不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的　探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin,NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法　成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI 组和 NAS 组。采用高眼压法建立RIRI大鼠模型。NAS组按照给药剂量的不同分为NAS低剂量组（5 mg·kg^-1）、NAS中剂量组（10 mg·kg^-1）和NAS高剂量组（20 mg·kg^-1）,造模前后30 min腹腔注射NAS。HE染色法观察各组大鼠视网膜形态学的改变,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL法检测各组视网膜细胞凋亡的变化。结果　HE染色结果显示,NAS中剂量组大鼠视网膜各层细胞排列最整齐,视网膜内层厚度［（53.24±1.68）μm］显著薄于RIRI组［（60.54±2.52）μm］及NAS低剂量组［（56.78±1.78）μm］（均为P<0.01）,NAS中剂量组视网膜神经节细胞数［（1113.65±74.40）个·mm^-2］显著多于RIRI组［（719.89±83.67）个·mm^-2］及NAS低剂量组［（882.09±55.62）个·mm^-2］（均为P<0.01）。免疫组织化学结果示,视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数RIRI组［（246.08±19.23） 个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（196.95±19.83）个·mm^-2、（142.77±18.25）个·mm^-2、（133.10±15.19）个·mm^-2］均显著多于正常对照组［（95.37±10.93）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数量显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。TUNEL检测结果显示,TUNEL阳性细胞数RIRI组［（225.45±18.93）个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（175.06±17.69）个·mm^-2、（108.85±13.41）个·mm^-2、（100.37±13.53）个·mm^-2］均多于正常对照组［（81.98±11.29）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜TUNEL阳性细胞数显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。结论　腹腔注射NAS治疗可减轻RIRI大鼠视网膜细胞凋亡,具有神经保护作用,中剂量NAS治疗方案最佳。     

N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.     

低氧预适应对缺血再灌注损伤大鼠视网膜低氧诱导因子-1α和血红素氧合酶-1表达的影响

目的 观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)后视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的动态变化。方法 取65只Wistar成年大鼠随机分为正常对照组5只,RIRI组30只,HPC+RIRI组30只(HPC后采用高眼压法制成RIRI模型),后两组于RIRI后6 h、12 h、24 h、36 h、3 d、7 d各处死5只鼠。采用尼氏染色观察HPC对各组大鼠视网膜的影响,免疫组织化学法动态观察HPC对RIRI大鼠视网膜HIF-1α、HO-1表达的影响。结果 尼氏染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列整齐紧密;RIRI组大鼠视网膜各层高度水肿,随着时间延长,神经节细胞数量逐渐减少,分布较紊乱、稀疏;HPC+RIRI组与RIRI组比较,各层细胞水肿明显减轻,细胞排列比较规整,神经节细胞数量减少降低,分布较整齐。正常对照组大鼠视网膜组织HIF-1α、HO-1微量表达。RIRI组HIF-1α表达升高,峰值在RIRI后12 h,阳性细胞数为(120.64±5.67)个·mm-2;RIRI后6 h起HPC+RIRI组HIF-1α表达较RIRI组升高,RIRI后12 h达高峰且阳性细胞数为(158.54±4.77)个·mm-2,24 h起逐渐下降,RIRI后7 d时HPC+RIRI组HIF-1α表达仍高于RIRI组;RIRI后RIRI组HO-1表达升高,峰值在RIRI后24 h且阳性细胞数为(129.54±4.58)个·mm-2;RIRI后6 h起HPC+RIRI组HO-1表达较RIRI组升高,RIRI后12 h达高峰且阳性细胞数为(157.56±4.67)个·mm-2,RIRI后24 h仍高表达且阳性细胞数为(150.78±4.97)个·mm-2,此后逐渐下降,RIRI后7 d,HPC+RIRI组仍明显高于RIRI组。与RIRI组比较,HPC+RIRI组RIRI后各时间点HIF-1α、HO-1阳性细胞数均增多,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HPC可促进RIRI大鼠视网膜HIF-1α、HO-1蛋白的表达,减轻视网膜损伤,具有视网膜保护作用。     

