冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和功能变化

目的:观察冠心病患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)数量和功能的改变.方法:选择冠心病患者和非冠心病患者各20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(fibronectin)包被培养板,培养7d后贴壁细胞进行细胞化学分析.激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC.采用MTT比色法、改良的Boyden 小室和粘附能力测定实验,观察EPC的增殖能力和迁移能力及粘附能力.结果:冠心病患者外周血EPC数量明显减少(31.8±7.7 vs 59.5±10.6 EPCs/×200视野,P<0.05),且冠心病患者外周血EPC的粘附能力和迁移能力及增殖能力也明显受损.结论:冠心病患者外周血内皮祖细胞数量减少、功能减退.     

冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞功能的改变

目的:观察冠状动脉慢血流患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的改变。方法:选择30例冠状动脉造影证实为慢血流的患者为CSF组,冠脉造影血流正常的患者30例为NCF组。以校正TIMI帧数>27,诊断为冠状动脉慢血流。采取外周血分离单个核细胞体外诱导培养1周,在显微镜下计数,并观察EPCs增殖能力、迁移能力、黏附能力。结果:CSF组外周血EPCs数量及增殖、迁移、黏附能力均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSF患者外周血EPCs功能降低可能参与CSF现象发生的病理生理过程中。     

老年性耳聋患者内皮祖细胞功能变化

目的探讨老年性耳聋患者外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的变化。方法分离老年性耳聋患者(观察组)和健康老年人(对照组)外周血中单个核细胞,诱导其分化为EPCs,检测2组培养第7天的EPCs集落数目和细胞计数、黏附、增殖和迁移能力并进行比较。结果观察组EPCs集落数目(1.40±0.37)个少于对照组(2.88±0.48)个,差别有统计学意义(t=7.734,P<0.01)。观察组EPCs细胞计数(54.32±9.24)个少于对照组(67.64±8.39)个,差别有统计学意义(t=3.376,P<0.01)。与对照组相比,观察组黏附细胞数明显减少(P<0.05);EPCs增殖能力和迁移能力下降,差别均有统计学意义(P<0.01)。结论 EPCs功能下降可能为老年性耳聋的发病机制之一。     

系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的研究

目的：测定系统性硬皮病患者外周血中的内皮祖细胞（endothelial progenitors cells,EPCs）数量和增殖、迁移、黏附功能,探讨EPCs在其发病中的作用。方法：系统性硬皮病患者和健康者各20例。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并培养,流式细胞仪检测CD133^＋、CD34^＋或CD133^＋、VEGFR2^＋双荧光标记的EPCs数。MTT比色法、Millicell小室和黏附能力测定实验分别检测EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果：系统性硬皮病患者外周血EPCs数为（0．10±0．09）％,健康对照组为（0．49±0．09）％,P〈0．01,系统性硬皮病患者外周血EPCs数较健康者减少。实验组外周血EPCs增殖、迁移和黏附能力分别为（13．01±4．33）％、（7．20±3．67）个／视野和（15．20±4．40）个／视野,健康对照组分别为（23．28±4．34）％、（14．15±2．98）个／视野和（24．80±3．58）个／视野,两组比较,P值均〈0．01,实验组EPCs增殖、迁移和黏附能力均较对照组有所下降。结论：系统性硬皮病患者外周血EPCs数量减少,增殖、迁移和黏附功能降低,可能参与了系统性硬皮病的发病。     

COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附及血管形成功能研究

目的：观察慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附及小管形成等功能。方法：体外培养分离COPD患者及对照组外周血中EPCs,采用MTT测定细胞不同时间段的OD值,观察EPCs增殖情况。应用Transwell测定细胞对基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的迁移能力。通过对细胞HUVEC的黏附及late-EPCs小管形成实验判断COPD患者外周血中EPCs对血管内皮的修复能力,并用NOS/SCID下肢股动脉内皮损伤模型观察患者EPCs修复功能。结果：COPD患者的EPCs和对照组单个集落细胞数量分别是22.0±7.0、62.0±12.9（100倍,10个随机视野）,两者存在明显差异（P〈0.001）。细胞迁移实验中发现,COPD患者组early-EPCs对SDF-1迁移细胞数量明显少于对照组,两组迁移的细胞数量分别是0.425×104、0.775×104（P=0.039）,通过流式分析发现COPD患者组early-EPCs表达C-X-C家族趋化因子受体4（CXCR4）数量较对照组少,两者分别是（55.1±9.9）%、（91.5±6.7）%。Late-EPCs对HUVECs形成小管黏附实验中,两者有明显差异（P〈0.001）,分别是26.4±8.1、35.2±7.3/×10（10随机视野）。小管成形实验中,COPD患者的late-EPCs不能形成完整的小管;动物在体实验中发现,COPD患者组late-EPCs在受损血管处黏附较对照组少。结论：COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附等功能降低,血管形成功能异常。     

