阿片受体与神经细胞内Ca^2＋

阿片受体包括κ,μ,δ等多种亚型,属G蛋白偶联受体,广泛分布于神经系统.阿片受体可通过与神经细胞内第二信使Ca     

失血性休克后血管低反应期血管平滑肌细胞内钙与钙通道变化及其阿片受体的调控作用

目的:失血性休克后血管低反应性与血管平滑肌细胞内钙及钙通道变化的关系及其阿片受体的调控作用.方法:按以前我们报导的方法复制大鼠失血性休克及用急性酶分离法分离肠系膜动脉2-3级分支的血管平滑肌单个细胞,将细胞悬液滴加在涂有多聚赖氨酸的盖玻片上使细胞贴壁,用"全细胞”(whole-cell)膜片钳记录Ca2+通道电流.使用Fluo-3-AM为一种脂溶性钙荧光指示剂,通过共聚焦显微镜激光扫描系统检测血管平滑肌细胞[Ca2+ ]i变化.结果:1. 失血性休克血管低反应期(休克后2.5 h)大鼠肠系膜动脉平滑肌Ca2+通道活动呈抑制状态,Ca2+电流密度显著减小,Ca2+内流减少,通道开放表现低水平模式. 2.非特异性阿片受体阻断剂naloxone及δ、κ、μ阿片受体阻断剂naltrindole,Nor-BNI ,B-FNA均可以明显加强休克血管低反应期内Ca2+通道活动,使Ca2+电流密度显著增大,Ca2+ 内流增加.3.PKC阻断剂H7抑制PKC活性后各阿片受体阻断剂的上列作用显著减弱,甚至不出现增加钙通道活动的影响.证明阿片受体阻断剂的该作用是通过激活PKC信号分子引起的.4.naltrindole,N or-BNI,B-FNA及NE均可增加正常大鼠血管平滑肌[Ca2+]i,部分[Ca2+ ]i升高也表现为钙振荡现象.5.休克后3 h,给予上列药物升高血管平滑肌[Ca2+ ]i的作用也存在,但与正常动物相比,明显减弱.6.将naltrindole,Nor-BNI,B-FNA分别与NE伍用于失血性休克 3 h后的血管平滑肌,它们都能明显加强NE所致的[Ca2+]i增高,即有明显的协同作用.结论:失血性休克失代偿期Ca2+通道活动抑制,从而导致Ca2+ 转运功能障碍,这些病理变化可能与阿片受体激动有关,即阿片受体通过抑制VSMCs中的Ca2+通道活性而介导休克血管低反应性的发生.因而将阿片受体阻断剂与血管活性药物伍用,是减轻血管低反应性的有效措施之一.     

失血性休克后血管低反应期血管平滑肌细胞内钙与钙通道变

目的失血性休克后血管低反应性与血管平滑肌细胞内钙及钙通道变化的关系及其阿片受体的调控作用.方法按以前我们报导的方法复制大鼠失血性休克及用急性酶分离法分离肠系膜动脉2-3级分支的血管平滑肌单个细胞,将细胞悬液滴加在涂有多聚赖氨酸的盖玻片上使细胞贴壁,用"全细胞”(whole-cell)膜片钳记录Ca2+通道电流.使用Fluo-3-AM为一种脂溶性钙荧光指示剂,通过共聚焦显微镜激光扫描系统检测血管平滑肌细胞[Ca2+]i变化.结果1.失血性休克血管低反应期(休克后2.5h)大鼠肠系膜动脉平滑肌Ca2+通道活动呈抑制状态,Ca2+电流密度显著减小,Ca2+内流减少,通道开放表现低水平模式.2.非特异性阿片受体阻断剂naloxone及δ、κ、μ阿片受体阻断剂naltrindole,Nor-BNI,B-FNA均可以明显加强休克血管低反应期内Ca2+通道活动,使Ca2+电流密度显著增大,Ca2+内流增加.3.PKC阻断剂H7抑制PKC活性后各阿片受体阻断剂的上列作用显著减弱,甚至不出现增加钙通道活动的影响.证明阿片受体阻断剂的该作用是通过激活PKC信号分子引起的.4.naltrindole,Nor-BNI,B-FNA及NE均可增加正常大鼠血管平滑肌[Ca2+]i,部分[Ca2+]i升高也表现为钙振荡现象.5.休克后3h,给予上列药物升高血管平滑肌[Ca2+]i的作用也存在,但与正常动物相比,明显减弱.6.将naltrindole,Nor-BNI,B-FNA分别与NE伍用于失血性休克3h后的血管平滑肌,它们都能明显加强NE所致的[Ca2+]i增高,即有明显的协同作用.结论失血性休克失代偿期Ca2+通道活动抑制,从而导致Ca2+转运功能障碍,这些病理变化可能与阿片受体激动有关,即阿片受体通过抑制VSMCs中的Ca2+通道活性而介导休克血管低反应性的发生.因而将阿片受体阻断剂与血管活性药物伍用,是减轻血管低反应性的有效措施之一.     

