人胸腺基质淋巴生成素的研究进展

人胸腺基质淋巴生成素（hTSLP）是一种结构类似IL-7的新型细胞因子。正常情况下其mRNA主要表达于基质细胞、上皮细胞和肥大细胞，病理状态下，TSLPmRNA在一些前炎症细胞因子的作用下表达增加。hTSLP直接作用的效应细胞主要是树突状细胞（DC），通过调节DC的成熟来发挥作用。一方面，hTSLP-DC在外周能够诱导初始T细胞向一类特殊的Th2细胞分化，从而启动炎症反应；另一方面，hTSLP—DC能够促进胸腺中CD4^＋CD25^-T细胞分化成CD4^＋CD25^＋调节性T细胞，从而在免疫耐受的发生和调控中发挥作用。     

胸腺基质细胞支持下骨髓CD34~+细胞向T细胞体外定向分化

目的：研究人骨髓CD34^＋细胞体外向T细胞定向分化的方法，为研究造血细胞淋系造血活性及T细胞发育和分化提供技术平台。方法：免疫磁珠法分离骨髓CD34^＋细胞，在骨髓基质细胞条件培养液构建的微环境下，在胸腺基质细胞的支持下，使其体外向T细胞定向分化，收集培养的非贴壁细胞，免疫荧光染色后经流式细胞术检测培养不同时间CD1^-CD3^＋细胞、CD3^＋CD4^＋CD8^-细胞及CD3^＋CD4^-CD8^＋细胞比例。结果：培养1周时，培养细胞中以不成熟的CD1^＋CD3^-细胞、CD1^＋CD3^＋细胞为主，可检测到少量CD1^-CD3^＋细胞，随培养时间延长，不成熟细胞比例逐渐减少，而成熟的CD1^-CD3^＋细胞比例逐渐增加；在CD3^＋细胞中，培养初期以不成熟的双阳性细胞CD4^＋CD8^＋为主，而成熟的单阳性CD^＋CD8^-细胞及CD4^-CD8^＋细胞占极小比例，随培养时间延长，双阳性细胞比例逐渐减少，而成熟的单阳性细胞比例逐渐增高；而无胸腺基质细胞支持的CD34＋细胞仅在培养初期检测到成熟细胞存在，而培养后4周基本检测不到成熟T细胞的存在。结论：在骨髓基质细胞及胸腺基质细胞的支持下，骨髓CD34^＋细胞可体外发育为成熟的CD1^-CD3^＋细胞及单阳性T细胞，其中胸腺基质细胞的支持对于造血细胞向T细胞的体外定向分化极其重要。     

两种细胞表面抗原标记法流式仪检测健康成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例实验研究

目的了解正常成人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例，并比较以CD3＋CD4双标记法和以CD3＋CD8双标记方法对检测结果的影响。方法全血以PMA和伊能霉素刺激培养4h，以三色标记法流式检测T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞因子阳性细胞的比例。结果CD3、CD8、CD4抗原在刺激后明显下调，但是不影响T亚群比例值。以CD3＋CD8双标记法检测了23例正常成人，n1和Tcl细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例分别为2．6％（0％-23．8％）和2．2％（0％-23．3％）。Th2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞2．8％（0．7％-13．3％）和1．6％（0％-5．1％）。以CD3＋CD4双标记法检测了12例正常成人，Th1和Tc1细胞占CD^＋淋巴细胞的比例分别为4．8％（0％-15．6％）和1．8％（0．3％-18．6％），Trh2和Tc2细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例分别为2．6％（0％-6．5％）和1．2％（0％-10．6％），均与以CD3＋CD8标记检测的结果无统计学意义。以CD3-FTTC和CD8-PerCP双标记法检测了17例正常人的IL-2表达，IL-2阳性的CD4^＋T细胞占CD3＋淋巴细胞的比例为3．7％（0％-30．0％），高于CD8^＋IL-2^＋T细胞在CD3^＋淋巴细胞中的比例0％（0％-1．7％），P=0．005。结论可以建立有效的流式检测正常人T亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例方法。以CD3＋CD4双标记或以CD3＋CD8双标记检测分析T亚群的Ⅰ、Ⅱ型细胞比例都是可行的。     

