清醒无制动豚鼠经典眨眼条件反射的建立及其习得规律研究

目的 以眼肌电记录法记录在清醒无制动豚鼠建立经典眨眼条件反射(conditioned reflex,CR)并分析其习得规律.方法 采用金属电极埋植技术及简易"随动"气流给气刺激装置,以声音作为条件刺激(conditioned stimulus,CS),气流作为非条件刺激(unconditioned stimulus,US),以眼肌电判断其眨眼行为,在清醒无制动的豚鼠上进行经典眨眼条件反射的训练.结果 可顺利于豚鼠的内眦采集并记录到眨眼肌电信号,动物可成功建立经典眨眼条件反射,其第4天,第7天,第10天的 CR 习得率分别可达31%、61.33%、82.67%,第15大,第20天的 CR 保持率可达到81.33%和82.33%.结论 应用眼肌电记录技术及"随动"给气刺激方法 吸可以在清醒无制动豚鼠建立经典眨眼条件反射实验.操作简单,方法 可靠,成功率高,可用于埘体型较大,不易固定动物的条件性眨眼行为研究.     

树鼩肝移植模型的建立

目的探寻树鼩肝移植模型建立的方法.方法改良"二袖套法"建立树鼩肝移植模型,观察术后树存活率,并行肝脏组织病理学检查.结果定型手术成功率为100%(30/30),树24 h存活率为76.66%(23/30),1周存活率为30.00%(9/30),最长存活时间为11 d.结论通过改良型二袖套法可成功建立树鼩肝移植模型.     

体检发现脂肪肝1829例患者行健康教育效果评价

目的:旨在对体检中发现脂肪肝患者进行健康教育,可起到防治脂肪肝的作用。方法:对体检1 829例职工中,经B超检查为脂肪肝者行健康教育,使其建立合理的饮食习惯和生活方式等。结果:1 829例中诊断为脂肪肝548例(29.96%),经健康教育后,建立了合理的饮食习惯和生活方式,1年后发现脂肪肝检出率为485例(26.52%)(P<0.05)。2009年血脂异常874例(47.79%),1年后血脂异常下降为580例(31.71%)(P<0.01);2009年肝功能异常633例(34.61%),1年后肝功能异常下降为433例(23.67%)(P<0.01)。结论:对体检中检出的脂肪肝患者给与相应的健康教育,可防治脂肪肝。     

SELDI-TOF-MS technique in diagnosis of gastric cardia adenocarcinoma

目的 寻找贲门癌肿瘤标记物并建立诊断模型.筛选提示发生淋巴转移的差异蛋白,为临床早期诊断贲门癌及判断预后提供新方法.方法 CM10蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测101例贲门癌患者及118例正常对照者血清蛋白,Biomarker Wizard 软件和Biomarker Patterns System(BPS)分析得差异蛋白并建立贲门癌诊断分类树,双盲法验证其准确性.进一步分析对比有、无淋巴转移的贲门癌患者血清蛋白指纹图谱,得到差异蛋白.结果 对照分析贲门癌患者和正常对照组的血清蛋白指纹图谱得56个差异蛋白(P<0.05),经BPS软件筛选,以质荷比为5 480.49(P<10-8)的蛋白为主根结点建立贲门癌诊断模型,其灵敏度为95.05%,特异度为95.76%.得到可提示淋巴转移的差异蛋白3 820.87(P<0.05),其灵敏度为84.4%,特异度为82.1%.结论 SELDI-TOF-MS技术可建立有较高灵敏度和特异度的贲门癌诊断模型,筛选出能够提示发生淋巴转移的差异蛋白,有助于贲门癌的早期筛查、诊断和预后判断.     