N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜 Fas、FasL 蛋白表达的影响

目的　探讨N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin，NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retina ischemia-reperfusion injury，RIRI）大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。方法　取健康成年Sprague Dawley大鼠54只，将大鼠随机分为正常组（6只）、RIRI组（24只）与NAS组（24只）；采用高眼压法建立大鼠RIRI模型，依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6 h、12 h、24 h及72 h四个亚组。NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS（5 mg·kg^-1），RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水。通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化，并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数，采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。结果　HE染色显示，正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰，形态正常，神经细胞排列整齐；RIRI组大鼠再灌注后6 h视网膜各层出现水肿，以神经节细胞层及内核层较显著，神经节细胞数较正常组减少；随后视网膜水肿进一步加重，神经节细胞继续减少；NAS组大鼠在再灌注后6 h、12 h、24 h 视网膜水肿程度较 RIRI组轻，NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较 RIRI组厚，NAS组各时间点神经节细胞数均较 RIRI组多，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。免疫组织化学染色显示，正常组几乎未见 Fas⁺细胞。再灌注后6 h，RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量 Fas⁺细胞；再灌注后12 h，RIRI组视网膜 Fas⁺细胞表达逐渐增多；再灌注后24 h视网膜Fas⁺细胞数达到高峰，棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后 72 h 视网膜 Fas⁺细胞较再灌注后 24 h 减少。NAS组在再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜 Fas⁺细胞数均较 RIRI组各时间点减少，再灌注后24 h，Fas⁺细胞数达较高水平，随后下降，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。正常组视网膜可见 FasL 全层低表达。RIRI组再灌注后 6 h，视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量 FasL⁺细胞；再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多；再灌注后24 h FasL⁺细胞数达高峰，可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后72 h FasL蛋白的阳性表达逐渐减少。NAS组再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜FasL⁺细胞数均少于 RIRI组各时间点阳性细胞数，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达，减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤。     

藏红花素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）时藏红花素对视网膜细胞凋亡数目、凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响，探讨缺血再灌注时藏红花素对视网膜的保护作用机制。方法　选取体质量200~250 g的健康雄性SD大鼠24只，随机分为4组:对照组、模型组、藏红花素低剂量组和藏红花素高剂量组，每组6只。藏红花素低剂量组、高剂量组分别于造模前3 d、30 min定时腹腔注射5 g·L^-1藏红花素5 mg·kg^-1、50 mg·kg^-1。造模成功后24 h处死大鼠并摘取眼球。使用电镜观察各组大鼠视网膜细胞结构，TUNEL染色检测视网膜凋亡细胞数量，免疫组织化学染色法观察凋亡相关蛋白Caspase-3在视网膜中的表达。结果　视网膜TUNEL染色发现，对照组视网膜组织中几乎未发现凋亡细胞的阳性表达，模型组视网膜神经节细胞层和内核层中发现大量棕黄色着色的细胞，其凋亡细胞数为（27.40±0.96）个，藏红花素低剂量组可见神经节细胞层、内核层凋亡细胞数较模型组减少，凋亡细胞数为（8.40±0.41）个，与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）；藏红花素高剂量组凋亡细胞数较模型组和低剂量组明显减少，凋亡细胞数为（4.30±0.47）个，和藏红花素低剂量组相比差异有统计学意义（P<0.01）。对照组大鼠视网膜组织Caspase-3染色阴性，模型组视网膜神经节细胞层可见棕黄色颗粒位于细胞浆内，藏红花素低剂量组Caspase-3蛋白表达量与模型组类似，藏红花素高剂量组Caspase-3蛋白表达量与对照组类似。结论　藏红花素能通过降低Caspase-3蛋白含量及凋亡细胞数，从而有效保护视网膜免受RIRI。     