调节性T细胞在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用

目的 分析调节性T细胞在大鼠急性排斥反应中的作用。方法 采用免疫组化SABC染色法，测定BN→LEW大鼠小肠移植急性排斥反应时，外周血及移植肠浸润淋巴细胞中调节性T细胞：CD4^ ,CD8^ ,CD25^ T淋巴细胞及相关细胞因子IL－4和IFN－γ的表达，并与同基因大鼠间小肠移植（BN→BN）作比较。结果 外周血淋巴细胞分析显示，大鼠小肠移植急性排斥反应时，以CD4^ ,CD25^ ,T细胞为主，CD8^ 淋巴细胞只占少部分；分泌IL－4的细胞在术后4，7，14d分别只占14．3％，16．2％和16．9％。移植肠基底浸润的淋巴细胞以CD4^ ,CD25^＋和分泌IFN－γ的淋巴细胞为主。结论 在大鼠同种小肠移植中，急性排斥反应与CD25^ ,CD4^ T细胞及Th1相关细胞因子IFN－γ的表达增加相关。而CD8^＋T淋巴细胞和Th2相关细胞因子IL－4可能具有保护作用。     

α-Dystroglycan在胸腺T细胞的表达及其对胸腺发育的作用

目的：研究α-DG在胸腺T细胞中的表达及其对胸腺T细胞发育的作用。方法：摘取1513龄胚胎鼠胸腺进行体外器官培养。FACS检查不同发育时期胸腺T细胞上α-DG的表达水平；于胸腺小叶上滴加α-DG抗体、对照抗体或培养液。FACS分析胸腺T细胞表面CD4、CD8等的表达。结果：15～19天胸腺CD4^- CD8^-、CD4^ CD8^ 、CD^- CD8^ 、CD4^ CD8^-等细胞上均有不同水平的α-DG表达；α-DG抗体的干扰使胸腺T细胞发育明显受阻，表现为：双阴性细胞比例极显著的增高从对照组的26．53％到干扰组的71．60％、双阳性细胞和CD8单阳性细胞比例显著下降，从39．8l％、20．66％分别下降到7．50％、6．85％、CD4单阳性细胞比例无明显变化；同时胸腺细胞数目明显减少；随胸腺发育时间的延长和α-DG抗体的持续存在，上述现象明显加剧。结论：α-DG广泛表达在胸腺细胞上，并参与胸腺T细胞的发育和分化。     

肾怡对狼疮小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用

目的：探讨复方中药肾怡对MRL/lpr小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用。方法：将MRL/lpr狼疮小鼠随机分成对照组和中药治疗组，从12周观察到28周后于实验终点处死小鼠。通过流式细胞术分别检测胸腺和脾脏中CD4^ CD30^-(Th1)、CD4^ CD30^ (Th2)淋巴细胞所占百分比，进一步对脾细胞进行CD^ T淋巴细胞分选，并于体外利用PHA—P进行刺激后，通过RT—PCR方法检测IL-4(Th2细胞因子)和IFN—γ(Th1细胞因子)的表达丰度，比较二者的比值在对照组和中药治疗组之间的差别。结果：胸腺中几乎检测不到CD4^ CD30^ T淋巴细胞；脾脏中虽可检测到CD4^ CD30^ T淋巴细胞，但在未加入PHA-P的条件下，CD4^ CD30^ T淋巴细胞在对照组和中药治疗组中所占的比例没有显著差异；经PHAP刺激后对照组和治疗组脾细胞中CD4^ CD30^ T淋巴细胞所占百分比均明显增加，但治疗组中CD4^ CD30^ T淋巴细胞所占百分比的增加程度明显低于对照组；将脾细胞中CD4^ T淋巴细胞分选出来后进行RT-PCR检测，结果显示中药治疗组CD^ T淋巴细胞所表达IL-4／IFN—γ(Th2／Th1)比值明显低于对照组。结论：复方中药肾怡能够纠正MRL/lpr狼疮小鼠脾脏中CD^ T淋巴细胞在PHA-P刺激的条件下朝向Th2过度分化的倾向性。     

