雷公藤红素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡研究

目的研究雷公藤红素对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机理。方法体外培养SMMC-7721细胞,细胞接受雷公藤红素处理后,采用CCK-8实验及Annexin V-FITC/PI双染实验观察其对SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响;采用Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3活性及Western blot法检测SMMC-7721细胞中NF-κB蛋白的表达;同时用人肝癌细胞系SMMC-7721进行裸鼠成瘤实验,观察雷公藤红素对裸鼠成瘤的影响。结果雷公藤红素可以抑制SMMC-7721细胞增殖并呈浓度和时间依赖性;Annexin V-FITC/PI双染实验显示随着药物浓度的增加,出现凋亡的细胞明显增加;Caspase-3活性测定实验显示细胞接受雷公藤红素处理后,Caspase-3活性明显增强;Western blot实验显示SMMC-7721细胞接受雷公藤红素处理后,细胞中NF-κB蛋白表达下调,并呈现一定的时间依赖性。裸鼠成瘤实验显示,雷公藤红素可以抑制裸鼠种植瘤的生长。结论雷公藤红素能显著抑制SMMC-7721增殖并诱导其凋亡,并可以抑制裸鼠种植瘤的生长。雷公藤红素可能通过激活Caspase-3通路及抑制NF-κB通路诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究

目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒（CNHK500-hTRAIL）和非增殖型腺病毒（Ad-hTRAIL）对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力。采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况。以及通过流式细胞术（FCM）检测其对细胞早期凋亡的影响。结果CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MOI值（MOI=0.1）即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤。CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL。结论靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。     

Lupeol对肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】〓目的〓探讨羽扁豆醇(lupeol)对人肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的作用及机制。方法〓采用MTT法检测lupeol对肝癌细胞 SMMC-7721和正常肝细胞L-02的增殖抑制作用,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot检测TRAIL受体及抗凋亡蛋白表达变化,比色法分析caspase-8、-9、-3酶活性改变。结果〓lupeol对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用(IC50=40 μmol/L),而对正常肝细胞L-02无细胞毒作用;lupeol在30、40、50 μmol/L浓度范围诱导SMMC-7721细胞48小时的凋亡率分别为5.5%、12.6%、28%;抗凋亡蛋白c-FLIPL表达下调,caspase-8及caspase-3活性增强均呈剂量依赖性。结论〓Lupeol通过下调c-FLIPL表达激活caspase通路诱导肝癌细胞凋亡,对肝癌细胞增殖发挥抑制作用。     

TSA对人肝癌细胞株E-cadherin启动子区甲基化及表达的影响

目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌SMMC-7721细胞株E-cadherin基因(E-cad)启动子区甲基化及其表达的影响.方法 TSA(300 nm/L)处理人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法、TUNEL染色法分别检测细胞生长抑制及凋亡情况,甲基化特异性的PCR(methylation-specificPCR,MSP)检测处理前后E-cad启动子区CpG岛甲基化状态;Western blot检测处理前后E-cad及DNMT3b表达水平的变化.结果 TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长并诱导其发生凋亡,与对照组相比,实验组细胞生长抑制率为21.85%,对照组细胞凋亡率为(4.69±0.56)%,实验组凋亡率为(14.94±0.91)%,与对照组相比,凋亡细胞明显增多(P=0.000).用药前E-cad启动子区CpG岛为甲基化状态,E-cad蛋白表达阴性.TSA处理后E-cad启动子区CpG岛发牛脱甲基化,E-cad蛋白恢复表达.TSA亦导致DNMT3b的表达水平降低. 结论去乙酰化转移酶抑制剂TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并可诱导其发生凋亡,逆转E-cad基因启动子区的甲基化状态,并恢复该基因表达.TSA有可能通过DNMT3b发挥脱甲基化作用.     