低氧预适应对缺血再灌注损伤大鼠视网膜促红细胞生成素及活性Caspase-3蛋白表达的影响

目的 观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)后视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)蛋白及活性Caspase-3蛋白表达的动态变化,探讨HPC预防RIRI的机制,为RIRI的防治提供有效的治疗方案.方法 取健康Sprague Dawley成年大鼠随机分为正常对照组(CON组),RIRI组与HPC+缺血再灌注损伤组(HPC组,HPC后采用高眼压法制成RIRI模型),每组根据RIRI时间分为6h、12 h、24h及72 h4个亚组.采用免疫组织化学法动态观察HPC对RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白、活性Caspase-3蛋白表达的影响.结果 CON组大鼠视网膜仅见极少量的EPO+细胞;RIRI后6h,HPC组EPO+细胞数开始增加;RIRI后12h,HPC组EPO+细胞数(171±21)mm-2进一步增加,显著高于RIRI组[(149±20) mm-2,P＜0.05];RIRI后24h,HPC组EPO+细胞数(287±24)mm-2达较高水平并显著高于RIRI组[(238±22)mm-2,P＜0.01];RIRI后72 h,HPC组EPO+细胞数开始下降,但仍显著高于RIRI组(P＜0.05).RIRI后6h,RIRI组活性Caspase-3+细胞数(60±5)mm-2开始增加,显著多于HPC组[(53±5)mm-2,P＜0.05];RIRI后12h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数进一步增加,HPC组活性Caspase-3+细胞显著少于RIRI组(P＜0.01);RIRI后24 h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数达较高水平,HPC组活性Caspase-3+细胞数(578±26)mm-2显著少于RIRI组[(624±25)mm-2,P ＜0.01];RIRI后72 h,HPC组与RIRI组活性Caspase-3+细胞数均开始下降,HPC组Caspase-3+细胞数仍少于RIRI组(P＜0.05).结论 HPC可促进RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白的表达,减轻活性Caspase-3蛋白的表达,从而减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.     

基于JAK2/STAT3通路分析姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响

目的　探讨姜黄素（CUR）对视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,并通过JAK2/STAT3通路探讨其机制,以期为CUR的临床应用提供理论依据。方法　健康雄性成年Sprague Dawley大鼠36只,随机分为假手术（Sham）组、RIRI组与CUR组,每组各12只。RIRI组和CUR组大鼠右眼采用高眼压法建立RIRI模型,Sham组仅将针头刺入大鼠右眼前房,不升高眼压。CUR组大鼠于建模前30 min腹腔注射CUR（100 mg·kg^-1）,RIRI组和Sham组大鼠腹腔注射等剂量生理盐水。造模后24 h,采用HE染色及免疫组织化学染色法观察各组大鼠视网膜形态及视网膜神经节细胞（RGC）数变化,Iba-1/CD16、Iba-1/Arg1免疫荧光双标法检测CUR对RIRI大鼠视网膜小胶质细胞极化的影响,免疫组织化学结合Western blot检测观察CUR对RIRI大鼠RGC及JAK2/STAT3通路信号分子表达的影响。结果　HE染色及免疫组织化学染色结果显示,Sham组大鼠视网膜细胞排列整齐,神经节细胞层见大量Brn-3a⁺细胞（即RGC）;与Sham组相比,造模后24 h,RIRI组大鼠内层视网膜厚度显著增加、RGC数显著减少,而CUR组大鼠内层视网膜厚度较RIRI组显著变薄,RGC数显著多于RIRI组（均为P<0.05）。免疫荧光双标染色结果显示,RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞（M1型小胶质细胞）数较Sham组显著增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺CD16⁺细胞数显著少于RIRI组,但仍多于Sham组（均为P<0.05）;RIRI组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞（M2型胶质细胞）数较Sham组增加,而CUR组大鼠视网膜Iba-1⁺Arg1⁺细胞数显著高于RIRI组（均为P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示,与Sham组相比,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均较Sham组增多,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2⁺、p-STAT3⁺细胞数均显著少于RIRI组（均为P<0.05）。Western blot检测结果显示,Sham组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平较低;造模后24 h,RIRI组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3 蛋白表达显著升高,而CUR组大鼠视网膜p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量均较RIRI组显著下降,但仍高于Sham组（均为P<0.05）。结论　CUR可调控小胶质细胞由M1型向M2型极化,从而减轻大鼠RIRI,具有神经保护作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

