KLF7对骨髓间充质干细胞增殖和施万样细胞分化的影响

目的探讨转录因子KLF7对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和施万样细胞分化的作用。方法 BMSCs培养与鉴定,应用腺病毒AAV-KLF7和AAV-NC转染BMSCs。将BMSCs分为AAV-KLF7组、AAV-NC组和正常组。应用Western blots和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测KLF7及其靶基因神经生长因子(NGF)表达水平,EdU免疫荧光染色及MTT法检测各组细胞增殖情况,应用施万细胞分化培养液和免疫荧光染色检测各组细胞诱导分化为类施万样细胞情况。结果与正常组和AAV-NC组比较,AAV-KLF7组KLF7蛋白和mRNA表达水平显著升高,NGF mRNA表达亦显著升高(P0.05);AAV-KLF7组EdU阳性细胞比率显著增多,增殖活性显著增加(P0.05);诱导10 d后AAV-KLF7组S100阳性细胞比率显著增多(P0.05)。结论 KLF7显著促进BMSCs增殖和施万样细胞分化。     

大鼠脂肪干细胞来源的施万细胞样细胞髓鞘形成能力的研究

目的 研究大鼠脂肪干细胞(ADSC)来源的施万细胞样细胞的髓鞘形成能力.方法 取大鼠脂肪组织分离、培养及鉴定ADSC,使用heregulin、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子和forskolin将ADSC诱导为施万细胞样细胞.将施万细胞样细胞和PC12细胞共培养.光镜(×100)下观察施万细胞样细胞的形态,免疫细胞化学染色检测其表面标志物表达,电镜观察其髓鞘形成能力.结果 大鼠ADSC均表达中胚层标志物fibronectin,极少数表达神经干细胞标志物nestin.ADSC诱导的施万细胞样细胞的形态为双极或三极细胞,施万细胞标志物胶质纤维酸性蛋白和S100表达阳性.电镜观察发现,施万细胞样细胞和PC12细胞形成髓鞘样结构.结论 大鼠ADSC来源的施万细胞样细胞具有髓鞘形成能力.     

嗅鞘细胞及其表达的NGF和BDNF对神经干细胞增殖的影响

目的 研究嗅鞘细胞及其表达的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对神经干细胞增殖的影响.方法 采用共培养液培养以及NGF或BDNF抗体封闭的方法,观察嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响.免疫组化和RT.PCR半定量分析嗅鞘细胞表达的细胞因子及其受体的情况.结果 共培养液培养4d后,神经干细胞数量明显增多(P<0.05).免疫组化和RT-PCR半定量分析结果显示,嗅鞘细胞表达多种细胞因子及受体,共培养液培养2d后嗅鞘细胞表达NGF和BDNF mRNA的相对值明显高于对照组(P<0.05).抗体封闭培养液中的NGF或BDNF后,没有影响神经干细胞的增殖.结论 嗅鞘细胞表达大量细胞因子作用于神经干细胞,促进其增殖.在本研究条件下,神经干细胞的增殖可能与嗅鞘细胞表达的碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)有关,而与NGF和BDNF无关.     

脑源性神经营养因子辅助施万细胞治疗实验性自身免疫性神经炎

目的 研究脑源性神经营养因子(BDNF)辅助施万细胞治疗实验性自身免疫性神经炎(EAN)的效果,并探讨其作用机制.方法 用400μg P2(57-81)多肽和弗氏完全佐剂的混合乳液免疫125只Lewis大鼠建立EAN模型.分别在致敏14 d经小脑延髓池注射羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂荧光染料(CFSE)标记的施万细胞(SCs移植组,n=28)或经BDNF处理的施万细胞(SCs+BDNF移植组,n=48),其余为EAN模型组(n=49),以致敏45 d作为研究终点.每日对大鼠进行临床瘫痪评分;分别于致敏25、35及45 d处死部分大鼠,取其坐骨神经进行移植细胞追踪,采用HE、Luxol坚牢绿-焦油紫及免疫组织化学染色,评价炎性细胞浸润及脱髓鞘情况,并比较CD4、CD8、CD68、S-100及神经生长因子(NGF)阳性细胞数量差异.结果 致敏大鼠均发病,植入的施万细胞能向脱髓鞘神经组织迁移.与EAN模型组比较,SCs移植组各时间点各指标差异均无统计学意义;SCs+ BDNF移植组大鼠瘫痪程度恢复较快,致敏45 d临床瘫痪评分分值降低,致敏25及35 d炎性细胞浸润(EAN模型组:325.8±10.8、221.4±35.2;SCs+ BDNF移植组:307.3 ±4.6、197.2±16.8)减少(t=2.172,P=0.031;t=3.756,P=0.000),CD4、CD8及CD68阳性细胞数均减少,致敏35及45 d髓鞘脱失程度(EAN模型组:3.4±0.5、2.9±0.8;SCs+ BDNF移植组:2.9±0.8、2.3±0.5)减轻(t=-7.408,P=0.000;t=-6.092,P=0.000),致敏25、35及45 d S-100阳性细胞数均增高,而NGF的阳性细胞数均降低.结论 经小脑延髓池植入的施万细胞可以迁徙到坐骨神经.BDNF辅助施万细胞移植治疗EAN有一定的疗效,可能通过抑制炎性细胞浸润,提高供体施万细胞活性,促进神经组织S-100表达及减少NGF应激性增高而发挥作用;而施万细胞单独移植治疗EAN无效.     

