人碳酸酐酶Ⅰ原核表达及其新型抑制剂研究

目的评价35个新碳酸酐酶抑制剂对人碳酸酐酶Ⅰ(hCAⅠ)的抑制作用。方法以大肠杆菌表达的hCAⅠ作为酶源,利用酯酶活性检测方法对35个新化合物进行了hCAⅠ的抑酶活性评价并与hCAⅡ的评价结果进行了综合分析。结果发现4个化合物对hCAⅠ和hCAⅡ的抑制作用均大于醋氮酰胺,2个化合物对hCAⅠ的抑制作用大于醋氮酰胺而对hCAⅡ的抑制率与醋氮酰胺相当,6个化合物对hCAⅡ的抑制作用大于醋氮酰胺而对hCAⅠ的抑制作用与醋氮酰胺相当。结论进一步深入研究这12个化合物有望获得高效、低副作用的急性高原病防治药物。     

老药新用

醋氮酰胺(Diamox) 醋氮酰胺系碳酸酐酶抑制剂,长期以来作为利尿降压剂,用以治疗青光眼、脑水肿,也有用于癫痫大小发作。以后发现胃粘膜中碳酸酐酶是参与壁细胞分泌盐酸的重要酶,因而本药可抑制胃酸分泌,具有治疗消化性溃疡病的作用。临床新用途一、治疗溃疡病     

Ｌ—天门冬酰胺酶Ⅱ的表达与纯化

依据发表的大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因序列,合成引物,利用ＰＣＲ技术获得天门冬酰胺酶Ⅱ的结构基因,插入高效表达载体pＢＶ２２０,并转化大肠杆菌菌株ＤＨ５α,获得高效表达天门冬酰胺酶Ⅱ的基因工种菌株,通过对包涵体的提取与纯化,结合离子交换层析获得天门冬酰胺酶Ⅱ的蛋白质纯品。检测结果表明得到的天门冬酰胺酶Ⅱ具有较高的比活性,与商品化的同类产品比活相近。     

2-芳基-3-吲哚取代乙酰胺类衍生物的合成及抗焦虑活性

目的　合成2-芳基-3-吲哚取代乙酰胺类化合物,从中筛选有抗焦虑作用而无镇静、肌松等副作用的活性化合物。方法　由取代苯和琥珀酸酐经傅-克反应得到取代苯甲酰基丙酸,取代苯甲酰基丙酸和氯甲酸乙脂生成混合酸酐,再和相应的胺反应得到取代酰胺,取代酰胺和取代苯肼经费歇尔反应得到目标化合物。结果　得到新化合物20个。结论　初步受体结果表明,多数化合物均与外周苯二氮受体有较强结合,在小鼠高架十字迷宫试验中发现一些化合物有明显的抗焦虑作用,且不能拮抗印防己毒素(PTX)诱发的惊厥作用,显示无镇静作用     

神经氨酸酶抑制剂的新用途及新结构

神经氨酸酶抑制剂不仅在多方面优于金刚烷胺类的防治A，B型流感的新型药，而且具有许多其他方面的作用。现介绍神经氨酸酶抑制剂在防治禽流感、防治并发细菌感染、抑制血凝素、抑制血凝素一神经氨酸酶、抑制部分细胞程序死亡等方面的新用途，并对神经氨酸酶抑制剂的新化合物进行了简述。     

抗青光眼新药MK-927

<正> 全身应用的碳酸酐酶抑制剂,自1954年眼科应用以来,已有近40年的历史。但有较多的全身副作用。国外一直试图研制一种局部应用药物。MK—927即是近几年发展起来的一种新的药物,现就它的一些研究现状作一简介。1 药理作用 MK—927主要是抑制眼局部睫状上皮内碳酸酐酶,从而减少房水生成而发挥作用。它能抑制50％人的碳酸酐酶同功酶Ⅱ的酶活体。     

L-天门冬酰胺酶II的表达与纯化

依据发表的大肠杆菌天门冬酰胺酶II基因序列,合成引物,利用PCR技术获得天门冬酰胺酶II的结构基因,插入高效表达载体pBV220,并转化大肠杆菌菌株DH5α,获得高效表达天门冬酰胺酶II的基因工程菌株。通过对包涵体的提取与纯化,结合离子交换层析获得天门冬酰胺酶II的蛋白质纯品。检测结果表明得到的天门冬酰胺酶II具有较高的比活性,与商品化的同类产品比活相近。     