血管疾病治疗新靶标：STIM1和Orai1

钙离子(Ca2+)是常见的第二信使,不同于其它第二信使,其主要位于细胞外或存储于内质网(endoplasmic reticulum,ER)等细胞器内.静息状态下细胞内游离Ca2+浓度(intracellular Ca2+ concentration,[Ca2+]i)约为细胞外的1/20000,受体激活或生物信号刺激可通过改变[Ca2+]i进一步发挥生物放大效应.[Ca2+]i的升高主要通过胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流两大途径.随着胞内钙库的排空,位于质膜上的Ca2+内流通道被激活,使Ca2+由胞外进入胞质内,这个过程称为钙库操纵的钙内流(store-operated calcium entry,SOCE),其通道称为钙库操纵的钙通道(store-operated calcium channel,SOCC).近来研究证实组成SOCC的主要蛋白是:Ca2+感受蛋白基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)[1-2]和Ca2+通道蛋白Orai1[3-4].     

顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞氯电流为非钙激活氯电流*

 目的：探讨顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z）氯通道电流是否为钙激活的氯电流。方法：采用膜片钳全细胞记录技术记录细胞内/外无Ca2+及钙通道阻断剂对顺铂激活氯电流的影响,并用高渗灌流液观察顺铂激活氯电流的容积敏感性。结果：去除细胞外液的Ca2+后,5 μmol/L顺铂能诱发氯电流,且电流大小与细胞外有Ca2+ 时无明显差异,但潜伏期与达峰时间延长。细胞内外均无Ca2+ 对顺铂激活氯电流未产生影响。钙通道阻断剂nifedipine未能抑制顺铂诱发的氯电流。但细胞外灌流高渗液几乎可完全抑制顺铂激活的氯电流。结论: 顺铂激活的氯通道开放不依赖于细胞内/外的Ca2+,该通道不是钙激活氯通道而很可能是容积敏感性氯通道。     

阿片类药物呼吸抑制作用的机制研究进展

呼吸抑制是阿片类药物常见不良反应,其机制和治疗是目前临床中研究的重点。阿片类药物主要通过激动前包钦复合体和Kolliker-Fuse核(KF核)等处的μ阿片受体产生呼吸抑制作用。腺苷酸环化酶、G蛋白偶联内向整流钾通道(GIRK)以及电压门控钙通道等是阿片类药物影响呼吸的主要细胞信号传导机制。     

钙池操纵的钙通道的调控机制

钙池操纵的钙通道(store-operated calciumchannel,SOC)系存在于细胞膜表面的一种新发现的钙通道,它是非兴奋性细胞Ca2 内流的主要通道。SOC的开启是由钙库耗竭所激发,然而,钙库耗竭如何开启SOC仍不十分清楚。文章综述了SOC开启调控机制的有关研究进展。     

阿片受体—效应器偶联

大多数神经递质、激素和神经肽的受体系统由①受体结合单位(能专一性地识别配体的部位);②效应器;③鸟嘌呤核苷酸调节蛋白(即G蛋白)三部分组成。纯化的G蛋白已于β_2、α_2肾上腺受体和毒蕈碱受体在人工磷脂介质中重建成功。阿片受体尚未被完全纯化,但从培养的神经细胞和脑膜受体与G蛋白的重建间接证明阿片受体也由受体结合位点、G偶联蛋白和效应器3个单位组成。受阿片受体调节的效应器是腺苷酸环化酶,钙离子通道和钾离子通道。阿片受体是通过G蛋白来调节的。探讨了阿片肽和吗啡类药物(激动剂和拮抗剂)对阿片受体的调节作用。     

BK_(Ca)通道的力敏感性

大电导钙激活的钾通道(large-conductance Ca~(2+)-activated K~+channel,BK_(Ca))可被应力激活,表现出力敏感性,进而参与应力对细胞功能的调控。然而,不同类型的细胞其BK_(Ca)通道响应于不同的力学加载方式,其表达或活性的变化不同。相应地,其被应力激活的机制也不同,有的通过Ca~(2+)浓度的升高被激活,有的则通过膜脂或细胞骨架的变化被激活。从BK_(Ca)通道力敏感性的分子结构基础、BK_(Ca)通道力敏感性的表现、应力激活BK_(Ca)通道的机制3个方面概述BK_(Ca)通道力敏感性的相关研究进展。     