大鼠脾脏与骨髓源内皮祖细胞生物学特性的对比研究

目的 体外分离培养Sprague Dawley(SD)大鼠脾脏和骨髓来源内皮祖细胞(EPCs),并比较其生物学特性.方法 采用密度梯度离心法,从健康4周龄SD大鼠脾脏和骨髓中分离出单个核细胞,体外诱导分化为EPCs,对比分析两种EPCs的形态、增殖、迁移、黏附和一氧化氮(NO)分泌能力.结果 从脾脏和骨髓均可分离获得大量单个核细胞,但骨髓组织可获得的细胞数量更多,两种来源的细胞在体外诱导培养均可形成类似于血岛样集落,绝大部分细胞吞噬DiI荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白和绿色荧光标记的荆豆凝集素双染为阳性;骨髓来源的EPCs在细胞增殖、迁移、黏附扣NO分泌能力等方面均显著高于脾脏来源的EPCs.结论 骨髓较脾脏更适宜作为体外培养EPCs的组织来源.     

辛伐他汀对细菌脂多糖共孵育内皮祖细胞功能的影响

 目的　观察不同浓度辛伐他汀对与LPS共孵育人内皮祖细胞( endothelial progenitor cells, EPCs) 增殖、迁移、黏附功能的影响。 方法　采用密度梯度离心法从成人外周静脉血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板上,培养7天后,收集贴壁细胞,通过激光共聚焦显微镜鉴定为正在分化EPCs。EPCs传代培养3天后,消化搜集贴壁细胞,调节细胞浓度至105/mL ,将等量EPCs接种到96孔培养板上,随机分为5组（1）空白对照组：仅使用EGM-2MV标准液培养48小时。（2）LPS对照组：使用EGM-2MV标准液与LPS液（100 ng/mL）共同培养48小时。（3）LPS干预后辛伐他汀干预3组：使用LPS液培养24小时后,予细胞换液,分别加入0.1umol/L、1.0umol/L、10.0umol/L不同浓度辛伐他汀液培养24小时。应用MTT 比色法、改良的Boyden 小室观察其增殖、迁移、黏附功能。结果　人EPCs与LPS共孵育后其增殖显著降低（p=0.009）,黏附、迁移能力改变不明显（p=0.279、p=0.656）。加入不同浓度辛伐他汀后EPCs的增殖、迁移和黏附能力不同程度改善,随辛伐他汀浓度增加,其影响增强,浓度在10.0μmol/L时对EPCs的增殖、迁移、黏附功能影响最大,EPCs增殖、黏附、迁移功能较空白对照组均有改善,其中黏附和迁移功能显著改善（p=0.039,p=0.000）。 结论 EPCs与LPS共孵育其增殖功能显著降低,黏附和迁移能力有所下降。辛伐他汀能使EPCs与LPS共孵育降低的功能改善,随辛伐他汀浓度增加,改善功能增强。     

高敏C反应蛋白对骨髓内皮祖细胞的黏附和增殖抑制作用

目的 观察体外培养的骨髓内皮祖细胞(EPCs)在C反应蛋白作用后功能的改变,探讨C反应蛋白影响EPCs修复损伤血管内膜的可能机制.方法 使用密度梯度离心法从骨髓获取单个核细胞并进行体外培养.对贴壁细胞进行细胞化学分析,以激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记的荆豆凝血素I(FITC-UEA-I)和DiI-标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染色阳性细胞为正在分化的EPCs.加入不同浓度C反应蛋白,测定C反应蛋白作用后不同时间EPCs迁移、黏附、增殖能力.结果 C反应蛋白作用后骨髓EPCs迁移、黏附和增殖能力明显减退.结论 C反应蛋白可使骨髓EPCs迁移、黏附、增殖功能受损,且这种变化与C反应蛋白浓度与作用时间呈正相关.     

