Wnt信号通路介导CIP2A沉默诱导肺癌细胞凋亡

目的探讨Wnt信号通路在沉默蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)对肺癌细胞凋亡影响中的作用。方法以H1299细胞为探讨对象,用CIP2A shRNA慢病毒感染后,Realtime PCR和Western印迹检测沉默效果。以Western印迹检测沉默CIP2A后的肺癌细胞中β-catenin、c-myc蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理沉默CIP2A后的肺癌细胞,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 CIP2A shRNA慢病毒感染显著降低肺癌细胞中CIP2A表达水平。沉默CIP2A后的肺癌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,β-catenin、c-myc蛋白水平显著降低(P0.05)。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默CIP2A对肺癌细胞增殖抑制、凋亡促进作用,降低细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,升高细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 Wnt信号通路参与介导沉默CIP2A对肺癌细胞凋亡诱导作用。     

PAK6基因对人乳腺癌放疗敏感性及细胞凋亡影响及机制

目的探讨P21激活的蛋白激酶(PAK)6基因对乳腺癌细胞放疗敏感性及细胞凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-468为研究对象,细胞转染PAK6小干扰RNA(PAK6 siRNA组)和阴性对照序列(siRNA对照组),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放疗敏感性,Western印迹检测细胞中β-连环蛋白(catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3表达水平。结果 siRNA对照组PAK6mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率及细胞中β-catenin、c-myc、酶切Caspase-3蛋白水平与未转染组相比差异无统计学意义(P0.05)。PAK6 siRNA组PAK6 mRNA和蛋白水平均明显低于未转染组,细胞凋亡率及细胞中酶切Caspase-3蛋白水平明显高于未转染组,细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平明显低于未转染组(P0.01)。PAK6 siRNA组放疗敏感性较未转染组显著增加,增敏比为:1.896。结论干扰PAK6表达能够促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路及酶切Caspase-3水平有关。     

ANXA2 siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及ROS水平影响研究

目的探讨膜联蛋白A2(ANXA2) siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及活性氧(ROS)水平影响。方法以非小细胞肺癌细胞株A549为探讨对象,在细胞内转染ANXA2 siRNA和siRNA阴性对照,用qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术测定A549细胞凋亡,Western blot测定A549细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,试剂盒测定A549细胞中己糖激酶(HK)活性、丙酮酸激酶(PK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,生物发光法测定三磷酸腺苷(ATP)含量。结果 ANXA2 siRNA可以下调A549细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达水平。A549细胞转染ANXA2 siRNA后凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平表达上调,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性降低,ROS含量增加,ATP含量降低,与没有转染的A549细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。A549细胞转染siRNA阴性对照后细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平没有变化,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性也没有变化,细胞中ROS和ATP含量也没有变化,与没有转染的A549细胞比较,差异没有统计学意义(P 0. 05)。结论下调ANXA2细胞中ROS水平诱导非小细胞肺癌细胞凋亡并抑制细胞能量代谢。     

miR-101-3p靶向调控SOX9影响肝癌细胞增殖凋亡的研究

目的探讨miR-101-3p对肝癌细胞增殖凋亡的影响及其对靶基因性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y-box 9,SOX9)的调控作用。方法肝癌细胞转染miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimics组)、模拟物阴性对照(mimics control组)、SOX9小干扰RNA(SOX9 siRNA组)、siRNA对照(siRNA control组),同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中miR-101-3p水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、SOX9表达,靶基因预测库预测miR-101-3p靶基因,荧光素酶报告基因鉴定靶基因。结果miR-101-3p mimics能够促进肝癌细胞中miR-101-3p表达,SOX9 siRNA能够抑制肝癌细胞中SOX9的表达。miR-101-3p mimics组细胞凋亡率高达(35.69±5.27)%,细胞存活率只有(76.34±4.63)%,细胞中Cleaved Caspase-3表达增多。靶基因预测库和双荧光素酶报告基因预测并鉴定miR-101-3p的靶基因是SOX9。miR-101-3p mimics能够抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。SOX9 siRNA组细胞中SOX9蛋白表达下降,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞凋亡率高达(29.58±2.58)%,而细胞存活率只有(69.47±5.26)%。结论miR-101-3p能够负调控靶基因SOX9,从而促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖。     

