抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及机制研究

目的 探讨抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及潜在机制。方法 采用微量稀释法检测MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC;通过扫描电镜等方法观察MAF-1A衍生物对白念珠菌生物膜形态学的影响;以XTT法测定MAF-1A衍生物对不同阶段生物膜活性的影响及生物膜 80% 抑制浓度(SMIC₈₀);采用流式细胞术、激光共聚焦显微技术、qRT-PCR等分析MAF-1A衍生物抗白念珠菌生物膜的作用机制。结果 MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC及SMIC₈₀均低于模板肽,分别为62.5 μg/mL、125 μg/mL和62.5~125 μg/mL。MAF-1A衍生物可明显抑制白念珠菌的黏附和菌丝形成,且抑制作用呈剂量依赖性;可使菌细胞黏附及菌丝形成相关基因(ALS3、HWP1、SUN41、UME6)的mRNA表达量降低(t_UME6=12.42,P<0.001;t_ALS3=12.20,P<0.001;t_SUN41=7.206,P<0.001;t_HWP1=22.52,P<0.001);可使形成中的生物膜和成熟生物被膜活性明显降低(t₂₅₀=3.680,P<0.05;t₅₀₀=4.153,P<0.05;t₁₀₀₀=4.934,P<0.05;t₂₅₀=0.5335,P<0.05;t₅₀₀=1.504,P<0.05;t₁₀₀₀=6.431,P<0.05)。62.5 μg/mL浓度的MAF-1A衍生物即可直接破坏白念珠菌成熟生物膜结构,引起成熟生物膜的细胞凋亡、ROS含量明显增加,线粒体膜电位显著降低。 结论 MAF-1A衍生物具有较好的体外抗白念珠菌生物膜活性,不仅能通过抑制细胞黏附、菌丝形成来干扰生物膜的早期形成,还能通过直接损伤以及ROS累积、线粒体膜电位去极化所引发的细胞凋亡来破坏成熟生物膜。     

汉防己甲素对氟康唑抗白念珠菌生物膜增效活性的初步研究

目的探讨汉防己甲素（tetrandrine,TET）对氟康唑（fluconazole,FLC）抗白念珠菌生物膜是否有增效活性。方法构建白念珠菌生物膜,参照微量稀释法,测定FLC单独及其联合TET对生物膜不同时期的最小抑菌浓度（minimum in-hibitory concentration,MIC）;生物膜重新悬浮后,测定FLC单独及其联合TET对不同浓度菌液的MIC。结果 FLC单独及其联合TET对白念珠菌生物膜最初期（0h）的MIC50值范围分别为0.25～64μg/mL和0.125～16μg/mL（P=0.002）;早期（4h）的MIC50值范围分别为8～256μg/mL和1～64μg/mL（P=0.000）;中期（24h）、成熟期（48h）的MIC50值均〉1024μg/mL。生物膜重新悬浮后,FLC单独及其联合TET对低浓度菌液（终浓度为1×103 CFU/mL）的MIC值范围分别为0.25～64μg/mL和0.125～16μg/mL（P=0.003）,高浓度菌液（终浓度为1×106 CFU/mL）的MIC值均〉64μg/mL。结论汉防己甲素在体外对氟康唑抗白念珠菌生物膜最初期（0h）、早期（4h）有增效活性,对中期（24h）、成熟期（48h）无增效活性;汉防己甲素对氟康唑抗白念珠菌生物膜重新悬浮后的低浓度菌液（终浓度为1×103 CFU/mL）有增效活性,高浓度菌液（终浓度为1×106 CFU/mL）无增效活性。     

黄连解毒汤对胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的观察黄连解毒汤在体外对胶质瘤C6细胞增殖的影响。方法制备黄连解毒汤固体样品,采用细胞培养技术以含10％胎牛血清的DMEM培养基体外培养C6细胞,不同浓度的黄连解毒汤作用不同时间后,用MTY比色法观察其对C6细胞增殖的影响,倒置显微镜观察C6细胞形态变化。结果随着黄连解毒汤浓度增加、培养时间的延长,C6细胞增殖抑制率逐渐增加,抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系（P均〈0．05）。黄连解毒汤作用下C6细胞胞质回缩,细胞变圆、固缩,贴壁细胞数量减少。结论黄连解毒汤体外对胶质瘤C6细胞增殖有抑制作用。     