硝基呋喃酰胺衍生物的合成及其抗血吸虫活性

目的合成含有酰胺基团的硝基呋喃衍生物,并进行小白鼠体外筛选和体内抗日本血吸虫活性测试。方法以四氢呋喃为溶剂,N,N'-二环己基碳二亚胺为缩合剂,5-硝基呋喃甲酸与1-羟基-苯并三氮唑(HOBt)缩合得到中间体,该中间体与胺缩合得到硝基呋喃酰胺类目标化合物。结果与结论合成了11个硝基呋喃酰胺类化合物,其中6个是未见文献报道的新化合物。抗日本血吸虫活性评价结果显示,有7个化合物对血吸虫具有一定的抑制效果,尤其是化合物N'-(2-吗啡啉基乙基)-5-硝基呋喃-2-酰肼(6k),抗虫效果最显著,可作为抗血吸虫的先导化合物做进一步研究。     

仓鼠糜酶2抑制剂高通量筛选模型的建立及其应用

本研究拟建立重组仓鼠糜酶2 (chymase 2) 抑制剂的体外高通量筛选模型, 寻找新型的糜酶2抑制 剂。首先, 利用大肠杆菌表达、制备成熟的重组仓鼠糜酶2蛋白, 以384孔微板为媒介, 建立基于荧光方法测定酶活性的抑制剂筛选模型, 结果表明所建立的糜酶2抑制剂高通量筛选模型具有灵敏、稳定、重复性好的特点 (Z' = 0.84)。利用建立的模型对40 080种样品 (包括28 060种化合物和12 020种天然产物提取物) 进行抑制活性筛选, 取抑制率大于90%的613种样品进行复筛。最终确定化合物J16647和J16648具有较强的抑制活性, 其IC₅₀值分别为0.823和0.690 μmol·L⁻¹。     

HIV化学治疗的最新进展

分两部分介绍了抗HIV的化学治疗药物的新进展,一是作用于现有病毒靶位的属于逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的新化合物,另一部分是作用于病毒新靶位的化合物如HIV整合酶抑制剂、核糖核酸酶-H抑制剂以及病毒进入抑制剂。主要从化学结构、对耐药性病毒的抑制作用、作用机制和临床效果等几个方面介绍了解决HIV耐药性问题的新化合物。     

一种酶反应器筛选胰蛋白酶抑制剂方法的建立

目的建立从黄酮化合物库中筛选胰蛋白酶抑制剂的新方法。方法利用毛细管固定化酶反应器技术,通过环氧基的开环反应,将胰蛋白酶与poly(GMA-co-PEGDA)有机聚合物整体材料共价键合制备毛细管固定化胰蛋白酶反应器;对酶反应浓度与反应时间等参数进行了系统研究,利用荧光显微镜、扫描电子显微镜和拉曼光谱对酶反应器进行了表征;采用微径液相色谱法对酶反应器的活性和动力学参数进行了系统评价;将制备的酶反应器用于20种中药黄酮化合物中胰蛋白酶抑制剂的筛选;通过分子对接手段进一步考察胰酶与抑制剂之间的作用机制。结果 16种黄酮化合物具有不同程度的胰蛋白酶抑制作用,其中,漆黄素的抑制效果最佳,抑制率为(62.9±1.2)%,分子对接结果进一步说明了漆黄素与胰蛋白酶之间的作用机制。结论建立了一种简单、有效的胰蛋白酶抑制剂的筛选方法,可进一步推广应用。     

12种植物的提取物对5α-还原酶的抑制活性研究

目的寻找新的可用于美容产品和治疗前列腺增生药物的植物源5α-还原酶抑制成分。方法从SD大鼠体内分别提取Ⅰ、Ⅱ型5α-还原酶,选择雪菊、黑枸杞、黑种草籽、枸杞子、红花、甜叶菊、矢车菊、大青叶、罗布麻、白麻、荨麻、薰衣草12种植物材料,分别制备其水提物及醇提物共计24种,作为抑制剂。以睾酮为底物,以非那雄胺为阳性对照,进行体外酶促反应,反应完成后,高效液相色谱法测定反应前后睾酮的变化,计算抑制率。结果除薰衣草醇提物、大青叶水提物外,其余22种提取物均表现出一定对Ⅰ型5α-还原酶的抑制活性(抑制率2.1%~30.6%),水提物活性大于醇提物活性;矢车菊、黑枸杞、薰衣草醇提物具有较弱的Ⅱ型5α-还原酶抑制活性(抑制率分别为4.5%、3.3%、8.1%),毛蕊花、矢车菊、罗布麻叶、白麻叶水提物抑制Ⅱ型5α-还原酶抑制活性较弱,雪菊、大青叶水提物抑制Ⅱ型5α-还原酶抑制活性较为显著(抑制率分别为11.5%、14.5%)。结论枸杞子、荨麻叶、矢车菊水提物可开发为抑制脱发和痤疮的产品,对大青叶和雪菊水提物进一步研究,可能在其中发现治疗前列腺增生的成分。     