FoxO3a对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究叉头框转录因子O3a(FoxO3a)对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法胆管癌细胞RBE中转染FoxO3a过表达载体,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中FoxO3a mRNA和蛋白水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果转染FoxO3a过表达载体后,RBE细胞中FoxO3a表达水平明显高于未转染的RBE细胞(P0.05),而转染对照载体的RBE细胞中FoxO3a表达水平与未转染的细胞相比,差异无统计学意义(P0.05)。转染FoxO3a过表达载体后RBE细胞A值从0.73±0.12降低至0.52±0.04,细胞凋亡率从(8.36±0.68)%升高至(25.62±2.52)%,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白水平降低,与未转染的细胞相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 FoxO3a表达上调后可以抑制胆管癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,增加Cleaved Caspase-3的活化水平,抑制Wnt信号通路激活。     

YAP调控Wnt信号通路影响肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)对肝癌细胞凋亡的影响。方法 Western blotting方法检测人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449和人正常肝细胞7702中YAP的表达水平。在肝癌细胞中转染YAP小干扰RNA1(YAP siRNA1组)和YAP小干扰RNA2(YAP siRNA2组),同时转染对照siRNA(siRNA-NC组),未转染组只加入转染试剂,培养48 h后,Western blotting检测细胞中YAP水平,筛选出干扰效率较高的YAP siRNA2继续研究。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测活性氧(ROS)水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(C-myc)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449中YAP表达水平均高于人正常肝细胞7702,且在Hep G2细胞中YAP的表达水平最高。YAP siRNA1、YAP siRNA2能够成功干扰肝癌细胞中YAP的表达水平,且YAP siRNA2的干扰效率最高。YAP siRNA2组细胞存活率和细胞中β-catenin、C-myc水平均低于未转染组,凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、ROS水平均高于未转染组(P0.01)。结论干扰YAP表达后能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,Wnt信号通路是其可能的作用机制之一。     

miR-145过表达增强非小细胞肺癌细胞的放疗敏感性

目的探讨miR-145过表达对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌细胞株A549、Calu-3、H460、SPC-A-1及支气管黏膜上皮细胞16HBE中miR-145的表达水平。细胞转染miR-145模拟物(miR-145 mimics)、阴性对照(mimics control),RT-PCR检测转染效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测miR-145过表达、放疗和miR-145过表达联合放疗后细胞的增殖、凋亡能力,细胞克隆实验检测放疗敏感性。Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(酶切Caspase-3)、Wnt信号通路下游靶基因(c-myc)、β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。结果非小细胞肺癌细胞株A549、Calu-3、H460、SPC-A-1中miR-145的表达水平均明显低于支气管黏膜上皮细胞16HBE(P0. 05),且Calu-3细胞中miR-145水平最低,后续选用Calu-3细胞为研究对象。miR-145 mimics有效促进Calu-3细胞中miR-145的表达,而mimics control没有明显作用。miR-145过表达或者放疗均能够抑制Calu-3细胞增殖,促进Calu-3细胞凋亡,促进细胞中酶切Caspase-3的表达,抑制细胞中c-myc、β-catenin的表达,且miR-145过表达联合放疗后细胞存活率最低,凋亡率最高,酶切Caspase-3表达水平也最高,c-myc、β-catenin表达水平最低。miR-145能够增加细胞放疗敏感性,增敏比为1. 363。结论 miR-145过表达能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进非小细胞肺癌细胞凋亡,增加非小细胞肺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路有关。     

PAK1在非小细胞肺癌的表达及对细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨P21蛋白激活激酶1(P-21 activated kinase 1,PAK1)在非小细胞肺癌的表达,以及下调PAK1基因对细胞增殖和侵袭的影响。方法选取非小细胞肺癌患者97例,实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌和癌旁组织中PAK1基因表达,培养非小细胞肺癌A549细胞株,分为PAK1干扰组、阴性对照组和空白组,实时荧光定量PCR检测细胞中PAK1基因表达,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中PAK1、β-catenin、磷酸化β-catenin和MMP-9蛋白表达。结果非小细胞肺癌组织中PAK1 mRNA相对表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=52. 063,P=0. 000);非小细胞肺癌组织中PAK1 mRNA相对表达量与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P 0. 05); PAK1干扰组细胞中PAK1 mRNA相对表达量低于阴性对照组和空白组(P 0. 05); PAK1干扰组细胞48h、72h和96h吸光度A值低于阴性对照组和空白组(P 0. 05); PAK1干扰组侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组(P 0. 05); PAK1干扰组PAK1、磷酸化β-catenin和MMP-9蛋白相对表达量低于阴性对照组和空白组,而β-catenin蛋白相对表达量高于阴性对照组和空白组(P 0. 05)。结论 PAK1在非小细胞肺癌组织中呈高表达,下调PAK1基因表达可抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与β-catenin信号通路有关。     

