MiR-125b-5p 抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase（http://starbase. sysu.edu.cn/）生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、miR-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qPCR和Westem blot实验检测各组中miR-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RT-qPCR技术证实miR-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达（P<0.05）;选择SKOV3和HO8910细胞进行转染,过表达miR-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制（P<0.05）;Starbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p 和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达miR-125b-5p组中miR-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。过表达miR-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。Transwell实验显示过表达miR-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达miR-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论 miR-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。     

MiR-34b-5p通过靶向PGRN减轻LPS诱导的急性呼吸窘迫综合征大鼠的肺部细胞凋亡

目的探讨miR-34b-5p对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠的肺部炎症、细胞凋亡的影响及可能机制。方法 60只SD大鼠分为对照组、ARDS、ARDS+miR-34b-5p mimics mock及ARDS+miR-34b-5p mimics组,每组15只。除对照组外,其余组大鼠腹腔注射LPS 3 mg/mL,ARDS+miR-34b-5p mimics mock和ARDS+miR-34b-5p mimics组建模后分别尾静脉注射50μL miR-34b-5p mimics mock和miR-34b-5p mimics,对照组大鼠腹腔和尾静脉注射等量生理盐水。RT-PCR检测肺组织中miR-34b-5p mRNA表达,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理变化,计算大鼠肺组织W/D值,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测颗粒体蛋白前体(PGRN)蛋白表达,生物信息预测miR-34b-5p与PGRN的靶向作用关系,荧光素酶实验验证。结果 ARDS组大鼠肺组织中miR-34b-5p mRNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01);ARDS+miR-34b-5p mimics组大鼠肺组织中miR-34b-5p mRNA水平高于ARDS组,差异有统计学意义(P0.01);ARDS+miR-34b-5p mimics mock组大鼠肺组织中miR-34b-5p mRNA水平高于ARDS组,差异无统计学意义(P0.05)。对照组大鼠肺组织规则,形态完整,清晰;ARDS组大鼠肺组织结构紊乱,肺泡内可见大量的红细胞及炎性细胞浸润。与ARDS组比较,ARDS+miR-34b-5p mimics mock组大鼠肺组织病理改变无明显差别,ARDS+miR-34b-5p mimics组大鼠肺组织较规则,红细胞、炎性细胞少。ARDS组大鼠肺组织W/D值、细胞凋亡率高于对照组,ARDS+miR-34b-5p mimics组大鼠肺组织W/D值、细胞凋亡率低于ARDS组,差异均有统计学意义(P0.05);ARDS组大鼠外周血IL-6和TNF-α水平高于对照组,ARDS+miR-34b-5p mimics组大鼠外周血IL-6和TNF-α水平低于ARDS组,差异均有统计学意义(P0.05);ARDS组大鼠肺组织中PGRN蛋白水平低于对照组,ARDS+miR-34b-5p mimics组大鼠组织中PGRN蛋白水平高于ARDS组,差异均有统计学意义(P0.05)。miR-34b-5p mimics mock组大鼠肺组织W/D值、细胞凋亡率、外周血IL-6、TNF-α、PGRN蛋白水平与ARDS组比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-34b-5p与PGRN有良好的靶向关系。结论 MiR-34b-5p可通过靶向PGRN减轻LPS诱导的ARDS大鼠的肺部炎症、细胞凋亡。     

miR-181b-5p调节EGR1/BIM通路对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响

探讨miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病（ALL）中的作用及其潜在的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测四川大学华西医院2019年1月—2021年1月80例ALL患者miR-181b-5p和早期生长反应因子1（EGR1） mRNA的表达水平。分别使用miR-181b-5p模拟物、miR-181b-5p抑制物或（和）EGR1过表达质粒转染人ALL细胞系NALM-6细胞。采用MTT、流式细胞仪和划痕愈合实验检测miR-181b-5p对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。通过双荧光素酶验证miR-181b-5p和EGR1的相互作用关系。Western blot检测细胞中EGR1蛋白和细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达水平。结果 miR-181b-5p在ALL中表达显著上调,EGR1表达下调（P＜0.05）。抑制miR-181b-5p不仅抑制细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,而且上调EGR1和BIM蛋白表达（P＜0.05）;上调miR-181b-5p则具有与之相反的效果（P＜0.05）。EGR1是ALL细胞中miR-181b-5p的靶基因（P＜0.05）。miR-181b-5p过表达可明显削弱EGR1过表达对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响（P＜0.05）。结论 抑制miR-181b-5p可通过靶向上调EGR1和BIM表达在ALL中抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡     