δ-阿片受体激活ERK1/2信号通路的新发现

δ-阿片受体(DOR)诱导激活细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)受表皮生长因子(EGF)受体转化激活的调节。新近发现长时间的表皮生长因子作用可以使δ-阿片受体激活的ERK1/2信号途径发生转换,即由依赖表皮生长因子受体转化激活转为依赖胰岛素样生长因子-1(IGF-1)受体转化激活。稳定表达DOR的人胚肾细胞(HEK293)经过0.1μg EGF处理18小时后EGF受体表达下调,导致功能性的ERK1/2信号途径对EGF不敏感。然而,表皮生长因子受体(EGFR)不敏感的     

钙火花的研究新进展

细胞内肌浆网上兰尼定 (Ryanodine)受体敏感性Ca2 释放通道产生的一过性局部Ca2 释放称为钙火花 ,它是心肌和骨骼肌细胞兴奋 收缩偶联形成的基本构成 ;而对平滑肌则通过胞膜Ca2 敏感性钾通道产生的自发一过性外向电流 (STOCs)引起平滑肌细胞舒张。同时钙火花又受膜电位 ,PKC ,Ca2 等多种因素的调节。     

蛋白酶活化受体4在外周痛觉信号调节作用的研究进展

蛋白酶活化受体4(PAR4)是G蛋白偶联受体家族成员之一,可被凝血酶、胰蛋白酶活化。PAR4是血小板活化和炎症的强力调节受体,活化的PAR4可作为潜在的内源性镇痛因子,在正常和炎症条件下参与调节外周疼痛反应。PAR4通过致敏TRPV1、细胞内Ca2+的释放和刺激周围感觉神经末梢释放P物质和CGRP参与了炎症和疼痛的周围机制。PAR4直接与电压门控Ca2+通道的相互作用可能是PAR4对细胞除极诱发的Ca2+信号产生抑制作用和PAR4参与镇痛的作用机制。     

δ阿片受体在大鼠脊髓后角浅层内一级传入C纤维上的免疫电镜定位

脑啡肽是一种高效内源性阿片肽镇痛物质,δ阿片受体是其特异性受体。脊髓后角浅层,脑啡肽与δ阿片受体都有高密度表达。以前的资料表明,脑啡肽可通过对一级传入C纤维的突触前抑制在脊髓后角浅层对痛觉进行调制。本研究根据西非单叶豆(Griffoniasimplicifolia)同工凝集素I-B4与一级传入C纤维选择性结合的特性,应用免疫电镜双标技术观察δ阿片受体是否定位在大鼠一级传入C纤维中枢终末上,为脑啡肽在痛觉调制中的突触前抑制作用提供相应的受体基础。电镜下在大鼠脊髓后角浅层内观察到,以纳金(nanogold)标记的δ阿片受体除定位在部分树突中外…     

SK2通道在心血管和神经系统疾病中的研究进展

小电导钙激活钾通道2(SK2)为钙激活钾通道的一种,大量分布于人体多种组织细胞中.SK2通道对膜电位敏感性低,为非电压依赖性.该通道电导较小,其门控调节不受膜电位影响,主要由细胞内Ca2+决定,通道开放时引起K+外流.SK2通道与许多心血管疾病和神经系统疾病有关,尤其是与心律失常、心力衰竭、帕金森病、神经肌肉失调和抑郁焦虑等密切相关.病理状态下,SK2的表达增加或减少,抑制或促进交感神经兴奋性,从而加重或改善病情.     

趋化因子受体与信号转导

趋化因子受体是一类表达于不同类型细胞上的含有 7个跨膜区的 G蛋白偶联受体超家族 ,通过与趋化因子作用参与细胞的生长、发育、分化、凋亡、组织分布等 ,同时亦是 HIV的协同受体。它可激活磷脂酶、脂类激酶、蛋白激酶 ,调节胞内 Ca2 +浓度 ,激活 JAK/ STAT途径 ,引发一系列的信号转导通路     

