米非司酮对早孕绒毛蜕膜组织凋亡调控基因及PRER的影响

目的探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜组织细胞凋亡调控基因及雌、孕激素受体(ER、PR)的影响.方法免疫组化法测定Fas、FasL、Bcl-2、Bax 4种凋亡调控基因在米非司酮组和对照组两组绒毛蜕膜组织中的蛋白表达;分别采用葡聚糖活性炭分离单点饱和分析和免疫组化两种方法测定两组绒毛蜕膜组织中ER、PR含量.结果Fas、Bcl-2表达两组间无明显差异(P＞0.05);FasL表达米非司酮组低于对照组(P＜0.05);Bax在米非司酮组中的表达较对照组增高(P＜0.05);用免疫组化法ER、PR的表达在米非司酮组明显高于对照组(P＜0.05);采用葡聚糖活性炭分离单点饱和分析法测定PR,米非司酮组低于对照组(P＜0.05),ER米非司酮组高于对照组(P＜0.05).结论米非司酮可通过Fas/FasL和Bcl-2/Bax两条途径直接促进早孕蜕膜及滋养细胞凋亡;米非司酮通过与PR竞争性结合,拮抗孕激素,在米非司酮作用时ER、PR表达增高.     

凋亡基因表达与FGR胎盘细胞凋亡的相关性研究

目的:探讨凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况及与胎儿宫内生长受限(FGR)病因的相关性。方法:应用免疫组化法检测凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况。结果:①Bc l-2、Bax的表达强度在FGR组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),P53的阳性率及表达强度在FGR组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);②Bc l-2、Bax、P53的阳性率及表达强度在FGR组中的FGR不伴有PIH组及FGR伴有PIH组两组间差异无统计学意义。结论:①正常孕妇和FGR患者胎盘组织中均有细胞凋亡,但FGR患者胎盘细胞凋亡较多,这可能是引起FGR发生的重要病理过程;②FGR胎盘细胞凋亡可能是非P53依赖性的,由Bax、Bc l-2介导的细胞凋亡。     

胎膜早破凋亡机理的探讨

目的:探讨细胞凋亡调控蛋白Bax、Bc l-2、Fas、Caspase-3在胎膜早破发病机制中的作用,凋亡与感染的关系,及临床的防治意义。方法:收集临产前剖宫产分娩的初产妇(包括足月胎膜早破、足月前胎膜早破及正常对照)胎膜51例,应用免疫组化法检测胎膜中Bax、Bc l-2、Fas、Caspase-3的表达情况,并常规HE染色进行胎膜的组织学检查,和经TUNEL原位标记后精确测定胎膜中细胞凋亡指数。结果:胎膜早破组Bax、Fas、Caspase-3阳性表达率分别为91.18%、88.24%、85.29%,明显高于其对照组58.82%、52.94%、23.53%,差异有显著统计学意义(P=0.018,0.014,0.000),但两组间Bc l-2阳性表达率无差异(P=0.105);胎膜早破组羊膜绒毛膜炎的发生率和细胞凋亡指数亦较其对照组高(P=0.035,0.000)。胎膜组织学证实为羊膜绒毛膜炎的和无羊膜绒毛膜炎的其Bax、Bc l-2、Caspase-3阳性表达率无统计学差异(P=0.846,0.332,0.334),但羊膜绒毛膜炎组Fas阳性表达率显著增高(P=0.039),而且细胞凋亡指数亦高有统计学差异(P=0.000)。结论:胎膜早破发生亦与凋亡有关。无论有无感染,促凋亡蛋白Bax、Fas、Caspase-3在胎膜早破患者胎膜组织中呈显著表达,且Fas还参与炎症反应。基因和环境因素共同作用下的细胞凋亡增加可能是胎膜早破的又一发病机理,凋亡与感染可能是胎膜早破的独立致病因素,亦或协同作用。     

米非司酮对早孕绒毛蜕膜组织凋亡调控基因及PR ER的影响

目的 :探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜组织细胞凋亡调控基因及雌、孕激素受体 ( ER、 PR)的影响。方法 :免疫组化法测定 Fas、 Fas L、 Bcl- 2、 Bax 4种凋亡调控基因在米非司酮组和对照组两组绒毛蜕膜组织中的蛋白表达 ;分别采用葡聚糖活性炭分离单点饱和分析和免疫组化两种方法测定两组绒毛蜕膜组织中 ER、 PR含量。结果 :Fas、 Bcl- 2表达两组间无明显差异( P>0 .0 5 ) ;Fas L表达米非司酮组低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;Bax在米非司酮组中的表达较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ;用免疫组化法ER、 PR的表达在米非司酮组明显高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;采用葡聚糖活性炭分离单点饱和分析法测定 PR,米非司酮组低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,ER米非司酮组高于对照组 ( P<0 .0 5 )。结论 :米非司酮可通过 Fas/ Fas L和 Bcl- 2 / Bax两条途径直接促进早孕蜕膜及滋养细胞凋亡 ;米非司酮通过与 PR竞争性结合 ,拮抗孕激素 ,在米非司酮作用时 ER、 PR表达增高     