Aβ1-40海马注射对大鼠神经胶质细胞S100β和iNOS表达的影响

目的在体条件下观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对S100β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨三者之间的相互关系.方法以不同浓度Aβ1-40溶液及生理盐水做海马立体定向注射后,采用刚果红染色、尼氏染色及免疫组织化学方法,显示胶质细胞反应、神经元损伤情况及S100β、iNOS表达变化.结果胶质细胞增生与神经元缺失程度以及S100β与iNOS的表达水平均随Aβ1-40浓度增大而增加,4μg/μl Aβ溶液注射组S100β阳性细胞数(个/视野)为42.39±3.46,显著多于盐水对照组(34.50±3.57),P<0.01;iNOS阳性染色面积与S100β阳性细胞数存在较强的相关性(r=0.873).结论在体条件下高含量Aβ强烈诱导胶质细胞S100β和iNOS的表达,结果提示三者之间的相互作用在Alzheimer病发病机制中有重要作用.     

EphB4为靶的siRNA抑制脑胶质瘤细胞的体外实验研究

目的探讨EphB4在脑胶质瘤细胞中的生物学作用。方法采用免疫组化的方法检测EphB4在脑胶质瘤细胞中的表达。合成EphB4siRNA,应用脂质体转染U251细胞,RT-PCR、Western-blot检测对EphB4的转录及表达的抑制效果,MTT法检测其对细胞增殖的影响,Transwell试验检测细胞侵袭能力,TUNEL法检测细胞凋亡。结果应用siRNA方法明显降低了EphB4的转录(P0.01)及表达(P0.05),明显减慢了细胞的增殖速度(P0.05),加大siRNA浓度后,肿瘤细胞生长抑制进一步增强。S1组(25nmol/L)、S2组(50nmol/L)、S3组(100nmol/L)与U251组、siRNASCR组相比,侵袭能力明显降低(P0.05),凋亡细胞数量有明显增加(P0.05)。结论EphB4在脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡过程中发挥着重要的生物学调节作用。     

尼莫地平对大鼠面神经损伤后髓鞘修复的作用及机制研究

目的研究尼莫地平对大鼠面神经损伤后髓鞘修复的作用及机制。方法 90只成年SD大鼠随机分成假手术组、单纯损伤组及药物干预组,采用定量损伤镊制作大鼠面神经主干卡压伤模型。对大鼠进行行为学及电生理学检测,取面神经进行苏木精-伊红(H-E)染色、Luxol fast blue(LFB)髓鞘染色以及免疫组化法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)和S-100β的表达。结果与单纯损伤组相比,药物干预组大鼠在损伤后20d的行为学评分显著改善,复合肌肉动作电位(CMAP)的潜伏期缩短,面神经组织结构恢复,髓鞘染色缺失区域减少,髓鞘碱性蛋白(MBP)及S-100β的抗原活性增强。结论尼莫地平可促进大鼠面神经损伤后的髓鞘修复,其机制可能与药物上调损伤后施万细胞S-100β的表达有关。     

