姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖抑制机制的研究

目的 探讨姜黄素(curcumin)对人舌癌Tca8113细胞株体外增殖及凋亡的调控作用.方法 选用人舌鳞癌Tca8113细胞系进行体外培养,以5-40μmol/L的姜黄素分别处理Tca8113细胞24～72h后,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组化法检测细胞内核增殖抗原ki-67、癌基因蛋白p-21、细胞凋亡相关基因蛋白Bax表达水平.结果 curcumin对Tca8113细胞增殖有抑制作用,并随药物浓度升高和时间延长而增强,倒置显微镜观察可见细胞发生凋亡形态学改变的程度和浓度与时间呈正相关,免疫组织化学检测到核增殖抗原ki-67、p-21表达均下调,Bax表达增强.结论 姜黄素对Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用,并与浓度、时间有量效关系.通过上调凋亡基因蛋白Bax,下调ki-67、p-21蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tca8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)处理Tca8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间(24h、48h、72h、96h)下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tca8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大(P<0.01)。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

熊果酸通过下调环氧化酶2表达调控舌鳞癌细胞增殖与凋亡

目的 研究熊果酸(UA)对舌鳞癌细胞增殖与凋亡的作用及其可能机制.方法 人舌鳞癌细胞Tca8113分别加入UA 0、10、20、40 μmol/L,培养12-72 h,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot法检测药物作用后细胞中环氧化酶2(COX-2)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白表达.结果 UA呈剂量依赖性地抑制舌鳞癌细胞Tca8113增殖,诱导舌鳞癌细胞凋亡,下调Tca8113细胞中COX-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比值及活化的Caspase-3蛋白表达.结论 UA可能通过下调COX-2的表达抑制舌鳞癌细胞增殖,诱导凋亡.     

野黄芩苷对人舌鳞癌 Tca8113 细胞凋亡及 caspase-8表达的影响

目的 探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌 Tca8113 细胞凋亡的可能机制。方法 将体外培养的人舌鳞癌Tca8113 细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组（浓度分别为 80、 120、 160 mg/L）, 每组设 3 个复孔。采用 Tunel检测细胞凋亡情况; 采用免疫细胞化学法和 Western blot 法检测 caspase-8 蛋白表达情况。结果 （1） 80、 120、 160 mg/L 野黄芩苷组 Tca8113 细胞凋亡率高于对照组（ [ 17.63±0.25） %、（36.23±0.36） %、（51.84±0.58） % vs（4.45±0.27） %, P < 0.05]。（2）与对照组相比, 80、 120、 160 mg/L 野黄芩苷组 caspase-8 蛋白的表达增加（0.283±0.040 vs 0.474±0.031、 0.592±0.077、 0.781±0.020, P < 0.05）。结论 野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞 Tca8113 的凋亡, 可能与上调 caspase-8 蛋白表达有关。     

基于miR-224和TPD52探讨雷公藤红素诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的机制

目的基于miR-224和TPD52探讨雷公藤红素诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的机制。方法分为对照组(舌癌Tca8113细胞组)和雷公藤红素低、中、高剂量组(12.5、25和50μg/ml雷公藤红素),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后测定各组细胞癌细胞活力,单克隆形成数,细胞凋亡率,miR-224与TPD52 mRNA水平,Bax和Caspases-3蛋白水平。结果雷公藤红素低、中、高剂量组细胞A值、细胞存活率水平和单克隆形成数目低于舌癌Tca8113细胞组,凋亡率高于舌癌Tca8113细胞组,差异有统计学意义(P0.01),且随着雷公藤红素剂量的增加,雷公藤红素各剂量组A值、细胞存活率水平和单克隆形成数目逐渐降低,凋亡率水平逐渐升高,剂量-效应关系明显(P0.01)。雷公藤红素低、中、高剂量组miR-224 mRNA表达水平、Bax和Caspases-3蛋白表达水平高于舌癌Tca8113细胞组,TPD52 mRNA低于Tca8113细胞组,差异有统计学意义(P0.01),随着雷公藤红素剂量的增加,雷公藤红素各剂量组miR-224 mRNA表达水平、Bax和Caspases-3蛋白表达水平逐渐升高,TPD52 mRNA表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P0.01)。结论雷公藤红素可诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡;其机制可能与雷公藤红素促进miR-224表达,抑制TPD52的表达进而促进Bax和Caspases-3高表达有关。     

