基于网络药理学和分子对接对金丝桃苷抗肝癌作用机制

目的 采用网络药理学的方法，对金丝桃苷抗肝癌的作用机制进行探讨。方法 使用过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、药物基因相互作用数据库（DGIdb）、毒性与基因比较数据库（CTD）及SwissTargetPrediction数据库预测金丝桃苷的作用靶点。利用基因数据库（GeneCards）、在线人类孟德尔遗传病数据库（OMIM）等5个数据库，获得肝癌疾病相关靶点。二者取交集，即金丝桃苷抗肝癌作用靶点。采用在线注释及可视化整合分析工具（DAVID v2021q4）进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。Cytoscape 3.6.1软件构建作用靶点蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，筛选出核心作用靶点，并对金丝桃苷与核心作用靶点亲和力进行分子对接验证。细胞活力实验观察金丝桃苷抗肝癌的作用；划痕实验观察金丝桃苷对肝癌细胞迁移的作用；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测金丝桃苷对关键靶基因胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、丝裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）mRNA及蛋白表达的影响。结果 共获得金丝桃苷抗肝癌的相关基因45个，并筛选出核心靶基因6个。KEGG途径分析富集的信号通路包括凋亡信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路及癌症信号通路等。分子对接显示核心靶基因Caspase-3、TNF、雌激素受体1（ESR1）、MAPK3、过氧化氢酶（CAT）及环加氧酶2（PTGS2）与金丝桃苷亲和力较好，尤其与Caspase-3与MAPK3具有强烈的结合活性。另外细胞实验显示，与空白组比较金丝桃苷能减低肝癌细胞活力（P<0.05），抑制肝癌细胞迁移，同时升高Caspase-3 mRNA表达（P<0.05），降低MAPK3 mRNA表达（P<0.05）。结论 金丝桃苷抗肝癌作用通过影响Caspase-3、TNF、ESR1、MAPK3、CAT、PTGS2等核心靶点，共同干预凋亡信号通路、TNF信号通路及癌症信号通路等，以达到抗肝癌的作用。     

基于网络药理学和实验验证探讨香连化浊方对慢性萎缩性胃炎的作用机制

目的 基于网络药理学及动物实验探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎（CAG）的作用机制,为临床推广应用提供科学依据。方法 基于网络药理学预测得到香连化浊方治疗CAG的可能作用靶点和通路,采用水杨酸钠、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）及饥饱失常多因素诱导大鼠CAG模型,给予香连化浊方和摩罗丹干预60 d。给药结束后处死大鼠,苏木素-伊红（HE）法观察各组胃黏膜组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELSIA）检测大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量;免疫组织化学法（IHC）检测各组胃黏膜B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）家族抗凋亡因子（Bad）、细胞抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达含量。结果 最终获得香连化浊方潜在活性成分241种,核心靶点53个。香连化浊方可影响细胞增殖凋亡、炎症反应、DNA代谢过程的调控、细胞对氧化还原的反应等多个生物过程,影响磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路、TNF信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、癌症及癌症相关等多个信号通路。动物模型验证结果,香连化浊方能够降低CAG大鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-1β、VEGF水平;降低胃组织中Bad、Bcl-2蛋白表达水平。结论 香连化浊方可通过参与细胞增殖、凋亡和炎症反应等生物过程,调控PI3K/Akt信号通路,改善CAG胃黏膜损伤。     

