P物质抗血清对小鼠病毒性心肌炎的作用研究

目的:通过观察P物质抗血清对脑心肌炎病毒(EMCV)心肌炎的作用,探讨P物质在病毒性心肌炎发病机制中的作用.方法:4周龄DBA/2小鼠经腹腔接种EMCV制成病毒性心肌炎模型,腹腔注射P物质抗血清观察其对小鼠病毒性心肌炎的作用.观察小鼠在接种EMCV后14 d生存率的变化.小鼠心肌切片苏木精-伊红染色、Masson trichrome染色,观察心室肌坏死和炎症细胞浸润面积的变化.甲苯胺蓝(TB)染色显示心室肌组织内肥大细胞,观察肥大细胞密度的变化.荧光定量RT-PCR检测小鼠心脏促炎细胞因子[白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、基质金属蛋白酶(MMP-9)和肥大细胞蛋白酶类胰蛋白酶及糜蛋白酶(mMCP-4, mMCP-5, mMCP-6) mRNA表达.ELISA法检测小鼠心脏IL-6、TNF-α及MMP-9的表达.结果:P物质抗血清治疗使小鼠的14 d生存率明显改善(80%: 30%, P<0.05);小鼠心脏/体重比值显著改善(P<0.01);小鼠左心室坏死和炎症细胞浸润面积明显减少(P<0.01);左心室肥大细胞密度明显降低(P<0.01);IL-6、TNF-α、MMP-9、mMCP-4、mMCP-5及mMCP-6 mRNA的表达明显下调(P<0.05);小鼠心脏IL-6, TNF-α及MMP-9蛋白质表达减少(P<0.05).结论:P物质抗血清可改善EMCV小鼠病毒性心肌炎的心肌炎症和生存率,下调心肌促炎细胞因子和基质金属蛋白酶的表达,降低肥大细胞密度及其特异蛋白酶类胰蛋白酶和糜蛋白酶的表达,表明P物质可能在病毒性心肌炎急性炎症和心室重构中起重要作用.     

急性病毒性心肌炎小鼠心肌中Calpain mRNA表达与心肌细胞凋亡的关系研究

目的检测CMpmn mRNA在柯萨奇病毒B3（Coxsackievirus B3,CVB3）急性心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌细胞凋亡的关系。方法以CVB3单次感染Balb／c小鼠建立急性病毒性心肌炎（n=10）模型,同时设立药物干预组（n=12）及药物对照组（n=10）;同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的DMEM液作为正常对照组（n=8）。以缺口末端标记法（TUNEL）检测各组心肌细胞凋亡情况,计数凋亡率。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小鼠心肌组织中Calpain-1及Calpain-2 mRNA的表达。结果急性病毒性心肌炎组较正常对照组及药物对照组心肌组织内Calpain-1（P=0．02及P=0．04）和Calpain-2（P〈0．01及P=0．02）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦增高（P值均〈0．01）;药物对照组与正常对照组心肌组织内Calpain-1（P〉0．05）和Calpain-2（P〉0．05）mRNA及心肌细胞凋亡率均没有统计学差异（P〉0．05）;药物干预组较正常组心肌组织内Calpain-1（P〈0．01）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）;药物干预组较急性病毒性心肌炎组心肌组织内Calpain-1（P=0．04）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）。各实验组小鼠心肌组织中calpain-1及Calpain-2m RNA的表达水平分别与心肌细胞的凋亡呈正相关。结论柯萨奇B3病毒通过激活心肌组织内Calpain,导致心肌细胞的凋亡,从而参与病毒性心肌炎的发生。     

TNF-α和IL-6血清检测在儿童急性病毒性心肌炎诊断中的价值

目的探讨急性病毒性心肌炎患儿血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）水平变化及其临床价值。方法应用放射免疫法（RIA）和酶联免疫法（EIISA）,检测53例急性病毒性心肌炎患儿及20名健康儿童血清中TNF—α及IL-6含量。结果心肌炎组血清TNF—α和IL-6水平分别为（526．7±32．9）mg／L和（3．23±0．53）mg/L,而健康组分别为（383．1±27．5）mg／L和（1．63±0．22）mg／L,二者相比差异有统计学意义（P〈0．05）;临床治愈后,心肌炎组TNF—α及IL-6分别降至（407．3±34．4）mg／L和（1．97±0．29）mg／L,与正常组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测TNF—α及IL-6血清水平及其变化,有助于判断急性病毒性心肌炎患儿病情及心肌损害程度。     