脐血体外同时扩增造血干祖细胞、T细胞及树突状细胞

目的：探索体外同时扩增脐血中造血干祖细胞、T细胞及树突状细胞的可能性和最佳细胞因子组合方案。方法：采集健康正常足月产新生儿脐血，分离出单个核细胞，在不同的细胞因子组合作用下培养14天。培养于0、3、7和14天时收集细胞，用FCM分析扩增前后脐血CD34^＋、CD3^＋T及DCs细胞含量。结果：3组不同细胞因子组合实验组A：SCF＋IL-3，6；B：SCF＋IL-3，6，4；c：SCF＋IL-3，6，4（5X）均能显著扩增脐血中的单个核细胞和CD34’细胞，各组的CD34^＋细胞最高值出现在第7天，CD34^＋细胞平均增加倍数10—20倍不等。在扩增初期，各组CD3^＋T有所下降，7天时CD3^＋T细胞有不同程度的增加，14天时扩增最高的组别中CD3^＋T细胞是新鲜脐血的2倍。DCs标志CD1a、CDS0、CD83和CD86。在所有组别中培养3天时有所下降，第7天时在含IL4的组别中有显著上升，且CD1a和CD80表达高于CD83和CD86；14天时则有所回落。IL4对CD34^＋和CD3^＋T细胞扩增有一定促进作用。结论：脐血中T细胞、DC细胞在一定细胞因子组合下。可与CD34^＋细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

IL-7对胸腺T细胞及树突状细胞体外分化发育的影响

目的:探讨IL-7对胸腺T细胞及胸腺树突状细胞分化的影响。方法:摘取15～16日龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胚胎胸腺器官培养-FTOC),分别将细胞因子IL-7和培养基滴加在胸腺小叶上,12天后收集不同条件下经FTOC培养获得的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、B220、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态,通过细胞计数检测细胞数目的变化。再将经FTOC培养获得的胸腺细胞和异源的T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:细胞计数结果表明添加外源性IL-7组的胸腺细胞数目明显减少,流式细胞仪检测结果显示其中胸腺CD4-CD8-双阴性细胞及CD8+单阳性细胞比例有所增加,而CD4+CD8+双阳性细胞比例显著下降,CD4+单阳性细胞比例没有明显变化;此外,B细胞和树突状细胞、NK细胞数量均有不同程度的增加。结论:IL-7在胸腺T细胞及胸腺树突状细胞的分化发育中发挥重要的调节作用。     

类风湿关节炎患者Th17细胞与调节性T细胞失衡的研究

目的观察类风湿性关节炎（RA）患者外周血Th17细胞与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞（Treg）平衡状态与疾病的关系,分析Th17／Treg细胞免疫失衡在RA发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪四色荧光抗体标记法分别对47例RA患者和39名健康志愿者（HVs）进行CD3、CD8、IL-17与CD4、CD25、F0xP3标记,测定Th17与调节性T细胞的比例变化及相关细胞因子IL-6、IL-23和IL-17水平。结果RA组患者外周血中,CD3^＋CD8^＋IL-17^＋T细胞占CD3^＋T淋巴细胞的百分比为（1．12±0．38）％,明显高于对照组（0．68±0．29）％（t=1．83,P〈0．05）;CD4’CD25’FoxP3^＋细胞占CD4^＋T淋巴细胞的百分比为（2．74±0．71）％,明显低于对照组（4．69±1．23）％（t=-2．94,P〈0．05）。相关细胞因子测定结果：IL-6水平在RA组为（13．5±3．7）ng／L,正常人为（4．6±0．9）ng／L（t=6．24,P〈0．01）;IL-23水平在RA组为（71±19）ng／L,正常人为（25±6）ng／L（t=14．37,P〈0．01）;IL-17水平在RA组为（122±33）ng／L,正常人为（37±9）ng／L（t=19．01,P〈0．01）;RA患者血清IL-6、IL-23和IL-17水平均明显升高。结论RA患者外周血Th17与CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节性T细胞数量的异常可能是RA发病的重要因素,IL-6和IL-23的升高是引起这些改变的可能原因。     

松果体及褪黑素对大鼠胸腺CD4+/CD8+T细胞分化发育的影响

目的：探讨松果体和褪黑素对胸腺T细胞分化发育的影响。方法：实验组为松果体摘除组和松果体摘除 褪黑素组。ABC法染胸腺CD4^ 、CD8^ 细胞。流式细胞术测定胸腺和血液T淋巴细胞CD4^ 、CD8^ T亚类。结果：松果体摘除后胸腺明显萎缩,并随时间延长而加剧,补充褪黑素后胸腺重量逐渐恢复。松果体摘除后胸腺和血液中CD4^ T细胞百分比无明显波动;胸腺CD8^ T细胞比例上升,但血液CD8^ T细胞比例则下降;补充褪黑素后胸腺CD4^ T细胞在低剂量组略有下降,而高剂量组则显著升高,胸腺和血液CD8^ T呈下降趋势,双阳性细胞比例恢复正常,双阴性细胞比例则上升。结论：松果体能显著影响CD8^ T细胞的分化发育和释放,降低血液CD8^ T细胞的比例。补充褪黑素能缓解相关影响。     