miR-125b-5p调控HK2抑制胆囊癌细胞增殖和糖酵解

  目的  研究miR-125b-5p通过HK2调控人胆囊癌细胞增殖和糖酵解的作用机制。  方法  分别在人胆囊癌细胞GBC-SD中转染NC mimic、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic+pcDNA-NC、miR-125b-5p mimic+pcDNA-HK2。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测miR-125b-5p和HK2 mRNA的表达,Western blot检测HK2和LDHA、PDK1的蛋白表达。细胞计数试剂盒-8（cell countingKit-8,CCK-8）检测细胞增殖活力,糖酵解相关试剂盒检测乳酸生成、葡萄糖消耗以及ATP生成。双荧光素酶报告基因实验对miR-125b-5p和HK2的靶向关系进行验证。  结果  miR-125b-5p在胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ（P < 0.001）以及组织（P < 0.01）中表达降低,且在GBC-SD细胞中低于NOZ细胞中。过表达miR-125b-5p可显著抑制GBC-SD细胞的增殖（P < 0.05）、葡萄糖消耗（P < 0.05）、乳酸（P < 0.001）和ATP的生成（P < 0.01）以及LDHA（P < 0.01）、PDK1（P < 0.001）、HK2（P < 0.0001）表达。starBase数据库和双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p靶向负调控HK2。过表达miR-125b-5p和HK2组中细胞的增殖（P < 0.01）、葡萄糖摄取（P < 0.05）、乳酸（P < 0.01）和ATP（P < 0.05）的生成以及LDHA（P < 0.05）、PDK1（P < 0.05）、HK2（P < 0.05）表达显著高于仅过表达miR-125b-5p组。  结论  过表达miR-125b-5p靶向HK2,抑制人胆囊癌细胞GBC-SD的增殖和有氧糖酵解。     

HDAC2调控MiR199a-3p对大鼠心衰模型中心肌细胞凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨HDAC2调控MiR199a 3p对大鼠心衰模型中心肌细胞凋亡的影响。 方法 选取清洁级健康成年雄性（sprague dawley,SD）大鼠40只,随机分为心衰组（HF组,20只）、假手术组（Sham组,10只）和空白对照组（无任何处理,Blank组,10只）3组。H&E 染色用于心脏大体形态分析;Q PCR方法检测HDAC2、HDAC3、HDAC4、miR199a 3p及其下游基因p53表达水平;western blot方法检测HDAC2及P53蛋白表达水平;染色质免疫共沉淀结合PCR（ChIP PCR）技术检测HDAC2与miR199a-3p启动子结合水平。 结果 与Sham组及Blank组对比,HF组大鼠心肌细胞明显肥厚。HDAC2 mRNA、p53 mRNA水平HF组显著高于Sham组及Blank组（P＜0.05）。miR199 a 3p mRNA水平HF组较Sham组及Blank组明显下降（P＜0.05）。p53 mRNA、HDAC2 mRNA、miR199 a-3p mRNA表达水平Sham组与Blank组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HDAC3及HDAC4mRNA表达水平在各组间差异均无统计学意义（P＞0.05）,HDAC2蛋白、p53蛋白HF组显著高于Sham组及Blank组（P＜0.05）,Sham组及Blank组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HF组中HDAC2与miR199a-3p启动子结合水平较Sham组及Blank组明显升高（P＜0.05）,而HDAC3及HDAC4 mRNA水平在各组中无显著差异（P＞0.05）。 结论 大鼠心衰模型中,组蛋白去乙酰化酶HDAC2介导miR199a-3p低表达,进而引起凋亡标志物p53表达上调。     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

