姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖抑制机制的研究

目的 探讨姜黄素(curcumin)对人舌癌Tca8113细胞株体外增殖及凋亡的调控作用.方法 选用人舌鳞癌Tca8113细胞系进行体外培养,以5-40μmol/L的姜黄素分别处理Tca8113细胞24～72h后,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组化法检测细胞内核增殖抗原ki-67、癌基因蛋白p-21、细胞凋亡相关基因蛋白Bax表达水平.结果 curcumin对Tca8113细胞增殖有抑制作用,并随药物浓度升高和时间延长而增强,倒置显微镜观察可见细胞发生凋亡形态学改变的程度和浓度与时间呈正相关,免疫组织化学检测到核增殖抗原ki-67、p-21表达均下调,Bax表达增强.结论 姜黄素对Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用,并与浓度、时间有量效关系.通过上调凋亡基因蛋白Bax,下调ki-67、p-21蛋白的表达,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一.     

苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

熊果酸通过下调环氧化酶2表达调控舌鳞癌细胞增殖与凋亡

目的 研究熊果酸(UA)对舌鳞癌细胞增殖与凋亡的作用及其可能机制.方法 人舌鳞癌细胞Tca8113分别加入UA 0、10、20、40 μmol/L,培养12-72 h,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot法检测药物作用后细胞中环氧化酶2(COX-2)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白表达.结果 UA呈剂量依赖性地抑制舌鳞癌细胞Tca8113增殖,诱导舌鳞癌细胞凋亡,下调Tca8113细胞中COX-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比值及活化的Caspase-3蛋白表达.结论 UA可能通过下调COX-2的表达抑制舌鳞癌细胞增殖,诱导凋亡.     

普洱茶水提取物体外抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖并诱导凋亡的研究

 目的   研究普洱茶水提取物（Pu-erh tea extract,PTE）对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用及其作用机制。 方法   采用四甲基偶氮唑盐比色法检测PTE对Tca8113细胞和牙周膜成纤维细胞生长和增殖的抑制作用,用倒置相差显微镜观察PTE作用后细胞的形态变化,利用流式细胞术分析PTE对舌鳞癌细胞的作用机制。实验数据采用GraphPad Prism 5.01软件进行统计分析,应用单因素方差分析对数据进行比较。 结果   在PTE作用时间相同的情况下,随着其浓度的增加,Tca8113细胞存活率明显降低,当PTE浓度为125.00 μg/ml时,细胞存活率下降最为显著（F=1 283,P<0.000 1）。而当PTE浓度相同的情况下,随着作用时间的增加,Tca8113细胞存活率也随之降低,并且在作用12 h时差异最显著（F=111.6,P<0.000 1）。PTE对正常牙周膜成纤维细胞无明显抑制作用。显微镜观察发现,舌鳞癌细胞经PTE处理后出现皱缩、变圆、脱离贴壁状态;而牙周膜成纤维细胞形态无变化。流式细胞术检测发现,舌鳞癌细胞经浓度为125.00 μg/ml的PTE作用12 h后,细胞凋亡率为27.65%±0.47%。 结论   PTE能通过诱导细胞凋亡抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖,提示其具有防治舌鳞癌的作用。     

NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2蛋白表达的影响

目的探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法将舌鳞癌细胞株Tca8113分为对照组(A组)和NS-398 20、40、80μmol/L加药组(分别为B1、B2、B3组);荧光免疫组化和Western blot法检测各组MMP-2蛋白表达情况。结果 B1、B2、B3组MMP-2蛋白表达呈递减趋势,且均较A组明显降低(免疫组化法:366073.100±116272.561、241739.000±12320.270、120672.100±5976.391vs.591518.000±17356.450;Western blot法:0.620±0.084、0.425±0.058、0.172±0.025vs.0.950±0.124)(P<0.05)。结论 NS-398在Tca8113细胞中能抑制MMP-2蛋白表达,并且MMP-2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少。     

Effect of NS398 on expression of MMP-2 protein in tongue squamous carcinoma

目的 探讨环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对舌鳞癌基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响.方法 将舌鳞癌细胞株Tca8113分为对照组(A组)和NS-398 20、40、80 μmol/L加药组(分别为B1、B2、B3组);荧光免疫组化和Western blot法检测各组MMP-2蛋白表达情况.结果 B1、B2、B3组MMP-2蛋白表达呈递减趋势,且均较A组明显降低(免疫组化法:366073.100±116272.561、241739.000±12320.270、120672.100±5976.391 vs.591518.000±17356.450;Western blot法:0.620±0.084、0.425±0.058、0.172±0.025 vs.0.950±0.124)(P＜0.05).结论 NS-398在Tca8113细胞中能抑制MMP-2蛋白表达,并且MMP-2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少.     