巴戟天中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运

目的 研究巴戟天中的有效成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在人源结肠癌细胞Caco-2单层模型中的吸收特性。方法 通过细胞培养技术建立Caco-2细胞单层模型,以细胞形态学特征、细胞跨膜电阻等指标验证和筛选模型。考察不同pH、不同质量浓度的水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖对Caco-2细胞活力的影响,以确定给药pH和质量浓度。通过Caco-2细胞转运实验探究药物质量浓度、作用时间与P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖吸收转运的影响。采用高效液相色谱法（HPLC）测定水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的累积转运量。结果 水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在Caco-2细胞单层模型中吸收良好,三者低质量浓度的双侧表观渗透系数（P_app）明显大于中、高质量浓度;加入盐酸维拉帕米后,三者的P_app变化不大,说明这3个成分的小肠吸收不需要载体。去乙酰车叶草苷酸的液相色谱图中存在少量水晶兰苷,说明去乙酰车叶草苷酸存在首过效应。结论 巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖3个特征性成分在跨膜转运过程中均以被动转运为主,且3个成分都存在自身质量浓度抑制现象。     

饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天主要化学成分的含量差异分析

目的 考察目前市场上的饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中主要化学成分的含量差异。方法 在主要产区和国内主流药材市场上,收集饮片巴戟天41批、巴戟肉32批、盐巴戟天10批;在前期对巴戟天药材中糖类成分研究的基础上,利用超高液相色谱飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术鉴别饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中的主要的差异成分,利用UPLC对主要成分含量进行测定,并结合热图对三者的主要化学成分的含量进行差异分析。结果 饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天三者的主要成分有显著差别,表现在果糖、葡萄糖、蔗糖以及低聚糖GFn的含量及种类两方面。巴戟肉和盐巴戟天中10种低聚糖GFn（n=2~11）的含量均分别低于饮片巴戟天中相应成分的含量（P<0.01）,巴戟肉中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均高于巴戟天和盐巴戟天中相应成分的含量,差异极显著（P<0.01）。饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中水晶兰苷的质量分数分别为42.6,39.8,32.3 mg·g^-1,其中巴戟天与盐巴戟天中的含量差异显著（P=0.031）;各批次的巴戟天和盐巴戟天中耐斯糖的质量分数均高于4.0%,高于2015年版《中国药典》（简称“药典”）标准的要求;而巴戟肉中耐斯糖的平均质量分数为14.7 mg·g^-1,只有少数批次的巴戟肉符合药典要求。结论 蒸制使巴戟天中大部分的低聚糖转化成了果糖、葡萄糖、蔗糖;盐制使巴戟天中的各低聚糖和水晶兰苷的含量均显著降低,但是,各低聚糖含量降低的程度远小于巴戟肉。巴戟天和盐巴戟天的耐斯糖含量符合药典质量要求,巴戟肉中耐斯糖含量低于药典中限量要求。建议开展巴戟天药典标准的提升和修订,以保持药典的科学性、先进性和适用性,增强药典对巴戟天药材质量控制的导向作用。该研究结果为饮片巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天的质量标准修订及其功效物质基础研究提供了参考依据。     

芍药苷干预Hippo信号通路诱导非小细胞肺癌凋亡的机制

目的 观察芍药苷诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用,并探讨其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）检测不同浓度芍药苷（2.5、5、10、20、25 μmol·L^-1）对H1299、H292、A549细胞增殖的抑制率,筛选合适药物浓度及实验细胞。克隆形成实验检测芍药苷对肺癌细胞抑制作用。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）染色,流式细胞仪检测芍药苷对细胞凋亡的影响。在合适药物浓度干预下,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）水平变化,同时测定缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及Hippo信号通路分子表达情况。结果 与空白组比较,芍药苷对人肺癌H1299、H292和A549细胞的生长均具有显著抑制作用（P<0.01）;芍药苷可显著诱导A549细胞出现凋亡现象（P<0.01）,同时降低Bcl-2/Bax（P<0.01）,并显著升高cleaved Caspase-3蛋白的表达（P<0.01）。与空白组比较,芍药苷组A549细胞中的HIF-1α、具有PDZ基序的辅转录激活子（TAZ）、大肿瘤抑制激酶1（LATS1）、单极纺锤体结合蛋白1（MOB1）、Yes激酶相关蛋白（YAP）的表达水平均显著降低（P<0.01）,p-LATS1、p-MOB1、p-YAP表达显著升高（P<0.01）。同时对磷酸化哺乳动物不育系20样激酶1（p-MST1）及MST1的表达水平没有显著影响,差异无统计学意义。结论 芍药苷可通过改善细胞缺氧状态、抑制异常激活的Hippo信号通路诱导促进非小细胞肺癌凋亡,从而达到抗肿瘤的作用。     