RNA干涉CD44基因抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖与侵袭性研究

目的通过合成靶向分化抗原簇44(CD44)基因的siRNA片段,下调CD44在脑胶质瘤细胞U251中的表达,揭示其在胶质瘤增殖、迁移和侵袭中所起的作用。方法根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段转染U251细胞,利用荧光实时定量(qRT-PCR)检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;蛋白印迹实验(Western blot)检测CD44基因蛋白水平的变化;四甲基偶氮唑蓝染色(methyhhiazolyl tetrazolium,MTT)法检测U251细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U251细胞的迁移与侵袭能力变化。结果体外合成的CD44-siRNA能有效抑制U251细胞中CD44基因在mRNA水平与蛋白水平的表达(P0.05),并抑制细胞的增殖(P0.05)和迁移侵袭能力(P0.05)。结论 CD44-siRNA能够有效抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的肿瘤基因治疗奠定了基础。     

神经生长因子对创伤性脊髓损伤大鼠膀胱功能和轴突损伤修复的作用研究

目的 探讨神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)对创伤性脊髓损伤(Traumatic spinal cord injury,t-SCI)大鼠膀胱功能和脊髓神经轴突损伤修复的影响及其分子机制。方法 取30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,通过改良Allen’s击打法构建创伤性脊髓损伤模型,随机分为假手术组、损伤组和NGF组,每组各10只; 采用血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)评分观察术前、术后大鼠的后肢运动功能; BL-420生物仪实验系统检测尿动力学; 甲苯胺蓝染色吻合口远端截取的左侧腰6前根,计算有髓轴突数量; 采用苏木精-伊红(Hematoxylin eosin,HE)染色大鼠膀胱组织; 原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling,TUNEL)染色大鼠损伤严重的脊髓,观察脊髓神经细胞的凋亡率; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织中原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(proto-oncogene serine/threonine-protein kinase,Raf-1)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(Phospho-mitogen-activated protein kinase kinase 2,p-MEK-2)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase 2,MEK-2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(Phospho-extracellular regulated protein kinases1/2,p-ERK1/2)、细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases1/2, ERK1/2)的蛋白表达水平。结果 BBB评分显示,术前假手术组、损伤组和NGF组的评分无明显差异,而术后与假手术组比较,损伤组和NGF组的评分显著降低(P<0.05); 损伤组的最大逼尿压力和脊髓有髓轴突数量显著低于假手术组和NGF组(P<0.05),但损伤组的残余尿量和膀胱细胞凋亡率显著高于假手术组和NGF组(P<0.05); HE染色显示,损伤组的膀胱水肿严重,逼尿肌结构疏松,而NGF组膀胱损伤减轻; Western blot显示,与假手术组比较,损伤组的p-ERK1/2/ERK1/2和p-MEK-2/MEK-2蛋白水平比值以及Raf-1表达水平显著高于假手术组和NGF组(P<0.05); 假手术组和NGF组最大逼尿压力、髓轴突数量、残余尿量、膀胱细胞凋亡率和蛋白水平均无显著差异(P>0.05)。结论 NGF可能阻碍MAPK/ERK通路的传导,从而促进轴突损伤的修复,改善t-SCI大鼠膀胱功能。     

Influence of abciximab on the adhesion of platelets on a shielded plasma gradient prepared on polyethylene

INTRODUCTION: Thrombotic effects of biomaterial implants are mediated merely through activation of the platelet glycoprotein IIb-IIIa (GpIIb-IIIa) receptor. Consequently, platelet GpIIb-IIIa receptor inhibitors are successfully used during stent implantation procedures to prevent thrombosis. However, currently a new generation of stents contains surface coating, which changes the surface to more hydrophobic or hydrophilic. This change markedly affects the interaction of platelets and may influence the efficiency of GpIIb-IIIa inhibitors. MATERIALS AND METHODS: To study the influence of the wettability of biomaterials on the effectiveness of abciximab, 5-cm polyethylene gradients with contact angles of 100 degrees to 40 degrees were made by means of glow discharge. Fresh whole blood with or without abciximab was recirculated over this gradient. RESULTS: Inhibition of platelet adhesion by abciximab was maximal, but not complete, on the hydrophobic and moderate hydrophobic part of the gradient, with contact angles of 55 degrees to 90 degrees. Percentage inhibition by abciximab was maximal around 60 degrees. CONCLUSIONS: Intermediate hydrophobicity of currently applied stent materials, such as stainless steel, seems optimal in combination with abciximab. However, on hydrophobic and particularly on hydrophilic materials, abciximab is less effective.     

