SOX9对肺腺癌细胞生长影响及机制研究

目的性别决定区Y框蛋白9(SOX9)对肺腺癌细胞生长的影响及机制研究。方法肺腺癌细胞A549转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2,同时转染小干扰RNA阴性对照,qRT-PCR和Western blot检测细胞中的SOX9 mRNA和蛋白,筛选干扰效率较高的小干扰RNA,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白水平。结果转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2后的A549细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平均明显低于没有转染的细胞(P 0. 05),并且转染SOX9小干扰RNA1后的细胞SOX9 mRNA和蛋白水平下调更多,而转染小干扰RNA阴性对照的细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平与没有转染的细胞相比差异没有统计学意义(P 0. 05),后续选用转染SOX9小干扰RNA1后的A549细胞。下调SOX9表达后的A549细胞增殖活性较没有转染的细胞相比明显降低(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9水平升高(P0. 05),β-catenin、c-myc水平降低(P 0. 05)。结论下调SOX9抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞中Caspase-3、Caspase-9活化,抑制细胞中Wnt/β-catenin信号通路激活。     

shRNA干扰卷曲蛋白-7基因对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨抑制卷曲蛋白-7(FZD-7)受体基因对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法实验分3组:空白组(Blank)、阴性对照组(sh NC)、FZD-7干扰组(sh FZD-7)。用sh NC、sh FZD-7转染Hep G2细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡率的变化,Western blotting检测FZD-7、β-连环蛋白(β-catenin)、Pro-caspase-3、cleaved caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、c IAP-1、c IAP-2、Bcl-2、Bcl-x L、Bax、Bad、β-肌动蛋白(β-actin)的表达。结果转染后96 h,sh FZD-7组Hep G2细胞吸光度值(0.97±0.10)较Blank组(1.49±0.06)和sh NC组(1.42±0.05)明显下降(P0.01);流式细胞仪检测细胞凋亡率显示sh FZD-7组(43.90±2.61)%较Blank组(14.12±1.39)%和sh NC组(16.82±1.26)%明显升高(P0.01);灰度分析显示sh FZD-7组cleaved caspase-3蛋白表达量较Blank组和sh NC组明显升高(P0.01);sh FZD-7组β-catenin、XIAP、c IAP-1、c IAP-2、Bcl-2、Bcl-x L蛋白表达量较Blank组和sh NC组明显降低(P0.01);sh FZD-7组Bcl-2或Bcl-x L与Bax蛋白表达量比值(Bcl-2/Bax或Bcl-x L/Bax)与Blank组和sh NC组比较明显降低(P0.05)。结论抑制FZD-7受体基因,可抑制Hep G2肝癌细胞株增殖活性并促进细胞凋亡。这一过程可能与下调凋亡抑制蛋白(IAPs),导致caspase-3的活化增加有关;凋亡相关蛋白Bcl-2家族在此过程中也扮演了重要角色。     

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

FoxO3a对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究叉头框转录因子O3a(FoxO3a)对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法胆管癌细胞RBE中转染FoxO3a过表达载体,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中FoxO3a mRNA和蛋白水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果转染FoxO3a过表达载体后,RBE细胞中FoxO3a表达水平明显高于未转染的RBE细胞(P0.05),而转染对照载体的RBE细胞中FoxO3a表达水平与未转染的细胞相比,差异无统计学意义(P0.05)。转染FoxO3a过表达载体后RBE细胞A值从0.73±0.12降低至0.52±0.04,细胞凋亡率从(8.36±0.68)%升高至(25.62±2.52)%,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白水平降低,与未转染的细胞相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 FoxO3a表达上调后可以抑制胆管癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,增加Cleaved Caspase-3的活化水平,抑制Wnt信号通路激活。     

DEK基因在肝癌中的表达及靶向抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨DEK基因在肝癌中的表达及RNA干扰抑制其表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702作为对照,RT-PCR检测人肝癌HepG2、Huh-7、SMMC-7721、SNU-475细胞中DEK mRNA表达;DEK-siRNA转染HepG2细胞,同时转染阴性对照和空白对照,转染48 h后Western blotting检测各组细胞中DEK、Cleaved caspase 3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果各个肝癌细胞中DEK mRNA表达均显著高于正常细胞,差异有统计学意义(P0.01);DEK基因在HepG2细胞中表达最高,选择作为后续研究对象;转染DEK-siRNA后DEK蛋白表达显著降低;DEK-siRNA组细胞存活率及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组,细胞凋亡率和Cleaved caspase 3蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制肝癌HepG2细胞中DEK基因可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。     

Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

背景:结肠癌为常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。Cullin7定位于染色体6p21. 1,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用q RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌组织、癌旁组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达。以si RNA沉默Cullin7基因,并转染结肠癌HCT116细胞,q RT-PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。以si RNA Cullin7联合Wnt信号通路抑制剂FH-535处理结肠癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。结果:结肠癌组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05)。与对照组相比,si RNA Cullin7 1组、si RNA Cullin7 2组、si RNA Cullin7 3组Cullin7 m RNA和蛋白表达均明显降低(P 0. 05),尤其是si RNA Cullin7 2组。与对照组相比,沉默Cullin7表达后,结肠癌细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。与si RNA Cullin7 2组相比,联合Wnt信号通路抑制剂FH-535后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。结论:Cullin7基因参与了结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡,沉默Cullin7可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Wnt信号通路介导CIP2A沉默诱导肺癌细胞凋亡

目的探讨Wnt信号通路在沉默蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(CIP2A)对肺癌细胞凋亡影响中的作用。方法以H1299细胞为探讨对象,用CIP2A shRNA慢病毒感染后,Realtime PCR和Western印迹检测沉默效果。以Western印迹检测沉默CIP2A后的肺癌细胞中β-catenin、c-myc蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂处理沉默CIP2A后的肺癌细胞,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9、β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 CIP2A shRNA慢病毒感染显著降低肺癌细胞中CIP2A表达水平。沉默CIP2A后的肺癌细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,β-catenin、c-myc蛋白水平显著降低(P0.05)。Wnt信号通路激活剂可以逆转沉默CIP2A对肺癌细胞增殖抑制、凋亡促进作用,降低细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,升高细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平。结论 Wnt信号通路参与介导沉默CIP2A对肺癌细胞凋亡诱导作用。     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

CAV1在人肺动脉成纤维细胞增殖调控中的作用

目的研究小窝蛋白1(CAV1)在缺氧相关肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖调控中的作用。方法将体外培养的人PAFs分为:对照组(C:21%O_2);10%氧浓度组(10%O_2);5%氧浓度组(5%O_2)及2%氧浓度组(2%O_2)进行细胞增殖实验,选取细胞增殖最明显组为缺氧组(H)进行后续实验。并构建CAV1高表达质粒(pCAV1),然后再将PAFs分为对照组(C:21%O_2),缺氧组(H),空白对照组(NC:缺氧+空质粒转染组)和CAV1高表达组(pCAV1:缺氧+pCAV1转染组),采用Western-blot法检测各组细胞中CAV1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法检测细胞增殖情况。结果缺氧能刺激PAFs增殖,并呈浓度依赖性,于2%氧浓度刺激48小时PAFs增殖达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(1.20+0.02 vs 0.54+0.04,P0.01);缺氧组PAFs中CAV1表达下调(1.23±0.04 vs 0.90±0.02,P0.01),cyclin D1(0.19±0.03 vs 1.15±0.06,P0.01)和c-IAP2(0.63±0.04 vs 0.78±0.09,P0.01)表达上调,细胞增殖增加(MTT:0.78±0.04 vs 1.20±0.02,P0.01;PCNA:0.29±0.03 vs 0.54±0.03,P0.01);CAV1在PAFs中高表达后(0.55±0.03 vs 0.90±0.03,P0.01),cyclin D1(0.88±0.02 vs 0.52±0.02,P0.01)和c-IAP2(0.87±0.02 vs 0.72±0.02,P0.01)表达下调,PAFs增殖减少(MTT:1.20±0.02 vs 1.00±0.06,P0.01;PCNA:0.52±0.03 vs 0.38±0.03,P0.01)。结论缺氧能通过下调CAV-1在PAFs中的表达,促进PAFs的增殖、抑制其凋亡。cyclinD1和cIAP2可能是CAV1调控PAFs增殖和凋亡的下游靶点。     

PTEN对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖凋亡的影响

目的探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖凋亡的影响。方法急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat分为对照组(不做处理)、p EGFP组(细胞转染空载体)、p EGFP-PTEN组(细胞转染PTEN过表达载体),RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中PTEN表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,Western印迹检测β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白表达水平。结果对照组、p EGFP组、p EGFP-PTEN组PTEN mRNA水平分别为:1.00±0.06、0.98±0.09、2.14±0.15,PTEN蛋白水平分别为:0.36±0.07、0.37±0.05、1.06±0.11,细胞存活率分别为:(100.00±10.36)%、(100.15±11.97)%、(65.84±7.59)%,细胞凋亡率分别为:(7.69±0.98)%、(7.84±1.32)%、(26.93±2.45)%,ROS水平分别为:1.00±0.13、1.03±0.08、2.95±0.24,β-catenin水平分别为:0.58±0.09、0.56±0.12、0.21±0.05,c-myc水平分别为:0.63±0.08、0.62±0.06、0.29±0.02,酶切Caspase-3水平分别为:0.32±0.07、0.34±0.03、0.97±0.11。结论 PTEN抑制急性T淋巴细胞白血病细胞增殖,促进急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡,Wnt信号通路及ROS水平可能是其作用机制之一。     

