黄枇烟吸入对肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其对HIF-1α、VEGF表达的影响

目的:观察黄枇烟吸入对肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其对去氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达及肿瘤微血管密度(MVD)的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,实验分为模型组、黄枇烟吸入低剂量组、高剂量组和顺铂组,每组10只。各组给药2周后,处死大鼠,取瘤称重,计算抑瘤率;免疫组化法检测瘤组织HIF-1α、VEGF的表达,光镜观察病记录MVD。结果:与模型组比较,黄枇烟吸入低剂量组、高剂量组和顺铂组均能够抑制肿瘤生长,而以化疗药顺铂组作用最强,黄枇烟吸入高、低剂量组次之。各给药组均能抑制肿瘤血管HIF-1α、VEGF因子的表达以及降低MVD计数,以顺铂组作用最明显,黄枇烟吸入高、低剂量组次之。结论:黄枇烟吸入可抑制肺癌小鼠肿瘤生长,其作用机制与下调HIF-1α、VEGF的表达及抑制肿瘤血管生成有关。     

吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠生长及HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的：探讨吴茱萸碱对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子（HIF-1α/VEGF）信号通路的影响。方法：通过皮下注射Lewis肺癌细胞建立荷瘤小鼠模型,建模后分为模型对照组、阳性对照组（顺铂干预）及吴茱萸碱低、高剂量组,共干预14 d。通过检测各组小鼠造模给药期间肿瘤大小,计算抑瘤率,评价吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。此外,运用定量PCR（qPCR）法检测吴茱萸碱干预14 d后各组小鼠肿瘤组织中HIF-1α及VEGF mRNA表达的影响,免疫组织化学染色评估肿瘤组织中HIF-1α、VEGF及血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）表达水平,计算肿瘤组织中微血管密度（MVD）。结果：吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有显著的抑制作用,阳性对照组及吴茱萸碱低、高剂量抑瘤率分别为53.13%、20.49%、38.54%;吴茱萸碱各给药剂量组可不同程度下调Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织HIF-1α及VEGF基因及蛋白表达（P<0.01）,减少肿瘤组织中MVD（P<0.01）。结论：吴茱萸碱可抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,其作用机制可能是通过减少肿瘤组织中HIF-1α及VEGF表达,抑制肿瘤中血管生成。     

芪玉三龙汤对肺肿瘤的抑制效应及对肺脏的影响

目的:研究芪玉三龙汤对荷肺癌小鼠的抑瘤效应及对小鼠肺脏的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、化疗组、芪玉三龙汤高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始芪玉三龙汤低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 m L顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平;免疫组化检测肿瘤组织VEGF蛋白表达,HE染色法观察小鼠肺脏的病理形态变化。结果:与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86%,联合组与化疗组抑瘤率相当;芪玉三龙汤能够明显降低肿瘤组织PI3K mRNA的转录水平和PI3K p85α、PI3K p110α蛋白水平,与顺铂联用有一定协同增效作用;并且能够降低VEGF阳性细胞率;光镜下观察肺脏示芪玉三龙汤高、中剂量组以及联合组小鼠肺组织内未见肿瘤转移灶。结论:芪玉三龙汤可温和抑制肺癌移植瘤生长,可能与降低PI3K mRNA转录水平、PI3K p85α、PI3K p110α蛋白表达有关,并可能通过降低VEGF表达减少肺脏的肿瘤转移。     

益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织Bcl-2、Bax、MMP-9表达的影响

目的探讨益肺散结方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将50只建模小鼠随机分为模型组、顺铂组及益肺散结方低、中、高剂量组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃,1次/d,连续21 d;益肺散结方低、中、高剂量组分别给予含生药0.5,1.0,2.0 g/mL的益肺散结药液灌胃,1次/d,连续21 d;顺铂组给予2 mg/kg顺铂腹腔注射,隔日1次,共21 d。干预结束后处死各组小鼠,剥离瘤组织并称瘤质量,计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量。结果益肺散结方中、高剂量组和顺铂组瘤质量均明显低于模型组(P均0.05),且益肺散结方中、高剂量组和顺铂组抑瘤率均明显高于益肺散结方低剂量组(P均0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组瘤质量和抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益肺散结方中、高剂量组移植瘤组织中Bcl-2 mRNA表达量和MMP-9蛋白表达量均明显低于模型组和益肺散结方低剂量组(P均0.05),而Bax mRNA表达量均明显高于模型组和益肺散结方低剂量组(P均0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织具有明显的抑制作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2、MMP-9表达有关。     