姜黄素对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜IL-1β表达的影响

目的 观察姜黄素(CUR)对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,从Toll样受体4/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(TLR4/Caspase-8)通路探讨其机制,为CUR治疗RIRI的临床应用提供科学的理论依据。方法 SPF级健康无眼疾雄性SD大鼠102只,随机分为Sham组(n=10)、RIRI组(n=35)、RIRI+TLR4抑制剂(TAK-242)组(n=11)、RIRI+CUR组(n=35)及RIRI+CUR+TAK-242组(n=11),其中,Sham组、RIRI组及RIRI+CUR组根据建模后时间不同分为建模后6 h、12 h、24 h、72 h及7 d组。采用前房高眼压灌注法建立RIRI模型为RIRI组,Sham组不做特殊处理,RIRI+TAK-242组、RIRI+CUR组、RIRI+CUR+TAK-242组分别于建模前腹腔注射相应药物。免疫组织化学染色检测建模后各时间点各组大鼠视网膜中IL-1β⁺、TLR4⁺ Caspase-8⁺细胞数;建模后12 h, We...     

GPR120通过抑制核因子-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　探讨GPR120对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及可能机制。方法　健康雄性SD大鼠按55 mg·kg^-1腹腔一次性注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,将大鼠随机分成三组:糖尿病组、鱼油预处理组(鱼油1 g·kg^-1每天1次灌胃;鱼油的主要成分为omega-3,omega-3为GPR120通路激活剂)、安慰剂组(玉米油1 g·kg^-1每天1次灌胃),每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组（对照组和糖尿病组大鼠每天1次灌胃等剂量PBS缓冲液）。12周后,气相色谱法检测各组大鼠视网膜组织中二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）含量,HE染色检测RGC密度,免疫荧光染色检测视网膜GPR120蛋白表达,Western blot检测视网膜GPR120、核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白相对表达量。结果　与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显减少（均为P<0.01);与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜组织中DHA、EPA含量均明显增加（均为P<0.01)。GPR120主要分布于RGC层。对照组大鼠RGC密度为(437.06±4.72) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(35.65±0.89)%、(12.42±0.58)%、(13.76±0.08)%;糖尿病组大鼠RGC密度为 (329.75±3.51) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3 蛋白相对表达量分别为(24.14±0.46)%、(38.94±0.45)%、(25.14±0.45)%;鱼油预处理组大鼠RGC密度为(412.44±3.62) 个·mm^-2,GPR120、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量分别为(31.59±0.77)%、(18.11±0.58)%、(20.14±0.61)%。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显增加,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显降低;与糖尿病组相比,鱼油预处理组大鼠视网膜NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达量均明显降低,RGC密度、GPR120蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01)。糖尿病组与安慰剂组相比,各指标差异均无统计学意义(均为P＞0.05)。结论　GPR120激活对糖尿病大鼠RGC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。     

葡萄籽原花青素对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin extract，GSPE）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）的保护作用及其机制。方法　将120只大鼠分为假手术组（Sham组，灌胃生理盐水）、模型组（RIRI组，眼内灌注加压法制备，灌胃生理盐水）及GSPE低、中、高剂量组（GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组，灌胃0.13 g·kg^-1 GSPE、0.25 g·kg^-1 GSPE、0.50 g·kg^-1 GSPE）、阳性对照组（α-LA组,灌胃100 mg·kg^-1 α-硫酸锌）。采用苏木精-伊红（HE）染色观察各组大鼠视网膜组织形态学变化情况；ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、iNOS、白细胞介素-6（IL-6）水平，氮蓝四唑显色法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性；双抗体夹心法检测血清丙二醛（MDA）水平，铁离子还原法检测活性氧（ROS）水平；TUNEL法检测各组大鼠视网膜组织神经细胞凋亡；免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中核因子E2-相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、Caspase-3表达情况；Western blot法检测各组大鼠视网膜组织中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、p-ERK1/2表达情况。结果　GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组、RIRI组和Sham组视网膜厚度分别为（139.31±11.43）μm、（127.05±12.73）μm、（113.16±13.25）μm、（110.58±13.47）μm、（161.48±10.26）μm、（92.35±16.54）μm,Nrf2蛋白阳性表达率分别为（29.93±4.21）%、（34.06±5.17）%、（43.12±7.23）%、（45.35±7.46）%、（11.86±3.19）%、（52.27±8.36）%，ERK1/2蛋白磷酸化水平分别为0.41±0.05、0.62±0.07、0.89±0.09、0.92±0.05、0.23±0.04、1.16±0.25，RIRI组与Sham组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05）， GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组与RIRI组比较，差异均有统计学意义（均为P<0.05），且GSPE表现出剂量依赖性。与Sham组相比，RIRI组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著升高，HO-1阳性表达率、SOD水平显著降低（均为P<0.05）；与RIRI组相比，GSPE-L组、GSPE-M组、GSPE-H组、α-LA组神经细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、TNF-α、IL-6、iNOS、MDA、ROS水平显著降低，HO-1阳性表达率、SOD水平显著升高，且GSPE表现出剂量依赖性剂量依赖性（均为P<0.05）。结论　GSPE能够抑制视网膜组织神经细胞凋亡，保护视网膜组织，其作用机制可能与ERK/Nrf2/HO-1通路活化有关。     