Hepatocyte progenitors in man and in rodents--multiple pathways, multiple candidates

In severe injury, liver-cell progenitors may play a role in recovery, proliferating, and subsequently differentiating into mature liver cells. Identifying these progenitors has major therapeutic potential for ex vivo pharmaceutical testing, bioartificial liver support, tissue engineering and gene therapy protocols. Potential liver-cell progenitors have been identified from bone marrow, peripheral blood, cord blood, foetal liver, adult liver and embryonic stem cells. Differences and similarities are found among cells isolated from rodents and humans. This review will discuss identifying markers and differentiation potential in in vitro and in vivo models of these putative progenitors in both humans and rodents.     

On the possible origin of extra-epithelial enterochromaffin cells by budding from the crypts of Lieberkuhn

This study was undertaken to test Pierre Masson's still unconfirmed theory that extra-epithelial enterochromaffin cells in the gut arise in adult life by budding from the crypts of Lieberkuhn under conditions of low grade inflammation. Appendices (900) were reviewed and 19 were selected for serial section study because in random sections they showed lateral fusion of the crypts, one of the key features described by Masson. Ten specimens without crypt fusion served as controls. Sixteen of the 19 study specimens and one of the control specimens showed budding, averaging one bud in every 88 sections. Most buds were in direct contact with Schwann cells in the adjacent lamina propria and 45 per cent of them contained enterochromaffin cells. There was also histologic evidence linking buds and lateral crypt fusion to low grade inflammation. Masson's ideas are, therefore, confirmed insofar as the existence of buds and their relationship to enterochromaffin cells, Schwann cells, and inflammation is concerned. The actual separation of buds from the crypts to form extra-epithelial enterochromaffin cells has yet to be proved.     

大鼠肝卵圆细胞的诱导、分离及鉴定

目的建立大鼠肝卵圆细胞的增殖模型,并探索其分离及鉴定方法。方法雄性Wistar大鼠每天1次连续灌胃给予不同剂量二乙酰氨基芴(2-AAF熏5、10、15、20、25mg/kgBW),第5天行标准的2/3肝切除术,术后按各自剂量继续给予11天,不同时间取肝脏组织,行甲胎蛋白、细胞角蛋白18及19染色并观察。以确定的2-AAF最佳剂量制备大鼠肝干细胞增殖模型,Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化大鼠肝卵圆细胞,光镜、电镜下观察细胞特点,并进行上述细胞表型标志免疫组化染色。结果2-AAF15mg/kgBW能建立较理想的肝卵圆细胞增殖模型。HE染色可见汇管区及中央静脉周围大量增殖的嗜碱性小细胞,电镜下观察此种细胞具有卵圆形细胞核、细胞质少而淡、核/浆比例较大等特点,免疫组化染色证实甲胎蛋白、细胞角蛋白18和19染色阳性,白蛋白及白细胞共同抗原(LCA)染色阴性。分离所得底层细胞,光镜下表现大小不等、不规则圆形细胞,体积较小,细胞核/浆比例较大,电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,余同增殖细胞特点,免疫组化染色与增殖细胞表现相同细胞表型特点。结论本方法可成功诱导、分离、纯化大鼠肝卵圆细胞,符合肝卵圆细胞的形态特点、超微结构及细胞表型标志特点。     

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的：探讨树突状细胞—肿瘤细胞融合细胞的形态特性，为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法：将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合，瑞氏—姬姆萨染色观察；扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果：树突状细胞与MCF细胞按10：1比例融合后，一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合；扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起，树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论：树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。     

Harnessing innate and adaptive immunity for adoptive cell therapy of renal cell carcinoma