妊娠晚期母体外周血与胎儿脐血淋巴细胞凋亡的对比研究

目的:比较妊娠晚期母体外周血与胎儿脐血间淋巴细胞凋亡及其调控基因的表达,探讨妊娠期母体与胎儿在免疫功能方面的差异。方法:采用流式细胞技术分析ICP及正常妊娠妇女外周血及脐血间淋巴细胞凋亡率;以免疫细胞化学染色技术检测两组孕妇外周血及脐血间淋巴细胞上Fas、FasL、Bcl-2的蛋白表达。结果:正常妊娠组脐血淋巴细胞凋亡率显著高于外周血(P<0.05),脐血淋巴细胞上Fas、FasL的表达显著低于母体外周血淋巴细胞(P<0.05),而Bcl-2在两者间无显著性差异;ICP组脐血淋巴细胞凋亡率亦明显高于外周血(P<0.05),脐血淋巴细胞上Fas、Bcl-2的表达显著低于母体外周血淋巴细胞(P<0.05),FasL在两者间无显著性差异。结论:妊娠晚期外周血与脐血间淋巴细胞的凋亡及其调控基因的表达存在差异,而这种差异可能在维持妊娠期免疫耐受的稳定性及移植物抗宿主的排斥反应方面有重要的作用。     

重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

复发性流产患者子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2与复发性流产患者的相关性。方法:选择20例复发性流产患者作为研究组,以下称RAS组,同期正常计划外受孕者20例作为对照组。采用免疫组织化学方法测定各组子宫蜕膜细胞Fas、Bcl-2蛋白的表达。根据阳性表达率和表达强度进行量化评分,并进行相关性分析。结果:RAS组Fas的表达为(4.67±0.59)明显高于对照组(1.31±0.66)(P<0.001),而Bcl-2的表达为(1.76±0.51)明显低于对照组(4.89±0.41)(P<0.001),且两者的表达呈明显负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论:①子宫蜕膜细胞Bcl-2低表达、Fas高表达与复发性流产患者的发生有关。②Fas与Bcl-2在子宫蜕膜细胞中的表达失衡可能是复发性流产患者发生的原因之一。     

促性腺激素释放激素激动剂治疗后子宫肌瘤细胞凋亡调控基因Bcl-2表达的变化

目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotrop in-releasing hormone agonist,GnRHa)对子宫肌瘤及相邻肌层组织细胞凋亡调控基因蛋白Bc l-2的影响。方法:采用免疫组化法测定30例子宫肌瘤患者应用GnRHa(达菲林,3.75 mg/28 d)治疗2~4个月,末次注射4~6周后子宫肌瘤及相邻肌层组织细胞凋亡调控基因蛋白Bc l-2的表达水平,并以30例同期手术的子宫肌瘤患者作对照。结果:GnRHa治疗组子宫及肌瘤体积均明显缩小,子宫体积收缩率为(42.77±12.11)%,子宫肌瘤体积收缩率为(37.65±15.20)%。肌瘤细胞内Bc l-2表达水平明显低于对照组(P<0.01),肌层组织细胞内Bc l-2表达水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫肌瘤细胞内Bc l-2表达水平降低可能是GnRHa缩小子宫肌瘤的重要机制之一。     

原位杂交技术检测子宫内单纯疱疹病毒感染与自然流产的关系

目的探讨单纯疱疹病毒(HSV)感染与自然流产的关系。方法应用非放射性核酸分子原位杂交技术检测56例自然流产者的流产组织或子宫内膜组织中HSVDNA的存在情况,其中40例为流产组织(均可见蜕膜和绒毛组织)、16例为自然流产后子宫内膜;20例同龄人流胎盘组织和20例正常子宫内膜分别作为对照组。结果自然流产后子宫内膜HSVDNA的检出率为56.3%(9/16例),明显高于正常子宫内膜,差异有有显著性(P<0.05);自然流产组蜕膜组织HSVDNA的检出率为47.5%(19/40例),明显高于人工流产组,差异有显著性(P<0.05);胎盘绒毛滋养细胞核内存在HSVDNA,自然流产组有14.7%(5/34例)、人工流产组有5%(1/20例)。结论宫内HSV感染与部分自然流产有关;HSVDNA可进入胎盘,但几率较小。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。     

Bax和Bcl-2在恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘组织中的表达研究

目的:Bax和Bcl-2是重要的凋亡调节因子,本研究主要探讨细胞凋亡与流产的关系。方 法:应用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘、子宫中Bax和Bcl-2的 表达。结果:BaxmRNA在流产胎盘中的表达量明显高于正常妊娠胎盘,在胎盘绒毛滋养层细胞和基 底层蜕膜细胞均有明显表达。Bcl-2mRNA在流产胎盘中的表达量明显低于正常妊娠胎盘,表达模 式与Bax类似。结论:药物可能通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致恒河猴胎盘组织和子宫基 底层凋亡细胞的数量增加,影响胎盘的正常结构和功能,从而增加了流产的危险性。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元Bax、Bcl-2表达的影响