重组碱性成纤维细胞生长因子通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)的保护作用。方法　雄性SD大鼠40只，随机分成对照组、糖尿病组、rbFGF组、rbFGF+DAPT组(DAPT为Notch1通路的特异性拮抗剂)，每组10只。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 诱导糖尿病模型。模型诱导成功后，rbFGF组给予rbFGF 10 μL(200 U)玻璃体内注射给药，rbFGF+DAPT组在给予rbFGF基础上加用DAPT(10 μmol·L^-1)。注射12周后，HE染色检测RGC密度，免疫组织化学染色检测神经元再生相关蛋白GAP-43、Notch1蛋白表达，Western blot检测GAP-43、Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3相对表达量。结果　与对照组RGC密度(433.49±6.02)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(8.96±0.26)%、Notch1阳性率(45.04±0.46)%及Caspase-3 (27.91±0.63) %蛋白表达相比，糖尿病组RGC密度(328.35±6.43)mm^-2，Notch1荧光强度(31.66±0.40)%蛋白表达明显降低，GAP-43荧光强度(13.66±0.52)%、Caspase-3 (48.91±0.64)%蛋白表达明显增加(均为P<0.05)；而与糖尿病组相比，rbFGF组RGC密度(425.30±7.98)个·mm^-2，Notch1阳性率(41.76±0.62)% 及GAP-43荧光强度(33.05±0.37)%蛋白表达明显增加，Caspase-3 (28.86±0.71)%蛋白表达明显降低(均为P<0.05)；而rbFGF+DAPT组RGC密度(324.91±8.22)个·mm^-2，GAP-43荧光强度(14.27±0.64)%、Notch1阳性率(30.40±0.82)%及Caspase-3 (47.63±0.68)%蛋白表达均无明显变化(均为P>0.05)。结论　rbFGF可上调糖尿病状态下视网膜GAP-43蛋白表达，下调Caspase-3蛋白表达，进而提高RGC的存活，其机制可能与激活Notch1信号通路有关。     

桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用

目的　探讨桦褐孔菌多糖经Nrf2信号通路对糖尿病大鼠视网膜组织氧化应激和炎症反应的抑制作用。方法　选取12周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组:正常对照组10只、糖尿病组10只、IOP组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1）10只和抑制剂组（给予大鼠桦褐孔菌多糖300 mg·kg^-1+锌原卟啉20 mg·kg^-1）10只。除正常对照组外,其余大鼠均采用一次性腹腔注射10 g·L^-1链脲佐菌素（60 mg·kg^-1）制作糖尿病大鼠模型,桦褐孔菌多糖采用灌胃法给药;抑制剂组在桦褐孔菌多糖灌胃前24 h将锌原卟啉经腹腔注射给大鼠。正常对照组和糖尿病组灌胃相同体积的生理盐水,并于12周后禁食不禁水12 h后进行实验。将分离到的新鲜视网膜,石蜡包埋,切片,用于HE染色和免疫组织化学染色。检测视网膜样品组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）含量;采用HE染色观察视网膜形态并检测视网膜神经节细胞密度;免疫组织化学染色观察细胞HO-1阳性染色情况;采用Western blot法检测视网膜HO-1、Nrf2和COX-2蛋白的表达。结果　造模后12周,糖尿病组、IOP组、抑制剂组大鼠体质量均低于正常对照组,血糖浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。造模后,糖尿病组大鼠视网膜组织中SOD、GSH的含量均明显低于正常对照组(均为P<0.01);MDA含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。IOP组视网膜组织中SOD、GSH含量高于糖尿病组及抑制剂组,MDA含量显著低于糖尿病组及抑制剂组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。正常对照组、糖尿病组、抑制剂组和IOP组视网膜神经节细胞密度分别为（2300±100）个·mm^-2、（1400±100）个·mm^-2 、（1505±95）个·mm^-2、（2250±95）个·mm^-2。Western blot结果显示:糖尿病组HO-1、Nrf2及COX-2蛋白的表达均高于正常对照组（均为P<0.01）。IOP组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达高于糖尿病组,COX-2蛋白的表达低于糖尿病组（均为P<0.01）;抑制剂组大鼠视网膜组织中HO-1、Nrf2蛋白表达低于IOP组,COX-2蛋白的表达高于IOP组,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。结论　桦褐孔菌多糖能够通过激活Nrf2通路降低糖尿病大鼠视网膜氧化应激及炎症反应。     

