miR-125b-5p靶向调控p53及PDCD4表达对心力衰竭合并心房颤动大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA（miR）-125b-5p靶向调控p53和程序性死亡因子4（PDCD4）对心力衰竭（HF）合并心房颤动（AF）大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用随机数字表法将建立HF模型并诱导AF成功的30只SD大鼠分为模型组和miR-125b-5p组,每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组。miR-125b-5p组大鼠尾静脉注射miR-125b-5p类似物（300滋g/次,1次/周,连续4周）。分析各组大鼠左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）、AF诱导率、诱导时间和细胞凋亡情况。采用RT-qPCR检测心肌组织中miR-125b-5p、p53及PDCD4mRNA相对表达水平。采用Westernblot法检测PDCD4和p53蛋白相对表达水平。在心肌细胞中通过双荧光素酶报告实验分别验证miR-125b-5p与p53及PDCD4的靶向关系。结果miR-125b-5p组、模型组的LVEF、LVFS均低于对照组,AF诱导率、诱导时间、凋亡指数、PDCD4及p53mRNA和蛋白相对表达水平均高于对照组（均P＜0.05）。miR-125b-5p组的LVEF、LVFS和miR-125b-5p相对表达水平高于模型组,AF诱导率、诱导时间、凋亡指数、PDCD4及p53mRNA和蛋白相对表达水平均低于模型组（均P＜0.05）。3组大鼠miR-125b-5p、p53及PDCD4mRNA相对表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。miR-125b-5p能够与PDCD4和p53的靶向结合（P＜0.05）。结论miR-125b-5p通过抑制PDCD4和p53蛋白抑制心肌细胞的凋亡,从而缓解HF合并AF。     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

基于TLR4信号通路研究调控miR-217对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的干预作用

目的:探究基于Toll样受体4(TLR4)信号通路调控微小RNA-217(miR-217)对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的作用。方法:选择75只SD健康雄性大鼠(SPF级),随机分为正常组、假手术组、模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组各15只,模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组大鼠采用公认的盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症肺损伤模型,miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组尾部静脉注射10μL miR-217 mimics control、10μL miR-217 mimics,正常组、假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。评价各组大鼠病理组织变化、肺湿重/干重(W/D)、动脉血气、TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO、PMN细胞计数、miR-217、TLR4信号通路蛋白表达量。结果:miR-217 mimics组病理学评分、W/D、pH、BE均低于miR-217 mimics control组,PaO_2高于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组血清、肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO水平低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组肺泡灌洗液中蛋白含量、PMN细胞计数低于miR-217 mimics control组,差异有统计学差异(P<0.05)。miR-217 mimics组肺组织中miR-217表达量高于miR-217 mimics control组,肺组织中TLR4信号通路蛋白表达量低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-217过表达通过抑制TLR4信号转导通路,阻断炎症反应,改善脓毒症所致的肺损伤,保护肺组织。     

红枣色素通过调控miR-29b-3p/MST1表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及机制

目的探讨红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制。方法设正常对照组(NG)(5 mmol/L D-葡萄糖),高糖处理(HG)组(30 mmol/L D-葡萄糖),HG+红枣色素-低组(30 mmol/L D-葡萄糖+50 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-中组(30 mmol/L D-葡萄糖+150 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-高组(30 mmol/L D-葡萄糖+250 mg/L红枣色素);将miR-NC、miR-29b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p分别转染至未经任何处理的MPC5细胞中,记为miR-NC组,miR-29b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-29b-3p组;将miR-NC、miR-29b-3p、si-NC、si-蛋白激酶1(MST1)染至单纯30 mmol/L的D-葡萄糖处理的MPC5细胞中,记为HG+miR-NC组,HG+miR-29b-3p组、HG+si-NC组、HG+si-MST1组。将anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p转染至30 mmol/L的D-葡萄糖和250 mg/L红枣色素处理的MPC5细胞中,记为HG+红枣色素+anti-miR-NC组、HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组,均采用脂质体法。qRT-PCR检测miR-29b-3p和MST1 mRNA的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与NG组比较,HG组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,MST1 mRNA的表达水平显著升高,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,不同浓度红枣色素的高糖处理组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平逐渐显著升高,MST1 mRNA的表达水平显著降低,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.21±0.03)显著低于miR-NC组(0.42±0.04);anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.87±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.40±0.04),差异均有统计学意义(P0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著升高,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与HG+miR-NC组比较,HG+si-MST1组小鼠足细胞SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。与HG+红枣色素+anti-miR-NC组比较,HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡有保护作用,其机制可能与调控miR-29b-3p/MST1及SOD和MDA活性有关。红枣色素可作为治疗肾损伤的药物,miR-29b-3p、MST1可成为肾损伤治疗的靶点。     