NF-κB P65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究

目的 探讨NF-κB P65亚基siRNA(NF-κB P65 siRNA)在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1,分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组.MTT方法检测细胞增殖情况;Western blot方法检测NF-κB P65及凋亡相关蛋白的表达水平;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况;电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性.BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型.治疗后监测肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数.结果 转染后72 h,与其他组相比,联合治疗组显著降低了细胞活力指数(P<0.05),下调了Bel-2和proeaspase-3的表达水平,同时上调了Bax的表达水平;流式细胞仪检测结果显示,联合治疗组细胞凋亡率高于其他组(P<0.05);EMSA实验结果证实,NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组(P<0.05).联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01).结论 NF-κB P65 siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性,调控凋亡相关蛋白的表达水平,激活线粒体凋亡途径,从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用.     

NF-κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用

目的 研究NF-κB、Caspase-3在腺苷(ADO)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的ADO(0.1～5 mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应.2.0 mmol/L ADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100 μmol/L)作用HepG2细胞12 h、24 h,采用Hoechst 33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF-κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性.结果 ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系.药物作用24 h、48 h的IC50分别为2.52 mmol/L和1.89 mmol/L.ADO单独处理HepG2细胞12 h和24 h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P<0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub-G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P<0.05).ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P<0.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了 Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P<0.05).结论 ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3.抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强ADO的细胞毒作用.     

HGF通过P13K/AKT信号通路上调SMMC-7721细胞Mcl-1的表达

目的 探讨HGF是否上调SMMC-7721细胞抗凋亡蛋白Mcl-1的表达以及HGF是通过哪条信号途径调节MCl-1.方法 人肝癌细胞SMMC-7721进行实验;采用RT-PCR检测HGF受体c-Met在SMMC-7721细胞的表达情况;用Western blot方法 检测MAPK和P13K/AKT磷酸化以及Mcl-1蛋白的表达;用信号通路阻断剂处理SMMC-7721细胞,检测HGF是通过哪条信号途径调节Mcl-1.结果 人肝癌细胞SMMC-7721表达HGF受体C-Met;HGF能够激活MAPK、PI3K/AKT信号转导途径;HGF能够上调SMMC-7721细胞Mcl-1表达;进一步用特异的抑制剂阻断MAPK途径后,并不能改变HGF对Mcl-1的上调作用,而阻断PI3K/AKT途径后,HGF对Mcl-1的上调作用被抑制.结论 HGF对Mcl-1的上调作用是通过PI3K/AKT途径介导的.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体治疗肝细胞癌的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与其受体在肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达及意义,及利用TRAIL对HCC的治疗作用。方法采用免疫组化技术及原位杂交方法分别检测了100例肝癌组织,100例癌旁组织,40例正常肝组织中TRAIL及TRAILR的表达,并结合临床资料进行分析;采用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。结果TRAIL在正常肝组织中无表达,癌旁组织中的表达明显高于癌组织。86例肝癌组织不表达诱捕受体DcR1(86%),55例肝癌组织不表达诱捕受体DcR2(55%),40例正常肝组织两种诱捕受体均有表达。肝癌组织中死亡受体为高表达,诱捕受体为低表达,正常肝组织则相反,两者间有显著差异性(P<0.05)。肝癌组织中死亡受体的表达与肿瘤的分化呈正相关(P<0.01),与肿瘤分级呈负相关(P<0.05),与病人的性别、年龄、AFP水平、肿瘤的大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10%,而Jurkat细胞凋亡率达70%以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50%。结论HCC时,TRAILR普遍表达,但存在受体类型的表达差异,其中DcR1大多缺失,这为利用TRAIL治疗HCC提供了理论依据,然而,单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制

目的 观察5-氮杂胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制。方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为0、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率;Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点;Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达。结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性（P＜0.05）;与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加。结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关。5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关。     

