大鼠脑出血后铁超载与二价金属转运体1表达变化的实验研究

目的 观察大鼠脑出血后铁超载状态下二价金属转运体1(DMT1)mRNA的动态表达,探讨铁超载时DMT1的可能作用机制.方法 采用大鼠缓慢注射自体血脑出血模型,Perl法观察不同组别的铁沉积,RT-PCR方法测定DMT1 mRNA表达.结果 脑出血模型各组较同期假手术对照组铁沉积显著增多,且以第7天最多;脑出血第3、7、14天组较同期手术对照组DMT1 mRNA表达显著增高,且以第3～7天表达最高;铁沉积与DMT1 mRNA表达呈显著正相关.结论 脑出血后铁超载可诱导DMT1的表达;DMT1可能参与脑出血后的铁转运过程.     

脑卒中后抑郁大鼠海马和丘脑神经生长因子及其受体的表达变化

目的探讨脑卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)大鼠海马和丘脑神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其高亲和力受体TrkA mRNA和蛋白的表达变化。方法选择健康成年SD大鼠52只,随机分为对照组、抑郁组、脑卒中组和PSD组,每组13只。应用RT-PCR检测各组大鼠造模后第29天海马及丘脑NGF和TrkA mRNA的表达变化;利用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马及丘脑NGF和TrkA免疫阳性细胞数的表达变化。结果各组海马及丘脑均有NGF和TrkA mRNA的表达。PSD组海马NGF mRNA表达较对照组明显降低(0.646±0.264 vs 0.956±0.263,P<0.05);各组TrkA mRNA在海马的表达无统计学差异(P>0.05);各组丘脑NGF和TrkA mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。PSD组海马NGF阳性细胞较对照组明显减少[(14.46±2.64)个vs(19.56±2.63)个,P<0.05];各组丘脑NGF阳性细胞差异无统计学意义(P>0.05);各组海马TrkA阳性细胞及丘脑TrkA阳性细胞数无统计学差异(P>0.05)。结论 PSD大鼠海马NGF mRNA及蛋白表达减少可能与PSD发病相关。     

补肾填精益髓法对脑出血模型大鼠神经保护作用及Notch-1蛋白表达的影响

目的探讨补肾填精益髓法对脑出血(ICH)大鼠神经保护作用及Notch-1蛋白表达的影响,明确其具体作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、补肾填精益髓组、神经节苷脂组、γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组。采用尾动脉注血法制作脑出血大鼠模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)腹腔注射标记脑内增殖细胞,在第3天、第7天、第14天、第28天4个时间点采用免疫组织化学法标记大鼠海马区BrdU/神经元核抗原(NeuN)阳性细胞数;尼色染色法观察大鼠脑出血灶周围组织病理形态结构;Werstern Blot法测定Notch-1蛋白表达情况。结果术后第7天、第14天、第28天,补肾填精益髓组、神经节苷脂组BrdU/NeuN阳性细胞数均高于模型组、DAPT组(P0.01),且补肾填精益髓组BrdU/NeuN阳性细胞数均高于神经节苷脂组(P0.01),以第7天、第14天增殖最明显,随后呈下降趋势;术后第7天、第14天,补肾填精益髓组大鼠Bederson神经功能评分较模型组、神经节苷脂组、DAPT组改善明显(P0.01),至术后第28天Bederson神经功能评分基本降至正常;补肾填精益髓组和神经节苷脂组Notch-1蛋白表达高于模型组、DAPT组(P0.01);在第7天、第14天时,补肾填精益髓组与神经节苷脂组Notch-1蛋白表达上升最明显,且补肾填精益髓组Notch-1蛋白表达高于神经节苷脂组表达(P0.01)。结论补肾填精益髓法可以改善脑出血大鼠神经功能,促进神经干细胞(NSCs)增殖,其机制可能是补肾填精益髓法可通过Notch信号通路诱导尾状核出血区域NSCs增殖,提高Notch-1蛋白表达。     