循环外泌体miR-92b-5p对射血分数降低的心力衰竭患者的诊断和预测价值

目的探讨循环外泌体中miR-92b-5p的表达水平对射血分数降低的心力衰竭(HFrEF)患者的诊断和预测价值。方法选择于2018年1月至2019年7月化州市人民医院心血管内科经确诊为心力衰竭(HF)的患者共74例,其中HFrEF患者33例(HFrEF组),非HFrEF患者41例(HF组),选取40名健康体检者作为对照组,检测各组人群血清循环外泌体miR-92b-5p的表达水平,分析外泌体miR-92b-5p表达水平与超声心动图指标的关系,ROC曲线分析外泌体miR-92b-5p对HFrEF患者的诊断价值。结果 HFrEF组的外泌体中miR-92b-5p表达水平以及脑钠肽(BNP)、左心房直径(LAD)、左心室舒张期直径(LVDD)、左心室收缩末期直径(LVSD)水平显著高于HF组和对照组,差异有统计学意义(P0.001);而左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)显著低于HF组和对照组,差异有统计学意义(P0.001)。血清外泌体miR-92b-5p表达水平与BNP、LAD、LVDD、LVSD呈显著正相关(r=0.489、0.446、0.469、0.414),与LVEF和LVFS呈显著负相关(r=-0.505、-0.512),差异有统计学意义(P0.001)。外泌体miR-92b-5p对HFrEF的诊断ROC曲线下面积为0.905,当miR-92b-5p表达水平为6.49时,其敏感度为93.9%,特异度为77.8%。结论循环外泌体miR-92b-5p表达水平在HFrEF患者中显著上升,且与心功能密切相关,是诊断HFrEF的良好临床生物标记物。     

冠心病患者血浆miR-125b-5p表达变化及其与疾病严重程度关系研究

目的：探讨冠心病患者血浆miR-125b-5p表达变化及其与疾病严重程度关系。方法：选取我院2014年12月至2017年12月收治的冠心病患者112例为观察组。据临床分型将观察组患者分为急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）组，共37例，稳定型心绞痛（stable angina pectoris，SAP）组，共38例，不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris，UAP）组，共37例；选取同期正常体检者41例为对照组。检测所有患者血浆miR-125b-5p与高敏C反应蛋白（hs-CRP）表达水平，并分析血浆miR-125b-5p与hs-CRP表达水平与冠心病发病之间的相关性。结果：观察组患者血浆miR-125b-5p水平低于对照组，血浆hs-CRP水平高于对照组（P<0.05）。AMI组患者miR-125b-5p水平低于SAP、UAP、对照组，hs-CRP水平高于SAP、UAP、对照组（P<0.05）。UAP组患者miR-125b-5p水平低于SAP、对照组，hs-CRP水平高于SAP、对照组（P<0.05），SAP患者miR-125b-5p水平低于对照组，hs-CRP水平高于对照组（P<0.05）。经多元回归Logistic分析表示，血浆miR-125b-5p水平低、hs-CRP水平高是冠心病发生的独立危险因素（P<0.05）； Pearson相关性分析结果显示：冠心病与hs-CRP呈正相关（P<0.01），与miR-125b-5p呈负相关（P<0.01），miR-125b-5p与hs-CRP呈负相关（P<0.01）；miR-125b-5p、hs-CRP对冠心病的诊断价值均较高（P<0.05）。结论：冠心病患者随着疾病越来越严重，其血浆miR-125b-5p水平降低，hs-CRP水平则上升，且两者呈负相关，miR-125b-5p水平低、hs-CRP水平高是影响冠心病的独立危险因素，且两者可作为冠心病的诊断指标。     

冠心病患者心外膜脂肪组织和血浆中脂联素相关miR-371b-5p表达及其对脂肪细胞因子分泌的影响

目的：探讨冠心病（CAD）患者心外膜脂肪组织（EAT）和血浆中脂联素（APN,又称ADIPOQ）相关差异表达miR-371b-5p对脂肪细胞因子APN、Kruppel样因子4（KLF4）、白细胞介素6（IL-6）和单核细胞因子趋化蛋白1（MCP-1）分泌的影响,阐明miR-371b-5p在CAD中的作用机制。方法：收集CAD （CAD组,n=34）和非CAD （non-CAD组,n=16）患者的EAT和血液标本,采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测2组患者EAT和血浆中miR-371b-5p的表达水平。将诱导成功的3T3-L1前体脂肪细胞分为空白对照组（不做任何处理）、miR-371b-5p过表达组（转染miR-371b-5p模拟物）和miR-371b-5p抑制剂组（转染miR-371b-5p抑制剂）。qRT-PCR法检测转染24 h后各组3T3-L1前脂肪细胞中APN、KLF4、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平,并对miR-371b-5p进行生物信息学分析。结果：与non-CAD组比较,CAD组患者EAT和血浆中miR-371b-5p表达水平均升高（P<0.01）。与空白对照组比较,miR-371b-5p过表达组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4 mRNA表达水平降低（P=0.043,P=0.045）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平升高（P=0.037,P=0.041）;miR-371b-5p抑制剂组3T3-L1前脂肪细胞中APN和KLF4mRNA表达水平升高（P=0.025,P=0.027）,IL-6和MCP-1mRNA表达水平降低（P=0.039,P=0.041）。miR-371b-5p预测靶基因富集于多个生物学功能及过程,KEGG通路主要富集于脂肪细胞因子等信号通路;蛋白互作,miR-371b-5p预测靶基因APN、瘦素（LEP）和AKT1编码蛋白位于互作网络中核心位置。结论：CAD患者EAT中过表达miR-371b-5p转染成熟的3T3-L1脂肪细胞后可使细胞的抗炎因子表达水平降低,炎性因子表达水平升高,miR-371b-5p有望成为CAD治疗的新靶点。     