RNA干扰Gal-3表达抑制胰腺癌细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨RNA干扰半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法将培养的Panc-1细胞随机分为对照组(未处理)、NC组(转染control-si RNA)和Gal-3干扰组(转染Gal-3-si RNA),以小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)技术干扰Panc-1细胞中Gal-3表达后,RT-PCR和Western blot检测干扰效果,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)抗体和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达.结果与对照组相比,NC组中Gal-3 m RNA(0.99±0.08vs 1.01±0.06)和蛋白(0.36±0.03 vs 0.34±0.05)的表达差异不显著(P0.05),而Gal-3干扰组中Gal-3m RNA(0.38±0.02 vs 1.01±0.06)和蛋白(0.10±0.01vs 0.34±0.05)的表达均显著降低(P0.05);Gal-3干扰组细胞增殖能力减弱(24 h:0.55±0.03 vs 0.71±0.05;48 h:0.76±0.05 vs 0.97±0.06;72 h:1.08±0.06 vs1.32±0.09),G0/G1期细胞百分比升高(79.48±1.32 vs71.52±1.15),S期(14.26±1.08 vs 18.24±1.06)和G2/M期(6.21±0.78 vs 10.19±1.52)降低,凋亡能力增强(13.26±2.28 vs 5.82±0.35),与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,Gal-3干扰组中ki67(0.24±0.02 vs 0.96±0.07)、CyclinD 1(0.26±0.03vs 0.88±0.09)和β-catenin(0.42±0.05 vs 0.87±0.05)蛋白的表达水平均明显降低,而Cleaved Caspase-3(0.70±0.06 vs 0.32±0.03)蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);NC组与对照组间各指标差异均无统计学意义(P0.05).结论 RNA干扰Panc-1细胞中Gal-3表达,可抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.     

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

背景:结肠癌为常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。Cullin7定位于染色体6p21. 1,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用q RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌组织、癌旁组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达。以si RNA沉默Cullin7基因,并转染结肠癌HCT116细胞,q RT-PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。以si RNA Cullin7联合Wnt信号通路抑制剂FH-535处理结肠癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。结果:结肠癌组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05)。与对照组相比,si RNA Cullin7 1组、si RNA Cullin7 2组、si RNA Cullin7 3组Cullin7 m RNA和蛋白表达均明显降低(P 0. 05),尤其是si RNA Cullin7 2组。与对照组相比,沉默Cullin7表达后,结肠癌细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。与si RNA Cullin7 2组相比,联合Wnt信号通路抑制剂FH-535后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。结论:Cullin7基因参与了结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡,沉默Cullin7可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

siRNATPM4对肺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨原肌球蛋白(TPM)4小干扰RNA(siRNA TPM4)对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法以人肺癌细胞A549为研究对象,细胞转染TPM4 siRNA(TPM4 siRNA组)、siRNA control(siRNA control组),同时设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48 h后,Western印迹检测细胞TPM4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 siRNA control组细胞中TPM4、Cleaved Caspase-3、Bcl-2表达水平及细胞存活率、细胞凋亡率与对照组相比均无明显差异(P>0.05)。TPM4 siRNA组细胞中TPM4表达水平及细胞存活率均明显低于对照组(P<0.01)。TPM4 siRNA组细胞中Cleaved Caspase-3表达水平及细胞凋亡率均明显高于对照组,而Bcl-2明显低于对照组(P<0.01)。结论 TPM4 siRNA能够抑制肺癌细胞增殖,促进肺癌细胞凋亡。     

沙培林联合SOX9基因siRNA对胃癌细胞生长抑制的机制研究

目的探讨沙培林或SOX9 siRNA对胃癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法人胃癌BGC803细胞分为空白对照组、沙培林组、siSOX9组和沙培林+siSOX9 4个处理组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM) 2000说明,MTT、流式细胞术、Western blotting分别检测细胞活力、凋亡率及SOX9、β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达。结果转染SOX9 siRNA的BGC803细胞SOX9蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。沙培林组和siSOX9组细胞活力降低,凋亡率升高,β-catenin和cyclinD1蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),而沙培林和siSOX9联合使用对细胞活力、凋亡率及β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达影响更显著,且与沙培林组和siSOX9组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论沙培林或SOX9 siRNA均可抑制胃癌细胞活力,诱导细胞凋亡,联合对细胞活力抑制及凋亡促进作用更明显,机制可能与Wnt/β-catenin信号的下调有关。     

DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DEK基因在肝癌中的表达及RNA干扰抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702作为对照,RT-PCR检测人肝癌HepG2、Huh-7、SMMC-7721、SNU-475细胞中DEK mRNA表达;DEK-siRNA转染HepG2细胞,同时转染阴性对照和空白对照,转染48 h后Western blotting检测各组细胞中DEK、Cleaved caspase 3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果各个肝癌细胞中DEK mRNA表达均显著高于正常细胞,差异有统计学意义(P0.01);DEK基因在HepG2细胞中表达最高,选择作为后续研究对象;转染DEK-siRNA后DEK蛋白表达显著降低;DEK-siRNA组细胞存活率及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制肝癌HepG2细胞中DEK基因可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌HuH-7细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌Hu H-7细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法肝癌Hu H-7细胞感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒,qRT-PCR和Western blotting测定下调效果,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡。Western blotting检测激活的Caspase-3(C-Caspase-3)、激活的Caspase-9(C-Caspase-9)、β-catenin、C-myc蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl处理感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒的肝癌细胞,检测细胞增殖、凋亡变化。结果感染LV3-KIAA1199shRNA慢病毒的肝癌Hu H-7细胞中KIAA1199 mRNA和蛋白水平均下降,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9表达水平升高,β-catenin、C-myc蛋白表达水平下降。Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl可以逆转下调KIAA1199对肝癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论慢病毒介导的KIAA1199表达下调通过阻断Wnt/β-catenin信号诱导肝癌Hu H-7细胞增殖抑制和凋亡增加。     

shRNA-Survivin基因对A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的构建shRNA-Survivin慢病毒载体,对肺腺癌A549细胞中Survivin基因表达进行干扰,探讨其对肿瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将A549细胞分成3组,即空白对照组,空白病毒载体对照组和shRNA干扰Survivin慢病毒载体组。采用慢病毒载体构建的方法,采用RT-qPCR和Western-Blot检测凋亡因子Caspase-3和Caspase-9的表达量,采用CCK-8试剂盒检测肺癌细胞的增殖,Transwell小室检测肺癌细胞的迁移,AV-PI凋亡试剂盒检测肺癌细胞的凋亡。结果 (1)慢病毒转染效率较高,以肺癌细胞A549为靶点种子细胞,慢病毒转染率为90%;(2)空白载体病毒组的Caspase-3的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(1. 231±0. 112,n=3),shRNA-Survivin组的Caspase-3的mRNA的相对表达量为(0.121±0. 009,n=3);两组比较具有统计学差异(t=2. 097,P=0. 0219 0. 05),Caspase-9的mRNA表达具有相同的趋势;(3) Caspase-3的蛋白相对表达量为(0. 173±0. 231,n=3),shRNA-Survivin组与空白载体病毒组相比,具有统计学差异(t=3.221,P=0.02410.05);(4)Transwell实验结果,CCK-8检测结果和AV-PI检测结果显示,空白对照组、空白载体病毒组、shRNA-Survivin组三组之间比较具有明显的统计学差异(P0.05)。结论 shRNA干扰Survivin可以有效的抑制肺癌细胞的迁移和增殖,并且提高其凋亡率。     

小RAN干扰Trx1促进大鼠缺血再灌注损伤的星形胶质细胞凋亡、抑制其增殖及作用机制

目的研究硫氧还蛋白(Trx)1在氧糖剥夺(OGD)损伤后对星形胶质细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养原代星形胶质细胞分为对照组、OGD模型组、小干扰(si)RNA-NC组、siRNA-Trx1组,采用携带Trx1的siRNA星形胶质细胞抑制Trx1表达后进行OGD/复氧(R)干预,氧糖剥夺6 h,复氧24 h,对照组为正常培养的星形胶质细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰效果。噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹试验检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、活化的(Cleaved)Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,OGD模型组、siRNA-NC组、siRNA-Trx1组Trx1 mRNA表达水平显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白显著下降(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05);与OGD模型组相比,siRNA-NC组星形胶质细胞的增殖、凋亡及凋亡蛋白水平无显著变化(P0.05),siRNA-Trx1组细胞的增殖显著降低(P0.05),凋亡显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05)。结论 Trx1可促进氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3信号通路有关。     

siRNA沉默Annexin-1基因对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的观察RNA干扰技术沉默Annexin-1基因表达对膀胱癌T24细胞增殖能力的影响。方法针对Annexin-1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞,转染后应用半定量RT-PCR和Western印迹法检测Annexin-1mRNA和蛋白的改变,透射电镜观察细胞凋亡情况,用MTT法检测沉默Annexin-1表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响。结果转染siRNA后膀胱癌T24细胞Annexin-1mRNA和蛋白水平显著下降(P0.05),转染siRNA沉默Annexin-1基因表达后膀胱癌T24细胞出现典型凋亡细胞,增殖能力显著下降(P0.05)。结论 RNA干扰Annexin-1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降,诱导了膀胱癌T24细胞凋亡,并且抑制细胞的增殖。     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。