扶正抗癌方对Lewis肺癌荷瘤小鼠肺癌基因Bcl-2、抑癌基因Bax及血管内皮生长因子、表皮生长因子受体、金属蛋白酶表达的影响

目的:观察扶正抗癌方对小鼠Lewis肺癌抗转移机制的影响。方法:选取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,每只小鼠腋窝下接种肿瘤细胞0. 2 m L造模,24 h后,完全随机分为对照组、顺铂组、扶正抗癌方低、中、高剂量组,每组10只。分别给药21 d后取出完整肿瘤组织称重计算抑瘤率,同时用实时荧光定量PCR检测Lewis肺癌组织Bcl-2和Bax mRNA的表达,免疫组化检测Lewis肺癌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,用蛋白质印迹法(WB法)检测Lewis肺癌组织血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果:与模型组小鼠比较,扶正抗癌方药可以呈剂量依赖性抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,显著升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达,降低Bcl-2 mRNA、MMP-9蛋白表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0. 05),其中高剂量组在升高Lewis肺癌组织中Bax mRNA表达、降低Bcl-2 mRNA表达方面与顺铂组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。同时模型组Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达显著升高,扶正抗癌方药可显著降低Lewis肺癌组织中VEGF、EGFR表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0. 05),与顺铂组比较,无统计学意义(P 0. 05)。结论:虽然扶正抗癌方总体上较顺铂作用偏弱,但依然能有效抑制肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞Bcl-2基因的表达,激活Bax的高表达,下调肺癌细胞中VEGF、EGFR、MMP的表达。     

华蟾素辅助顺铂化疗对H22肝癌小鼠的抑瘤作用及其相关机制研究

为了观察华蟾素对H22肝癌小鼠的抑瘤作用,并探讨其调控机制,取50只昆明小鼠,采用腋窝皮下接种H22腹腔传代细胞建立H22肝癌小鼠模型,随机分为模型组、华蟾素低剂量组、华蟾素高剂量组、顺铂组、顺铂+华蟾素组,分别给予0.01%乙醇溶液、1 mg·kg~(-1)华蟾素、5 mg·kg~(-1)华蟾素、5 mg·kg~(-1)顺铂、5 mg·kg~(-1)顺铂+5 mg·kg~(-1)华蟾素干预10 d。干预期间观察各组小鼠一般状况,并比较各组肿瘤质量、抑瘤率、胸腺指数、组织病理学变化、肿瘤细胞凋亡率及肿瘤组织中磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、凋亡相关基因(apoptosis related gene,Fas)、Fas配体(Fas ligand,FasL)mRNA和蛋白及磷酸化Akt(phosphorylated Akt,pAkt)蛋白表达情况。结果表明在建模期间小鼠出现进食量下降、毛色暗淡、精神状态不佳等情况,随时间延长情况逐渐转差;各干预组小鼠精神状态逐渐好转,其中顺铂+华蟾素组改善最为明显。与模型组相比,各干预组肿瘤质量较小(P0.05);与华蟾素低剂量组相比,华蟾素高剂量组、顺铂组、顺铂+华蟾素组肿瘤质量较小,抑瘤率较高(P0.05);与华蟾素高剂量组、顺铂组相比,顺铂+华蟾素组肿瘤质量较小,抑瘤率较高(P0.05)。与模型组相比,华蟾素高剂量组、顺铂+华蟾素组胸腺指数较高,顺铂组较低(P0.05);与华蟾素低剂量组相比,华蟾素高剂量组胸腺指数较高,顺铂组较低(P0.05);与华蟾素高剂量组相比,顺铂组胸腺指数较低(P0.05);与顺铂组相比,顺铂+华蟾素组胸腺指数较高(P0.05)。病理染色结果显示,模型组肿瘤组织可见大量异质性细胞及核分裂现象,各干预组肿瘤组织内可见细胞碎片、中性粒细胞,呈现弥漫性变性坏死状态,且顺铂+华蟾素组弥漫性坏死现象更为明显。与模型组相比,各干预组肿瘤细胞凋亡率及Fas mRNA和蛋白相对表达量较高,PI3K和FasL mRNA和蛋白相对表达量及pAkt蛋白相对表达量较低(P0.05);与华蟾素低剂量组相比,华蟾素高剂量组、顺铂组、顺铂+华蟾素组肿瘤细胞凋亡率及Fas mRNA和蛋白相对表达量较高,PI3K和FasL mRNA和蛋白相对表达量及pAkt蛋白相对表达量较低(P0.05);与华蟾素高剂量组、顺铂组相比,顺铂+华蟾素组肿瘤细胞凋亡率及Fas mRNA和蛋白相对表达量较高,PI3K和FasL mRNA和蛋白相对表达量及pAkt蛋白相对表达量较低(P0.05)。综上,华蟾素对H22肝癌小鼠有显著抑瘤作用,且能增强小鼠免疫功能、协同增强化疗效果,可能通过调控PI3K/Akt/Fas/FasL信号通路相关基因和蛋白表达发挥作用。     