蒲公英根水提物通过磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B途径调控人舌癌细胞Tca-8113凋亡 迁移

目的制备蒲公英根水提物,研究其对人舌癌细胞Tca-8113凋亡、迁移的影响。方法水溶法制备蒲公英根水提物,并按一定浓度加至正常培养的人舌癌细胞Tca-8113中。流式细胞术用于分析蒲公英根水提物对Tca-8113细胞凋亡的作用,Transwell实验检测其对癌细胞迁移的影响,蛋白质印迹法检测各组癌细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K/Akt)途径中关键分子p-Akt、Bcl-2等蛋白的表达差异。结果 10 g/L,20 g/L的蒲公英根水提物明显抑制癌细胞的增殖,进一步证实蒲公英根水提物可诱导Tca-8113细胞凋亡;蒲公英根水提物降低p-Akt、Bcl-2的蛋白表达并呈浓度依赖性。结论蒲公英根水提物通过降低p-Akt、Bcl-2表达促进人舌癌细胞Tca-8113细胞凋亡,并降低其迁移能力。     

姜黄素对Tca8113细胞生长、增殖抑制作用的实验研究

目的观察中药有效成分姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株生长、增殖的抑制作用。方法将Tca8113细胞培养于普通的RPM I-1640培养基中,实验组用含有不同浓度姜黄素(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)的培养基进行培养,采用倒置显微镜观察细胞形态的变化,MTT法检测其生长抑制效应。结果随着姜黄素浓度升高与作用时间的增加,其对细胞的生长、增殖抑制作用明显增强,在倒置显微镜下观察可见细胞生长增殖变慢、细胞形态变圆、变小,脱壁细胞越来越多,漂浮在培养基中。MTT法检测结果显示姜黄素对细胞抑制效应有浓度、时间依赖性。结论姜黄素能明显抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制效应与姜黄素浓度、作用时间有依赖关系。     

奥沙利铂诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的研究

目的探讨铂类抗癌药——奥沙利铂体外对诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法应用MTT法检测奥沙利铂不同浓度(32、64、128、256μmol/L)对Tca8113细胞增殖的影响,并确定半数抑制浓度(IC50);应用免疫细胞化学法观察奥沙利铂作用于Tca8113细胞过程中凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果一定浓度的奥沙利铂作用于Tca8113细胞24、48及72小时,可见survivin表达有不同程度增强。结论奥沙利铂体外能诱导人舌鳞癌细胞株Tca8113凋亡抑制基因survivin表达上调,可能是奥沙利铂化疗耐药性的机制之一。     

补骨脂乙素对Tca8113细胞迁移及侵袭的抑制作用及其机制

目的探究补骨脂乙素(Isobavachalcone,IBC)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞迁移和侵袭的抑制作用及其可能的作用机制。方法将不同浓度的IBC作用于体外培养的Tca8113细胞,通过MTT法检测细胞增殖抑制率;划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果 IBC以浓度和时间依赖的方式有效抑制Tca8113细胞增殖。IBC降低Tca8113细胞迁移及侵袭能力。Western blot法显示IBC能够以浓度相关性下调p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,而Akt蛋白水平不受IBC处理剂量的影响。结论 IBC可抑制Tca8113细胞的增殖,迁移和侵袭,其作用与下调MMP-2和MMP-9蛋白及抑制其上游Akt的磷酸化有关。     