SELDI-TOF-MS技术在贲门癌诊断中的初步研究

目的寻找贲门癌肿瘤标记物并建立诊断模型。筛选提示发生淋巴转移的差异蛋白,为临床早期诊断贲门癌及判断预后提供新方法。方法 CM10蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测101例贲门癌患者及118例正常对照者血清蛋白,Biomarker Wizard软件和Biomarker Patterns System(BPS)分析得差异蛋白并建立贲门癌诊断分类树,双盲法验证其准确性。进一步分析对比有、无淋巴转移的贲门癌患者血清蛋白指纹图谱,得到差异蛋白。结果对照分析贲门癌患者和正常对照组的血清蛋白指纹图谱得56个差异蛋白(P<0.05),经BPS软件筛选,以质荷比为5 480.49(P<10-8)的蛋白为主根结点建立贲门癌诊断模型,其灵敏度为95.05%,特异度为95.76%。得到可提示淋巴转移的差异蛋白3 820.87(P<0.05),其灵敏度为84.4%,特异度为82.1%。结论 SELDI-TOF-MS技术可建立有较高灵敏度和特异度的贲门癌诊断模型,筛选出能够提示发生淋巴转移的差异蛋白,有助于贲门癌的早期筛查、诊断和预后判断。     

浅谈动脉采血的体会

1动脉采血的目的通过采集动脉血,可做动脉血气分析,主要包括血液酸碱度(pH),动脉血氧分压(PaO2),二氧化碳分压(PaCO2),动脉血氧含量(SaO2),剩余碱(BE)几项值的测定,其可反映采血时刻的呼吸气体交换和酸碱平衡状况,判断急、慢性呼吸衰竭的程     

红管药片中山奈素含量测定研究

目的:建立红管药片中山奈素的含量测定方法。方法:色谱柱:Dikma Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45),流速:1 m L·min-1,检测波长360 nm,柱温:室温。结果:线性范围为7.44~186μg·m L-1(r=0.9999),平均回收率为98.60%,RSD=1.02%,精密度RSD=1.30%(n=6),重复性RSD=1.08%(n=6),稳定性RSD=0.80%。结论:所建立的方法对处方中红管药所含山奈素可准确、快速的定量,可作为红管药片的质量控制方法。     

Kidd血型抗原基因定型技术的建立与初步应用

目的 建立简易的Kidd血型抗原基因分型技术.方法 设计2对引物,分别特异性针对Kidd血型基因(SLC14A1)Jka和Jkb抗原的等位基因(JKA和JKB),建立序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术,基因定型Jka和Jkb抗原,初步用于检测192份无偿献血者DNA样品.全部样品均进行血清学红细胞Kidd抗原鉴定.结果 建立的PCR-SSP技术检测192份DNA样品的基因分型结果均与血清学检测结果一致,样品中发现Jk(a+b-)17例(8.854%),Jk(a+b+)125例(65.104%),Jk(a-b+)50例(26.042%),未发现Jk(a-b-)个体.JKA基因频率为0.414 063(41.4%),JKB基因频率为0.585 937(58.6%).结论 成功建立Kidd血型系统抗原基因分型技术,可用于常规检测.     

新生大鼠海马区神经干细胞分离培养和单细胞克隆系建立及鉴定

目的:分离培养新生大鼠海马区神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),建立NSCs单细胞克隆系。方法:取新生SD大鼠海马组织分离NSCs后无血清技术培养,建立其克隆系并行单细胞传代克隆培养。采用细胞免疫荧光和RT-PCR等技术对NSCs进行鉴定,分子标志物选择Nestin和Sox2。NSCs诱导分化的神经元的鉴定,标示物选择早期神经元特异性微管蛋白(β-tubulin),星形胶质细胞标示物为特异性胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),少突胶质细胞特异性标记蛋白为髓鞘相关蛋白(cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNP)。结果:无血清培养法可维持NSCs生长和促进其增殖。成功建立NSCs单细胞克隆系,传代可获得大量亚克隆NSCs株团。单细胞克隆NSCs球团经早期酶消化结合后期机械吹打法传代,分散为单细胞或类单细胞后,增殖及分化能力依然存在。单细胞克隆系株经Nestin和Sox2细胞免疫荧光或RT-PCR检测均为阳性表达。在加有胎牛血清培养基条件下进行诱导分化,来自单细胞克隆系的细胞株同样可分化为神经元样、星形胶质细胞样和少突胶质细胞样3种神经细胞,即β-tubulin、GFAP、CNP免疫荧光染色分别呈阳性。结论:无血清培养可成功建立新生SD大鼠海马区NSCs单细胞克隆系,并可稳定传代增殖,并在一定条件下可诱导分化为成熟的神经元和神经胶质细胞。     