养肺控瘤方对Lewis晚期肺癌小鼠的抑瘤作用及对白介素-2和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察养肺控瘤方对Lewis晚期肺癌小鼠模型的抑瘤作用及对血清白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:选取30只C57BL/6雄性小鼠,采用胸腔注射Lewis肺癌细胞悬液制作Lewis晚期肺癌小鼠。造模后随机分为6组:空白对照组、顺铂组、等效剂量中药组、高剂量中药组、顺铂+等效剂量中药组、顺铂+高剂量中药组,每组5只。计算各组抑瘤率,并采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-2、TNF-α的表达。结果:顺铂组、等效剂量中药组、高剂量中药组、顺铂+等效剂量中药组、顺铂+高剂量中药组的抑瘤率分别为57.52%,30.88%,51.15%,67.73%,82.75%。与空白对照组比较,各观察组血清IL-2、TNF-α水平均得到显著下降(P0.05),顺铂+高剂量中药组与顺铂组比较,血清IL-2、TNF-α水平显著下降(P0.05)。结论:养肺控瘤方能抑制肿瘤生长,并能与顺铂协同降低Lewis晚期肺癌小鼠模型血清IL-2、TNF-α的表达。     

二陈汤合会厌逐瘀汤对喉癌荷瘤裸鼠肿瘤组织中PD-L1及IL-6/JAK1/STAT3信号通路的影响

目的探讨二陈汤合会厌逐瘀汤治疗喉癌的可能作用机制。方法采用Hep2喉癌细胞株异位移植法建立喉癌荷瘤小鼠模型,将模型小鼠分为对照组,合方低、中、高剂量组,顺铂组,每组7只。合方低、中、高剂量组分别给予二陈汤合会厌逐瘀汤14.44、28.87、57.74g/(kg·d)灌胃,每日1次;顺铂组给予浓度为2mg/kg的顺铂腹腔注射,隔日1次;对照组灌胃等体积蒸馏水,各组均给药3周。采用RT-PCR法检测小鼠肿瘤组织程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)、白细胞介素6(IL-6) mRNA表达水平,Western blot法检测小鼠肿瘤组织PD-L1、磷酸化蛋白质酪氨酸激酶(p-JAK)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)蛋白表达,免疫组化法检测小鼠肿瘤组织PD-L1蛋白表达。结果与对照组比较,合方低、中、高剂量组和顺铂组小鼠肿瘤组织PD-L1 mRNA及蛋白表达均下降,合方低、中、高剂量组IL-6 mRNA表达亦下降,合方中、高剂量组和顺铂组STAT3、p-STAT3蛋白表达下降,合方高剂量组p-JAK1蛋白表达下降(P<0.01)。合方高剂量组PD-L1、IL-6 mRNA表达均低于合方低、中剂量组及顺铂组,合方高剂量组PD-L1蛋白表达低于合方中剂量组和顺铂组,合方高剂量组STAT3蛋白表达低于合方低、中剂量组和顺铂组,合方高剂量组p-STAT3蛋白表达低于合方中、低剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论二陈汤合会厌逐瘀汤可能通过抑制IL-6/JAK1/STAT3信号通路,从而降低喉癌荷瘤裸鼠肿瘤组织PD-L1表达而发挥对喉癌的治疗作用,且以高剂量效果最好。     