中药天南星提取物抗肿瘤活性研究

目的 探讨中药天南星提取物的体外抗肿瘤作用.方法 分别选用人红白血病细胞株K562、人胃癌细胞株BGC823、人宫颈癌细胞株HeLa,用MTT法测定天南星醇提物(RAE)和水提物(RAW)对体外肿瘤细胞的抑制作用.结果 体外抑瘤实验表明,对RAE敏感的最低药物浓度分别为3.9、62.5和250 μg/ml,半数抑制率(IC50)分别为65.07 μg/ml、0.59 mg/ml和5.11 mg/ml;对RAW敏感的最低药物浓度分别为15.6、62.5和250 μg/ml,IC50分别为0.24 mg/ml、0.78 mg/ml和82.17 mg/ml.结论 RAE和RAW体外均有很强的抗肿瘤作用,且RAE的作用高于RAW.     

碘伏对真菌性角膜溃疡常见分离真菌的体外抗菌活性

观察不同浓度碘伏对真菌性角膜溃疡常见分离真菌的体外抗菌活性,取100%的生长抑制为最低抑菌浓度（MIC）,质控菌株采用近平滑念珠菌。结果显示碘伏对白色念珠菌、烟曲霉菌、串珠镰刀菌的MIC（90）均为0.125mg/ml,茄病镰刀菌的MIC_（90）为0.25mg/ml。认为碘伏对真菌性角膜溃疡常见分离真菌有明显的体外抗菌活性,其眼用剂型的开发对临床上真菌性角膜溃疡的治疗具有重要价值。     

中药提取液体外抗肠道念珠菌的作用

目的:观察27种中药醇提液及5种中药提取油对肠道念珠菌(白念、热带、克柔氏)的体外抗菌活性.方法:采用试管药基法将27种中药醇提取液倍比稀释成浓度50-3.125 g/L.中药提取油倍比稀释成5-0.0097 mL/L,对肠道念珠菌进行MIC观察.结果:27种中药醇提取液中有6种(土槿皮、黄连、黄柏、五倍子、桂皮、丁香)MIC均值为1.56-3.25 g/L,4种(广藿香、川芎、菖蒲、蛇床子)MIC均值12.5 g/L,2种(五味子、小茴香)MIC均值50 g/L,对念珠菌有不同程度的抑制作用,其他15种中药醇提取液无抑制作用.5种中药提取油(桂皮油、藿香油、丁香油、小茴香油、五味子油)对念珠菌均有较强的抑制作用.结论:6种中药醇提取液及5种中药提取油对念珠菌(白念、热带、克柔氏)均有较强的抑制作用.     

ε-聚赖氨酸对铜绿假单胞菌生长及生物膜形成的影响

目的研究ε-聚赖氨酸对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的生长及其对生物膜形成与清除的影响。方法以P.aeruginosa PAO1、ATCC27853及收集的65株临床分离株作为受试菌,采用微量肉汤稀释法测定ε-聚赖氨酸(ε-Polylysine,ε-PL)对PA的MIC、MBC值;吸光度法测定ε-PL对PA浮游菌生长影响,并绘制时间-生长变化曲线;结晶紫染色法筛选产生物膜的临床菌株;结晶紫染色法测定ε-PL对PA产生物膜影响及对预形成生物膜的作用效果。结果ε-PL对P.aeruginosa PAO1菌株、ATCC27853和临床分纯菌株的MIC值均为0.25 mg/ml, MBC值均为0.5 mg/ml。临床株PA生物膜阳性率为100%;时间-生长曲线表明自6 h起ε-PL对PA的抑制作用明显;随着ε-PL浓度的增加,对PA的生长、生物膜的形成抑制作用及对预形成生物膜的清除作用均逐渐增强。结论ε-PL可抑制PA的生长和生物膜的形成,并能清除部分预形成生物膜。     