全身照射技术及其临床应用

对白血病人做骨髓移植(BMT),可提供治愈的机会。大剂量全身照射(TBI)是 BMT 常用的预处理方法。其目的在于:灭活患者体内残存的白血病细胞,以防止复发;灭活淋巴细胞抑制病人免疫机制,以防止免疫排斥。本文建立了全身照射技术和剂量测量方法。于1990年     

胰岛素微乳大鼠结肠给药的药效学研究

目的:建立胰岛素(Ins)大鼠结肠给药实验动物模型,考察胰岛素微乳对高血糖大鼠的药效指标.方法:用链脲佐菌素制备大鼠高血糖模型,并制备了结肠给药大鼠动物模型,分别设立胰岛素生理盐水溶液组(阴性对照组),空白O/W微乳组(阴性对照组),5 IU/kg胰岛素皮下注射组(阳性对照组),胰岛素微乳低剂量组(5/3 IU/kg),中剂量组(5 IU/kg),高剂量组(15 IU/kg),考察高血糖大鼠结肠给药后的降糖效果.结果:用链脲佐菌素制成的高血糖模型稳定可靠,一次性ip 60 mg/kg,5～7 d后可形成稳定的高血糖模型;胰岛素微乳高、中、低剂量组经大鼠结肠给药后均能降低大鼠血糖浓度,并呈剂量依从性,15,5,5/3 IU/kg三剂量使其血糖降低的最大百分率分别为61.4%,44.5%和28.1%.结论:所建立的大鼠结肠给药实验动物模型能够较好地反应药物的疗效,胰岛素微乳可有效降低高血糖大鼠的血糖.     

白庇汤质量标准研究

目的:建立白庇汤的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TCL)对白庇汤中芦丁和黄芩苷进行鉴别;采用高效液相色谱法测定丹皮酚和绿原酸的含量。结果:在硅胶G薄层板上,检出芦丁和黄芩苷。采用迪马-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇:水(45∶55),检测波长:274 nm检测丹皮酚;采用月旭-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相,检测波长为327 nm检测绿原酸,其回收率、线性、重复性均符合要求。结论:所建立的方法简便可行,重现性好,可用于白庇汤的质量控制。     

酶免疫法测定血清幽门螺杆菌特异性免疫复合物

目的建立酶免疫法测定血清幽门螺杆菌特异性免疫复合物(Hp-IC),并探讨其与Hp感染的关系.方法采用链霉亲和素-生物素技术建立夹心式酶免疫法定量测定血清Hp-IC.结果Hp阳性组血清Hp-IC浓度(0.571±0.496)mg/L,阳性率82.6%(199/241),显著高于Hp阴性组(0.033±0.024)mg/L,阳性率19.8%(39/197),P均＜0.01.血清Hp-IC测定,诊断Hp感染的特异性为80.2%,敏感性为82.6%.本法检测灵敏度2μg/L,批内差异2.8%,批间差异4.3%.结论血清Hp-IC与Hp感染密切相关,Hp-IC测定可作为Hp感染诊断的辅助指标之一.     

木蝴蝶的质量标准研究

目的建立木蝴蝶的质量标准。方法鉴别木蝴蝶的性状、显微特征,检查其水分、总灰分、酸不溶灰分;采用薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定木蝴蝶含量。结果 TLC斑点清晰、分离度好;黄芩苷在1.01-5.06μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,其回归方程为:A=2449.5X+125.9(r=0.9994),平均回收率为101%(n=5),RSD为0.70%。结论所建标准可作为木蝴蝶饮片质量控制标准。     