miR-23b-5p通过靶向下调FN1缓解支气管哮喘气道重塑

目的 探讨miR-23b-5p靶向下调纤维连接蛋白1 (FN1)对支气管哮喘（简称哮喘）气道重塑的影响。方法 将BALB/c小鼠随机分为正常对照组和哮喘组,每组6只。Masson染色观察气道壁周围胶原沉积水平。ELISA测定白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、血管内皮生长因子（VEGF）水平。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肺组织中miR-23b-5p表达水平。免疫组织化学染色、Western blotting检测FN1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织中的表达。TargetScan网站预测miR-23b-5p靶基因,双荧光素酶报告实验验证。转染miR-23b-5p模拟物和抑制剂于人支气管平滑肌细胞（HBSMC）后,Western blotting检测FN1表达水平。结果 与正常对照组相比,哮喘组小鼠气道上皮下胶原沉积,IL-6、TNF-α、TGF-β1、VEGF表达显著增高（P <0.001）,miR-23b-5p表达显著降低（P <0.05）。免疫组织化学染色、Western blott...     

miR-181a通过调控Smad7对COPD大鼠气道重塑的作用研究

目的 探讨微小RNA-181a(miR-181a)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织中气道重塑的作用及其可能的机制.方法 80只大鼠随机取65只建立COPD模型,建模成功56只,随机分为模型组、mimics组、inhibitors组、NC组各14只,剩余15只为假手术组.建模2h后,mimics组、inhibitors组和NC组分别尾静脉注射miR-181a mimics、miR-181 a inhibitors和control mimics,假手术组和模型组注射生理盐水.干预24 h后取材,RT-qPCR检测肺组织miR-181a、母亲信号蛋白同源物7(Smad7)mRNA相对表达水平,ELISA法检测肺组织匀浆白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,荧光素酶报告基因分析miR-181a对Smad7的靶向性,HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,测量支气管壁及支气管壁胶原纤维厚度,Western blot检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7、p-Smad7蛋白相对表达水平.结果 与假手术组比较,模型组、NC组和inhibitors组肺组织miR-181a相对表达水平降低,mimics组肺组织miR-181a相对表达水平升高,且mimics组＞模型组和NC组＞inhibitors组(P＜0.05).与假手术组比较,模型组、NC组、mimics组、inhibitors组肺组织匀浆IL-1β、TNF-α水平升高,且mimics组＞模型组和NC组＞ mimics组(P＜0.05).双荧光素酶报告基因分析系统结果显示,miR-181a可显著抑制野生型Smad7相对荧光素酶活性(P＜0.05),而对突变型Smad7相对荧光素酶活性无显著影响(P＞0.05).HE染色显示,假手术组大鼠肺泡细胞正常,模型组、NC组和inhibitors组大鼠肺实质破坏,有炎性细胞浸润和胶原纤维形成.mimics组肺泡细胞趋于正常,炎症减轻,胶原纤维减少,肺泡结构紊乱明显好转.与假手术组比较,模型组、NC组、mimics组、inhibitors组支气管壁和支气管壁胶原纤维厚度增加,且inhibitors组＞模型组和NC组＞ mimics组(P＜0.05).与假手术组比较,模型组、NC组、mimics组和inhibitors组肺组织TGF-β1、MMP-9蛋白相对表达水平升高,p-Smad7蛋白相对表达水平降低,且TGF-β1、MMP-9蛋白相对表达水平inhibitors组＞模型组和NC组＞ mimics组,p-Smad7蛋白相对表达mimics组＞模型组和NC组＞inhibitors组(P＜0.05).模型组和NC组之间的肺组织miR-181a相对表达水平,IL-1β、TNF-α水平,支气管壁和支气管壁胶原纤维厚度,MMP-9、p-Smad7、TGF-β1蛋白相对表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-181a对COPD模型大鼠肺组织中气道重塑有改善作用,可能通过靶向调控Smad7表达发挥作用.     