抗嗜肝DNA病毒中草药的体外快速筛选

采用测定鸭乙型肝炎病毒未成熟核心颗粒复制复合体中内源性DNA多聚酶(DHBV RCs DNAp)及HBV DNAp的方法,对叶下珠等中草药提取物进行了对DNAp的抑制试验;同时采用测定抑制HBsAg与抗-HBs结合方法,观察药物提取物对HBsAg的灭活能力。结果显示出:①叶下珠提取物对DHBV RCs DNAp有较强体外抑制作用,在浓度为1mg/ml、0.1mg/ml和0.01mg/ml时其抑制率分别为72.6％、45.6％和5.2％,而其它药物抑制作用较弱或无抑制作用;②叶下珠、旱莲草和虎杖提取物对HBV DNAp有体外抑制作用,在浓度为1mg/ml时,抑制率分别为67.6％、65.5％和79.9％。③虎杖、大黄、夏枯草、金钱草、旱莲草和叶下珠等中草药提取物对HBsAg有较强的体外抑制能力,在浓度为10mg/ml时对HBsAg与抗-HBs结合的抑制率分别为97.6％、93.8％、84.5％、82.1％、83.2％和73.3％,并且抑制率与药物浓度间有剂量应答。     

类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激巨噬细胞的表达和作用研究

目的 探讨巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1在申克孢子丝菌刺激后的表达和作用研究。方法 通过测定巨噬细胞与申克孢子丝菌共孵育时杀菌率,使用实时荧光定量 PCR检测不同时间点巨噬细胞的类几丁质酶3蛋白1 mRNA表达水平,同时体外实验检测类几丁质酶3蛋白1对申克孢子丝菌的抑菌作用,同时采用空白对照和白念珠菌阳性对照比较两者的差异。结果 巨噬细胞可吞噬杀灭申克孢子丝菌分生孢子,也可吞噬阳性对照白念珠菌酵母相细胞。巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1 mRNA表达水平在申克孢子丝菌组和空白对照组无明显差别,作用于阳性对照的白念珠菌组的巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1 mRNA表达水平明显上调。体外实验显示类几丁质酶3蛋白1 对申克孢子丝菌分生孢子的无明显抑制作用,对白念珠菌繁殖却有较强的抑制作用。结论 申克孢子丝菌未能诱导巨噬细胞表达类几丁质酶3蛋白1 抑制其增殖从而逃逸清除,而白念珠菌感染可上调巨噬细胞类几丁质酶3蛋白1 表达从而抑制其增殖减轻感染,这可能是申克孢子丝菌特有的致病作用机制之一。     

血清及转铁蛋白对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

目的探讨血清及转铁蛋白对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。方法采用微孔板结合结晶紫染色半定量试验测定血清及转铁蛋白对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制作用;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测血清中能与表皮葡萄球菌生物膜结合的有效成分;最后利用盖玻片和导尿管体外构建表皮葡萄球菌生物膜,分析转铁蛋白的生物膜抑制能力。结果 25%的血清能使表皮葡萄球菌生物膜的形成量(A570值)从0.71±0.13减少到0.20±0.08(t=5.75,P0.05)。SDS-PAGE检测血清处理表皮葡萄球菌后25×103蛋白和(45~70)×103蛋白条带数量或表达量显著增多。当转铁蛋白浓度≥5.21mg/ml时,可显著抑制生物膜的形成(t=2.99,P0.05),且随着浓度增高,其抑制能力增强。此外,5mg/ml的转铁蛋白还可显著抑制盖玻片和导尿管表面生物膜的形成。结论血清及其成分转铁蛋白可显著抑制表皮葡萄球菌生物膜形成。     