康莱特注射液对Lewis肺癌小鼠TAM及HIF-1α的影响

目的研究康莱特注射液对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞(TAM)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法将造模成功Lewis肺癌荷瘤小鼠随机分为模型组、康莱特组、顺铂组及康莱特+顺铂组,模型组给予生理盐水腹腔注射,其余组均分别给予相应药物腹腔注射。干预14 d后处死各组小鼠取瘤组织,流式细胞仪检测TAM的比例,实时定量PCR检测HIF-1αmRNA的表达情况。结果康莱特组、顺铂组及康莱特+顺铂组小鼠瘤质量均明显低于模型组(P均0.05);康莱特+顺铂组与顺铂组抑瘤率均明显高于康莱特组(P均0.05),但康莱特+顺铂组与顺铂组比较差异无统计学意义(P0.05)。顺铂组小鼠脾指数明显低于其他3组(P均0.05),康莱特组小鼠脾指数明显高于其他3组(P均0.05),而康莱特+顺铂组与模型组比较差异无统计学意义(P0.05)。康莱特组和康莱特+顺铂组TAM比例均明显低于模型组(P均0.05),康莱特组和康莱特+顺铂组比较差异无统计学意义(P0.05),康莱特+顺铂组明显低于顺铂组(P0.05)。康莱特组、顺铂组、康莱特+顺铂组HIF-1α表达量均明显低于模型组(P均0.05),康莱特+顺铂组HIF-1α表达量均明显低于康莱特组、顺铂组(P均0.05),而康莱特组与顺铂组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论康莱特注射液具有抗肿瘤作用,与顺铂联用可增强化疗疗效、提高小鼠免疫功能,可能是通过降低TAM水平、改善缺氧实现的。     

参芪抑瘤方对H22荷瘤小鼠瘤组织VEGF及TGF基因表达的影响

目的研究参芪抑瘤方对H22荷瘤小鼠瘤组织VEGF及TGF基因表达的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将60只荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂阳性对照组、参芪抑瘤方低剂量组、参芪抑瘤方高剂量组、参芪抑瘤方低剂量联合顺铂组、参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组,连续灌胃给药14天,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,l4天后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;qRT-PCR技术检测肿瘤血管生成相关基因VEGF、TGF-β基因表达;免疫组织化学技术检测肿瘤组织中肿瘤血管生成相关蛋白VEGF、TGF-β的表达情况。结果不同剂量的参芪抑瘤方组的抑制率分别为:高剂量联合组达到53%,低剂量联合组为33%,高剂量中药组为35%,低剂量中药组为21%,阳性对照组为39%,差异有统计学意义(P0.05);qRT-PCR结果显示:与模型组相比,各用药组中VEGF、TGF-βmRNA的表达量均降低,差异有统计学意义(P0.05);免疫组织化学染色显示:VEGF、TGF-β在联合组中蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,联合组较顺铂阳性组、纯中药组蛋白表达量低,差异有统计学意义(P0.05)。结论参芪抑瘤方在mRNA和蛋白水平,可以下调肿瘤组织中VEGF、TGF-β的表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成,从而发挥抑瘤效应。     