色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子（pigment epithelial-derived factor,PEDF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）模型中PEDF、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用。方法　绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的慢病毒（lentivirus,LV）为载体,将PEDF基因以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况。选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组（N组）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）治疗组（PBS组）、hUCMSCs治疗组（M组）及 PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组（P组）;N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予 PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗。5 d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜 PEDF和VEGF的mRNA表达情况。结果　荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％。RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量（4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测结果显示,转染后 PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量［（83.09±7.58）μg·L^-1］明显高于hUCMSCs［（12.30±1.24）μg·L^-1］,差异有统计学意义（P<0.05）。尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5 d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组高于M组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗5 d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;P组厚于M组。RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA 表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF 表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用。     

藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤小鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制研究

目的　研究藏红花素对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及其机制。方法　将144只C57BL/6小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、藏红花素治疗组。模型组和藏红花素治疗组小鼠建立RIRI模型,藏红花素治疗组小鼠造模前30 min腹腔注射50 mg·kg^-1藏红花素。RIRI后14 d,视网膜铺片染色比较各组小鼠RGC密度差异。RIRI后24 h,HE染色比较各组小鼠视网膜内层厚度差异。于RIRI后不同时间点（0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h）取各组小鼠视网膜组织,通过多重基因定量分析系统检测NLRP3、ASC、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA的表达变化。RIRI后6 h和12 h取各组小鼠视网膜组织,Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达,ELISA检测IL-1β蛋白的含量,并对比分析。结果　小鼠RIRI后14 d,视网膜铺片染色结果显示,藏红花素治疗组较模型组小鼠RGC密度增加约18.5%（P<0.05）。RIRI后24 h,HE染色结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜内层厚度较模型组显著降低（P<0.01）。多重定量分析系统检测结果显示,RIRI后6 h、9 h及12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β mRNA表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中Caspase-1以及IL-1β蛋白表达较模型组均显著降低（均为P<0.05)。RIRI后6 h、12 h,模型组小鼠视网膜组织中NLRP3、ASC mRNA和蛋白表达与假手术组相比无显著变化（均为P>0.05)。ELISA检测结果进一步证实,RIRI后6 h和12 h,藏红花素治疗组小鼠视网膜组织中IL-1β蛋白含量较模型组均显著降低（均为P<0.05)。结论　藏红花素通过抑制Caspase-1和IL-1β表达保护RIRI小鼠RGC。     