目的:探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,把实验分成两部分:①观察缺氧缺血后3、7、14、28天各组的体重变化以及各组28天内生存率;②观察缺氧缺血前2h,缺氧缺血后2、12、24h,3、7、14、28天各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。每组实验随机分为4组:假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附预处理组(P组)、参附治疗组(SF组)。结果:SF组和P组较C组Bax表达明显下调(P<0.05,P<0.01),而Bcl-2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),生长发育和生存情况明显好于C组。结论:参附改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其生存率;可明显下调新生大鼠HIBD后海马神经元Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白的表达。     

引产分娩胎盘中相关活性物质的表达及其意义

目的:观察不同用药方式中期引产胎盘的结构变化,并检测胎盘中活性物质的免疫组化表达,探讨引产分娩的相关机理。方法:收集妊娠16~28W胎盘组织共25例,分3组:羊膜腔内注射依沙吖啶引产组、注射依沙吖啶并配伍口服米非司酮引产组和正常足月分娩组。取新鲜胎盘,多聚甲醛固定,常规石蜡切片和HE染色;免疫组化SP法检测Bcl-2、Bax、Caspase-9、Fas-L、EGFR、CD68和β-hCG在胎盘的表达特征。结果:用药物引产组胎盘比正常组胎盘表现更严重的组织变性、坏死以及炎性浸润;几种凋亡相关因子的表达显示阳性增强,CD68阳性显示的绒毛Hofbauer细胞较足月胎盘大量增多,EGFR和β-hCG的表达也均明显较正常组活跃。结论:引产的分娩发动可能是药物对胎盘组织造成的严重炎症性损伤及主要引起滋养细胞过度凋亡,最终导致胎盘功能骤然下降的过程。     

Survivin、Stat3在反复自然流产患者绒毛和蜕膜中的表达

目的:通过对反复自然流产(RSA)患者和正常早孕妇女绒毛、蜕膜中Survivin、Stat3的测定,探讨不明原因反复自然流产患者的流产病因和胚胎、胎盘的生长机制。方法:采用免疫组化法检测40例RSA患者及20例对照组的绒毛和蜕膜组织中Survivin、Stat3含量。结果:RSA患者孕早期绒毛中Survivin的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Stat3的表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),二者的表达不存在相关关系(P>0.05);RSA组与对照组蜕膜中Survivin、Stat3的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Survivin过表达可能与反复自然流产有关,而Stat3与反复自然流产无关。     

超声对活鼠胚胎心肌细胞凋亡影响的研究

目的 观察诊断级超声波对活鼠胚胎心肌细胞Bcl-2及Bax表达及其凋亡的影响。方法 采用孕14d的Wistar大鼠36只,分为6组,分别为2.5MHz照射10 min、7MHz照射10 min、10 min对照组、2.5MHz照射40 min、7MHz照射40 min、40 min对照组(7MHz探头,Isppa=227W/cm²,Ispta=385mW/cm²;2.5MHz探头,Isppa=94.5W/cm²,Ispta=15.6mW/cm2)。采用免疫组化检测胎鼠心肌Bax及Bcl-2的表达,用TUNEL法及电镜检测胎鼠心肌细胞的凋亡情况。结果 统计显示同一样本不同胚胎间差异无显著性(P>0.05)。7MHz照射40 min组胎鼠心肌组织Bcl-2(+),Bax蛋白阳性(+),2.5MHz照射40min组胎鼠心肌组织Bcl-2阳性(+),Bax阳性(-),7MHz照射10min组胎鼠心肌组织Bcl-2(+),Bax蛋白阴性(-),2.5MHz照射10 min组胎鼠心肌组织Bcl-2阳性(+),Bax阳性(-),两组对照组两者均为(-);TUNEL试验及电镜显示7MHz照射40 min组较其他组凋亡差异有显著性(P<0.05),其余各组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。结论 较高强度诊断级超声波较长时间辐照可导致胎鼠心肌细胞凋亡,Bcl-2及Bax在该过程中起调节作用,小剂量的超声波可以促进Bcl-2表达来抑制细胞凋亡。     

超微六味地黄汤对孕期被动吸烟胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3的影响

目的研究六味地黄汤超微和传统饮片对胎鼠脑发育不全的干预作用，并从细胞凋亡角度探讨其机理。方法采用孕鼠被动吸烟造成胎鼠脑发育不全，分别给予六味地黄汤超微和传统饮片进行治疗。采用免疫组化法检测Bax、Bcl-2和Casepas’e-3。结果模型组三项指标均明显高于正常组（P〈0．01）；治疗组与模型组相比Bax和Caspase-3明显减少（P〈0．01）；但仍高于正常组（P〈0．01）；治疗组与模型组相比Bcl-2变化不大（P〉0．05）。超微全量组和1／3量组Caspase-3表达较传统组少（分别为P〈0．05和P〈0．01）；超微全量组Caspase-3的表达较超微1／3量组少（P〈0．01）。结论孕期被动吸烟可以导致胎鼠脑Bax、Bcl-2和Casepase-3表达水平升高，六味地黄汤能降低Bax和Casepase-3的表达水平。     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3:F=23.33,P<0.001;Bax:F=60.31,P<0.001;Bcl-2:F=577.8,P<0.001;Cyt-c:F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。