肺岩宁颗粒干预细胞周期G1/S检测点调控信号抗Lewis肺癌细胞增殖的研究

目的 观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、肿瘤细胞周期分布，以及G1/S检测点调控信号RB－E2F1生物轴的影响。 方法 采用C57BL/6小鼠，造模并随机分为6组：模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组（煎剂组）、肺岩宁颗粒低剂量组（低剂量组，0.3 g）、肺岩宁颗粒中剂量组（中剂量组,0.6 g）、肺岩宁颗粒高剂量组（高剂量组,1.2 g）。造模后顺铂组1、3、5天腹腔注射顺铂0.1 mg,其他各组分别灌胃给药14天，观察各组治疗后抑瘤率、瘤重、体重，流式细胞术检测细胞周期时相分布，RT-PCR测定肿瘤组织视网膜母细胞瘤蛋白（RB）－腺病毒E2启动子结合转录因子（E2F1）的mRNA表达,Western blot检测RB、E2F1蛋白表达。 结果 各用药组瘤重低于模型组（P<0.05，P<0.01），中剂量组体重明显高于模型组和顺铂组（P<0.05，P<0.01）。流式细胞术发现中剂量组的G0/G1比例较模型组、顺铂组和煎剂组显著增多（P<0.01），癌细胞增殖指数明显降低（P<0.01，P<0.05）。RT-PCR显示中剂量组E2F1 mRNA水平明显低于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0.01)；中剂量组RB mRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组 (P<0.01)。Western blot分析显示中剂量组较模型组和顺铂组明显抑制E2F1蛋白表达(P<0.05)，并较模型组、顺铂组和煎剂组明显增加RB蛋白表达(P<0.05)。 结论 肺岩宁颗粒抑制Lewis肺癌肿瘤生长与干预细胞周期时相分布有关，能使癌细胞较多的阻滞在细胞周期G0/G1期，通过抑制E2F1，增强RB表达，从而干预细胞周期G1/S检测点信号通路中RB－E2F1生物轴实现抗肺癌增殖。     

肺岩宁方对A549裸鼠移植瘤VEGF与HIF-1α表达的影响

目的 观察肺岩宁方对A549裸鼠移植瘤的抑制作用及对VEGF、HIF-1α表达的影响.方法 将A549荷瘤鼠随机分为4组:模型组、化疗组、肺岩宁方组和综合治疗组,化疗组和综合治疗组DDP0.1mg腹腔注射3 d,肺岩宁方组和综合治疗组中药灌胃21 d.观察抑瘤率,RT-PCR和免疫组化法检测移植瘤VEGF和HIF-1α表达.结果 肺岩宁方组抑瘤率为34.17%,低于模型组(P＜0.05):RT-PCR结果显示,综合治疗组、肺岩宁方组和化疗组的VEGF mRNA的表达明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01);综合治疗组HIF-1α mRNA的表达水平低于模型组(P＜0.05),其余各组无显著差异.VEGF、HIF-1α光密度指数化疗组、肺岩宁方组和综合治疗组均明显低于模型组(P＜0.01).结论 益气养精法为主的肺岩宁方有一定的抑制肺癌生长的作用,且与顺铂有协同作用,肺岩宁方可能通过对HIF-1α的抑制,达到对VEGF的表达调控,从而抑制血管生成,控制肿瘤生长.     

甘草黄酮联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠的影响

目的探讨甘草黄酮联合顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠的影响。方法建立C57BL/6 J小鼠Lewis肺癌模型,随机分为空白组、模型组、顺铂组、甘草黄酮组、低联合组、高联合组,每组10只,给予相应药物干预21 d。称取瘤重,测定肿瘤抑制率。ELISA检测血清白介素-2 (IL-2)、白介素-10 (IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(TFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)水平。结果与模型组比较,高、低联合组血清IL-2、TFN-γ、TNF-α水平升高,血清IL-10、VEGF、HIF-1α、MMP-2水平降低,瘤重降低(P<0. 05)。结论甘草黄酮与顺铂联用可显著减少肺癌小鼠瘤重,提高肿瘤抑制率,增加血清IL-2、INF-γ、TNF-α水平,减少IL-10、HIF-1α、VEGF、MMP-2水平,其作用效果优于甘草黄酮组及顺铂组。     