外源性硫化氢调节视神经萎缩相关蛋白1（OPA1）表达对视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨外源性硫化氢（H₂S）对急性高眼压模型诱导视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠模型的作用和机制。方法　建立SD雄性大鼠急性高眼压模型（前房加压法）:通过自制的升眼压装置维持120 mmHg（1 kPa=7.5 mmHg）眼压,1 h后解除压力造成RIRI。硫氢化钠（NaHS）作为提供外源性H₂S的供体,随机把52只健康无眼疾的SD雄性大鼠分为对照组（4只）、RIRI组（24只）及NaHS干预组（24只;连续5 d大鼠腹腔内注射NaHS液,造模前15 min再次给药）。后两组再分为造模后 1 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h 6个时间点（n=4）。TUNEL法检测各组大鼠视网膜细胞凋亡指数,qPCR检测视网膜中视神经萎缩相关蛋白1（optic atrophy 1,OPA1）mRNA表达,Western blot检测各组大鼠视网膜细胞胞质以及线粒体中OPA1、CytC蛋白的表达,透射电镜观察各组线粒体形态。结果　与对照组比较:细胞凋亡指数除NaHS干预组造模后1 h（0.226±0.01）差异无统计学意义外（P＞0.05）,RIRI组和NaHS干预组均增加（均为P<0.05）,两组视网膜中OPA1 mRNA表达均下降（均为P<0.05）,线粒体内OPA1和CytC的蛋白表达均下降（均为P<0.05）,细胞质内均增加（均为P<0.05）。透射电镜下RIRI组和NaHS干预组线粒体肿胀,可见细胞质空泡及自噬小体。与RIRI组比较:NaHS干预组细胞凋亡减少（P<0.05）;视网膜OPA1 mRNA表达从造模后6 h开始均高于RIRI组（均为P<0.05）,线粒体内OPA1和CytC表达从造模后24 h开始均高于RIRI组（均为P<0.05）;在细胞质内OPA1和CytC表达均低于RIRI组（均为P<0.05）;NaHS干预组各时间点线粒体损伤减轻。结论　H₂S可能通过调节OPA1的表达与分布来减轻RIRI,且开始作用时间为造模后24 h。     

青少年不同程度高度近视患者视网膜微血管变化情况分析

目的　探讨青少年高度近视（HM）和超高度近视（SHM）患者视网膜微血管的变化。方法　收集2021年1月至2021年11月在聊城爱尔眼科医院就诊的37例（64眼）近视青少年患者进行分析。根据平均等效球镜度(MSE)和眼轴长度(AL),将受试者分为HM组(23例41眼,-9.0 D< MSE≤-6.0 D,25 mm≤AL≤27 mm)和SHM组(14例23眼,MSE≤-9.0 D,AL>27 mm)。 将黄斑中心凹 6 mm 范围内划分为以黄斑中心凹为中心的3个同心圆,直径为 1 mm 的黄斑中心凹、1~3 mm 的内环区、3~6 mm 的外环区,应用光学相干断层扫描血流成像(OCTA)对3个区域的浅层视网膜血管长度密度（SRVD）、浅层视网膜血管灌注密度（SBPD）和直径6 mm完整图像（整体黄斑区）的SRVD和SBPD及其内环区和外环区各个象限的患者SRVD和SBPD进行分析,并对两组患者视网膜厚度和黄斑中心凹无血管区（FAZ）面积进行分析。结果　SHM组患者整体黄斑区、黄斑中心凹、内环和外环的SRVD分别为（15.63±1.91）mm^-1、（4.99±3.05）mm^-1、（14.09±2.71）mm^-1和（16.49±1.78）mm^-1,HM组患者整体黄斑区、黄斑中心凹、内环和外环的SRVD分别为（16.94±1.30）mm^-1、（7.46±2.96）mm^-1、（16.18±2.12）mm^-1和（17.52±1.15）mm^-1,两组患者间的各区域SRVD比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）;SHM组患者整体黄斑区、黄斑中心凹、内环和外环SBPD分别为（37.33±4.87）%、（11.01±7.07）%、（32.60±6.69 ）%和（39.50±4.92）%,HM组患者整体黄斑区、黄斑中心凹、内环和外环SBPD别为（40.57±3.26）%、（15.95±6.68）%、（37.77±5.24）%和（42.33±2.89）%,两组患者间各区域SBPD比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）;两组患者间内环和外环各象限比较,除外环区鼻侧和下方SRVD和SBPD比较差异均无统计学意义（均为P>0.05)外,其余内环区和外环区各象限SRVD和SBPD比较差异均有统计学意义 (均为P<0.05)。 SHM组和HM组患者各区域视网膜厚度和FAZ面积比较差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　SHM患者黄斑区视网膜SRVD和SBPD明显低于HM患者,而视网膜厚度和FAZ保持稳定。