黄芪总黄酮对病毒性心肌炎小鼠心律失常的作用

目的探讨黄芪总黄酮（TFA）对病毒性心肌炎小鼠心律失常的作用。方法应用CVB3感染BALB／c小鼠制作病毒性心肌炎模型,每日腹腔注射TFA（dOmg／kg）0．1ml;对照组每13腹腔注射生理盐水0．1ml。10d后以BL一420生物机能实验系统对小鼠心电图进行观察和改良CurtisandRavingerovand评分,并进行统计分析。结果应用黄芪总黄酮（TFA）组病毒性心肌炎小鼠与对照组相比较,心律失常发生率明显减少（12例,P〈0．05）。结论黄芪总黄酮可显著降低病毒性心肌炎小鼠心律失常发生率。     

病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织转录因子ROR-Υt的表达

目的观察｜rhl7细胞特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体1t（retinoid—relatedorphannuclearreceptorΥt,ROR-Υt）在柯萨奇病毒B3（COXsackievirusB3,CVB3）诱导的病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织中的表达变化,初步探讨ROR-Υt在病毒性心肌炎发病中的作用。方法雄性BALB／c小鼠腹腔注射CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型（实验组）,对照组小鼠腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液,按注射后第0、1、2、3、4、6周分为6个时点亚组,每个时点亚组至相应时间取小鼠心脏,苏木精-伊红染色观察心肌病理改变,半定量反转录聚合酶链反应测定小鼠心肌组织ROR-TtmRNA的表达,Western-Blotting测定小鼠心肌组织ROR-Υt蛋白的表达。结果苏木精-伊红染色证实病毒性心肌炎模型构建成功。实验组小鼠中,1周亚组ROR-ΥtmRNA及其蛋白的表达较0周亚组升高,4周亚组表达最高,6周亚组表达低于4周亚组但仍高于0周亚组：实验组各亚组ROR-1tmRNA及其蛋白的表达与相应时间对照组各亚组比较,差异均具有统计学意义（P均〈0．05）。结论Thl7细胞特异性转录因子ROR-Υt在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中呈高表达,且其变化趋势与Thl7细胞改变趋势一致,提示ROR-Υt通过参与病毒性心肌炎中Thl7细胞的分化,可能参与病毒性心肌炎的免疫发病过程。     

RNA干扰技术阻断小鼠巨噬细胞受体相互作用蛋白2表达的实验研究

目的观察阻断受体相互作用蛋白2（Rip2）对巨噬细胞产生炎症细胞因子的影响,以及对内毒素血症小鼠的保护作用。方法构建Rip2小干扰RNA（siRNh）重组表达质粒,转染细胞后RT．PCR和Western blot检测Rip2的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（M1Tr）法检测细胞增殖水平,脂多糖（LPS）刺激后,测定TNFa和高迁移率组蛋白1（HMGB1）的水平。Rip2 siRNA质粒转染小鼠后,观察小鼠病死率,测定血清TNFct水平和肝组织Rip2和HMGB1表达。结果Rip2 siRNA表达质粒可阻断Rip2 mRNA和蛋白表达。Rip2阻断的细胞增殖明显,LPS刺激后产生TNFα、HMGB1减少;Rip2阻断的小鼠生存率较其他组高（P〈0．05）,肝组织中HMGB1[（40．21±11．03）Pg／g]表达和血清TNFα[（300．43±59．26）ng／L]水平均较其他组低（P〈0．05）。结论Rip2 siRNA表达质粒可阻断Rip2的表达,从而减少TNFα、HMGB1等炎症细胞因子的产生,降低小鼠内毒素血症的病死率。     