川芎对肺癌干细胞样PG细胞荷瘤裸鼠手术前后HIF-1α表达的影响

目的:探讨活血药川芎对高转移性人巨细胞肺癌细胞PG-BEI干细胞样细胞荷瘤裸鼠手术前后HIF-1α蛋白表达的影响。方法:分选PG-BG1中的干细胞样细胞亚群,并将其接种于裸鼠右下肢。根据干预时间和药物的不同,分为对照组、乏氧组、川芎术前组、川芎术后组、顺铂术前组、顺铂术后组、川芎联合顺铂术前组和川芎联合顺铂术后组。于第21天行截肢手术并对原位瘤组织称重,计算抑瘤率,用Western blot法检测HIF-1α表达。第40天获取小鼠复发瘤组织,并对复发瘤组织称重,计算复发率、复发率抑制率、复发瘤重及复发瘤重抑制率,Western blot法检测HIF-1α表达结果。结果:肺癌干细胞样细胞荷瘤裸鼠原位瘤方面,川芎联合顺铂组原位瘤重及HIF-1α表达较空白组和单纯顺铂组减少。复发瘤组织方面,与模对照、化疗组比较,川芎联合顺铂组复发率、复发率抑制率、复发瘤重、复发瘤重抑制率及HIF-1α表达明显下调。低氧环境较常氧环境下HIF-1α表达增加。结论:川芎联合顺铂组可以通过抑制HIF-1α的表达从而抑制肺癌干细胞样细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织的增殖和复发。     

中药复方对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及其抑制血管新生机制初步探讨

目的:观察中药复方肺金生方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和对新生血管的影响,初步阐明其可能的作用机制。方法:选取成功构建Lewis肺癌移植瘤模型C57BL/6小鼠48只,按随机数字表法分为荷瘤对照组、顺铂组、肺金生方低剂量组、肺金生方高剂量组4组,每组12只,分别以相应药物干预2周,取瘤块称重,计算肿瘤抑制率;采用SABC免疫组化法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的微血管密度(MVD);采用western blot法检测Lewis肺癌小鼠肿瘤组织的血管内皮生长因子(VEGF)蛋白和碱性纤维细胞生长因子(b FGF)的表达。结果:各组肿瘤质量中,顺铂组(1.65±0.15)g、肺金生方低剂量组(2.42±0.19)g、高剂量组(1.83±0.16)g与荷瘤对照组(3.13±0.21)g比较差异有统计学意义;各组对Lewis肺癌小鼠肿瘤的抑瘤率分别为:荷瘤对照组0,顺铂组46.61%,肺金生方低剂量组27.32%,肺金生方高剂量组44.29%;各组MVD的值中,顺铂组(16.74±0.96)个,肺金生方低剂量组(19.31±0.85)个、肺金生方高剂量组(17.21±0.77)个与荷瘤对照组(29.98±1.06)个比较差异有统计学意义;Western blot结果显示,各治疗组的VEGF和b FGF蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义;肺金生方高剂量组VEGF和b FGF蛋白的表达与顺铂组比较差异无统计学意义。结论:肺金生方可抑制血管新生对抗Lewis肺癌,其机制可能与抑制VEGF和b FGF相关。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。     

参芪抑瘤方联合顺铂对MFC荷瘤小鼠瘤组织XIAP、PTEN表达的影响

目的:研究参芪抑瘤方联合顺铂对MFC荷瘤小鼠瘤组织连锁凋亡抑制蛋(XIAP)及磷酸酶和张力蛋白同源缺失性基因(PTEN)表达的影响。方法:建立MFC荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将50只荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、参芪抑瘤方低剂量组(中药低组)、参芪抑瘤方高剂量组(中药高组)、参芪抑瘤方低剂量联合顺铂组(联合低组)、参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组(联合高组),连续灌胃给药15 d,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,15 d后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫组织化学技术(IHC)分别检测肿瘤组织中XIAP、PTEN mRNA和蛋白的表达情况。结果:不同剂量组抑瘤率依次为顺铂组55.25%,参芪抑瘤方低、高剂量组分别为27.7%和30.58%,芪抑瘤方低、高剂参量联合顺铂组分别为66.3%和67.78%。联合用药组优于单纯用药组,差异具有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,顺铂组、中药组、联合组中XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,PTEN mRNA及蛋白的表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。与顺铂组、中药低组和中药高组相比,联合低组和联合高组中XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,PTEN mRNA及蛋白的表达升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:参芪抑瘤方具有一定的抗MFC胃癌移植瘤作用,并与顺铂联用具有减毒增效作用。其作用可能是通过下调瘤组织中XIAP的表达,上调PTEN的表达有关。     