YAP调控Wnt信号通路影响肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)对肝癌细胞凋亡的影响。方法 Western blotting方法检测人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449和人正常肝细胞7702中YAP的表达水平。在肝癌细胞中转染YAP小干扰RNA1(YAP siRNA1组)和YAP小干扰RNA2(YAP siRNA2组),同时转染对照siRNA(siRNA-NC组),未转染组只加入转染试剂,培养48 h后,Western blotting检测细胞中YAP水平,筛选出干扰效率较高的YAP siRNA2继续研究。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测活性氧(ROS)水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(C-myc)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449中YAP表达水平均高于人正常肝细胞7702,且在Hep G2细胞中YAP的表达水平最高。YAP siRNA1、YAP siRNA2能够成功干扰肝癌细胞中YAP的表达水平,且YAP siRNA2的干扰效率最高。YAP siRNA2组细胞存活率和细胞中β-catenin、C-myc水平均低于未转染组,凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、ROS水平均高于未转染组(P0.01)。结论干扰YAP表达后能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,Wnt信号通路是其可能的作用机制之一。     

血管内皮生长因子-A siRNA对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中血管内皮生长因子(VEGF)-A表达下调,检测细胞凋亡率变化及pAkt、生成素、caspase-3表达。方法采用脂质体介导将针对靶基因VEGF-A的小片段RNA导入人Hep G2细胞内,用Western印迹和RT-PCR技术检测人Hep G2细胞内VEGF-A、p-Akt、生成素、caspase-3的表达,用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测细胞凋亡。结果细胞转染成功后,VEGF-A siRNA组VEGF-A mRNA表达量显著降低,较RNA干扰组下降80.88%(0.26±0.07 vs 1.36±0.05,P0.01),VEGF-A蛋白表达量显著降低,较RNA干扰组下降75.34%(0.18±0.02 vs 0.73±0.06,P0.01);细胞凋亡率增加,VEGF-A siRNA组较RNA干扰组增高21.96%(28.21%±1.75%vs 6.25%±0.82%,P0.01)。伴随p-Akt和生存素蛋白水平降低和caspase-3表达上调(P0.01)。结论通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中VEGF-A表达下调,可以诱导Hep G2细胞发生凋亡,这可能是通过PI3K/p-Akt/生存素信号转导通路实现的。     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

小RAN干扰Trx1促进大鼠缺血再灌注损伤的星形胶质细胞凋亡、抑制其增殖及作用机制

目的研究硫氧还蛋白(Trx)1在氧糖剥夺(OGD)损伤后对星形胶质细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养原代星形胶质细胞分为对照组、OGD模型组、小干扰(si)RNA-NC组、siRNA-Trx1组,采用携带Trx1的siRNA星形胶质细胞抑制Trx1表达后进行OGD/复氧(R)干预,氧糖剥夺6 h,复氧24 h,对照组为正常培养的星形胶质细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰效果。噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹试验检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、活化的(Cleaved)Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,OGD模型组、siRNA-NC组、siRNA-Trx1组Trx1 mRNA表达水平显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白显著下降(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05);与OGD模型组相比,siRNA-NC组星形胶质细胞的增殖、凋亡及凋亡蛋白水平无显著变化(P0.05),siRNA-Trx1组细胞的增殖显著降低(P0.05),凋亡显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05)。结论 Trx1可促进氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3信号通路有关。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