血红素氧合酶-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义。方法 30只大鼠根据随机数字法分为对照组(正常大鼠)、糖尿病组(糖尿病模型)、氯高铁血红素(hemin)组(糖尿病模型+hemin治疗)。免疫荧光染色观察视网膜HO-1、核因子相关因子(Nrf) 2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)表达,RT-PCR检测大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK mRNA表达,Western印迹测定各组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK蛋白表达。结果免疫荧光染色显示:HO-1为绿色荧光,Nrf2、pERK为红色荧光,对照组大鼠只检测到极少量的HO-1、Nrf2、pERK阳性表达。糖尿病组大鼠HO-1、Nrf2、pERK阳性表达均增加,hemin组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK阳性表达明显增加。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜Nrf2mRNA和Nrf2蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。结论糖尿病大鼠视网膜HO-1水平升高,HO-1水平升高可能通过Nrf2/ERK信号通路对糖尿病视网膜发挥保护作用。     

去铁胺干预对脑出血大鼠血肿周围组织的影响

目的 探讨脑出血后异常积聚的铁离子在血肿周围组织病变中的作用及去铁胺的干预影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、脑出血组(n=60)和去铁胺干预组(n=60),以尾状核注射自体血制作大鼠脑出血模型,观察各组大鼠不同时间点神经功能缺损评分、脑水含量(干湿重法)和血脑屏障通透性(伊文思蓝渗出法)、DNA碎裂(TUNEL染色)以及去铁胺干预的影响.结果 脑出血组大鼠脑出血后1～7 d神经功能缺损评分显著高于假手术组(P＜0.01),血肿周围脑水含量显著增高(P＜0.05),血脑屏障通透性显著增加(P＜0.01),TUNEL阳性细胞数量显著增加(P＜0.05).去铁胺干预组各观察指标与脑出血组呈现相同变化趋势,但神经功能评分显著低于脑出血组(P＜0.05),血肿周围脑水含量显著低于脑出血组(P＜0.05),血脑屏障通透性显著低于脑出血组(P＜0.05),TUNEL阳性细胞数量显著少于脑出血组(P＜0.05).结论 铁离子异常积聚参与了脑出血后血肿周围组织的病理损伤,去铁胺能减轻这一损伤.     

脑出血大鼠脑内脑源性神经营养因子蛋白及mRNA表达变化与意义

目的观察脑出血模型大鼠脑内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和mRNA的分布。方法取健康成年SD大鼠39只,随机分为正常对照组(3只)、假手术组(18只)、模型组(18只)。通过微量注射器向苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4 U建立脑出血模型(模型组),用免疫组织化学方法和原位杂交法分别观察脑出血后2、6 h,1、4、7及14天共6个时间点BDNF蛋白及mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标。以假手术组、正常对照组作对照。结果脑出血后2 h BDNF蛋白主要表达于血肿周围的小胶质细胞,6 h表达开始增高,1天达高峰,部分表达于神经元,以后逐渐降低,到第7天基本恢复到正常水平,14天后仍可见到少量阳性反应极弱的BDNF阳性细胞;在6 h,1、4天3个时间点上,模型组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0.05);而BDNF mRNA主要表达于神经元,1天后达高峰,7天后两者的表达水平继续下降但仍高于正常,14天后降至基础水平,在6 h,1、4天3个时间点上,模型组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。结论脑出血后BDNF蛋白及mRNA的表达呈时段性增高。     

左归丸与右归丸对EAE大鼠APP及GAP-43表达的影响

目的 观察左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠淀粉样前体蛋白(APP)及生长相关蛋白[GAP-43)表达的影响,探讨滋阴与温阳补肾法治疗EAE的可能机制.方法 应用髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86免疫诱导Lewis大鼠建立EAE模型.免疫后第7天、第14天、第28天取大鼠脑白质与脊髓,采用Western-blot和实时荧光定量RT-PCR技术检测APP及GAP-43蛋白及mRNA的表达.结果 免疫后第7天,激素和左归丸均能升高EAE大鼠脊髓中APP和脑白质中APP mRNA的过低表达(P<0.05或P<0.01),且在脊髓中二者对APP的调节优于右归丸(P<0.05);第14天,左归丸显著调节脑白质中APP mRNA的过高表达、脊髓中APP mRNA的过低表达(P<0.05或P<0.01),作用优于右归丸(P<0.05).免疫后第7天,激素与左归丸显著上调EAE大鼠脑白质和脊髓中GAP-43水平(P<0.05或P<0.01),在脊髓中二者作用优于右归丸(P<0.01),右归丸显著下调脑白质中GAP-43 mRNA的表达(P<0.05);第14天,激素与左归丸显著抑制脑白质中GAP-43的过高表达(P<0.05);第28天,激素组与左归丸组脑白质中GAP-43水平低于模型组与右归丸组(P<0.01).结论 左右归丸对EAE大鼠脑白质和脊髓中APP和GAP-43蛋白与基因的表达均具有一定调节作用,且左归丸的作用明显优于右归丸.     

