肌球蛋白致自身免疫性心肌疾病的实验研究

目的　探索在没有病毒感染的情况下 ,自身免疫机制在心肌炎和心肌病发病中的作用。方法　 (1)猪心肌肌球蛋白致BALB/C鼠自身免疫性心肌疾病模型的复制 :实验组 (n =32 )于实验的第 0 ,7和 30天 3次注射肌球蛋白 ,对照组 (n =2 0 )与实验组同样的时间注射弗氏完全佐剂 ,于初次免疫后的第 15 ,2 1和 12 0天分别留取血清和心肌标本。 (2 )病毒性心肌炎模型的复制 :病毒接种组 (n =2 2 )给予 10 3 TCID50 / 0 1mlCVB3 溶液腹腔注射 ,对照组 (n =10 )给予Vero细胞冻融液 0 1ml腹腔注射 ,接种时间及采样时间同肌球蛋白免疫组。 (3)抗体检测 :ELISA法检测小鼠血清抗肌球蛋白抗体。结果　病理结果显示 ,肌球蛋白致心肌炎小鼠急性期 (15和 2 1d)以心肌纤维变性坏死和淋巴细胞浸润较明显 ,间质病变较轻 ,内膜和心瓣膜无明显改变 ;慢性期 (12 0d)仅见心肌纤维化 ,急慢性期均可检测到高滴度的抗肌球蛋白抗体 (P <0 0 0 1) ,对照组为正常心肌 ,抗体滴度低。病毒接种组慢性期亦显示成纤维细胞增生。结论　心肌肌球蛋白可以作为自身抗原刺激机体产生自身免疫反应 ,在没有病毒感染的情况下 ,单一的自身免疫机制即可导致心肌炎向心肌病的转化。     

肌球蛋白致自身免疫性心肌疾病的实验研揪

目的探索在没有病毒感染的情况下,自身免疫机制在心肌炎和心肌病发病中的作用.方法 (1) 猪心肌肌球蛋白致BALB/C鼠自身免疫性心肌疾病模型的复制实验组(n=32)于实验的第0,7和30天3次注射肌球蛋白,对照组(n=20)与实验组同样的时间注射弗氏完全佐剂,于初次免疫后的第15,21和120天分别留取血清和心肌标本.(2)病毒性心肌炎模型的复制病毒接种组(n=22)给予103 TCID50/0.1 ml CVB3溶液腹腔注射,对照组(n=10)给予Vero细胞冻融液0.1 ml腹腔注射,接种时间及采样时间同肌球蛋白免疫组.(3)抗体检测ELISA法检测小鼠血清抗肌球蛋白抗体.结果病理结果显示,肌球蛋白致心肌炎小鼠急性期(15和21 d)以心肌纤维变性坏死和淋巴细胞浸润较明显,间质病变较轻,内膜和心瓣膜无明显改变;慢性期(120d)仅见心肌纤维化, 急慢性期均可检测到高滴度的抗肌球蛋白抗体(P<0.001),对照组为正常心肌,抗体滴度低.病毒接种组慢性期亦显示成纤维细胞增生.结论心肌肌球蛋白可以作为自身抗原刺激机体产生自身免疫反应,在没有病毒感染的情况下,单一的自身免疫机制即可导致心肌炎向心肌病的转化.     

乙型肝炎病毒诱导小鼠抗β1-肾上腺素能受体抗体致心律失常作用的初步研究

最近我们发现 ,抗β1 肾上腺素能受体抗体 (以下简称抗 β1 受体抗体 )在肝炎病毒性心肌炎中检出率较高 ,且与临床表现严重程度具有相关性〔1〕。本文旨在用乙型肝炎病毒 (HBV)接种小鼠 ,探索HBV诱导抗β1 受体抗体对心肌的作用。1　材料与方法实验组 (n =30 ) :将HBV( 8.4× 1 0 7拷贝 /L)与等体积完全弗氏佐剂混匀成乳化剂 ,取混合液1 0 0 μl每只小鼠腹腔注射 ,初次接种后的第 1 4天、2 8天和 42天各重复 1次。对照组 (n =30 ) :用0 .85 %氯化钠溶液与等体积的完全弗氏佐剂混匀后按同样的方法假性免疫。于实验第 0、35天眼内眦静…     