丹红注射液对血脂异常患者内皮祖细胞功能和数量的影响

目的：：观察丹红注射液对血脂异常患者内皮组细胞(EPCs)功能和数量的影响。方法：160例血脂异常患者随机分为治疗组80例和对照组80例,对照组采取常规治疗,治疗组在对照组的基础上加用丹红注射液,疗程为10d。疗程结束后取外周血EPCs进行培养,采用流式细胞术、倒置显微镜、MTT法和Boyden小室等鉴定EPCs,并观察EPCs的黏附能力、增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和数量。结果：丹红注射液能显著提高血脂异常患者外周全血EPCs的黏附能力、增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和数量(P＜0.01,P＜0.05)。结论：丹红注射液可能通过改善血脂异常患者EPCs的功能保护心脑血管。     

冠心病患者循环内皮祖细胞与基质细胞衍生因子-1α的变化

目的探讨循环内皮祖细胞(EPCs)与血浆基质细胞衍生因子-1α(SPF-1α)在冠心病中的作用及其临床应用价值。方法将44例患者分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=12)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=14)、急性心肌梗死(AMI)组(n=11)及对照组(n=7)。采集患者外周血进行EPCs的分离培养,激光聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPCs的数量,测定EPCs的迁移和黏附能力。用酶联免疫吸附法检测各组血浆SDF-1α水平,比较其与循环内皮祖细胞的数量、迁移和黏附能力有无相关性。结果AMI组EPCs集落形成数是对照组的2.7倍,其迁移能力较其他3组升高(P<0.01),但其黏附能力与UAP组相比差异无统计学意义(P>0.05);UAP组患者EPCs数量及迁移能力较SAP组和对照组升高(P<0.01);SAP组患者EPCs数量及迁移、黏附能力均比对照组减低(P<0.05)。与对照组相比,UAP和AMI组患者血浆SDF-1α水平明显降低(P<0.01)。SDF-1α浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈负相关,与循环EPCs黏附能力无相关性。结论AMI(发病7d内)和UAP可引起循环EPCs数量增多,迁移和黏附能力增强,这种变化可能与冠状动脉粥样斑块不稳定、消耗循环SDF-1α有关。     

雌激素受体激动剂对人脐血内皮祖细胞增殖和迁移的影响

目的:观察选择性雌激素受体(ER)激动剂PPT(α亚型激动剂)和DPN(β亚型激动剂)对人脐带血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells EPCs)增殖和迁移的影响,并与17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)的作用进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离获得脐带血单个核细胞,硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)双染及CD133免疫荧光鉴定EPCs。培养的EPCs分别加入不同浓度的E2、PPT和DPN(分别为1×10-10mol/L、1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L)进行细胞增殖实验分析(WST)、显微镜下EPCs计数及Transwell技术测定对EPCs迁移的影响。结果:E2及PPT呈浓度依赖性促进EPCs的增殖和迁移,PPT刺激作用等同于E2,DPN无刺激作用。结论:雌激素α亚型激动剂PPT明显刺激内皮祖细胞的增殖和迁移,其作用与17β-雌二醇相同。     

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞体外增殖的影响

目的:观察黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)对2型糖尿病(T2DM)患者内皮祖细胞(EPCs)体外增殖的影响.方法:密度梯度离心法获取T2DM患者外周血单个核细胞,在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养7 d后鉴定EPCs,MTT检测APS对T2DM患者EPCs增殖的影响.结果:T2DM外周...     

过表达Periostin蛋白对内皮前体细胞功能影响的实验研究

目的构建Periostin蛋白过表达慢病毒载体, 并检测其对内皮前体细胞(EPCs)功能的影响。方法从小鼠骨髓中获取EPCs, 并进行鉴定。采用Oligos设计获得目的基因, 构建慢病毒载体LV5/Periostin。慢病毒感染EPCs, 荧光显微镜下观察被感染细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况, Western blotting检测Periostin蛋白表达情况。CCK-8法和流式细胞计数检测被感染细胞的增殖和凋亡情况, 划痕法和Transwell小室法检测被感染细胞迁移和侵袭能力的改变情况。结果被重组慢病毒感染的EPCs明显表达GFP; 过表达慢病毒组细胞增殖活性较阴性对照组低, 而凋亡细胞较阴性对照组多(P < 0.05);过表达慢病毒组细胞的迁移率较空白对照组细胞高, 侵袭细胞数目较多(P < 0.05)。结论可以从小鼠骨髓中成功分离和培养EPCs, 过表达Periostin蛋白会降低EPCs体外增殖的活性, 促进其凋亡; 但会增加EPCs的体外迁移和侵袭能力。     