丰富康复训练对脑出血大鼠Slit2表达的影响

目的观察大鼠脑出血后同侧海马区Slit2的表达情况及丰富康复训练的干预效果。方法将66只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组,采用Ⅶ型胶原酶制备诱导尾状核出血模型,模型组又随机分为非干预组和丰富康复训练组,丰富康复训练组大鼠于造模成功次日开始进行干预,各组大鼠分别于24 h、7 d、14 d及21 d时相点行出血侧海马区免疫组化Slit2检测。结果与对照组相比,非干预组、丰富康复训练组大鼠Slit2阳性反应明显增强(P0.01),丰富康复训练组Slit2表达水平明显高于非干预组(P0.01),各组Slit2阳性反应均以第7天最为显著。结论丰富康复训练能显著增强脑出血大鼠Slit2的阳性表达,促进中枢神经系统的修复与再生。     

田黄颗粒对脑出血大鼠脑水肿及水通道蛋白-4 mRNA的影响

目的观察田黄颗粒对脑出血模型大鼠脑含水量、水通道蛋白-4 mRNA、大鼠行为学评分的影响。方法选用雄性SD大鼠,采用自体动脉血制备大鼠脑出血(ICH)模型,随机分为模型组、中药组(田黄颗粒)、西药组(甘露醇)、中西药组(田黄颗粒+甘露醇)。测定各组大鼠术后第1天、第3天、第7天后脑含水量、水通道蛋白-4 mRNA、大鼠行为学评分等。结果在第3天和第7天时,各治疗组脑水肿减轻、水通道蛋白-4mRNA下降、行为学评分降低,均优于模型组(P0.05或P0.01),并且中西药组优于中药组和西药组(P0.05或P0.01)。结论田黄颗粒能降低脑出血大鼠脑水肿,改善神经功能缺损,可能与降低水通道蛋白-4 mRNA表达有关。     

骨形态发生蛋白7对肺纤维化大鼠胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对肺纤维化大鼠肺组织炎症、纤维化程度及转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将雄性Wister大鼠48只随机分为正常对照组、纤维化组、小剂量组和大剂量组,每组12只.气管内灌注博莱霉素A5制作肺纤维化模型.对小剂量组和大剂量组动物,每天分别以100 μg/kg、500 μg/kg剂量腹腔注射BMP-7.各组在制作模型后第14、28天随机处死6只大鼠.HE、Masson染色观察肺组织病理变化,测定组织胶原含量,免疫组织化学测定肺组织中Ⅰ型胶原蛋白及TGF-β1的表达,半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织TGF-β1 mRNA的表达.结果 BMP-7处理后第14、28天肺组织炎症及纤维化程度均低于纤维化组,差异有统计学意义(P＜0.05).BMP-7使14 d、28 d时肺组织胶原含量较同期纤维化组胶原含量减少(P＜0.05).经过BMP-7处理,14 d、28 d时肺组织Ⅰ型胶原和TGF-β1蛋白的表达均较纤维化组减弱(P＜0.05).BMP-7使肺组织TGF-β1 mRNA的表达水平较同期纤维化组降低(P＜0.05).而且BMP-7的上述作用在大剂量时更明显(P＜0.05).结论 在博莱霉素A5诱导的大鼠肺纤维化模型中,BMP-7可以剂量依赖的方式抑制肺组织炎症及纤维化程度,其可能机制可能与BMP-7抑制TGF-β1在肺组织的表达有关.     