PI3K／AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tea8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K／AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tea8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002（5μmol／L,10μmol／L,20μmol／L,40μmol／L）处理Tea8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间（24h、48h、72h、96h）下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tea8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tea8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大（P〈0．01）。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002对Tca8113细胞增殖活性的影响

目的探讨PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002对人舌鳞癌Tca8113细胞株增殖活性的影响。方法用不同药物浓度的LY294002(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)处理Tca8113细胞,MTT法检测对照组和实验组在不同的作用时间(24h、48h、72h、96h)下,Tca8113细胞的OD值,计算增殖抑制率,绘制Tca8113细胞浓度-抑制率曲线及时间-抑制率曲线。结果随药物浓度的增加及作用时间的延长,Tca8113细胞的OD值逐渐减小,增殖抑制率逐渐增大(P<0.01)。结论LY294002对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与LY294002的药物浓度及作用时间呈正相关。     

香芹酚诱导非小细胞肺癌1299细胞凋亡的实验研究

摘要： 目的 探讨香芹酚 （CV） 对人非小细胞肺癌 （NSCLC） NCI-H1299 细胞的增殖、 凋亡及侵袭的作用及可能机制。方法 以不同浓度的 CV （20、 40、 60、 80 μmol/L） 处理 NCI-H1299 细胞, 以未经 CV 处理的细胞为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝 （MTT） 比色法检测细胞存活率; 流式细胞术检测各组细胞凋亡率; Transwell 法检测 40 μmol/L CV 处理组和对照组细胞侵袭能力; 实时荧光定量 PCR 及 Western blot 检测 40 μmol/L CV 处理组和对照组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （caspase） -9、 基质金属蛋白酶 （MMP） -9、 TIMP-1 的 mRNA 及蛋白水平的表达变化。结果 与对照组比较, CV 各处理组 NCI-H1299 细胞存活率均明显降低, 而凋亡率增加 （P＜0.05）, 但抑制效应均不呈浓度依赖性（P＞0.05）。CV 处理组侵袭细胞数 （40.67±3.63） 个明显低于对照组 （76.00±5.78） 个 （P＜0.01）。CV 处理组较对照组 caspase-9、 TIMP-1 的 mRNA 和蛋白表达水平均增高, MMP-9 的 mRNA 和蛋白表达水平均降低 （P＜0.01）。结论 CV 可诱导人 NSCLC NCI-H1299 细胞凋亡, 抑制其侵袭, 作用机制可能与 caspase-9 的活性增加及 MMP-9 的下调有关。     

原花青素提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制研究

目的 探讨原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制.方法 2019年3月至2020年2月,将对数期生长的人舌癌Tca8113细胞分为对照组(Tca CON),Tca8113细胞加10 mg/L GSP组(Tca GSP-10 mg/L)、Tca8113...     

Over-expression of Gadd45a enhances radiotherapy efficacy in human Tca8113 cell line

Aim:

To investigate the effect of the growth arrest- and DNA damage-inducible Gadd45a gene on the radiosensitivity of human tongue squamous cell carcinoma cell line to ionizing radiation (IR).

Methods:

Short interfering ribonucleic acid (si-RNA) targeting Gadd45a or an irrelevant mRNA (nonsense si-RNA) was chemically synthesized. The constructed si-RNAs were transfected into Tca8113 cells and Gadd45a expression was determined using quantitative real-time PCR and Western-blot. After 24-h exposure to IR at a dose rate of 4 Gy/min, apoptosis of Tca8113 cells was detected using flow cytometry, and radiosensitivity was measured using MTT assays.

Results:

IR apparently increased the expression of Gadd45a at mRNA and protein levels in Tca8113 cells. The effect was efficiently inhibited by transfection with Gadd45a si-RNA (P<0.01). Furthermore, silencing Gadd45a gene significantly increased cell viability and decreased the percentage of apoptotic cells during irradiation, which indicated that IR-induced Gadd45a over-expression could increase the radiosensitivity of Tca8113 cells.

Conclusion:

These results indicated that targeting Gadd45a may have important therapeutic implications in sensitizing Tca8113 cells to IR.     

5-氨基酮戊酸对人舌麟癌Tea8113细胞株体外光动力杀伤作用的基础研究

目的初步研究体外5-氨基酮戊酸介导的光动力疗法对人舌鳞癌Tea8113细胞的杀伤效应。方法体外培养Tca8113细胞,以5-氨基酮戊酸为光敏剂,半导体激光治疗仪给予光动力疗法,采用MTr法检测光敏剂不同孵育时间、不同光敏剂浓度对Tea8113细胞抑制率的影响。结果5-AIA—PDT作用后,Tea8113细胞生长受到抑制,孵育时间和浓度效应关系显著（P〈0．05）。药物最佳作用浓度为1mmoL／l,最佳孵育时间为6h。结论5-氨基酮戊酸一光动力疗法能有效杀伤Tea8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度是影响疗效的重要因素。     

Inhibitory effect of isobavachalcone on migration and invasion of Tca8113 cells and its mechanism北大核心CSCD

Aim To explore the inhibitory effect of isobavachalcone ( IBC) on migration and invasion of tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cells and its possible mechanism. Methods Tca8113 cells were treated in different concentrations of IBC in vitro. Cell proliferation was detected by MTT; Wound healing assay and Transwell chamber assay were used to detect the ability of cell migration and invasion; Western blot was applied to detect the expression of Akt, p-Akt, MMP-2 and MMP-9 proteins. Results IBC could inhibit the proliferation of Tca8113 cells in a concentra-tion-and time-dependent manner. IBC can reduce cell migration and invasion. Western blot showed that IBC could an decrease the expression of p-Akt, MMP-2 and MMP-9 proteins in a concentration- dependent manner. However, the level of Akt was not affected by the concentration of IBC treatment. Conclusion IBC could inhibit the proliferation, migration and invasion in Tca8113 cells and its mechanism may be associated with the down-regulation of MMP-2 and MMP-9 proteins and the inhibition of phosphorylation of upstream Akt.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.