建立人工气道患者肺部感染病原体分析

目的 探讨建立人工气道患者肺部感染病原体及耐药情况,为临床合理应用抗菌药物提供依据.方法 对呼吸重症治疗病房45例建立人工气道机械通气的患者使用纤维支气管镜吸取气道深部分泌物进行培养及药敏试验,并对其结果进行分析.结果 45例患者痰培养结果革兰氏阴性菌201株(86.3%),革兰氏阳性菌26株(11.2%),真菌6株(2.6%);建立人工气道前7 d培养结果为革兰氏阴性菌72株(84.7%),革兰氏阳性菌11株(12.9%),真菌2株(2.4%);建立人工气道后8～30 d培养结果为革兰氏阴性菌129株(87.2%),革兰氏阳性菌15株(10.1%),真菌4株(2.7%).主要细菌对各种常用抗生素均有不同程度的耐药.结论 建立人工气道患者肺部感染以革兰氏阴性菌为主,且通气时间延长,病原体发生变化,细菌的耐药率增加.     

蟾酥商品药材中5-羟色胺含量测定

目的:建立蟾酥药材中5-羟色胺的含量测定方法。方法:HPLC法,色谱柱Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),0.05 mol·L~(-1)磷酸二氢钾缓冲液-甲醇94∶6(V/V),p H 3.5为流动相,柱温30℃,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长296 nm,测定10批蟾酥药材中5-羟色胺含量。结果:10批样品中均检测出5-羟色胺,其含量在0.3926~50.06 mg·g~(-1)。结论:该方法简便、可靠,可作为蟾酥药材质量控制的方法。     

吡咯二硫氨基甲酸酯对幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 本实验通过建立幼兔离体心脏灌注模型,研究吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)对幼兔心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 通过Langendorff离体心脏灌流系统建立幼兔高体心脏灌注模型.离体心脏复跳60min后,取左心室组织测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果 缺血再灌注后,实验组MCA值低于对照组,其差别有统计学意义(p＜0.05),实验组SOD值高子对照组,其差别有统计学意义(p＜0.05).结论 PDTC可减少幼兔未成熟心肌缺血再灌注损伤后氧自由基的产生,减轻幼兔心肌缺血再灌注损伤.     

甘丙肽及其拮抗剂在雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎中的作用

目的探讨丙甘肽及其拮抗物(galantide)对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)模型的影响。方法将55只小鼠随机分为11组,其中胰腺炎6组,建立胰腺炎模型;丙甘肽及其拮抗物治疗干预4组,对照组1组,每组各5只。各组干预前后分别测定其血清淀粉酶、脂肪酶、过氧化物酶(MPO),干预后评定各组胰腺坏死评分并做比较。结果 galantide 204、0 nmol/kg剂量组可不同程度地改善AP的高酶血症、MPO活性及胰腺坏死评分(P<0.05),丙甘肽并没显著影响AP所致的高酶血症和MPO活性及胰腺坏死(P>0.05),galantide 40 nmol/kg延迟治疗组可改善AP的高酶血症及胰腺坏死情况(P<0.05),但对MPO活性无显著影响(P>0.05)。结论丙甘肽以一定方式参与AP的发病过程,而丙甘肽拮抗剂可对急性胰腺炎有一定潜在的临床治疗价值。     

无血清培养概述

自1955年Roux发现神经板可在盐水内生活一段时间后,组织培养技术的发展经历了百年多时间。由于组织培养技术的不断革新,得以建立能在体外长期生存的细胞系(株)。目前全世界已建立的细胞系(株),包括人和动     

RP-HPLC测定香椿叶中芸香苷的含量

目的 建立1种测定香椿叶中芸香苷含量的反相高效液相色谱法,为其内在质量控制提供参考.方法 采用Thermo ODS Hypersil column色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(16:84),流速为1.0mL/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃.结果 在以上色谱条件下,供试品溶液中的芸香苷与干扰成分完全分离,其在0.0104 4～0.261 0 mg/mL范围内线性关系良好(r=1),重复性实验RSD=1.77％(n=6),平均加样回收率为96.9％～98.7％(n=3),RSD为3.56％～4.42％;试验测得2个批次香椿叶中芸香苷的含量分别为(0.673士0.010)mg/g和(0.498士0.005) mg/g.结论 该方法准确,快速,重复性好,可用于香椿叶中芸香苷的含量测定.