基于网络药理学和实验验证探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的 运用网络药理学结合生物信息学探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病（AD）的潜在作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选小柴胡汤的可能活性化合物及其潜在治疗靶标，从基因表达综合数据库（GEO）中获取与AD相关的差异表达基因，取交集筛选出小柴胡汤可能的靶点；对交集靶点基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；构建化合物—靶点网络、蛋白互作（PPI）网络，进行KEGG和GO富集分析。采用β淀粉样蛋白_1-40（Aβ_1-40）诱导PC12细胞制备AD细胞模型，以小柴胡汤干预处理后，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞活率，4''，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色观察细胞形态、细胞膜电位检测、流式细胞术检测细胞凋亡、细胞荧光免疫检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）/Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达，初步验证网络药理学预测结果。结果 小柴胡汤共收集到190个化学成分和41个AD相关靶点，包括丁子香萜，槲皮素，小檗碱，原卟啉，24-Ethylcholest-4-en-3-one，β-D-呋喃核糖苷等关键化合物及Sigma非阿片类细胞内受体1（SIGMAR1），细胞周期检测点激酶1（CHEK1），非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（PTPN6），蛋白激酶C（PRKCH），核转录因子κB激酶亚单位β抑制蛋白（IKBKB），组织蛋白酶D（CTSD），半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3），Bax，Bcl-2样蛋白1（Bcl-2L1）等核心靶点。GO富集分析获得302个条目（P<0.05），主要与调控神经元细胞凋亡相关；KEGG通路富集获得相关通路73条（P<0.05），涉及的主要通路和生物过程包括细胞凋亡通路、脂质和动脉粥样硬化相关通路、癌症相关通路等。细胞实验表明，与空白组比较，模型组细胞活率降低（P<0.05），凋亡率升高（P<0.05）、线粒体膜电位降低，Bcl-2/Bax下调；与模型组比较，小柴胡汤组细胞活率升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05）、线粒体膜电位升高，Bcl-2/Bax上调，验证了预测结果的可靠性。结论 本研究揭示了小柴胡汤治疗AD多成分、多靶点、多途径的作用特点，为进一步阐释其物质基础和机制奠定了一定基础。     

芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡

目的 观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法 选择人大肠癌CL187细胞，利用芹菜素（0、30、45、60 mg·L^-1）进行干预后，采用噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用；Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中Akt、磷酸化（p）-Akt及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果 与空白组比较，芹菜素组细胞存活率显著降低，细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）；与空白组比较，芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低，克隆形成抑制率显著升高（P<0.01）；不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h，与空白组比较，在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩，染色质凝聚，细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征；与空白组比较，芹菜素组（45、60 mg·L^-1）抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，芹菜素组（60 mg·L^-1）Akt蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调（P<0.01），芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01），芹菜素组（60 mg·L^-1） p38 MAPK蛋白表达明显上调（P<0.05），芹菜素组p-p38 MAPK蛋白表达显著上调（P<0.01），芹菜素组p-Akt/Akt明显降低（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-ERK1/2/ERK1/2显著降低（P<0.01），芹菜素组（45、60 mg·L^-1）p-JNK/JNK明显升高（P<0.05，P<0.01），芹菜素组p-p38 MAPK/p38 MAPK显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 芹菜素可抑制大肠癌CL187细胞增殖并促进细胞凋亡，其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和调控MAPK信号通路相关蛋白的表达有关。     