大鼠脑出血急性期核因子Nrf2信号通路表达变化及其与继发性脑损伤的关系

目的观察大鼠脑出血(ICH)急性期不同时间点核因子Nrf2信号通路相关因子的表达与继发性脑损伤的关系。方法将120只大鼠随机分为出血组和假手术组,每组60只。采用自体血立体定向注入大脑基底核区,建立大鼠ICH模型,根据ICH后不同时间点,将大鼠随机分为2、8、24 h,3、5、10 d组,各时间点设相应假手术组,每组10只。分别于造模后2、8、24 h,3、5、10 d,检测Nrf2及其下游基因的mRNA及蛋白水平表达的变化,并在相应时间点行神经行为学评价及脑含水量的测定。结果①从ICH后24 h开始,出血组大鼠的前肢抬起的比例均低于假手术组,出血组的右向转角比例均高于假手术组,差异均有统计学意义,P<0.05。②在ICH后24 h,3、5 d,出血组的脑含水量高于假手术组,差异有统计学意义,P<0.05。出血组的脑含水量在3 d达到高峰,为(86.9±5.4)%,此后逐渐降低。③与假手术组比较,Nrf2 mRNA在ICH后2 h至5 d均高于假手术组,2 h达到高峰,差异有统计学意义。Nrf2下游基因血红素加氧酶(HO)、谷胱甘肽-S-转移酶α1(GST-α1)、谷胱甘肽(GSH)及硫氧还蛋白(TRX)mRNA表达亦有不同程度的升高。其中HO-1mRNA表达上调最为显著,ICH后2 h至5 d均高于假手术组,3 d时达高峰,差异有统计学意义。④与假手术组比较,Nrf2蛋白在ICH后2 h至5 d均高于假手术组,24 h达到高峰,相对表达量为0.39±0.05,差异有统计学意义。HO-1蛋白在ICH后8 h至10 d均高于假手术组,3 d达到高峰,相对表达量为0.99±0.08,差异有统计学意义。结论核因子Nrf2信号通路在大鼠ICH急性期被激活,影响下游基因的表达,其中HO-1表达变化与神经行为学、脑含水量变化趋势相近,可能在反映ICH继发性脑损伤程度方面具有重要意义。     

去铁敏治疗大鼠脑出血后脑水肿的疗效观察

目的探讨铁螯合剂———去铁敏不同时间点治疗大鼠脑出血后脑水肿的效果。方法大鼠脑出血建模后,随机分组,并设立对照组,观察每组动物给药前后的神经功能缺损症状及其脑组织的水含量、钠离子含量和铁离子含量的变化。结果脑出血大鼠在不同时间点给予去铁敏治疗均能明显改善大鼠的神经功能缺损症状,且较对照组有显著性差异(P<0.01);同时也能明显降低血肿周围脑组织水和Na+含量。术后24h给予去铁敏治疗对脑组织铁离子含量无明显影响(P>0.05);术后72h小时去铁敏治疗则明显降低脑组织铁离子的含量(P<0.01)。结论去铁敏对大鼠脑出血后脑水肿的治疗有一定效果。     

自发性高血压大鼠脑出血急性期中枢和外周肾上腺素能受体表达与血压调控的相关性研究

目的 观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)脑出血后血压变化以及中枢(脑组织)-肾上腺素能受体(adrenergic receptor,AR)和外周(肾组织)α1A-AR的表达,探讨高血压脑出血急性期α1A-AR和α2A-AR与血压调控的相关性.方法 30只6月龄雄性SHR,随机分为假手术组和脑出血1 d、3 d、7 d和14 d组,每组6只.尾袖法测定血压;尾壳核注入Ⅳ型胶原酶建立脑出血模型;逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学染色法检测α2A-AR和α2A-AR mRNA和蛋白表达.结果 脑出血后1 d时血压为(195.4 ±8.39)mm Hg,显著高于出血前的(177.8±8.69)mm Hg(P=0.00)和假手术组的(184.1±3.76)mm Hg(P=0.002),3 d时为(185.3±9.22)mm Hg,较1 d时下降,7 d和14d时分别为(177.7±5.62)mm Hg和(176.67±6.06)mm Hg,基本恢复至出血前水平.肾组织α2A-AR mRNA和蛋白在脑出血后1 d时分别为(0.91±0.013)和(0.944±0.142)%,高于假手术组的(0.89±0.018)和(0.779±0.103)%,3 d时达高峰,为(0.93±0.015)(P=0.008)和(1.526 ±0.296)%(P=0.010);(3)脑出血3 d时脑组织俚α2A-AR mRNA和蛋白为(0.93±0.020)和(2.64±0.293)%,显著高于假手术组的(0.86 ±0.019)(P=0.001)和(1.070±0.155)%(P=0.020)以及脑出血1 d时的(0.87±0.029)(P=0.000)和(1.629±0.488)%(P=0.023).脑出血1 d组～7 d组血压变化与脑组织α2A-AR mRNA吸光度的相关系数r=-0.509(P=0.031),与脑组织α2A-AR蛋白表达容积分数的相关系数r=-0.473(P=0.047).结论 急性脑出血的血压调控可能与脑组织α2A-AR和肾组织α2A-AR表达上调有一定的相关性.     