MDRI的siRNA干扰口腔Tca8ll3/DDP细胞表达的研究

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)对口腔鳞癌多药耐药基因mdr1(MDRI)及其表达产物P-糖蛋白(permeability-glyco-protein,P-gp)的干扰作用。方法体外构建针对MDR1的小干扰RNA,将其转染至人舌癌耐药细胞系Tca8113/DDP,采用RT-PCR法检测转染前后MDR1 m RNA的表达;采用免疫细胞化学技术比较转染前后P-gp的表达;采用MTT法检测转染前后肿瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。结果 Tca8113/DDP细胞经MDR1-si RNA转染后48 h的转染率达最高,为71.3%;转染后mdr1 m RNA表达较对照组显著降低,降低率为68.32%,转染48 h后P-gp的表达较对照组明显降低;si RNA可显著提高Tca8113/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转其耐药性,耐药倍数为2.05。结论 si RNA可以明显干扰口腔鳞癌MDR1及相应蛋白P-gp的表达。     

PI3K／AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tea8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K／AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tea8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002（5μmol／L,10μmol／L,20μmol／L,40μmol／L）处理Tea8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间（24h、48h、72h、96h）下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tea8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tea8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大（P〈0．01）。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

Over-expression of Gadd45a enhances radiotherapy efficacy in human Tca8113 cell line

Aim:

To investigate the effect of the growth arrest- and DNA damage-inducible Gadd45a gene on the radiosensitivity of human tongue squamous cell carcinoma cell line to ionizing radiation (IR).

Methods:

Short interfering ribonucleic acid (si-RNA) targeting Gadd45a or an irrelevant mRNA (nonsense si-RNA) was chemically synthesized. The constructed si-RNAs were transfected into Tca8113 cells and Gadd45a expression was determined using quantitative real-time PCR and Western-blot. After 24-h exposure to IR at a dose rate of 4 Gy/min, apoptosis of Tca8113 cells was detected using flow cytometry, and radiosensitivity was measured using MTT assays.

Results:

IR apparently increased the expression of Gadd45a at mRNA and protein levels in Tca8113 cells. The effect was efficiently inhibited by transfection with Gadd45a si-RNA (P<0.01). Furthermore, silencing Gadd45a gene significantly increased cell viability and decreased the percentage of apoptotic cells during irradiation, which indicated that IR-induced Gadd45a over-expression could increase the radiosensitivity of Tca8113 cells.

Conclusion:

These results indicated that targeting Gadd45a may have important therapeutic implications in sensitizing Tca8113 cells to IR.     

NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2蛋白表达的影响

目的探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法将舌鳞癌细胞株Tca8113分为对照组(A组)和NS-398 20、40、80μmol/L加药组(分别为B1、B2、B3组);荧光免疫组化和Western blot法检测各组MMP-2蛋白表达情况。结果 B1、B2、B3组MMP-2蛋白表达呈递减趋势,且均较A组明显降低(免疫组化法:366073.100±116272.561、241739.000±12320.270、120672.100±5976.391vs.591518.000±17356.450;Western blot法:0.620±0.084、0.425±0.058、0.172±0.025vs.0.950±0.124)(P<0.05)。结论 NS-398在Tca8113细胞中能抑制MMP-2蛋白表达,并且MMP-2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少。     

Inhibitory effect of isobavachalcone on migration and invasion of Tca8113 cells and its mechanism北大核心CSCD

Aim To explore the inhibitory effect of isobavachalcone ( IBC) on migration and invasion of tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cells and its possible mechanism. Methods Tca8113 cells were treated in different concentrations of IBC in vitro. Cell proliferation was detected by MTT; Wound healing assay and Transwell chamber assay were used to detect the ability of cell migration and invasion; Western blot was applied to detect the expression of Akt, p-Akt, MMP-2 and MMP-9 proteins. Results IBC could inhibit the proliferation of Tca8113 cells in a concentra-tion-and time-dependent manner. IBC can reduce cell migration and invasion. Western blot showed that IBC could an decrease the expression of p-Akt, MMP-2 and MMP-9 proteins in a concentration- dependent manner. However, the level of Akt was not affected by the concentration of IBC treatment. Conclusion IBC could inhibit the proliferation, migration and invasion in Tca8113 cells and its mechanism may be associated with the down-regulation of MMP-2 and MMP-9 proteins and the inhibition of phosphorylation of upstream Akt.     