Laser therapy on points of acupuncture on nerve repair

正Paresthesia is the name given to a temporary or permanent sensory loss caused by several surgical procedures that affected the peripheral sensory nerve.In dentistry,common iatrogenic procedures that can lead to sensory loss include third molar removal,blocking of the inferior alveolar nerve     

Effects of lorazepam on rate of forgetting,on retrieval from semantic memory and on manual dexterity

Using a double-blind procedure, 16 out of 32 volunteer subjects (students) each took 2.5 mg of lorazepam (Ativan) orally and the remainder took a placebo. To overcome the problem of wide variation in individual tolerance to the drug, impairment on a task unrelated to memory (a manual dexterity task) was used to divide drug subjects into a group appreciably affected by the drug. subgroup 1, and a group minimally affected, subgroup 2. Only subgroup 1 showed consistent impairment of episodic memory. Both subgroups showed some impairment in a semantic memory task (generation of words from a specified category), but this was confined to the rate at which the task was carried out. The main aim of the experiment was to examine the effect of lorazepam on the rate of forgetting of word lists when drug and control subjects' initial recall levels were equalized. There was no evidence that the drug affected rate of forgetting: this suggests that it does not affect retention. There was also no evidence that it affected retrieval, since there was no impairment in the recall of material presented before administration of the drug. Hence its locus of action is attributed to input, specifically to impaired encoding of contextual information.     

不同病房模式对精神分裂症病情影响的研究

目的探讨不同病房模式对首发精神分裂症患者病情的影响及康复情况。方法开放式病房的患者为研究组68例,同时选择住封闭式病房患者为对照组130例,对两组患者的临床资料进行比较分析。结果对照组患者入院时焦虑抑郁及敌对猜疑出现明显变化（P＜0.05）;研究组患者在第1周时焦虑抑郁已经开始改善,第2周时病情、阳性症状、一般精神病理、敌对猜疑、激活性也出现明显变化（P＜0.05）;第4周时研究组病情及各因子、认知功能及自知力显著改善,与对照组比较存在统计学差异（P＜0.05）。结论开放式病房模式可以减少患者的负性影响,更快改善患者的认知功能,有利于患者自知力的恢复,使患者的病情达到更全面的康复。     

散发神经鞘瘤22号染色体杂合子丢失发生的研究

目的探讨散发神经鞘瘤病人22号染色体（CHR22）杂合子丢失（LOH）情况及其与肿瘤增殖的关系。方法选取4个与NF2基因密切相关的多态性微卫星标记物,应用PCR方法研究54例神经鞘瘤的LOH情况。采用Ki-67和增殖细胞核抗原（PCNA）评估增殖指数。结果23例（42.6%）CHR22发生LOH,听神经鞘瘤发生率显著性高于脊神经鞘瘤（χ2=5.14,P〈0.05）。发生LOH者增殖指数明显高于无LOH者（Pki-67=0.0079,PPCNA=0.0021）。结论在散发神经鞘瘤中,CHR22LOH是常发事件;听神经瘤与脊神经鞘瘤LOH发生率有显著性差异,CHR22LOH与神经鞘瘤的增殖活动性有关。     

氨磺必利对不同亚型精神分裂症的治疗效应

目的探讨氨磺必利对不同亚型精神分裂症治疗效应的差异。方法将150例符合《中国精神障碍分类与诊断标准(第3版)》(CCMD-3)诊断标准的首发住院精神分裂症患者按临床亚型和阳、阴性症状分型(分别为I型和II型)进行分组,全部根据临床用药原则结合病情给予氨磺必利治疗,第一天200mg/d,第二天300mg/d,第三、四天300~400mg/d,第五天起,根据病情及用药后的感受调整剂量至400~1000mg/d,分2次服用,观察8周。于治疗前及治疗第1、4、8周末采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评定各时点的病情,按四级临床疗效标准评定治疗第8周末的疗效,比较不同亚型之间PANSS总分减分率、剂量、疗效的差异。结果 4周末和8周末不同亚型患者的PANSS总评分均低于治疗前(P<0.01),治疗1周末偏执型、未定型、青春型和I型患者的PANSS总评分低于治疗前(P<0.05或0.01);治疗第1、4、8周末PANSS减分率偏执型组高于紧张型组、I型组高于II型组,差异均有统计学意义(P<0.01)。不同亚型之间8周末的疗效和显效率差异无统计学意义(P>0.05),但氨磺必利的平均等效用量以偏执型和I型较高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论氨磺必利对各亚型精神分裂症患者均有较好的效果,需根据患者的亚型特点调整个体化的治疗剂量。