济阴颗粒对去势雌性血脂异常大鼠的影响＊

目的 探讨济阴颗粒对女性绝经后血脂异常的影响。方法 雌性SD大鼠去除双侧卵巢，确定未出现动情期后随机分为模型组、西药对照组、中药对照组、济阴颗粒组，每组15只，灌胃给予高脂乳剂构建血脂异常模型。造模同时各干预组给予相应药物，与空白组（15只）共同常规饲养，连续8周。检测全血血液流变学指标，血清TC、TG，HE染色观察肝细胞形态，免疫组织化学法检测肝组织GPR30、PPARγ、MAPK蛋白表达，荧光RT-PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组血液流变学指标和血清TC、TG值升高（P < 0.01），肝细胞损伤严重，GPR30、PPARγ蛋白和Bcl-2 mRNA表达抑制，MAPK蛋白和Bax mRNA表达上调；济阴颗粒干预后，血液流变学指标、血清TC、TG（P < 0.01）和肝细胞损伤程度均得到改善，GPR30、PPARγ蛋白表达上调（P < 0.01），MAPK蛋白表达抑制（P < 0.01）；Bcl-2mRNA表达升高（P < 0.05）和Bax mRNA表达降低（P < 0.05）。结论 济阴颗粒可有效干预女性绝经后血脂异常，调节GPR30/PPARγ/MAPK信号通路，可能是其作用机制之一，并通过Bcl-2 mRNA和Bax mRNA抑制细胞凋亡和炎症保护肝组织。     

基于网络药理学和动物实验探究荆防颗粒对高尿酸血症的治疗作用及机制

目的 基于网络药理学方法和体内实验验证探讨荆防颗粒治疗高尿酸血症的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）筛选荆防颗粒活性成分对应靶点,通过OMIM、GeneCards和TTD等数据库收集高尿酸血症相关靶点。将交集靶点上传至STRING数据平台构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络,再采用Metascape数据平台进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。采用氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠模型和小鼠肾脏代谢组学对网络药理学结果进行验证。结果 网络药理学结果表明,荆防颗粒109个成分中含有500个相关靶点,高尿酸血症相关靶点801个,交集靶点87个。PPI网络分析结果显示,甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）、肿瘤蛋白p53（tumor protein p53,TP53）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）可能是荆防颗粒治疗高尿酸血症的关键靶点。KEGG通路富集分析获得凋亡信号通路、坏死性凋亡、低氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）信号通路等。通过氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠模型结果显示,荆防颗粒显著降低血清尿酸、尿素氮及血肌酐水平（P＜0.01、0.001）,显著抑制肾组织Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、cleaved Caspase-3蛋白表达（P＜0.01）,升高B细胞淋巴瘤（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达（P＜0.05、0.01）。肾脏代谢组学结果显示,荆防颗粒能够通过改善高尿酸血症小鼠丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的代谢、糖酵解/糖异生途径、柠檬酸循环等途径改善代谢。结论 荆防颗粒能够基于多成分、多靶点、多通路的特点相互协同治疗高尿酸血症。     

哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用

目的 研究哈蟆油蛋白酶解物（ORPH）对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法 复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^-1乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果 CCK-8法结果表明400 mmol·L^-1乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降（P<0.01）,细胞处于G₀/G₁期的细胞占比显著升高（P<0.01）,细胞总凋亡率显著升高（P<0.01）,线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）,细胞色素C（Cyt C）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）凋亡相关蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）明显上调（P<0.05,P<0.01）,且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β（IL-1β）表达明显增强（P<0.05）,Bcl-2显著下降（P<0.01）;与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善（P<0.05,P<0.01）,细胞总凋亡率显著下降（P<0.01）,线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,Cyt C,Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）,MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势（P<0.05,P<0.01）。结论 ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。     