普洱茶水提取物体外抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖并诱导凋亡的研究

 目的   研究普洱茶水提取物（Pu-erh tea extract,PTE）对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用及其作用机制。 方法   采用四甲基偶氮唑盐比色法检测PTE对Tca8113细胞和牙周膜成纤维细胞生长和增殖的抑制作用,用倒置相差显微镜观察PTE作用后细胞的形态变化,利用流式细胞术分析PTE对舌鳞癌细胞的作用机制。实验数据采用GraphPad Prism 5.01软件进行统计分析,应用单因素方差分析对数据进行比较。 结果   在PTE作用时间相同的情况下,随着其浓度的增加,Tca8113细胞存活率明显降低,当PTE浓度为125.00 μg/ml时,细胞存活率下降最为显著（F=1 283,P<0.000 1）。而当PTE浓度相同的情况下,随着作用时间的增加,Tca8113细胞存活率也随之降低,并且在作用12 h时差异最显著（F=111.6,P<0.000 1）。PTE对正常牙周膜成纤维细胞无明显抑制作用。显微镜观察发现,舌鳞癌细胞经PTE处理后出现皱缩、变圆、脱离贴壁状态;而牙周膜成纤维细胞形态无变化。流式细胞术检测发现,舌鳞癌细胞经浓度为125.00 μg/ml的PTE作用12 h后,细胞凋亡率为27.65%±0.47%。 结论   PTE能通过诱导细胞凋亡抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖,提示其具有防治舌鳞癌的作用。     

苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。     

manumycin诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的作用及机制

目的研究manumycin抑制Tca8113细胞的生长和诱导细胞凋亡的作用及机制。方法细胞毒作用以MTT法测定;凋亡细胞形态以Hoechst33258染色后荧光显微镜观察;凋亡率的检测以AnnexinV染色,流式细胞仪检测;细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(ΔΨm)分别用DCFH-DA和DiOC6荧光探针标记,流式细胞仪检测;蛋白质定量检测以Westernblot法。结果manumycin浓度依赖性抑制Tca8113细胞的生长,IC50为(11.33±0.63)μmol.L-1;manumycin可浓度和时间依赖性诱导Tca8113细胞的凋亡,过氧化物清除剂N-乙酰半胱氨酸能清除manumycin介导的细胞活性氧的增加,抑制线粒体跨膜电位降低及细胞凋亡。结论manumycin体外显著抑制舌鳞癌Tca8113的生长及诱导细胞凋亡,其机制可能通过激活线粒体依赖性凋亡通路有关。     

5-氨基酮戊酸对人舌麟癌Tea8113细胞株体外光动力杀伤作用的基础研究

目的初步研究体外5-氨基酮戊酸介导的光动力疗法对人舌鳞癌Tea8113细胞的杀伤效应。方法体外培养Tca8113细胞,以5-氨基酮戊酸为光敏剂,半导体激光治疗仪给予光动力疗法,采用MTr法检测光敏剂不同孵育时间、不同光敏剂浓度对Tea8113细胞抑制率的影响。结果5-AIA—PDT作用后,Tea8113细胞生长受到抑制,孵育时间和浓度效应关系显著（P〈0．05）。药物最佳作用浓度为1mmoL／l,最佳孵育时间为6h。结论5-氨基酮戊酸一光动力疗法能有效杀伤Tea8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度是影响疗效的重要因素。