核因子-κB活化受抑对TRAIL诱导前列腺癌细胞株PC-3M凋亡效能的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸毗咯烷(PDTC)对核因子(NF)-κB活化的抑制作用,探讨PDTC对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导激素耐受型前列腺癌细胞株PC-3M凋亡的促进作用.方法 根据单用TRAIL(25、50、100 μg/L)或PDTC(25、50、100μmoL/L)或两者合用[25/25、25/50、25/100、50/25、50/50 PDTC(μmoL/L),TRAIL(μg/L)]等不同干预情况将PC-3M细胞分组,以细胞免疫组织化学和凝胶电泳迁移率(EMSA)检测法分析NF-κB核转位的活化情况,并通过MTY和流式细胞分选法研究PDYTC的参与对TRAIL诱导凋亡能力的影响.结果 EMSA和细胞免疫组织化学结果显示TRAIL单独诱导PC-3M细胞凋亡过程中引起NF-κB的显著活化,但是经PDTC预处理的PC-3M细胞中NF-κB的核转位受到抑制.导致其对细胞凋亡的保护作用丧失.检测凋亡显示PDTC作为NF-κB的强抑制物本身并不具有明显的细胞毒性,TRAIL+PDTC作用组的杀伤效应显著增强,远远超过单用TRAIL组对细胞的杀伤率(P<0.01).结论 TRAIL杀伤激素耐受型前列腺癌细胞的作用受到NF-κB活化的影响,抑制NF-κB活化可以显著增强TRAIL的凋亡诱导效用.     

Roscovitine对增生期肝癌细胞周期的影响

目的 探讨细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂Roscovitine对增生期肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的影响.方法 采用体外培养的肝癌细胞SMMC-7721,经过Roscovitine作用后,对SMMC-7721细胞的形态、生长情况、细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、Caspase-3、bcl-2 mRNA的表达情况进行观察.结果 MTT提示:Roscovitine对SMMC-7721细胞的增生有抑制作用,作用效果呈时间、剂量依赖性,并促进细胞的凋亡;流式细胞仪发现G0期、G1期的比例增加,细胞出现凋亡;R-T PCR显示CDK2 mRNA表达水平降低,凋亡相关基因bel-2表达降低,Caspase-3 mRNA水平表达升高.结论 Roscovitine可以抑制增生期肝癌细胞的生长、增生,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞的凋亡,凋亡机制与bcl-2、Caspase-3的表达改变有关.     

NF-κB decoy寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM化疗敏感性的研究

目的研究NF-κB decoy寡核苷酸增强肝癌耐药细胞株HepG2／ADM对阿霉素化疗敏感性的变化。方法通过培养液中阿霉素(adriamycin，ADM)的浓度梯度增加法，长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株，荧光定量PCR检测MDRl的表达，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入化疗药物阿霉素(ADM)，MTT比色法检测细胞增殖，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化。结果HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验(electrophoreretic mobility shift assay，EMSA)分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM(0．1mg／L)后，MTT显示HepG2／ADM细胞的增殖明显抑制，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κB decoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞诱导的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加。结论NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，逆转耐药细胞对化疗药物的耐受，增加其对化疗药物的敏感性。     

肿瘤相关凋亡诱导配体、Survivin、Caspase-3和NF-κB在大肠癌中的表达

肿瘤相关凋亡诱导配体（TRAIL）与FasL有较高的同源性，其选择性地诱导肿瘤细胞发生凋亡，从而使正常细胞逃逸其杀伤作用。有研究结果表明，许多肿瘤对TRAIL并不敏感．Sunivin、NF-κB和Caspase．3是TRAIL诱导细胞凋亡通路中三个关键性的影响因子。我们通过其在大肠癌中的表达的研究以期阐明TRAIL的效能与Survivin、Caspase．3和NF-κB表达的关系。     

TRAIL联合HSP90抑制剂17-AAG诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨17-AAG增加TRAIL诱导肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制.方法 应用流式细胞仪分析17-AAG联用TRAIL对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响;Western blot检测HepG2细胞在17-AAG作用前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、caspa8e-3、c-FLIP、RIP及NF-KB上游调节激酶Akt、IKb-α蛋白的表达变化.结果 联合用药组的细胞生存率为(17.25±2.34)%,显著低于17-AAG单独用药组的[(93.14±5.25)%,P<0.01];17-AAG预处理,随其浓度和时间的增加能明显下调RIP的表达,进而影响Akt的磷酸化,但对c-FLIP的表达无明显影响.结论 TRAIL联合17-AAG可以诱导肝癌细胞凋亡,其机制是通过下调RIP的表达,活化凋亡发生的死亡受体通路及阻断NF-κB通路来实现的.     