长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响

目的 研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA (NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法 RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;q RT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况。将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达。结果 NORAD...     

lncRNA HCG18靶向miR-34b-5p/FOXP1轴促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法：收集47例骨肉瘤组织及对应瘤旁组织,RT-qPCR法检测组织中HCG18和miR-34b-5p表达,Pearson相关分析评价骨肉瘤组织中HCG18和miR-34b-5p表达的相关性。体外培养骨肉瘤U2OS细胞,分别转染si-HCG18、miR-34b-5p mimics、共转染si-HCG18与anti-miR-34b-5p或miR-34b-5p mimics与pcDNA-FOXP1后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测细胞中FOXP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HCG18和miR-34b-5p及miR-34b-5p和FOXP1调控关系。结果：骨肉瘤组织中HCG18表达量高于瘤旁组织(P<0.01),而miR-34b-5p表达量低于瘤旁组织(P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,骨肉瘤组织中HCG18与miR-34b-5p的表达呈负相关关系(r=-0...     

miR-548a-3p调控TLR4抑制脂多糖诱导结肠上皮细胞的凋亡

目的 探究微小RNA (miRNA)-548a-3p对脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞的凋亡和炎症反应影响及其机制。方法 收集2019年1月至2020年5月于南方医科大学深圳医院就诊,经肠镜及病理学检查确诊为活动期溃疡性结肠炎35例患者的肠黏膜组织及正常肠道黏膜组织。取正常结肠上皮细胞分为6组:对照组不做任何处理;LPS组给予50 μg/mL LPS处理;miR-NC组、miR-548-3p mimics组、miR-548-3p inhibitor组、miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-toll样受体4(TLR4)组分别转染相应序列,随后使用等量LPS处理。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-548a-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素8(IL-8)含量,双荧光素酶报告基因实验验证miR-548a-3p与TLR4的结合关系;Western blot实验检测TLR4、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因-相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果 miR-548a-3p在溃疡性结肠炎患者肠黏膜组织中相对表达水平为(1.130±0.568),低于正常肠黏膜组织(1.684±0.733),差异有统计学意义(P<0.05);LPS组中miR-548a-3p表达水平为(0.463±0.042),低于对照组的(1.001±0.090),差异有统计学意义(P<0.05)。转染后,miR-548a-3p inhibitor组中TNF-α、IL-8、细胞凋亡率、BAX表达和Caspase 3表达水平高于miR-NC组,而24小时和48小时细胞增殖水平低于miR-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-548a-3pmimics组中含野生型TLR4荧光素酶活性降低(P<0.05)。与miR-548a-3p mimics组相比,miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-TLR4组TNF-α、IL-8、细胞凋亡率、BAX表达和Caspase 3表达水平较高,24小时和48小时细胞增殖水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-548a-3p可通过靶向TLR4抑制细胞凋亡和炎症因子分泌,并促进细胞增殖。     

LncRNA SNHG16通过miR-106b-5p/PHF1轴调节结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)通过miR-106b-5p/聚梳组蛋白家族指蛋白1(PHF1)轴对结直肠癌(CRC)细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织、相邻正常组织及体外培养的CRC细胞系(LoVo、Caco-2、HCT116和SW480)和正常人结肠上皮细胞(CCD 841 CON)中SNHG16、miR-106b-5p、PHF1表达。将SW480细胞随机分组为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor-NC组、si-SNHG16+miR-106b-5p inhibitor组、si-PHF1组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-106b-5p+pcDNA组、miR-106b-5p+pcDNA-PHF1组。采用qRT-PCR检测各组SW480细胞中SNHG16、miR-106b-5p和PHF1的表达水平。MTT法、流式细胞术和Transwell法分别检测SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证...     