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P<0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p 表达量升高,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中 RAB3D 的蛋白表达量下降（P<0.05）;miR-125b-5p 表达量降低,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P<0.05）,而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P<0.05）。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

circVRK1/miR-18b-5p轴调控结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 探讨circVRK1/miR-18b-5p轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应检测53例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中circVRK1和miR-18b-5p表达。体外培养结直肠癌LoVo细胞,双荧光素酶报告基因实验验证circVRK1与miR-18b-5p的调控关系。分别转染pcDNA-circVRK1、miR-18b-5p inhibitor,或共转染pcDNA-circVRK1与miR-18b-5p mimic至LoVo细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、凋亡、蛋白（cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2）表达。结果 结直肠癌组织中的circVRK1表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）,miR-18b-5p表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。circVRK1可靶向结合miR-18b-5p,且过表达circVRK1抑制LoVo细胞中miR-18b-5p的表达。过表达circVRK1或敲减miR-18b-5p后,LoVo细胞的抑制率、凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白表达升高（P<0.05）,克隆形成数、划痕愈合率、Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）。过表达miR-18b-5p导致过表达circVRK1对LoVo细胞增殖、迁移和凋亡的影响降低。结论 结直肠癌组织中circVRK1呈低表达;过表达circVRK1可通过靶向抑制miR-18b-5p降低结直肠癌细胞的增殖和迁移能力,并加剧结直肠癌细胞凋亡。     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

miR-135b-5p通过靶向下调XBP1增强MCF-7/DOXR 细胞对阿霉素敏感性的机制

【摘要】 目的 探讨miR 135b 5p通过调控X盒结合蛋白（XBP1）对MCF-7/DOXR细胞阿霉素敏感性的机制。方法 采用Westernblot检测XBP1的表达水平;RT-qPCR法检测XBP1 mRNA在乳腺癌细胞MCF 7和乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/DOXR细胞中的表达水平以及miR-135b 5p的表达水平;CCK-8检测MCF 7/DOXR细胞的增殖情况;Annexin-V-FITC双染流式细胞术检测MCF-7/DOXR细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因验证miR-135b-5p与XBP1的调控关系。结果 XBP1在乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/DOXR细胞中均高表达（P＜0.05）,敲降XBP1可显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并促进了细胞凋亡（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因证实,XBP1是miR-135b-5p的潜在靶基因,miR-135b-5p靶向下调XBP1的表达水平（P＜0.05）。实验进一步证实,过表达miR-135b-5p下调XBP1进而显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论 miR-135b-5p通过下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素的敏感性。     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

MicroRNA-7-5p 调控p53 表达对非小细胞肺癌 增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨microRNA-7-5p（miR-7-5p）是否通过调控p53 基因的表达而影响人非小细胞肺 癌（NSCLC）细胞体外的增殖、侵袭能力。方法 通过双荧光素酶报告证明p53 为miR-7-5p 的下游靶基 因,将miR-7-5p 转染至人NSCLC 细胞株NCI-H1975,依据实验对照原则分为空白对照组、miR-7-5p 组 和miR-NC 组,观察细胞中p53 基因在转录和蛋白水平的表达变化;然后通过细胞增殖、细胞周期实验及 侵袭实验,观察NCI-H1975 细胞体外增殖和侵袭能力的变化。结果 miR-7-5p 组的p53 mRNA 相对表达 量、迁移细胞数及克隆形成数均低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组3''UTR 荧光素酶的表达活性较 miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组p53 mRNA 和蛋白相对表达量较miR-NC 组低（P <0.05）。miR- 7-5p 组细胞增殖能力较miR-NC 组低（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期G0/G1 期比例高于空白对照组 和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞周期的G2/M 期比例低于miR-NC 组（P <0.05）。miR-7- 5p 组细胞周期的S 期比例低于空白对照组和miR-NC 组（P <0.05）。miR-7-5p 组细胞侵袭能力低于空白对 照组和miR-NC 组（P <0.05）。结论 miR-7-5p 主要是通过靶向p53 促进其mRNA 和蛋白的表达,并减弱人 NSCLC 的增殖和侵袭能力。     

