的FI值在作用2h时上升，而5h时降低，核因子κB（NF-κB）的FI值持续升高。PDTC可抑制DNR对HL－60细胞的凋亡诱导作用，而FB1无影响。结论：一定浓度的DNR在体外诱导HL－60细胞凋亡，发生凋亡的机制可能是通过抑制Bcl-2和C－myc蛋白的表达、激活Bax、caspase-3蛋白诱导的；此凋亡过程与ROS、NF－κB有关，而与CER合成酶无关。     

氯丙嗪对缺氧缺糖PC-12细胞的保护作用及其机制的探讨

目的研究氯丙嗪（CPZ）对PC-12缺氧缺糖细胞保护作用的机制。方法实验分组为正常对照组（con）、缺氧缺糖模型组（M）、氯丙嗪低浓度组（1μmol.L-1、L）、氯丙嗪高浓度组（2.5μmol.L-1、H）,MTT法检测各组PC-12细胞增殖率,RT-PCR方法检测各组PC-12细胞中IκBα和caspase-3的mRNA的表达水平,用Western blotting方法检测各组PC-12细胞中NF-κB P65和NF-κB P50的表达水平。结果与模型组相比,缺氧缺糖氯丙嗪低浓度组和缺氧缺糖氯丙嗪高浓度组细胞增值率明显升高,差异有统计学意义,同时IκBα和caspase-3的mRNA表达水平明显下降（P〈0.01）、NF-κB P65和NF-κB P50蛋白的水平明显升高（P〈0.01）,差异有统计学意义。结论氯丙嗪能够减轻缺氧缺糖引起的细胞损伤;其机制可能与调控IκB/NF-κB途径,减少凋亡相关基因的表达有关。     

核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用。方法构建动静力失衡性颈椎病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,PDTC低、中、高剂量组,另外设立假手术组(仅切开颈部皮肤),每组大鼠10只,PDTC低、中、高剂量组大鼠每天分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg PDTC,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续28 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及IL-6含量,Realtime PCR检测TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA表达,Western blot检测各组大鼠椎间盘组织中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。结果与假手术组比较,模型组中大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量提高(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量上调(P <0. 05)。与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量降低(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量下调(P <0. 05),并呈剂量依赖性。结论 PDTC能显著地抑制颈椎病大鼠椎间盘炎症反应,并其作用呈剂量依赖性。     

lncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究长的非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二〇一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近的健康组织,并分别作为病理观察组和对照组。将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12分为对照组(PC12细胞系)、过表达组(lncRNA HOTAIR过表达转染)和敲低组(shRNA lncRNA HOTAIR转染)。RT-PCR检测lncRNA HOTAIR的mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]水平;蛋白印迹分析JAK2/STAT3、核因子κB(NF-κB)相关通路蛋白的表达。结果病理观察组较健康对照组lncRNA HOTAIR mRNA表达升高(P<0.05)。转染24 h和48 h后,3组细胞增殖率均显著高于转染12 h(P<0.05);对照组和过表达组细胞增殖能力均随转染时间显著增强(P<0.05);转染24 h和48 h后,过表达组细胞增殖数目较对照组显著升高(P<0.05),敲低组细胞增殖数目较HOTAIR过表达组显著降低(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),与过表达组相比,敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过上调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平,激活了JAK2/STAT3通路,调节肾上腺肿瘤细胞的增殖和凋亡。     

肿瘤坏死因子-α诱导成骨细胞凋亡时Bcl-2和Bax蛋白表达变化

目的:了解成骨细胞凋亡发生机制,观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导大鼠成骨细胞凋亡过程中Bcl-2,Bax蛋白表达变化及意义。方法:以原代培养的SD大鼠颅骨成骨细胞为实验对象,分别用含量为0,10,20,30,40μg/LTNF-α刺激成骨细胞。通过对细胞活性、超微结构变化观察TNF-α对成骨细胞凋亡的诱导作用;同时检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达变化。结果:随刺激含量的加大,成骨细胞的活性逐渐降低,细胞凋亡逐渐增加。TNF-α含量为<30μg/L时Bax表达呈稳步上升趋势,30～40μg/L时开始下降。Bcl-2表达在含量为10μg/L的时候轻度上升,在20μg/L回复到正常,后随着剂量的加大Bcl-2表达开始明显下降,30～40μg/L时下降非常显著。对于Bax/Bcl-2相对表达强度与细胞死亡率做相关性分析两者呈显著性正相关(n=25,r=0.827,P<0.001)。结论:蛋白相对比例是决定成骨细胞对TNF-α诱导凋亡的易患性的重要因素。     

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO_2恒温箱中培养30 h; B组缺氧(O_2浓度6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO_2恒温箱)培养6 h; C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显; C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P 0. 05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P 0. 05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。     

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用

目的 探讨NF-κB(核因子-κB)与PUMA(P53正向凋亡调节因子)表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的影响.方法 SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC(15 mg/kg),各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果 成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.