miR-27b-3p对脓毒症肺内皮细胞YAP信号表达的调控机制研究

目的探讨微小RNA 27b-3p(miR-27b-3p)对脓毒症模型小鼠肺内皮细胞Yes相关蛋白(YAP)信号的调控机制。方法将40只C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为四组,对照组、盲肠结扎穿孔(CLP)组、miRNA类似物(mimic NC)组、miR-27b-3p类似物(miR-27b-3p mimic)组。利用CLP法构建脓毒症模型小鼠,miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞YAP、细胞间粘附分子(ICAM)、选择素(E-selectin)miR-27b-3p mRNA表达水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平。结果与对照组比较,CLP组小鼠原代肺内皮细胞YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高[YAP:(3.21±0.25)比(1.00±0.12);ICAM:(2.36±0.31)比(1.00±0.12);E-selectin:(1.98±0.11)比(1.00±0.12),P0.05];miR-27b-3p表达明显下调[(0.31±0.15)比(1.00±0.11),P0.05];数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3'UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;Western blot结果显示,与对照组比较,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组比较,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组比较,CLP组小鼠内皮上清液TNF-α、IL-6水平升高[TNF-α:(4.23±0.35)pg/mL比(1.00±0.52)pg/mL;IL-6:(7.43±0.83)pg/mL比(1.00±0.52)pg/mL,P0.05];与mimic NC组比较,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清液TNF-α、IL-6的含量明显升高[TNF-α:(8.52±0.46)pg/mL比(4.15±0.24)pg/mL;IL-6:(10.16±0.62)pg/mL比(7.85±0.57)pg/mL,P0.05]。结论脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。     

内皮细胞 miR-27b-3调控YAP信号参与脓毒症中的机制研究

【摘要】目的 探究miR-27b-3p对YAP信号的调控及其在脓毒症发生发展中的作用。方法 将小鼠按照随机数列法均分为4组,分别为对照组, CLP（盲肠结扎穿孔）组,mimic NC组,miR-27b-3p mimic组。利用CLP（盲肠结扎穿孔）法构建小鼠脓毒症模型, miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,对mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,qRT-PCR（荧光定量PCR）检测细胞中YAP（是相关蛋白1）、ICAM（细胞间粘附分子）、E-selectin（选择素）miR-27b-3p mRNA水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;WB检测细胞中YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)水平。 结果 与对照组相比,CLP组小鼠原代肺内皮细胞中YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高（P＜0.05）,miR-27b-3p表达明显下调（P＜0.05）;数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3’ UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;WB结果显示,与对照组相比,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组相比,CLP组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05） ;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6的含量明显升高（P＜0.05）。结论 miR-27b-3p在脓毒症血管内皮细胞中低表达,而YAP在内皮中高表达。脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞中进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。     

miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。 方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。 结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P＜0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P＜0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P＜0.05)。 结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的：探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌(LSCC) TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。方法：TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。结果：慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01...     

microRNA-513b-5p通过抑制αB-crystallin 促进晶状体细胞氧化应激和凋亡

目的 研究microRNA(miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制。方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平。miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H₂O₂共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系。结果 白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P<0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P<0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H₂O₂所诱导的活性氧ROS(P<0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P<0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P<0.05)。结论 miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡。     