氯吡格雷对人早期内皮祖细胞黏附、迁移及增殖功能的影响

目的探讨氯吡格雷对人早期内皮祖细胞(EPCs)黏附、迁移及增殖功能的影响。方法体外培养人外周血早期EPCs并进行鉴定;将含不同浓度(1×10-3～200×10-3mmol.L-1)氯吡格雷的培养液与EPCs共培养24 h,检测黏附、迁移及增殖功能;应用含浓度为20×10-3mmol.L-1氯吡格雷的培养液与EPCs共培养0.5～72.0 h,检测EPCs上述功能。结果培养EPCs第4天,早期EPCs呈典型长梭形;培养EPCs第7天数目增多,可摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白以及FITC标记的荆豆凝集素。氯吡格雷可使细胞明显增多;不同浓度的氯吡格雷可改善其黏附(F=56.54,P=0.00)、迁移(F=60.23,P=0.00)和增殖(F=1.45,P=0.16)功能;氯吡格雷浓度为20×10-3mmol.L-1时,保护作用最强;当共培养不同时间后,其仍可改善EPCs黏附(F=127.03,P=0.00)、迁移(F=96.03,P=0.00)和增殖(F=10.46,P=0.00)功能;保护作用呈时间依赖性,但于24 h后达到平台期。结论氯吡格雷可改善人外周血早期EPCs的黏附、迁移及增殖功能,且具有浓度依赖性和时间依赖性。     

C反应蛋白对人外周血来源内皮祖细胞Notch信号通路表达影响的实验研究

目的观察C反应蛋白(cRP)对内皮祖细胞(EPC)中Notch信号通路表达的影响。方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞并培养,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染进行鉴定。取生长7～14 d EPC,分为对照组、10和20 mg/L CRP干预组,培养48 h后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力检测各组EPC增殖、迁移和粘附能力。采用RT-PCR检测不同浓度CRP对EPC中Notch信号通路mRNA的影响,Western blot检测各组Notch-1及其配体Jagged-1的蛋白基因表达。结果外周血分离获取的单个核细胞经体外培养后形成了典型的EPC集落,经荧光双染证实为EPC。CRP(10、20 mg/L)组EPC数量分别为(61±3)、(54±3)个,对照组EPC数量为(71±4)个。CRP各组EPC在490 nm吸光度值分别为0.287±0.046、0.211±0.042,对照组为0.386±0.044。与对照组相比,CRP各组EPC黏附数量和迁移数量均显著减少(P<0.05)。CRP处理48 h后EPC中Jagged-1和Notch-1 mRNA含量明显增加,其中10和20 mg/L组Jagged-1 mRNA分别升高了3.84和10.70倍,Notch-1 mRNA分别升高了2.97和3.58倍;差异均具有统计学意义(P<0.05)。10和20 mg/LCRP处理组Jagged-1和Notch-1蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论 CRP处理后EPC的Notch信号通路表达发生了显著的改变,提示该通路可能是CRP影响EPC生物学功能的机制之一。     

瑞舒伐他汀对晚期内皮祖细胞增生、迁移及凋亡的影响

目的观察不同浓度及不同时间的瑞舒伐他汀(rosuvastatin)对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增生(proliferation)、迁移(migration)和凋亡(apoptosis)的影响。方法采用密度梯度法从大鼠骨髓获取单个核细胞,培养28 d,通过FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色鉴定为正分化晚期EPCs。以不同浓度的瑞舒伐他汀(0.001、0.01、0.1、1.0、10、100μmol/L)和晚期EPCs共培养24 h,分别采用MTT比色法、Transwell小室及Tunel法检测其增生、迁移及凋亡功能;以浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀与晚期EPCs分别共培养1、3、6、12、24、48 h,应用同样方法检测其增生、迁移及凋亡功能。结果体外培养7 d时,细胞呈典型长梭形;28 d时,呈铺路石样,并可摄取FITC-UEA-I和DiI-acLDL。不同浓度的瑞舒伐他汀组与对照组相比均可明显地改善晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及凋亡(P<0.05)功能,且浓度为0.1μmol/L的瑞舒伐他汀改善细胞功能最强(P<0.05)。当瑞舒伐他汀浓度为0.1μmol/L、共培养不同时间后,与对照组相比可增强晚期EPCs的增生(P<0.05)、迁移(P<0.05)及抗凋亡(P<0.05)功能。结论瑞舒伐他汀能够提高晚期内皮祖细胞的增生、迁移功能,减少细胞的凋亡,且呈浓度及时间依赖性。     