亚胺培南／西司他丁对铜绿假单胞菌生物膜形成和藻酸盐合成基因表达的影响

目的：研究亚胺培南／西司他丁对黏液型铜绿假单胞菌PA17及非黏液型铜绿假单胞菌PAO1生物膜形成及其藻酸盐合成基因algD表达的影响。方法：试管倍比稀释法检测亚胺培南／西司他丁对PA17和PAO1的最低抑茵浓度（MIC）；改良平板培养法建立PA17和PAO1的生物膜模型，从微菌落形成阶段开始在生物膜培养基中分别加入1倍和10倍最低抑菌浓度的亚胺培南／西司他丁，扫描电镜观察PA17和PAO1生物膜形成的变化，半定量RTPCR检测加入亚胺培南／西司他丁对生物膜形成过程中algD基因表达水平的影响。结果：对PA17用1倍和10倍MIC的亚胺培南／西司他丁干预时，第3天algD表达较对照组分别增加1．5和3．4倍，生物膜形态无明显变化；第6天algD表达分别增加0．38和0．78倍，没有形成生物膜。对PA01用1倍和10倍MIC的亚胺培南／西司他丁干预时，第24小时algD表达较对照组分别增加2．5和3．5倍，生物膜形态无明显变化；第3天algD分别增加0.7和2.1倍，1倍MIC干预组仍可看到少量微菌落存在，10倍MIC干预组仅见散在的细菌；第6天algD分别增加1．5和2．1倍，两个浓度组均只见数个细菌黏附于盖玻片。结论：亚胺培南／西司他丁对黏液型和非黏液型铜绿假单胞菌algD表达和生物膜形成的作用一致，虽可诱导algD表达上调从而使藻酸盐合成增加，但若从生物膜形成早期开始使用，仍可抑制和破坏生物膜形成。     

石榴皮对幽门螺杆菌的体外抑菌实验研究

目的 探讨石榴皮对幽门螺杆菌（H．pylori）甲硝唑耐药株及敏感株的体外抑制作用。方法 琼脂稀释法检测石榴皮水煎剂对H．pylori甲硝唑耐药株和敏感株的最低抑菌浓度（MIC），并计算MIC50、MIC75、MIC90。结果 石榴皮对H．pylori的MIC的范围为7．8125-500mg／ml，H．pylori甲硝唑耐药株和敏感株对石榴皮水煎剂的敏感性无统计学差异（相对中位数潜力1．072，95％的可信区间为0．763-1.513），石榴皮对H．pylori甲硝唑耐药株和敏感株的MIC50分别为29．9mg／ml和28．0mg／ml，MIC75分别为65．1mg,／ml和59．1mg/ml，MIC90分别为131．1mg／ml和115．9mg／ml。结论 石榴皮有良好的抑菌效果，H．pylori甲硝唑耐药株及敏感株都对其敏感。     

Antimicrobial activity of Hibiscus sabdariffa extract against uropathogenic strains isolated from recurrent urinary tract infections

ObjectiveTo report the antimicrobial effect and biofilm forming capacity of the uropathogenic strains that have been isolated from recurrent urinary tract infections (UTIs) in the presence of Hibiscus sabdariffa (H. sabdariffa) extract.MethodsSix Escherichia coli and two Klebsiella pneumoniae isolates were collected from patients with recurrent UTIs. The susceptibility of bacterial isolates to H. sabdariffa extracts were tested by determining their minimum inhibitory concentrations (MICs), and minimum bactericidal concentration (MBC) by using the broth microdilution method in accordance to Clinical and Laboratory Standards Institute guidelines. Time-kill curves were plotted against the eight isolates based on the MIC results. The biofilm forming capacity of the isolates were evaluated using the microtiter plate assay. Detection of biofilms was done using the crystal violet staining method.ResultsVarious levels of the extracts MIC were observed against all the uropathogenic isolates. MIC values ranged from 0.5 to 4 mg/mL, and MBC values ranged from 8 to 64 mg/mL. Both the time-kill experiment and MBC-MIC ratio demonstrated that the extracts' effect was in general, bacteriostatic. The biofilm capacity inhibition assay results showed that extracts inhibited biofilm production of all the isolates. The level of biofilm inhibition however, had varied among the bacterial strains and ranged from 8%–60% reduction in optical density.ConclusionsThe results of the study support the effective potential of H. sabdariffa extract to prevent recurrent UTIs and to emphasize the significance of the plant extract, in order to approach it as a potential antimicrobial agent.     