miR-208a通过调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

  目的   研究miR-208a调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制。  方法  将雄性SD大鼠32只随机选择分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、I/R+antagomir阴性对照组（I/R+anta-miR-NC组）和I/R+miR-208a antagomir 组 （I/R+anta-miR-208a组）,构建大鼠心肌I/R模型后检测各组大鼠心脏左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和左室每搏量（SV）;ELISA法检测血清肌酐激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（cTnI）以及IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化,采用TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织miR-208a和QKI5 mRNA表达,Western blot检测心肌组织QKI5蛋白和凋亡蛋白Caspase-3的相对表达水平。  结果  与Sham组比较,I/R组中LVEF、LVFS、SV值降低,心肌细胞凋亡率升高,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达升高,而QKI5表达水平降低（P < 0.05）;与I/R+anta-miR-NC组比较,I/R+anta-miR-208a组中LVEF、LVFS、SV值升高,心肌细胞凋亡率降低,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达水平降低,而QKI5表达升高（P < 0.05）。相关性分析发现miR-208a与QKI5表达呈负相关。  结论  抑制miR-208a可能通过调控QKI5表达减轻心肌缺血再灌注损伤中炎症反应,发挥心肌保护作用。     

重楼皂苷在 miR-125a-5p 靶向 调控GAB2诱导乳腺癌细胞增殖 和凋亡中的作用及机制研究

目的 探讨重楼皂苷（RPS）在 miR-125a-5p 靶向调控 Grb2 相关结合蛋白 2（GAB2）诱导乳腺癌细胞增殖和凋亡 中的作用及机制。 方法 取人乳腺癌细胞系 MCF-7 和人正常乳腺上皮细胞系 MCF-10A,采用 qRT-PCR、Western blot 法分别 检测并比较两者 miR-125a-5p、GAB2 表达水平。再将 MCF-7 细胞按随机数字表法分成 6 组：RPS 0 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组、RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+阴性干扰组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组,每组设 3 个复孔;培养 48 h 后检测并比较 miR-125a-5p、GAB2、B 淋巴细胞 瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）表达水平以及细胞增殖率、细胞凋亡率。将 GAB2 与空白质粒和过表达 miR-125a-5p 质 粒共转染到 MCF-7 细胞中,采用荧光素酶 Promega 检测法检测 miR-125a-5p 与 GAB2 的靶向作用。 结果 与 MCF-10A 细胞 比较,MCF-7 细胞中 miR-125a-5p 表达水平较低（P＜0.05）,GAB2 表达水平较高（P＜0.05）。与 RPS 0 μg/mL 组比较,RPS 80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+阴性抗体组 miR-125a-5p、Bax 表达水平和细胞凋亡率均明显升高（均 P＜0.05）,细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）;RPS 80 μg/mL 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组 GAB2 表达水平 均明显降低（均 P＜0.05）。与 RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+阴性抗体组比较,RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组 miR- 125a-5p 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）;RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p 组和 RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴 性干扰组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显升高（均 P＜0.05）,细胞凋亡率和 Bax 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）。与 RPS 80 μg/mL 组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干扰组比较,RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组 GAB2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与RPS 80 μg/mL+anti-miR-125a-5p组、RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+阴性干 扰组比较,RPS 80 μg/mL+ anti-miR-125a-5p+si-GAB2 组细胞增殖率和 Bcl-2 表达水平均明显降低（均 P＜0.05）,细胞凋亡率 和 Bax 表达水平均明显升高（均 P＜0.05）。GAB2 与 miR-125a-5p 的结合位点为 CAGGGA,GAB2 的突变位点为 AGUCCC; miR-125a-5p与GAB2野生型结合能明显降低荧光活性比（P＜0.05）,但与GAB2突变型结合不影响荧光活性比（P＞0.05）。 结 论 RPS 能够介导 miR-125a-5p/ GAB2 轴发挥抗肿瘤活性,具体机制可能与 miR-125a-5p 发挥抑癌效应来负向调控 GAB2 蛋 白表达,进而影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力有关。     