MiR-10b-5p通过靶向NCOR2调控乳腺浸润性导管癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-10b-5p通过靶向人源重组蛋白(NCOR2)调控乳腺浸润性导管癌细胞的迁移和侵袭。方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析了1 109例乳腺浸润性导管癌和113例相邻正常组织中miR-10b-5p和NCOR2的mRNA水平，根据miR-10b-5p表达中位数分为高表达组和低表达组，分析两组的总生存率(OS)、无进展生存期(PFI),同时采用实时荧光定量PCR法检测20例患者乳腺癌组织及对应的相邻正常组织miR-10b-5p和NCOR2的mRNA水平。在细胞水平应用乳腺癌细胞系MCF-7构建miR-10b-5p对照组(转染miR-NC),miR-10b-5p过表达组(转染miR-10b-5p mimics),运用qRT-PCR法和Western blot法检测NCOR2 mRNA水平和蛋白水平表达量，采用MTT法检测细胞增殖情况，采用划痕法检测细胞水平迁移情况，采用transwell法检测细胞垂直迁移情况。结果 miR-10b-5p在乳腺癌组织中的表达明显低于相邻正常组织(P<0.05),而NCOR2在乳腺癌组织中的表达明显高于相邻正常组织(P<0....     

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

【摘要】目的 探讨四味土木香散（STP）对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法 第一部分：Wistar大鼠随机分为假手术（sham）组、模型（Mod）组、Mod+STP高、中、低剂量（STP-H、STP-M、STP-L）组、Mod+阳性药卡托普利（CAP）组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分：Wistar大鼠随机分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂（agomir）组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂（DAPT）组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果 第一部分：STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。第二部分：与Mod组比,STP-H组 TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。结论 STP可通过抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。     

抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用研究

目的 探讨抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用及可能机制.方法 随机将100只SD大鼠分成5组:假手术组(sham组)、模型组(Model组)、antagomir NC组(NC组)、miR-128-3p antagomir组(antagomir组)和miR-128-3p antagomir+ Nrf2抑制剂ML385组(antagomir+ML385组),每组20只.采用尾静脉注射油酸(0.15 ml/kg)的方法建立肺损伤大鼠模型,术前1h给予miR-128-3p an-tagomir或ML385进行干预.造模成功24 h后,测定动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(OI)及肺组织湿/干重比(W/D);苏木精-伊红染色法(HE)观察肺组织病理学改变并评分;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)水平;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测肺组织中miR-128-3p表达水平以及E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA水平;蛋白质印迹免疫(Western blot)检测肺组织中Nrf2和HO-1的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因实验验证miR-128-3p与Nrf2的靶向作用关系.结果 与sham组比较,Model组大鼠肺组织损伤严重,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平增加(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01);与Model组比较,an-tagomir组大鼠肺组织损伤程度得到明显改善,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平下降(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均上升(P＜0.01),而NC组大鼠以上各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与antagomir组比较,an-tagomir+ ML385组大鼠以上各指标变化趋势又发生逆转(均P＜0.01).荧光素酶报告基因实验证实,miR-128-3p能靶向调控Nrf2的表达.结论 抑制miR-128-3p表达可显著减轻模型大鼠的肺损伤,其作用机制可能与通过靶向调控Nrf2表达,抑制肺组织炎症反应有关.     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

lncRNA TUG1靶向调控miR-199a-3p对高糖诱导的足细胞损伤的作用与机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)是否通过靶向miR-199a-3p调控高糖诱导的足细胞损伤.方法:将MPC5细胞分为NG 组(正常对照)、HG 组(高糖)、HG+pcDNA-NC 组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-199a-3p组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组、HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组.RT-qPCR检测TUG1、miR-199a-3p表达,CCK-8法测定细胞增殖,Western blotting分析Podocin、Nephrin表达,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒测定IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平.结果:与HG+pcDNA-NC组或HG+anti-miR-NC组比较,HG+pcDNA-lncRNATUG1 组或HG+anti-miR-199a-3p组MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin表达量升高,凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH 水平降低(P＜0.05).TUG1 靶向调控miR-199a-3p 的表达.与 HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-NC组相比,HG+pcDNA-lncRNA TUG1+miR-199a-3p组减少MPC5细胞增殖率、Podocin、Nephrin 表达量,增加 miR-199a-3p、凋亡率、IL-1β、TNF-α、MDA、LDH水平(P＜0.05).结论:TUG1通过靶向miR-199a-3p,促进高糖诱导的足细胞的增殖,减轻细胞凋亡、炎症和氧化应激.