The development of immunotherapies for renal cell carcinoma (RCC) has been the subject of research for several decades. In addition to cytokine therapy, the benefit of various adoptive cell therapies has again come into focus in the past several years. Nevertheless, success in fighting this immunogenic tumor is still disappointing. RCC can attract a multitude of different effector cells of both the innate and adaptive immune system, including natural killer (NK) cells, γδ T cells, NK-like T cells, peptide-specific T cells, dendritic cells (DC), and regulatory T cells (Tregs). Based on intensive research on the biology and function of different immune cells, we now understand that individual cell types do not act in isolation but function within a complex network of intercellular interactions. These interactions play a pivotal role in the efficient activation and function of effector cells, which is a prerequisite for successful tumor elimination. This review provides a current overview of the diversity of effector cells having the capacity to recognize RCC. Aspects of the functions and anti-tumor properties that make them attractive candidates for adoptive cell therapies, as well as experience in clinical application are discussed. Improved knowledge of the biology of this immune network may help us to effectively harness various effector cells, placing us in a better position to develop new therapeutic strategies to successfully fight RCC.     

皮肤树突状细胞亚群研究进展

皮肤树突状细胞(DC)作为重要的抗原提呈细胞,在机体免疫应答或自身耐受的发生中扮演着非常重要的角色.皮肤免疫系统中定居着多种DC亚群,主要包括表皮层中的郎格汉斯细胞(LC)与真皮层中的各种真皮DC亚群.健康皮肤中的DC亚群主要有表皮LC、真皮DC(dDC)和浆细胞DC(pDC),dDC又分为Langerin+ dDC及Langerin-dDC等.但在炎症性皮肤,如过敏性皮炎、银屑病等病变皮肤中则存在着炎症性DC亚群.DC由于其复杂的异质性群体,导致了其各亚群的特殊化功能.皮肤DC亚群的特殊化功能,为皮肤性疾病的临床治疗及新型疫苗的研发设计等都提供了良好的新策略.     

两种不同纯度的嗅鞘细胞在体外存活与生长的比较

比较80%和50%两种纯度的嗅鞘细胞在体外培养条件下的存活与生长,为嗅鞘细胞体内移植选用最佳纯度提供依据。分离、培养并纯化成年SD大鼠嗅鞘细胞,将纯化的嗅鞘细胞和收集到的贴壁成纤维细胞进行约80%和50%的比例混合后接种,继续培养1d或3d。所有细胞于不同时间点行P75免疫细胞化学荧光染色,以鉴定嗅鞘细胞的初始及其后培养过程中数量和纯度的变化。观察细胞状态,计数细胞总数和P75免疫阳性细胞数目,求得各组嗅鞘细胞数量和纯度并行统计学分析。结果显示:两种不同纯度嗅鞘细胞在培养1d时形态正常,3d时纯度为50%的嗅鞘细胞胞体依然饱满,突起更加纤长,数量和纯度亦无明显下降。而纯度为80%的嗅鞘细胞在培养3d时已出现胞体萎缩和突起变短,数量从1d时每一观察区域内的35±13显著下降为23±5(P=0.02),但纯度未发生明显变化。结果表明50%纯度嗅鞘细胞的存活及生长状态优于80%者,提示细胞体内移植时应考虑选取50%纯度的嗅鞘细胞。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

The molecular makeup and function of regulatory and effector synapses

Summary:  Physical interactions between T cells and antigen-presenting cells (APCs) form the basis of any specific immune response. Upon cognate contacts, a multimolecular assembly of receptors and adhesion molecules on both cells is created, termed the immunological synapse (IS). Very diverse structures of ISs have been described, yet the functional importance for T-cell differentiation is largely unclear. Here we discuss the principal structure and function of ISs. We then focus on two characteristic T-cell–APC pairs, namely T cells contacting dendritic cells (DCs) or naive B cells, for which extremely different patterns of the IS have been observed as well as fundamentally different effects on the function of the activated T cells. We provide a model on how differences in signaling and the involvement of adhesion molecules might lead to diverse interaction kinetics and, eventually, diverse T-cell differentiation. We hypothesize that the preferred activation of the adhesion molecule leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) and of the negative regulator for T-cell activation, cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 (CTLA-4), through contact with naive B cells, lead to prolonged cell–cell contacts and the generation of T cells with regulatory capacity. In contrast, DCs might have evolved mechanisms to avoid LFA-1 overactivation and CTLA-4 triggering, thereby promoting more dynamic contacts that lead to the preferential generation of effector cells.