中重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血内皮祖细胞数量和功能的变化

目的〖KG*2〗探讨中重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）患者外周血中内皮祖细胞数量和功能的变化。 〖HTH〗方法〖KG*2〗采用前瞻性研究方法,收集中重度OSAHS成人患者30例为OSAHS组,同时选择健康人30例为对照组,无菌空腹采集10 mL 新鲜静脉全血,采用淋巴分离液分离及密度梯度离心法提取单核细胞,以内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）培养基培养,使用荧光显微镜鉴定内皮祖细胞;评估2组人群内皮祖细胞数目、迁移能力、增殖能力、黏附能力。 〖HTH〗结果〖KG*2〗OSAHS组EPCs数量、吸光度值、迁移细胞数及黏附率显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 〖HTH〗结论〖KG*2〗和正常人群比较,中重度OSAHS患者外周血内皮祖细胞数目减少,增殖能力、迁移能力和黏附能力下降。     

ALT711干预对高龄大鼠供体内皮祖细胞的活化作用

目的 观察ALT711干预对大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)活性的影响,探讨ALT711影响年龄导致的EPCs功能改变的可能机制及在细胞移植治疗损伤性血管疾病中的作用.方法 3～4月龄、10～12月龄、18～20月龄3个年龄段大鼠,每个年龄段20只随机分为ALT711喂养组和对照组(n=10),从骨髓获取单个核细胞并进行体外培养、分化.培养7 d后检测各组EPCs迁移、黏附、增殖能力.提取3个年龄段大鼠血清,分为ALT711干预组和对照组培养年轻大鼠骨髓EPCs,培养7d后检测培养的各组EPCs迁移、黏附、增殖能力.结果 随供体大鼠年龄增加,骨髓EPCs迁移[(30.5±2.0) vs (18.8±2.3) vs (12.9±1.6)EPCs/视野(×400),P<0.01]、黏附[(52.2±2.3) vs(31.5±3.3) vs (23.9±2.0)EPCs/视野(×400),P<0.01]、增殖[(0.522±0.031) vs (0.349±0.022) vs (0.272±0.020),P<0.01]能力降低,使用ALT711干预可恢复因供体年龄增加导致的骨髓活性减弱;随供体大鼠年龄增加其血清对培养的年轻供体骨髓EPCs迁移[(26.8±1.8) vs (20.2±1.5) vs (16.0±1.3)EPCs/视野(×400),P<0.01]、黏附[(45.6±2.1) vs (30.1±3.0) vs (22.8±1.6)EPCs/视野(×400),P<0.01]、增殖[(0.466±0.023) vs (0.360±0.019) vs(0.303±0.015),P<0.01]活性具有抑制作用,加入ALT711干预可以拮抗这种效应.结论 EPCs生物学功能随机体年龄增加而减退,ALT711干预可以改善供体增龄导致的EPCs活性减退,拮抗老年供体血清对EPCs活性的负性调节效应.     

Proliferation, migration and apoptosis activities of endothelial progenitor cells in acute coronary syndrome

Background There are numerous articles on the endothelial progenitor cells （EPCs） in different disease conditions. However, the functional properties of EPCs in acute coronary syndrome （ACS） are still uncertain. Here we aimed to study the number and functions of EPCs in ACS patients. Methods Patients were enrolled with admitted ACS （n=25） and another 25 gender-, age-, atherosclerotic risk factors-matched stable coronary artery disease （CAD） controls. EPCs were defined as CD34＋/CD133＋/VEGFR-2＋ and quantified by flow cytometry. Moreover, functional properties of EPCs including colony-forming unit （CFU）, proliferation, migration as well as apoptosis were evaluated and compared between the two groups. Plasma matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） was detected in all patients as well. Results The two groups had similar medication and clinical characteristics on admission. The EPCs in ACS patients were more than 2.6 times that in stable CAD subjects （15.6±2.7 vs. 6.0±0.8 /100 000 events, P 〈0.01）. CFU was not statistically different between the two groups （10.8±2.9 vs. 8.2±1.8, number/well, P 〉0.05）. Furthermore, EPCs isolated from ACS patients were significantly impaired in their proliferation （0.498±0.035 vs. 0.895±0.067, OD value, P〈0.01） and migration capacity （20.5±3.4 vs. 30.7±4.3, number/well, P 〈0.01） compared with controls. Moreover, the apoptosis cell in cultured EPCs was drastically increased in ACS group （（18.3±2.. 1 ）% vs. （7.8±0.4）%, P 〈0.01）. Conclusions Patients with ACS exhibited apparently increased circulating EPCs as well as cultured apoptosis percentage together with a remarkable impairment of proliferation and migration activities compared with stable CAD subjects.