基于系统药理学的续断治疗骨质疏松作用机制研究

目的利用系统药理学的方法探讨续断治疗骨质疏松的可能作用机制。方法使用中药系统药理学数据库(TCMSP)获得续断的药物成分,筛选活性成分,预测靶蛋白。在TTD和CTD数据库查询骨质疏松对应靶蛋白,构建药物-靶蛋白-疾病相互作用网络。借助DAVID数据库对核心靶蛋白作用通路进行分析。利用String数据库构建主要信号通路的蛋白质相互作用网络。结果获得7个续断活性成分及其63个靶蛋白,筛选到骨质疏松疾病靶蛋白118个,得到续断与骨质疏松交叉作用蛋白118个,进而富集到与细胞增殖分化及免疫功能等相关的24条信号通路,其中PI3K-AKT信号通路包含有最多数量的相关基因。String数据库分析表明AKT1、MAPK1、MAPK3在信号通路中出现的频率较高。结论续断可能主要通过AKT1、MAPK1、MAPK3影响PI3K-AKT信号通路治疗骨质疏松。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨巴戟天治疗类风湿性关节炎的作用机制

目的 采用网络药理学方法和分子对接技术,探讨巴戟天治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制.方法 通过TCMSP、GeneCards、OMIM、TTD以及String数据库获得巴戟天活性成分、作用靶点以及RA相关疾病靶点,采用Cytoscape3.7.1软件绘制"化学成分-靶点-R...     

基于网络药理学探讨黄芪-当归配伍活性成分改善血管内膜增生的作用机制

目的采用网络药理学方法探讨黄芪-当归配伍改善血管内膜增生的药效物质和可能的作用靶点。方法利用TCMSP数据库,获取黄芪-当归的有效成分,利用Pharmmaper数据库搜集活性成分所对应的靶标。通过Genecards、DigSeE和OMIM数据库,收集血管内膜增生相关的靶标,并与药物作用靶标相比较,筛选出共同部分,作为药物成分作用的预测靶标。利用STRING获取预测靶蛋白之间的相互关系,根据相互关系大小筛选出核心靶标。利用Cytoscape 3.6.1软件,绘制"药物-成分-疾病-靶标"网络图、核心靶标相互作用网络图。用R语言进行核心靶标的KEGG通路富集分析和GO生物过程分析。结果收集到黄芪-当归药对的20个活性成分,共得到193个潜在药物作用靶点、487个潜在疾病靶点,主要作用于EGFR、ESR1、ALB、MAPK8、PGR等多个靶标,涉及PI3K-Akt、MAPK、Ras等多条信号通路以发挥抗血管内膜增生的作用。结论基于网络药理学方法,初步探讨了黄芪-当归配伍改善血管内膜增生可能的靶标和信号通路,可为黄芪-当归配伍作用机制的研究提供参考。     

基于网络药理学的黄芪治疗肾病综合征的机制研究

目的运用网络药理学的方法探讨黄芪治疗肾病综合征(NS)的分子作用机制。方法通过TCMSP数据库和文献挖掘获取黄芪主要活性成分,利用Pharm Mapper服务器、GeneCards和CoolGeN数据库预测和筛选黄芪活性成分的作用靶点。采用String数据库和Cytoscape软件绘制蛋白相互作用网络,通过Systems Dock Web Site对成分与靶点进行分子对接验证。借助DAVID数据库对靶点进行GO分析和KEGG通路分析,采用Cytoscape软件构建成分-靶点-通路-疾病网络。结果筛选得到黄芪25个活性成分,涉及47个作用靶点。网络分析结果表明,靶点主要涉及氧化应激、足细胞凋亡和脂质代谢等生物过程,通过调节Ras、Rap1、MAPK、PI3K-Akt和AGE-RAGE等信号通路来发挥治疗NS的作用。结论黄芪中黄酮类、皂苷类等活性成分可能是其治疗NS的物质基础,其作用机制涉及抗细胞凋亡、抗氧化应激和调节脂质代谢等。     