大鼠脑出血后血肿周围基质金属蛋白酶2和9及其组织抑制剂1的表达

目的观察大鼠脑出血后血肿周围组织基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、MMP-9）及其组织抑制剂1（TIMP-1）的表达规律,探讨它们与脑出血后脑水肿的关系。方法取成年雄性SD大鼠156只,随机分为假手术组（18只）和脑出血组（138只）,脑出血组再分为出血后1、3、6、12、24、36、48、72h和7d亚组（每组15只）。采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,分别用脑组织伊文思蓝（EB）含量测血-脑屏障通透性,用干-湿重法测定脑组织的含水量,用Western blot法观察血肿周围MMP-2、MMP-9和TIMP-1的表达规律。每组3只大鼠用于透射电镜观察脑组织病理学形态。结果①血肿周围脑组织的含水量和EB含量在造模后1h起开始增高,48h达到高峰,各时点（除外术后7d的脑组织含水量）与假手术组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05～0.01）。②在脑出血后1h,同侧基底核MMP-2开始表达,24h达到高峰,48h前各时点与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,术后48h恢复正常;MMP-9在脑出血后6h开始表达,48h达到高峰,7d前各时点与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,术后7d恢复正常;TIMP-1在脑出血后12～36h表达降低,与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05～0.01）。③同侧基底核脑组织含水量与EB含量（r=0.940,P〈0.01）、MMP-9表达（r=0.913,P〈0.01）、1～24h MMP-2表达（r=0.903,P〈0.05）呈正相关;与1～24hTIMP-1表达（r=-0.922,P〈0.05）呈负相关。EB含量与MMP-2表达呈正相关（r=0.930,P〈0.01）,与1～24hTIMP-1表达呈负相关（r=-0.950,P〈0.05）。④电镜观察显示,大鼠脑出血后48h,基底核区脑组织血管内皮基底膜遭到明显破坏。结论大鼠脑出血后血肿周围组织MMP-2、MMP-9的表达增加而TIMP-1表达减低,使MMPs与TIMPs之间的平衡遭到破坏,基底膜破坏增加,促进脑水肿的形成。     

HBED ligand: preclinical studies of a potential alternative to deferoxamine for treatment of chronic iron overload and acute iron poisoning

We have continued the preclinical evaluation of the efficacy and safety of the hexadentate phenolic aminocarboxylate iron chelator N, N'-bis(2-hydroxybenzyl) ethylenediamine-N, N'-diacetic acid monosodium salt (NaHBED) for the treatment of both chronic transfusional iron overload and acute iron poisoning. We examined the effect of route of administration by giving equimolar amounts of NaHBED and deferoxamine (DFO) to Cebus apella monkeys as either a subcutaneous (SC) bolus or a 20-minute intravenous (IV) infusion. By both routes, NaHBED was consistently about twice as efficient as DFO in producing iron excretion. For both chelators at a dose of 150 micromol/kg, SC was more efficient than IV administration. The biochemical and histopathologic effects of NaHBED administration were assessed. No systemic toxicity was found after either IV administration once daily for 14 days to iron-loaded dogs or after SC administration every other day for 14 days to dogs without iron overload. Evidence of local irritation was found at some SC injection sites. When the NaHBED concentration was reduced to 15% or less in a volume comparable to a clinically useful one, no local irritation was found with SC administration in rats. Because treatment of acute iron poisoning may require rapid chelator infusion, we compared the effects of IV bolus administration of the compounds to normotensive rats. Administration of DFO produced a prompt, prolonged drop in blood pressure and acceleration of heart rate; NaHBED had little effect. NaHBED may provide an alternative to DFO for the treatment of both chronic transfusional iron overload and of acute iron poisoning.     

褪黑素对脑出血大鼠基质金属蛋白酶表达及神经功能的影响

目的观察褪黑素对脑出血大鼠神经功能缺损及血肿周围组织基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。方法将SD雄性大鼠85只,随机分为正常组10只、假手术组25只、模型组25只、褪黑素组25只;后2组建立脑出血模型,后3组随机于12h、1、2、4和7d处理,每个时间点5只。修正神经功能缺损评分(NSS)对各组大鼠进行神经功能评估;透射电子显微镜观察出血侧皮质微血管形态;RT-PCR技术定量分析脑组织MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果褪黑素组1⁷dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h7dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h⁴dMMP-2mRNA水平均逐渐升高,褪黑素组7dMMP-2mRNA明显低于模型组(P<0.05);模型组MMP-9mRNA 2d显著升高,褪黑素组MMP-9mRNA峰值1d出现,7d再次升高,并明显高于模型组(P<0.05)。结论褪黑素能够改善脑出血大鼠神经功能,对脑出血具有保护作用,其机制可能与褪黑素通过调控MMP-2和MMP-9转录,减轻血管源性脑水肿相关。     