miR-216b-5p对喉癌TU686细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的：探讨miR-216b-5p对喉鳞状细胞癌(LSCC) TU686细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,分析其在喉癌细胞中的靶基因及其可能的作用机制。方法：TU686细胞分为对照组和miR-216b-5p组,对照组细胞通过慢病毒感染无义序列,miR-216b-5p组细胞通过慢病毒感染过表达miR-216b-5p。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中miR-216b-5p表达水平,克隆形成实验检测2组细胞克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测2组细胞凋亡率。通过TargetScan网站预测miR-216b-5p的潜在靶基因,采用RT-qPCR法检测靶基因mRNA表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p与靶基因间的靶向关系。结果：慢病毒感染后,与对照组比较,miR-216b-5p组细胞中miR-216b-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-216b-5p组细胞克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01...     

MicroRNA-129-5p通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭大鼠心功能的作用机制研究

目的 探讨miR-129-5p通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭（HF）大鼠心功能的作用机制。方法 将40只健康雄性Wistar大鼠作为研究对象,并分为空白对照组、模型组、空载病毒组和miR-129-5p组,每组10只。模型组腹腔注射阿霉素溶液复制慢性HF模型;空白对照组腹腔注射等量0.9%生理盐水;空载病毒组、miR-129-5p组分别通过尾静脉注射空载体病毒、miR-129-5p载体复制HF模型。各组大鼠连续给药6周后,采用心脏彩色多普勒超声仪检测大鼠左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVEDd）和左室收缩末期内径（LVEDs）。实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠心肌组织miR-129-5p表达,HE染色观察心肌组织病理形态,Western blotting检测心肌细胞自噬相关蛋白表达。结果 模型组、空载病毒组EF较空白对照组降低（P <0.05）,LVEDd、LVEDs较空白对照组增大（P <0.05）;模型组与空载病毒组EF、LVEDd、LVEDs比较,差异无统计学意义（P>0.05）;miR-129-5p组EF较模型组升高（P <0.05）,LV...     

MIR-138-5p 通过靶向组蛋白去乙酰化酶调节心脏 肥大

目的:探究MIR-138-5p 对心脏肥大的影响及其机制。方法:首先构建体外心脏肥大的模型,HE 染色、α-肌动蛋白染色 和RT-PCR 方法,分别检测模型大鼠心脏的横断面积和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）处理的心肌细胞（H9c2）的表面积和心肌细胞中 MIR-138-5p mRNA 表达情况;MIR-138-5p-mimic 转染AngⅡ处理过的H9c2 细胞,α-肌动蛋白染色和Western 印迹分别检测 心肌细胞的表面积和心肌肥大标志物的蛋白表达水平;采用TargetScan 在线软件筛选miR-138-5p 的潜在靶基因,并进一步验 证。MIR-138-5p-mimic、pcDNA- HDAC4共转染AngⅡ处理过的H9c2 细胞,α-肌动蛋白染色和Western 印迹法分别检测心肌 细胞的表面积和心肌肥大标志物的蛋白表达水平。结果:相对于Sham 组,模型大鼠的心脏体积及心脏横截面均明显增大,心肌 细胞中的MIR-138-5p mRNA 表达水平明显降低（F=21.578,P<0.001）;相对于Con 组,AngⅡ组心肌细胞的表面积明显增大,且 MIR-138-5p mRNA 表达水平明显降低（F=23.790,P<0.001）。相对于AngⅡ+miR-NC 组,AngⅡ+miR-mimic 组心肌细胞的表面 积（F=8.325,P<0.01）、心肌肥大标志蛋白表达水平（F=9.532,P<0.01）和心肌细胞中HDAC4 mRNA表达水平明显降低（F=25.530, P<0.001）; 相对于MIR-138-5p-mimic+pcDNA-Con 组,MIR-138-5p- mimic+pcDNA-HDAC4 组心肌细胞的表面积明显减小 （F=10.134,P<0.01）,心肌肥大标志蛋白表达水平明显升高。结论:MIR-138-5p 通过靶向组蛋白脱乙酰基酶-8（HDAC4） 调节心脏肥大反应。