基于UPLC-Triple-TOF-MS和网络药理学快速建立郁金潜在中药质量标志物成分库

目的 根据中药质量标志物（quality marker,Q-Marker）的理念,建立不同基源郁金的潜在Q-Marker库。方法 采用超高效液相色谱-三重四极杆-飞行时间质谱联用（UPLC-Triple-TOF-MS）技术,建立郁金化学成分高分辨质谱数据库,通过网络药理学等方法构建“化学成分-靶点-通路”预测郁金潜在的Q-Marker。结果 郁金药材中共鉴定出46个化学成分,其中共有成分12个。以共有成分为Q-Marker候选物进行网络药理学分析,预测姜黄酮、莪术双环烯酮、莪术二酮、莪术烯醇、莪术醇、二氢姜黄素、去甲氧基姜黄素和莪术呋喃二烯酮可作用于5羟色胺受体（HTR1A、HTR2A、HTR1D、HTR1B）、阿片受体（OPRK1、OPRM1、OPRD1、OPRL1）等靶点,通过调控神经活性配体-受体相互作用、血清素能突触、钙信号通路、cAMP信号通路、逆行内源性大麻素信号等重要通路发挥抗抑郁的作用。结论 通过UPLC-Triple-TOF-MS技术和网络药理学方法,可以快速分析和确定中药郁金的化学成分,建立郁金的潜在Q-Marker库。     

红花调控皮肤色素沉着网络药理学分析及实验验证＊

目的 利用网络药理学预测分析和动物模型试验验证的方法，对红花调控皮肤色素沉着的调控机制进行研究。方法 利用TCMSP数据库筛选红花的有效成分和相应的作用靶点，在GeneCards数据库收集皮肤色素沉着疾病的靶点，通过String数据库分析潜在靶点的蛋白互作，并利用David数据库对通路进行富集分析，随后采用Cytoscape3.7.2 软件构建有效成分-靶点-通路的网络。通过UVB豚鼠动物模型和蛋白芯片技术检测MAPK通路中关键蛋白的含量。结果 网络药理学预测了红花有22个活性成分和351个靶点，色素沉着疾病有203个靶点，红花活性物调控色素沉着的交集靶点有26个。其中，红花调控皮肤色素沉着的主要活性成分为槲皮素、木犀草素、黄芩素等；潜在的靶点为AKT1、MAPK1、EGFR等；核心通路为黑色素瘤、P13K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。动物蛋白芯片的实验结果显示，红花提取物参与调控MAPK/MITF通路，可抑制p38、p-JNK、p-MAPK1、MITF的表达水平。结论 本研究预测了红花治疗皮肤色素沉着可能的作用机制，为红花治疗皮肤色素沉着的应用和研究提供了参考。     

基于网络药理学探讨黄芪治疗糖尿病肾病作用机制

目的利用网络药理学方法研究黄芪治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法以化合物的口服生物利用度(OB)和类药性(DL)为标准,依据中药药理学技术平台(TCMSP)数据库、小分子靶点预测平台(Swiss Target Prediction)、人类基因组注释数据库(Genecards)预测和筛选黄芪的活性成分及治疗DN的作用靶点。采用Metascape数据库对作用靶点的基因本体(GO)注释和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路进行富集分析和蛋白功能归属。结果从黄芪中筛选得到槲皮素、山柰酚、异鼠李素、芒柄花素、黄芪皂苷I～IV等24个活性成分,作用于172个DN靶点,筛选出表皮生长因子受体、血管内皮生长因子受体、丝裂原活化蛋白激酶、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子等18个关键靶点。调节晚期糖基化终末产物及其受体(AGEs-RAGE)介导的信号通路、磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/叉头框转录因子O(PI3K/Akt/Fox O)信号通路、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、Janus激酶/信号转导子和转录激活因子信号通路等关键代谢通路。参与物质代谢、氧化还原、信号转导、炎症反应等多种生物过程。结论黄芪及其活性成分通过多个靶点、多条通路发挥治疗DN的作用。     