球囊损伤对大鼠颈动脉血红素氧合酶-1表达的影响

目的:观察球囊损伤对大鼠颈动脉血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响,以探讨HO-1在血管损伤反应过程中的意义。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白印迹杂交(Western blotting)及免疫组化技术观察大鼠颈动脉球囊损伤后HO-1mRNA水平、蛋白质表达及其蛋白分布的动态变化。结果:正常大鼠颈动脉仅见微量HO-1 mRNA表达,球囊损伤后1 d HO-1 mRNA表达达高峰,4、7和14 d逐渐降低,HO-1蛋白表达与HO-1 mRNA表达基本一致,生成的HO-1蛋白主要分布在血管平滑肌细胞胞质中,并随新生内膜的形成和增厚,由中膜向增厚内膜中迁移。结论:球囊损伤可引起颈动脉HO-1表达增加,提示HO-1为血管自身抗损伤反应机制之一。     

Heme oxygenase-1 overexpression increases liver injury after bile duct ligation in rats

AIM： To investigate the effects of heme oxygenase-1 （HO-1） against oxidant-induced injury caused by bile duct ligation （BDL）.

METHODS： Either cobalt protoporphyrin （CoPP）, a HO-1 inducer, or saline were injected intraperitoneally in male SD-rats. Three days later, BDL or sham-operations were performed. Rats were sacrificed 3 wk after BDL and livers were harvested for histology. Fibrosis was evaluated by sirius red staining and image analysis. Alpha-smooth muscular actin, which indicates activation of stellate cells, was detected by immunohistochemical staining, and q/tokine and collagen- Iα （Col- I α） mRNA expression was detected using RNase protection assays.
RESULTS： Serum alanine transaminase increased 8-fold above normal levels one day after BDL. Surprisingly, enzyme release was not reduced in rats receiving CoPP. Liver fibrosis was evaluated 3 wk after BDL and the sirius red-positive area was found to be increased to about 7.8%. However, in CoPP pretreated rats sirius redpositive areas were increased to about 11.7% after BDL. Collagen-1 α and TGF-β mRNA increased significantly by BDL. Again, this effect was increased by HO-1 overexpression.
CONCLUSION： Hepatic fibrosis due to BDL is not reduced by the HO-1 inducer CoPP. In contrast, HO-1 overexpression increases liver injury in rats under conditions of experimental chronic cholestasis.     

Expression of heme oxygenase-1 in response to myocardial infarction in rats

Heme oxygenase-1 (HO-1) is a heat shock protein catalysing the degradation of heme to yield biliverdin, carbon monoxide and iron. Several recent studies have proposed the stress-inducible HO-1 to participate in cellular protection also in the heart. We, therefore, examined the expression and localization of HO-1 in a rat experimental myocardial infarction model. Male Wistar rats were subjected to left anterior coronary artery ligation or sham-operation and sacrificed at 1 day, 1 week and 4 weeks after ligation. The expression of HO-1 mRNA was assessed by real-time quantitative RT-PCR and the localization of HO-1 protein by immunoconfocal microscopy. At day 1, HO-1 mRNA was increased 3.9-fold in the peri-infarct border area vs sham-operated hearts (P<0.001) and 2.9-fold vs remote areas of the same hearts (P<0.001). At 1 week, HO-1 mRNA levels remained significantly higher (5-fold) in the peri-infarct border area than in sham-operated hearts (P<0.001). In addition, HO-1 mRNA transiently increased 1.6-fold in the remote non-infarcted myocardium vs sham operated hearts (P<0.05). HO-1 mRNA returned to basal levels by 4 weeks. The increase in HO-1 mRNA was accompanied by increased immunoreactivity of HO-1 protein in the vascular walls throughout the myocardium, and in the cardiomyocytes and fibroblast-like cells of the peri-infarct border areas. Cardiomyocytes showed immunoreactivity at the intercalated disc area, and in the sarcoplasmic reticulum as indicated by the striated pattern of staining. The results suggest that the induction of HO-1 may have an important role in the heart during the first days after myocardial infarction.