土槿乙酸衍生物的合成及其抗肿瘤活性

目的:研究土槿乙酸抗肿瘤作用的构效关系。方法:以土槿乙酸为原料,合成8个土槿乙酸衍生物,其结构经1H-NMR,MS证实。经MTT法筛选了衍生物的抗肿瘤活性。结果:8个化合物均为新化合物,除Ⅱc所有化合物均具有抗肿瘤活性,其中Ⅱf,Ⅱg的抗肿瘤活性显著高于土槿乙酸。结论:某些土槿乙酸酯和酰胺可提高抗肿瘤活性。     

氨基噻唑衍生物的合成与药理活性研究

目的:合成氨基噻唑类衍生物并研究其抗流感病毒活性。方法:以氨基噻唑类化合物为母核,合成一系列神经氨酸酶抑制剂,通过在体方法检测其对流感病毒的抑制活性。结果与结论:合成了6个新化合物,其中部分化合物具有一定的抗流感病毒活性。     

人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂的高通量筛选

本研究拟建立体外人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂高通量筛选模型,用于PTP1B抑制剂的发现。利用大肠杆菌重组表达PTP1B,以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为特异性的底物,建立了基于酶反应速率的384孔微板为载体的PTP1B抑制剂高通量筛选模型(Z'=0.78)。选择24 240个样品进行筛选,对抑制率大于70%的80个样品作为活性样品进行复筛,最终确定6个具有较强的抑制活性的化合物J5753、J10550、J10551、J10583、J10585和J11101,其IC50值分别为21.58、18.39、15.37、11.92、37.27和36.61μg·mL-1。结果表明,所建立的PTP1B抑制剂高通量筛选模型具有快速、灵敏、稳定、重复性好的特点。     

具有去甲斑蝥素结构的HDAC抑制剂的设计与合成

目的：设计与合成以去甲斑蝥素为骨架的苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂。方法利用拼合原理,将去甲斑蝥素的活性结构片段,引入具有不同取代基的苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂中,探索性设计并合成了2个未经报道的全新化合物。结果目标化合物为全新未报道化合物,结构经质谱、氢谱和碳谱确认。结论设计思想合理,合成方法温和,简便,适合该类化合物的合成。     

新型AMPA受体正向变构调节剂抗疲劳活性筛选

目的寻找以AMPA(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid)受体为靶点的新型抗疲劳化合物。方法以胡椒酸、3,4,5-三甲氧基苯甲酸、3,4-二甲氧基苯甲酸,这3个化合物分别作为母体结构,对苯甲酰胺的酰胺氮原子引入基团进行结构修饰,设计合成43个化合物,结构经1H-NMR确认。采用MTT法评价新化合物的细胞毒性,通过戊巴比妥钠镇静催眠实验进行中枢兴奋性筛选,最后采用小鼠负重游泳实验评价目标新化合物抗疲劳活性。结果化合物2j细胞毒性低,具有一定的中枢兴奋性与抗疲劳活性。结论化合物2j具有较好的抗疲劳作用,具有进一步开发潜力。     

DNA小沟结合剂识别DNA序列的分子机理

本文讨论了 DNA 序列选择性小沟结合剂的研究进展。分子识别过程的作用因素有:接受体和供给基团的氢键存在和位置、配基形状、手性中心、立体化学、可变性及电荷分布。对于较长配基、关键在于配基重复单位与受体三维空间的或立体的相互对应性。本文还讨论了设计合成具有抗癌作用、抗病毒作用、抑制关键细胞酶包括拓扑异构酶及抑制病毒的反转录酶的新化合物时,如何应用这些因素。并描述了新化合物的序列选择性与其生物活性相互关系的表现方式。     

氮唑类抗真菌药物研究新进展

近年来氯唑类抗真菌药物研究取了许多新进展,氮唑类药物的作用机制得到了进一步阐明,并有多个广谱,低毒,高效的新化合物进入临床研究。本文综述了氮唑类抗真菌药物作用机制的研究进展,并介绍了5个正在研制中的新型氮唑类抗真菌药物,活力康唑,普沙康唑,拉夫康唑,Syn-2869和TAK－187。与临床上常用的氟康唑和伊曲康唑相比,这5个新化合物均有其显著的优点。     

拓扑异构酶Ⅱ抑制剂抗肿瘤作用机制的研究进展

DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)是一种基本核酶,影响DNA的结构和拓扑学,与细胞的增殖和凋亡有密切关系。TopoⅡ是肿瘤化疗的重要靶酶,TopoⅡ抑制剂的研究就具有很大的现实意义。因此,本文就近年来对TopoⅡ的生物学功能的认识,TopoⅡ抑制剂的作用机制以及TopoⅡ抑制剂促凋亡抗肿瘤作用机制作一综述。