抗L3T4单抗对线粒体腺苷酸转移酶多肽诱导小鼠心肌病的免疫治疗

目的 :探讨抗L3T4单克隆抗体对线粒体腺苷酸转移酶 (adeninenucleotidetranslocator ,ANT)多肽诱导的小鼠心肌病是否有治疗作用。方法 :15只雄性Balb/c小鼠分为 3组 :①免疫应答组 (n =5 ) :予ANT多肽免疫诱导心肌病的产生 ;②免疫治疗组 (n =5 ) :先予ANT多肽免疫 ,喂养 3个月后再给予抗L3T4单抗进行治疗 ;③对照组 (n =5 ) :以不含ANT合成肽的空白免疫液免疫小鼠。采用ELISA法检测血清抗ANT多肽抗体动态变化 ,实验结束时在光镜和电镜下观察小鼠心肌组织的病理改变 ,计算组织中的胶原纤维容积分数。实验期半年。结果 :免疫应答组小鼠体内均有ANT抗自身抗体的产生 ,且抗体的光密度值 (A )明显增高 ,与对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠经抗L3T4单抗治疗后自身抗体出现反应性下降 ,其A值与免疫应答组及对照组比较差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1) ;对照组抗体检测为阴性。病理结果显示 ,免疫应答组小鼠心肌组织出现弥漫性纤维化 ,心肌细胞线粒体和肌丝有明显损害 ,心肌胶原纤维容积分数明显高于对照组(P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠心肌组织的病理改变略轻于免疫应答组 ,心肌胶原纤维容积分数介于免疫应答组和对照组之间 ;对照组心肌组织基本正常。结论 :ANT多肽可诱导小鼠产生抗AN     

细菌脂多糖促进克氏锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎

目的观察细菌脂多糖（LPS）对克氏锥虫抗原诱导自身免疫性心肌炎的影响。方法克氏锥虫抗原辅以完全弗氏佐剂免疫A／J小鼠，LPS经腹腔接种方式给药，其后加强免疫2次，28d后，测定心肌肌球蛋白特异的迟发型超敏反应（DTH）及自身抗体，并取鼠心脏观察心肌炎症情况。结果LPS提高锥虫抗原诱导的心肌肌球蛋白特异性DTH及自身抗体。并且25μg LPS与锥虫抗原免疫的小鼠可见明显的心肌炎。结论LPS能够促进心肌肌球蛋白特异的自身免疫反应及锥虫抗原诱导的自身免疫性心肌炎。     

免疫抑制剂对小鼠肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体mRNA表达的影响

目的 探讨免疫抑制剂对小鼠肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体mRNA表达的影响.方法 30只昆明小鼠随机分为2组:正常对照组(6只)和免疫抑制组(24只,环磷酰胺150 mg/kg腹腔注射).免疫抑制组小鼠注射环磷酰胺后4 h、8 h、16 h及24 h,分别随机取6只进行支气管肺泡灌洗,收集肺泡巨噬细胞.正常对照组小鼠注射生理盐水24 h后处死,收集肺泡巨噬细胞.使用逆转录-聚合酶链反应检测小鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)、TLR4、树突状细胞相关C型凝集素1(Dectine-1)mRNA表达变化.结果 与正常对照组比较,腹腔注射环磷酰胺4 h后,TLR2 mRNA表达即出现显著下降(P＜0.01);在腹腔注射环磷酰胺8 h后TLR4 mRNA表达出现显著下降(P＜0.01);Dectine-1 mRNA在腹腔注射环磷酰胺后无明显变化.结论 免疫抑制剂环磷酰胺能够下调肺泡巨噬细胞抗曲霉感染相关受体TRL2和TLR4 mRNA的表达,对Dectine-1 mRNA的表达未见明显影响.     

金属硫蛋白表达对未成熟心肌间质保护作用的研究

目的 :探讨诱导金属硫蛋白 (MT)在未成熟心肌中的表达对缺血 再灌注未成熟心肌间质的影响。方法 :采用Langendorff离体灌注模型 ,分为 4组 :对照组 (C ,n =9) ,腹腔注射蒸馏水 0 3mL ,按注射后时间 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,灌注KH液 15min转为工作心 15min ,全心停灌注 4 5min ,恢复灌注 15min改为工作心 30min ;E1 2h组 (n =6 )、E2 4h 组 (n =6 )、E4 8h 组 (n =6 )各组分别按腹腔注射 3 6 %ZnSO4 (1 5mL kg)后 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,常规建立Langendorff灌注模型 ,方法同C组。以心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸 (HP)含量、内皮素 (ET)含量作为观察指标。结果 :腹腔注射ZnSO4 后 12hMT开始表达 ,2 4h达高峰 ,4 8h仍在高表达水平。MT含量在E2 4h、E4 8h组与C、E1 2h组比较明显增高 ;E2 4h、E4 8h组在心功能恢复方面均优于C组和E1 2h组 (P <0 0 5 ) ,在HP含量优于C组和E1 2h组 (P <0 0 1) ,在ET含量低于C组和E1 2h组 (P <0 0 1)。结论 :腹腔注射ZnSO4 可诱导心肌MT长时间表达 ,MT可减轻未成熟心肌间质的缺血 再灌注损伤。     