当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对血清HIF-1α和LDH的影响

目的探讨当归贝母苦参丸(当归、浙贝母和苦参)对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对血清低氧诱导因子HIF-1α和乳酸脱氢酶(LDH)的影响。方法将雌雄各32只荷H22肝癌移植瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸与顺铂联合组,另设正常对照组(n=16)。观察各组小鼠一般状况,检测有效体质量变化及抑瘤率、q值、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、和肾脏的器官指数。血常规检测白细胞计数,ELISA检测血清HIF-1α的水平,血生化检测LDH活力。结果当归贝母苦参丸组与联合组的一般状况优于模型组和顺铂组;各治疗组瘤体质量均低于模型组瘤体质量(P<0.05),联合组的抑瘤率高于单用当归贝母苦参丸或顺铂的抑瘤率,联合用药疗效具有相加效应;当归贝母苦参丸组有效体质量增加、脾脏和胸腺指数高于顺铂组(P<0.05);当归贝母苦参丸组和联合组血清HIF-1α水平低于模型组(P<0.05),两组血清LDH活性低于顺铂组(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸具有抑瘤作用和对顺铂化疗的增效减毒作用,抑瘤作用可能与降低小鼠血清中HIF-1α水平和降低顺铂引起的LDH活性升高所致的组织损伤。     

扶正康复合剂与顺铂联用抑制移植性肺癌的实验研究

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移植性裸鼠肺癌模型,接种15 d后开始给药,连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,ELISA法检测裸鼠血清BUN、Cr、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6的表达水平,免疫组化法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin的表达情况,q-PCR法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin mRNA的表达水平。结果:扶正康复合剂高剂量组、顺铂组、顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组与模型对照组相比:荷瘤裸鼠瘤质量显著减轻(P<0.05),血清TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-2水平显著升高(P<0.05),血清IL-6水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达量显著减少,Bax表达量增加。其中顺铂+扶正康复合剂高剂量给药组裸鼠抑瘤率最高,两者具有协同作用。与顺铂组相比:顺铂+扶正康复合剂高剂量组裸鼠血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),顺铂+扶正康复合剂中、高剂量组裸鼠血清TNF-α、INF-γ水平显著升高(P<0.01);顺铂+扶正康复合剂高剂量组Bcl-2、Survivin、VEGF表达量降低,Bax表达量增加。结论:扶正康复合剂与顺铂联用能够降低顺铂的肾损伤作用,调节机体的Th1/Th2细胞免疫平衡,通过抑制Bcl-2、Survivin、VEGF并促进Bax的表达,进而促进肺癌细胞的凋亡。     

加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对小鼠Lewis肺癌PI3K/AKT/mTOR通路的影响

目的观察加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对小鼠Lewis肺癌组织、骨髓组织PI3K/AKT/mTOR信号通路的双重调控作用机制。方法建立气阴两虚型C57BL/6J小鼠Lewis肺癌模型,随机分为正常对照组,模型对照组,加味龟鹿二仙胶汤组(中药组),顺铂组,顺铂+加味龟鹿二仙胶汤低、中、高剂量组(顺铂+中药低剂量组、顺铂+中药中剂量组、顺铂+中药高剂量组,即联合组),每组20只,干预21 d。观察小鼠肿瘤体积、测定瘤重、抑瘤率及骨髓有核细胞计数,Western blot检测各组移植瘤组织及骨髓组织中PI3K、p-AKT、mTOR的蛋白表达。结果药物干预后,与模型对照组比较,除中药组外,顺铂组、联合组肿瘤体积增长均减慢,瘤质量均明显下降(P<0.01);与模型对照组比较,中药组小鼠骨髓有核细胞计数显著升高(P<0.01)。移植瘤组织中,顺铂组、联合组PI3K、p-AKT蛋白表达较模型对照组明显降低(P<0.01);中药组、顺铂组、联合组mTOR蛋白表达较模型对照组明显降低(P<0.05或P<0.01);骨髓组织中,中药组PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达较模型对照组明显升高(P<0.01),联合组随剂量增加PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达较顺铂组升高(P<0.05)。结论加味龟鹿二仙胶汤与顺铂联用可以显著抑制肿瘤体积增长,增强抗肿瘤作用,提高抑瘤率,对化疗所致骨髓有核细胞降低有保护作用,且呈剂量依赖性效应。通过下调肺癌组织中mTOR的蛋白表达和上调骨髓组织中PI3K、p-AKT、mTOR的蛋白表达发挥双重调控作用。