血管平滑肌细胞钙库Ca~(2+)动员的变化在休克血管低反应性形成中的作用

目的:探讨大鼠腹主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)在缺氧培养时胞内钙库钙释放的变化情况,并探讨胞内钙库钙释放在休克血管对去甲肾上腺素(NE)低反应性中的可能作用,为进一步阐明休克血管低反应性的发生机制提供依据。方法:建立大鼠失血性休克(40mmHg,2h)的在体模型及大鼠VSMCs缺氧细胞模型;采用Fura-3/AM钙离子成像方法测定VSMCs胞浆钙离子浓度([Ca2+])的变化情况及其与IP3受体(IP3R)及雷诺定受体(RyR)介导的钙释放通道的关系;采用离体器官张力测定技术,检测不同内钙释放依赖信号通路在休克血管低反应性形成中的可能作用。结果:在细胞外液无Ca2+的前提下,NE可通过动员内钙释放引起VSMCs胞浆[Ca2+]的明显升高;缺氧培养后VSMCs胞浆[Ca2+]较正常对照组有所升高,由NE诱导的VSMCs胞浆[Ca2+]较对照组有所降低,但均无显著差别;但在缺氧培养的VSMCs,细胞内钙库钙释放功能明显改变,表现为与正常对照组比较,缺氧VSMCs由IP3R敏感钙释放通道开放剂adenophostinA(10-5mol/L)及ATP-Na2(10-4mol/L)诱导的VSMCs胞浆[Ca2+]升高不显著,但RyR敏感钙释放通道开放剂caffeine可诱导缺氧VSMCs胞浆[Ca2+]的明显升高;失血性休克(40mmHg,2h)可引起大鼠腹主动脉血管对由NE诱导的收缩反应性明显降低,IP3R激动剂ATP-Na2(10-4mol/L)并不明显提高休克血管对NE的收缩反应性,但IP3R阻断剂heparin(104U/L)可明显抑制休克血管对NE的收缩反应性;此外,在无钙及含钙的K-H液中,RyR阻断剂ryanodine(10-5mol/L)可部分恢复休克血管对NE的收缩反应性,而RyR激动剂caffeine(10-3mol/L)可进一步降低休克血管对NE诱导的收缩反应性。结论:失血性休克后由RyR介导的内钙释放被激活部分参与了休克血管低反应性的形成。     

兴奋性氨基酸系统在阿片耐受形成机制中的应用

阿片类药物是临床上常用的一类镇痛药 ,有关阿片耐受、依赖机制的研究是药物成瘾研究的一个热点。近年来进行的大量研究证明 ,阿片耐受是一个相当复杂的过程 ,涉及到多种神经递质 ,多个中枢结构及信号转导系统的变化。兴奋性氨基酸受体的激活 ,[Ca2 + ]i 增加 ,NO产生增多等信号转导机制也参与了阿片耐受、依赖的形成。本文近年来这方面的研究做一综述。     

δ—阿片受体激动剂DADLE对β—内啡肽和催乳素释放的影响

本工作给大鼠第三脑室微量注射δ-阿片受体相对选择性激动剂DADLE,增加血浆中β-内啡肽和催乳素的含量。结果表明,激活脑内δ-阿片受体,可同时兴奋上述垂体前叶激素的分泌。     

急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义

目的：观察急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义。方法:细胞水平：钙荧光探针(Fura-2/AM)负载大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs），荧光分光光度法，细胞外液无Ca2+及含Ca2+，在常氧（37 ℃、5% CO2、21 %O2、74 %N2 ）和急性低氧(37 ℃、5% CO2、2% O2、93 %N2)时，检测理阿诺碱（RD）和环匹阿尼酸（CPA）等对细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响；离体血管环水平：相同条件，离体血管灌流方法检测肺动脉环张力变化。结果:(1)急性低氧时［Ca2+］i升高：常氧组［Ca2+］i为（96.99±7.16） nmol/L，低氧组为(257.06±32.48) nmol/L (P<0.01)。(2)与低氧组比较，预先用RD或普鲁卡因(procain)抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，随后再给予低氧刺激时［Ca2+］i不升高，为（100.91±11.21） nmol/L (P<0.01)；而用CPA或thapsigargin（TG）抑制内质网摄取Ca2+，再给低氧刺激时［Ca2+］i呈升高状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起［Ca2+］i进一步升高(P<0.05)。(3)低氧引起肺动脉环收缩：常氧对基础张力无影响，低氧引起肺动脉环收缩，最大收缩张力达（49.28±8.64） g/g,P<0.01。(4)与低氧组比较，预先用RD或procain抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，再给予低氧刺激，肺动脉环不收缩，最大收缩张力（3.75±1.14） g/g, P<0.01；而用CPA或TG后，再给予低氧刺激，肺动脉环呈收缩状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起肺动脉环进一步收缩(P<0.05)。结论:急性低氧可以引起内质网释放Ca2+，至少来自理阿诺碱受体敏感钙库的Ca2+释放参与了低氧肺血管收缩的发病机制；这可能是PASMCs自身具有的，既不依赖细胞外Ca2+内流，也不依赖血管内皮。     

创伤失血性休克大鼠心脏μ、δ、κ阿片受体变化及其在心血管功能抑制中的作用

目的：明确参与创伤失血性休克的发病过程的亚型阿片受体。方法：观察创伤失血性休克后大鼠心脏μ、δ和κ阿片受体的变化及与血流动力学指标变化的关系；观察δ和κ阿片受体特异性拮抗剂对创伤失血性休克大鼠血流动力学指标的影响。结果：创伤失血休克后，大鼠心脏δ和κ阿片受体数目明显升高，与血流动力学指标下降呈显著负相关。δ和κ阿片受体特异性拮抗剂可明显逆转创伤失血休克大鼠血流动力学指标的下降。结论：心脏δ和κ阿片受体可能参与了创伤失血性休克的发病过程。