抗TNF-α中和抗体通过升高脂联素水平减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的:阐明心肌缺血/再灌注(MI/R)时,脂联素(APN)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系,以及使用中和抗体阻断TNF-α可否提高血浆APN,进而发挥心肌保护作用。方法: 96只成年雄性C57小鼠和36只ob/ob小鼠均采用30 min缺血/再灌注(I/R)建立MI/R模型。96只C57小鼠分为假手术组、手术+盐水对照组及手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=32);36只ob/ob小鼠分为ob/ob假手术组、ob/ob手术+盐水对照组及ob/ob手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=12)。假手术或缺血20 min后,腹腔注射给予单次抗TNF-α中和抗体或盐水干预。分别采用ELISA检测TNF-α与APN血浆水平;小鼠心脏超声评估心脏LVEF;伊文氏蓝/TTC染色检测心脏梗死面积;以及TUNEL/Caspase-3活性检测观察心肌细胞凋亡。结果: 血浆ELISA测定发现,MI/R后,小鼠血浆TNF-α水平在再灌后1 h即显著升高,后缓慢下降。注射抗TNF-α中和抗体可在再灌后1 h即中和TNF-α（P<0.01）,同时在再灌注3 h、8 h、1 d及3 d后4个时间点,较给予盐水对照显著升高血浆APN（P<0.01）。通过小鼠心脏超声、伊文氏蓝/TTC染色和TUNEL/Caspase-3活性检测发现,与给予盐水的对照相比,腹腔注射抗TNF-α中和抗体可提高小鼠的心肌功能（P<0.05）、减少梗死面积（P<0.01）及心肌细胞的凋亡（P<0.01）。而在ob/ob小鼠中,通过以同样的实验方法证实,单次注射抗TNF-α中和抗体已不能提高血浆APN的含量,其减轻心肌损伤的作用同样被显著削弱,但给予APN球状片段仍可发挥心肌保护作用。结论: 以抗TNF-α的中和抗体阻断TNF-α可逆转MI/R后血浆APN的降低并发挥心肌保护作用,提示抗TNF-α中和抗体发挥的心肌保护作用可能部分通过提高APN实现。     

诱导新生小鼠对Graves病免疫耐受的研究

目的 研究TSH受体(TSHR)289基因诱导Graves病新生免疫耐受的可行性,并初步探索其可能机制.方法 将出生0～24hBALB/c雌性小鼠分为腹腔注射组、肌肉注射组、造模组及正常对照组,腹腔注射组或肌肉注射组分别设低剂量、中剂量、高剂量耐受组及相应对照组,将腹腔注射、肌肉注射不同剂量耐受组及各自对照组给予1×106particles(低)、1×108particles(中)、1×1010particles(高)的Ad-TSHR289或Ad-lacz进行预处理6～7周后,除正常对照组肌肉注射Ad-lacz外,其余各组小鼠均给予Ad-TSHR289免疫,每3周1次,共3次,首次免疫后10d检测血清促甲状腺素受体抗体(TRAb),末次免疫后4周测血清TRAb、TT4、脾CD4+CD25+Foxp3/CD4+比例,并行甲状腺组织学检查.结果 首次注射后10d,腹腔注射及肌肉注射高剂量耐受组均未诱导出针对TSHR的抗体反应,而对照组TRAb滴度明显升高(P＜0.05).末次免疫后4周,腹腔及肌肉注射高剂量耐受组均只有1/10小鼠出现阳性的抗体反应,腹腔注射高剂量耐受组没有小鼠发生甲状腺功能亢进,而肌肉注射高剂耐受量组2/10小鼠出现轻微的TT4升高,其相应对照组却出现了强烈的抗体反应(P＜0.01),TT4水平明显升高(P＜0.05),所有TT4升高的小鼠均出现了甲状腺组织增生性改变.此外,腹腔注射及肌肉注射高剂量耐受组CD4+CD25+Foxp3/CD4+比例与对照组比较明显增高(P＜0.01)腹腔注射及肌肉注射其余组群,与其对照组和造模组比较Graves病发生率差异无统计学意义.结论 TSHR 289基因可以通过腺病毒为载体,腹腔和肌肉注射两种途径诱导新生小鼠成年后对Graves病免疫耐受,抑制Graves病的发生.而高剂量的抗原刺激容易导致耐受产生.CD4+CD25+Foxp3+T细胞在免疫耐受的诱导和维持中可能起重要作用.     

抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用

目的　研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法　实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果　尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论　NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 ,对血吸虫性肝纤维化有明显的抑制作用