VEGFsiRNA、bFGFsiRNA对胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达的影响

目的 观察VEGFsiRNA和bFGFsiRNA对胰腺癌sw1990、Panc-1及PCT-3细胞bFGF表达水平的影响.方法 用VEGFsiRNA和bFGFsiRNA处理胰腺癌sw1990、Panc-1及PCT-3细胞,用RT-PCR法检测bFGF mRNA表达变化,用ELISA法检测bFGF蛋白表达变化.结果 EGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞bFGF mRNA相对表达量分别为0.50±0.05、0.81 ±0.09、0.46±0.06,bFGFsiRNA处理后分别为0.08±0.01、0.10±0.04、0.15±0.08,对照组分别为0.42±0.02、0.62±0.03、0.22±0.03.VEGFsiRNA处理后Panc-1、sw1990细胞bFGF mRNA表达强于对照组(P均＜0.05),VEGFsiRNA处理后PCT-3细胞bFGFmRNA表达与对照组相比P＞0.05.bFGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1细胞bFGF mRNA表达弱于对照组(P均＜0.05),bFGFsiRNA处理后sw1990细胞bFGF mRNA表达与对照组相比P＞0.05.VEGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞培养液上清液bFGF蛋白浓度为(490.57±125.23) pg/mL、(77.49±10.07) pg/mL、(13.35±1.63) pg/mL,bFGFsiRNA处理后分别为(142.78±13.95) pg/mL、(11.41±8.14) pg/mL、( 2.26±0.65) pg/mL,对照组分别为(316.29±57.39) pg/mL、(36.44±12.29) pg/mL、(3.87±0.42) pg/mL.VEGFsiRNA处理后sw1990、Panc-1细胞培养液上清液中bFGF浓度较对照组显著升高(P均＜0.05),PCT-3细胞培养液上清液bFGF浓度与对照组相比P＞0.05.bFGFsiRNA处理后PCT-3、Panc-1、sw1990细胞培养液上清液中bFGF浓度较对照组显著降低(P均＜0.05).结论 bFGFsiRNA抑制胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达;VEGFsiRNA上调胰腺癌细胞bFGF mRNA、蛋白表达.     

沉默转化生长因子β1表达与抑制肾小管上皮细胞(HK-2)Notch信号通路的相关性研究

目的探讨沉默转化生长因子β1(TGF-β1)表达与抑制肾小管上皮(HK-2)细胞Notch信号通路的相关性。方法检测TGF-β1在DN的表达;TGF-β1小干扰RNA(TGF-β1-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染HK-2,空脂质体转染细胞为对照,检测各组TGF-β1;将HK-2分为低糖、高糖、siRNA-NC+高糖和TGF-β1-siRNA组+高糖组,检测细胞存活,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达。结果 TGF-β1在DN表达高于正常肾组织(P0.05);TGF-β1-siRNA组TGF-β1表达低于对照组(P0.05);高糖组细胞存活低于低糖组,凋亡率、Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1高于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与高糖组相当(P0.05);TGF-β1-siRNA+高糖组细胞存活高于高糖组,凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1低于高糖组(P0.05)。加入GSI细胞存活、凋亡及Cleaved caspase 3、Notch1和Hes1表达与沉默TGF-β1一致。结论 TGF-β1在DN高表达,高糖能抑制HK-2的存活,促进凋亡,沉默TGF-β1能减弱这种效果,可能与Notch信号通路调控有关。     

miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、ROS水平及PI3K/AKT信号通路的影响研究

目的:探索miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、活性氧簇(ROS)水平及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、NC组、H_2O_2组、miR-182mimics组和miR-182inhibitor组,各组细胞均培养24h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-182的mRNA表达;CCK8法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67和细胞增殖核抗原(PCNA),凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:与对照组比较,H_2O_2组细胞miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9的表达均显著升高(均P0.05);与H_2O_2组比较,miR-182mimics组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著升高,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低(均P0.05),miR-182inhibitor组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著升高(均P0.05)。结论:H_2O_2刺激可降低H9C2心肌细胞miR-182基因表达,过表达miR-182可促进细胞增殖,降低细胞凋亡,激活PI3K/AKT信号通路,其中对细胞增殖凋亡的影响方式是降低ROS含量,上调ki67和PCNA表达,下调Caspase-3和Caspase-9表达;抑制miR-182表达的结果则相反。     

糖尿病大鼠胃平滑肌内质网应激相关蛋白动态变化及其意义的研究

目的观察STZ诱导糖尿病大鼠胃平滑肌内质网应激相关蛋白GRP-78、CHOP、Caspase-12及其效应蛋白Bcl-2、Caspase-3的变化,探讨其在糖尿病胃轻瘫中发生的意义。方法根据STZ诱导6周大鼠出现糖尿病胃轻瘫症状及胃平滑肌细胞出现凋亡的前期实验结果,将SD大鼠分为正常对照组(NC)组和模型6周组(DM6W)。Western blot检测两组胃平滑肌GRP-78、CHOP、Caspase-12的表达,免疫组织化学染色检测两组胃平滑肌Bcl-2、Caspase-3的表达。结果 NC组胃平滑肌GRP-78、CHOP、Caspase-12的相对表达值低于DM6W组[(0.12±0.03)vs(0.23±0.03),(0.11±0.02)vs(0.24±0.03),(0.11±0.03)vs(0.24±0.04),P0.01];NC组胃平滑肌Bcl-2的表达高于DM6W组[(491.91±22.96)vs(159.48±20.29),P0.01];NC组胃平滑肌Caspase-3的表达低于DM6W组[(154.15±10.03)vs(489.45±52.08),P0.01]。结论糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌存在内质网应激,并且参与诱导胃平滑细胞凋亡。