鸭乙型肝炎病毒感染雏鸭原代肝细胞培养方法的建立及其应用

应用胰蛋白酶灌流DHBV感染北京雏鸭肝脏,制备原代培养的鸭肝细咆,斑点、杂交法检测DHBV DNA。观察了体外培养条件下鸭肝细胞中DHBV复制动态和药物对DHBV DNA复制的作用。结果表明,培养1～8天的鸭肝细胞中DHBV处于活跃复制状态,随着培养时间继续延长,细胞逐渐脱落,细胞中DHBV DNA减少,复制减弱。磷羧基甲酸钠、叠氮脱氧胸苷、脱氧无环鸟苷和中药肝可康、肝复灵五种药物对DHBV DNA的复制均有抑副作用。     

鸭乙型肝炎病毒DNA聚合酶和逆转录酶在抗乙型肝炎病毒药物研究中的应用

本实验改进了鸭乙型肝炎病毒(DHBV)复制复合体(RCs)的制备方法,研究了14种中药复方和单味药提取物及30种成分药对DHBV DNA、聚合酶(DNAP)和逆转录酶(RT)的抑制作用。发现小柴胡汤提取物对DHBV RT和DNAP有轻度抑制作用,其7味药提取物中,黄芩和半夏对RT的半数抑制浓度(IC50)分别为1.25和18.6mg/ml,黄芩对DNAP的IC50为0.925mg/ml。鸭体内实验证明,口服给予黄芩水煎剂(5g/kg,每日3次,共10天)可显著降低鸭血清中DHBV DNA水平。此外,虎杖提取物对RT的IC50为1.76mg/ml,鱼腥草素等9种成分药对RT有轻度抑制作用。     

儿茶素衍生物对人免疫缺陷病毒逆转录酶及DNA聚合酶的抑制作用

在体外观察绿茶提取物(GTE)及其中3种成份──没食子酰表没食子儿茶素(EG-CG)、没食子酰表儿茶素(ECG)及表没食子儿茶素(EGC)对克隆的人免疫缺陷病毒1型逆转录酶(HIV-1 RT)、鸭乙型肝炎病毒复制复合体逆转录酶(DHBV RCs RT),单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶(HSV-1 DNAP)及牛胸腺DNA聚合酶α(CT DNAPα)活性的抑制作用,结果4种化合物的IC_(50)浓度分别为EGCG0.0066μmol/L,ECG0.084μmol/L、GTE0.1μg/ml和EGC7.2μmol/L。动力学研究发现EGCG对HIV-1 RT的外源性模板(rA)·(dT)_(12-18)为混合型抑制,对底物dTTP为非竞争性抑制。牛血清白蛋白可显著降低儿茶素衍生物对HIV-1RT的抑制作用。     

抗嗜肝DNA病毒中草药的体外快速筛选

采用测定鸭乙型肝炎病毒未成熟核心颗粒复制复合体中内源性DNA多聚酶(DHBV RCs DNAp)及HBV DNAp的方法,对叶下珠等中草药提取物进行了对DNAp的抑制试验;同时采用测定抑制HBsAg与抗-HBs结合方法,观察药物提取物对HBsAg的灭活能力。结果显示出:①叶下珠提取物对DHBV RCs DNAp有较强体外抑制作用,在浓度为1mg/ml、0.1mg/ml和0.01mg/ml时其抑制率分别为72.6％、45.6％和5.2％,而其它药物抑制作用较弱或无抑制作用;②叶下珠、旱莲草和虎杖提取物对HBV DNAp有体外抑制作用,在浓度为1mg/ml时,抑制率分别为67.6％、65.5％和79.9％。③虎杖、大黄、夏枯草、金钱草、旱莲草和叶下珠等中草药提取物对HBsAg有较强的体外抑制能力,在浓度为10mg/ml时对HBsAg与抗-HBs结合的抑制率分别为97.6％、93.8％、84.5％、82.1％、83.2％和73.3％,并且抑制率与药物浓度间有剂量应答。     

EXPRESSION OF HBV PRE S1 PEPTIDE IN E. Coli AND PRODUCT CHARACTERIZATION

HBV Pie S1 sequence is supposed to play an inaportajtt role in the infection of HBV. Presence of Pre S1/anti-Pre S1 in serum has valuable clinical implications. In order to improve the study of Pre S1,Pre S1 sequence was overexpressed in E, coti as a fusion protein with MBP (Maltose-binding protein), and anti-Pre S1 antiserum was elicited in rabbits by Pre S1-NIBP purified by affinity chromatography. The recombinant plasmid constructed from pMAL-cRI expressed the 106aa Pre S1 sequence at the C terminal of MBP by tae promoter. The resulting protein is about 54kD in size. Western-blot analysis confirmed its reactivity with antiserum derived from synthetic Pre S1 peptide and serum from patients with acute hepatitis B (AHB). ELISA showed that Pre S1-MBP and Dane particles purified from AHB patient‘s serum reacted with antiserum against synthetic pie S1 peptide,and this reaction was specifically inhibited by synthetic Pre S1 peptide, ELISA also demonstrated that antiserum against Pre S1-MBP reacted with synthetic pre S1 puptide,but not with synthetic HCV puptide or HEV peptide.     

抗HCV药物及其体内外模型研究进展

美国Chiron公司的研究人员Choo等于1989年首次成功地克隆了非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒cDNA,正式将该病毒命名为丙型肝炎病毒(Hepatitis Cvirus,HCV),并建立了测定血清HCV抗体的酶联免疫吸附试验。流行病学研究表明,HCV感染是引起输血后肝炎的最主要病原体,随着HCV诊断技术在献血员筛选中的应用,我国辅血后肝炎的发生率已降低了80％。尽管如此,HCV感染的防治仍将是摆在我们面前的一个十分艰巨的任务,因为除通过输血和血液制品