丹参酮IIA对胃癌细胞的抑制作用及其与NF-κB信号通路的关系

目的：探讨丹参酮IIA（tanshinone IIA）体外对人胃癌SGC7901细胞的作用及其对NF-κB信号通路的影响。 方法：不同浓度丹参酮IIA（0.5、1、2、4 μg/mL）作用SGC7901细胞不同时间（24、48、72 h）后,用MTT法检测细胞增殖情况。丹参酮IIA（2 μg/mL）作用SGC7901细胞48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测NF-κB p65亚单位、IκB-α、磷酸化IκB-α、IKK-α/β、磷酸化IKK-α/β的水平;ELISA法检测p65亚单位的DNA结合活性。 结果：MTT结果显示,丹参酮IIA（1、2、4 μg/mL）明显抑制SGC7901细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性（均P<0.05）;凋亡分析显示,丹参酮IIA处理组细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.05）;NF-κB信号通路相关分子检测显示,与对照组比较,丹参酮IIA处理组细胞p65、IKK-β及其磷酸化蛋白水平明显下降（均P<0.05）,IκB-α水平无明显改变（P>0.05）,但其磷酸化蛋白水平明显降低（P<0.05）,而IKK-α及其磷酸化蛋白表达水平表达变化均不明显（均P>0.05）;NF-κB亚单位p65的DNA结合活性明显下降。 结论：丹参酮IIA可抑制人胃癌SGC7901细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是降低NF-κB信号通路的活性有关。     

TRAIL的抗肝细胞癌作用研究

目的 探讨TRAIL对HCC的治疗作用。方法 用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721，观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用分子克隆技术构建了真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL，转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞，观察其疗效。体内实验建立裸鼠肝癌模型，观察TRAn。的抑癌作用。结果TRAR，(100ng／m1)处理24h，肝癌细胞凋亡发生率约10％，而Jurkat细胞凋亡率达70％以上，胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-TRAIL可有效的导入TRAIL基因并获得高表达，但对裸鼠肝癌无明显抑制作用。结论 肝细胞癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象，提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素，单一的TRAIL疗HCC疗效有限。     

重离子与X射线辐射人肝癌细胞后细胞凋亡及STAT-3基因表达的研究

目的 探讨重离子辐射对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖及细胞凋亡的影响,以及STAT-3基因表达的变化.方法 采用克隆存活及流式细胞技术,探讨体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞周期及细胞凋亡的变化,并采用RT-PCR法及Western blotting法检测肝癌细胞系SMMC-7721 STAT-3基因的表达.结果 人肝癌细胞系SMMC-7721经不同剂量重离子辐射后,随辐射剂量增加,细胞存活率(SF)明显降低(分别t=0.89、0.76、0.41、0.23,均P＜0.05).流式细胞仪检测显示细胞周期G2/M期阻滞增强,重离子较X射线作用更明显(分别t=1.31、8.26,P＜0.05),重离子辐射较X射线对细胞凋亡率影响更大(x2=48.46,P＜0.01).Western blotting和RT-PCR法均显示随着辐射剂量的增加STAT-3基因的表达逐渐增强.结论 重离子较X射线可更明显地诱导癌细胞凋亡,降低细胞存活率,人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞凋亡与STAT-3基因的表达相关.     

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot免疫组织化学技术检测32例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果：NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.05)。免疫组化结果显示，NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达，而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论：NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达，提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异，提示NF-κB活化后，进入胞核，通过调节下游基因的转录，促进肝癌的发生。     

核因子-κB诱骗寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞化疗敏感性的机制

目的 研究核因子（NF）-κB诱骗（decoy）寡核苷酸对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素（ADM）化疗敏感性的影响及其内在机制。方法培养肝癌耐药细胞株，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入ADM，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖，采用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡，观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化，DEVD-pNA降解法检测Caspase-3的活性变化，Western blot检测bcl-2蛋白表达的变化。结果转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验（EMSA）分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM（0.1mg／L）后，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κBdecoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加，Caspase-3的活性增加，bcl-2的表达下调。结论 NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，Caspase-3活性增加和bcl-2的表达下调是其增加化疗药物的敏感性的可能机制。