筋骨草总环烯醚萜对乳腺癌干细胞特性的干预作用及其机制分析

目的:研究筋骨草总环烯醚萜(iridoids in Ajuga decumbens,ADI)对乳腺癌干细胞特性的干预作用及分子机制。方法:采用无血清悬浮微球体形成实验,transwell迁移和侵袭实验检测乳腺癌干细胞自我更新能力、运动和侵袭能力。流式细胞法分析CD44+CD24-/low细胞亚群比例。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤干细胞干性相关蛋白,细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB或Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果:5~80 mg·L-1ADI能浓度依赖性降低乳腺癌MCF-7细胞微球体形成的数量和体积,减少CD44+CD24-/low细胞亚群比例(P0.05,P0.01)。10~40 mg·L-1ADI对乳腺癌MCF-7干细胞的迁移和侵袭能力有明显抑制作用(P0.05,P0.01)。进一步研究发现,ADI能明显降低p-ERK,p-Akt,干性标志物八聚体结合转录因子-3/4(Oct-3/4),SRY相关的HMG盒转录因子-2(Sox-2)和胚胎干细胞转录因子(Ecat4或Nanog)蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:筋骨草总环烯醚萜能有效地抑制乳腺癌干细胞的自我更新和转移潜能等"干性"特性,作用机制可能与其调控ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和PI3K/Akt信号通路,下调相关干性标志物表达有关。     

基于数据挖掘探讨“柴胡劫肝阴”的相杀配伍内涵

目的 基于数据挖掘分析含柴胡经典方剂的配伍规律，并阐明“柴胡劫肝阴”和配伍高频药物对柴胡“解毒存效”的分子机制，为其临床应用及新药研发提供思路。方法 通过药智数据库、中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库（Wanfang）和中文科技期刊全文数据库（VIP）对含柴胡方剂进行检索，运用Excel 2019、IBM SPSS Modeler18.0和IBM SPSS26.0软件进行频数分析和聚类分析。利用网络毒理学对“柴胡劫肝阴”的毒性成分、毒性靶点和调控网络进行分析。通过网络药理学构建高频配伍中药和柴胡肝毒性成分-靶点网络图。结果 共筛选82首含柴胡方剂涉及205味中药，共897频次，关联规则分析得到13组关联规则。网络毒理学结果显示，柴胡皂苷和挥发油作为柴胡潜在的毒性成分，得到柴胡潜在毒性靶标298个，肝毒性靶点198个，柴胡致肝毒性潜在靶点20个，相关信号通路61条。网络药理学结果显示甘草和柴胡肝毒性共有靶点5个、通路17条，白芍和柴胡肝毒性共有靶点9个、通路49条，当归和柴胡肝毒性共有靶点2个、通路38条，黄芩和柴胡肝毒性共有靶点5个、通路33条。结论 柴胡分别与甘草、白芍、当归...     

Effect of adlay (Coix lachryma‐jobi L. var. ma‐yuen Stapf.) hull extracts on testosterone release from rat Leydig cells

Adlay has been used as a traditional Chinese medicine for the treatment of many diseases. However, few studies have reported the effects of adlay seeds on the endocrine system. In the present study, the effects of methanol extracts of adlay hull (AHM) on testosterone synthesis were studied. Rat Leydig cells were incubated with different reagents including human chorionic gonadotropin, 8‐bromo‐adenosine‐3′,5′‐cyclic monophosphate, forskolin, A23187, progesterone and androstenedione in the presence or absence of AHM. The rat anterior pituitary (AP) gland was treated with gonadotropin‐releasing hormone (GnRH) in vitro in the presence or absence of AHM, and the concentrations of luteinizing hormone (LH) in the media were measured. AHM decreased testosterone release via the inhibition of (1) the PKA and PKC signal transduction pathways, (2) 17β‐HSD enzyme activity in rat Leydig cells, and (3) in vitro GnRH‐induced LH secretion. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.