Disseminated candidiasis due to amphotericin B-resistant Candida albicans.

Although development of resistance in Candida albicans to amphotericin B is considered rare, C. albicans was persistently recovered from a 28-year-old man after a prolonged course of broad-spectrum antimicrobial therapy for a pancreatic abscess. Determination of the MICs of drugs for C. albicans in Sabouraud broth revealed MICs of 2.5 mg/l amphotericin B, greater than 40 mg/l ketoconazole, 2.5 mg/l miconazole, and greater than 40 mg/l 5-fluorocytosine. Synergy testing revealed a MIC of 0.3 mg/l amphotericin B in the presence of 2.5 mg/l 5-fluorocytosine. When intravenous 5-fluorocytosine was added to the patient's antifungal regimen, achieving levels of 125 mg/l, negative blood cultures resulted for the first time. This suggests there may be a clinical use for in vitro synergy testing as an adjunct to guide antifungal therapy for fungemia due to amphotericin B-resistant C. albicans.     

不同浓度黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生长及生物被膜形成能力影响的初步探讨

目的 研究黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌体外生长及生物被膜形成能力的影响.方法 以编号为3的高毒力肺炎克雷伯菌临床菌株作为试验菌株,微量稀释法测定黄芩苷最低抑菌浓度(MIC);通过细菌生长曲线观察黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生长的影响;连续稀释法检测黄芩苷对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜内活菌计数的影响;结晶紫染色法半定量测定黄...     

Treatment of chronic pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis patients with ceftazidime and tobramycin

50% inhibitory concentration (IC50) and minimum inhibitory concentration (MIC) of ceftazidime, cefsulodin, cefotaxime, moxalactam, azlocillin, carbenicillin, netilmicin and tobramycin against 90 strains of Pseudomonas aeruginosa isolated from cystic fibrosis (CF) patients were determined by means of the agar plate dilution method. Ceftazidime was most active of the antibiotics in vitro; the geometric mean of IC50 was 0.2 and of MIC 0.4 micrograms/ml. 11 CF patients suffering from P. aeruginosa infection were treated with 14 day courses of ceftazidime (100 mg/kg/24 h) and tobramycin (10 mg/kg/24 h). P. aeruginosa was only temporarily eradicated in one of the patients, but a significant improvement of respiratory function and a significant fall in white blood cell count was recorded in the patients during chemotherapy. There was no development of resistant strains against ceftazidime during treatment and no side-effects were observed. Ceftazidime is a promising new antimicrobial agent with high in vitro activity which deserves further in vivo evaluation in CF patients.     

粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用

目的 探讨粪肠球菌心内膜炎抗原EfaA在生物膜形成中的作用。方法 微量滴定板法测定生物膜形成能力,将efaA⁺、efaA^- 粪肠球菌S₁₄、S₁₄-pAT28、S₁₄-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37 ℃培养24 h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部生物膜的OD₅₇₀ 值;MTT法比较S₁₄、S₁₄-pAT28、S₁₄-pAT28-efaA所形成的生物膜的活菌含量OD₄₉₂;共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察比较efaA⁺、efaA^-肠球菌形成的生物膜的平均厚度、最大厚度。结果 efaA⁺ 转化株在各培养时间点微量滴定板法测定的生物膜形成能力OD₅₇₀ 值、MTT法测定的OD₄₉₂活菌含量、CLSM观察的生物膜的平均厚度、最大厚度均大于野生株及空质粒转化株,P<0.05;空质粒转化株与野生株比较无显著性差别,P>0.05。结论 粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。