阿伦膦酸钠对绝经后骨质疏松症患者骨密度、细胞因子及骨代谢指标的影响

目的观察阿伦膦酸钠治疗绝经后骨质疏松症（PMO）患者,其骨密度（BMD）、IL-6、TNFα、胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）及骨代谢指标的变化。方法选择年龄55—60岁的PMO患者共185例,随机分为：阿伦膦酸钠组69例,替勃龙组66例,钙剂组50例和年龄相匹配的正常妇女20例作为对照组。各组均于用药前和用药后24、48周测定BMD（采用DEXA骨密度仪）、雌二醇（E2）、碱性磷酸酶（ALP,放免法）、骨钙素（BGP）、Ⅰ型胶原N末端肽（NTX）、IL-6、TNFα、IGF-Ⅰ（ELISA）。结果阿伦膦酸钠组和替勃龙组BMD较治疗前均有不同程度的提高,腰椎BMD增幅分别为2．53％、3．65％（P〈0．05）,非优势侧股骨近端增幅分别为7．17％、3．01％（P〈0．001）。替勃龙组E2水平明显上升（P〈0．01）,IL-6、TNFα、NTX下降（P〈0．01）;阿伦膦酸钠组E2水平无变化（P〉0．05）,ALP、BGP水平上升（P〈0．05）,NTX水平下降（P〈0．05）,IGF-Ⅰ、IL-6、TNFα水平无明显变化（P〉0．05）;钙剂组和对照组各部位BMD、E2、IGF-Ⅰ、ALP、BGP继续下降（P〈0．05）,而IL-6、TNFα、NTX升高（P〈0．05）。结论阿伦膦酸钠组治疗PMO疗效显著,与替勃龙相仿。单纯服用钙剂不能治疗PMO．且继续骨量丢失。     

ADAMTS-1与小鼠急、慢性病毒性心肌炎心肌纤维化相关性的初步研究

目的检测ADAMTS-1（adisintegrinandmetalloproteasewitIlthrombospondintype1motifs）在急、慢性柯萨奇病毒取（CVB,）心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌纤维化的关系。方法以CVB,单次感染或重复增量感染Balb／c小鼠分别建立急性病毒性心肌炎（n=20）及慢性病毒性心肌炎（n=25）模型,同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的EMEM液作为各自正常对照组（n均=10）。以苦味酸天狼猩红行心肌胶原组织特异性染色,并运用图像分析软件计算心肌组织中的胶原容积积分（CVF,％）。用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学方法分别检测小鼠心肌组织中ADAMTS。1基因水平和蛋白水平的表达。结果两组病毒性心肌炎小鼠心肌组织中CVF显著增加,并以慢性组更为显著（P〈0．01）。急、慢性病毒性心肌炎组ADAMTS-1mRNA分别比其对照组明显高,尤以慢性组更为显著（P〈0．05）。免疫组织化学检测结果显示ADAMTS-1在心肌组织细胞胞浆内表达,各实验组小鼠心肌组织中ADAMTS-1mRNA的表达与CVF呈正相关。结论ADAMTS-1在急、慢性病毒性心肌炎心肌组织中呈进行性增加并与胶原增生密切相关,表明ADAMTS-1可能通过调节胶原代谢参与了心肌纤维化的发生发展。     

病毒性心肌炎中树突状细胞的体内迁移及机制

目的观察树突状细胞（DCs）在小鼠急性病毒性心肌炎（VMC）中的迁移途径及趋化因子的作用。方法雄性Balb／c小鼠随机分为正常对照组60只和VMC组80只。VMC组腹腔注射柯萨奇B组病毒（CVB3）,正常组腹腔注射等容积不含病毒的EMEM液。趋化实验分析DCs对CCL4、CCL19的趋化反应;检测心肌组织中DCs相应的趋化因子CCL4、CCL19及其受体CCR5、CCR7的表达变化以及脾脏中CCL19和CCR7的表达情况。DCs体外感染CVB3后检测CCR5和CCR7表达。结果VMC组DCs对趋化因子CCL4、CCL19的趋化反应能力增强（P〈0．05）;VMC组心肌组织中CCR5和CCR7及CCL4和CCL19表达增加（P〈0．05）,脾脏中CCR7和CCL19表达均增加（P〈0．05）。DCs体外感染CVB324小时后CCR5和CCR7表达明显上升。结论DCs在急性病毒性心肌炎小鼠体内发生定向迁移,和趋化因子与趋化因子受体相互作用有关。     

肿瘤坏死因子α对暴发性肝衰竭小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响

目的 研究TNFα对暴发性肝衰竭（FHF）小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的影响。方法 采用D-氨基半乳糖（GaIN）和内毒素（LPS）联合腹腔注射（ip）制备FHF小鼠动物模型,并设立TNFα组（TNFα10μs／kg,ip）,TNFα抗体组（注射LPS和GaIN前30min尾静脉注射TNFd抗体100μg/只）。在不同的时间点（6h,9h）处死动物,应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测各组小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin表达的变化。结果 在生理盐水（NS）对照组,几乎整张切片上均可见到沿大肠黏膜上皮细胞膜顶端呈线性分布的occludin阳性染色,但FHF组及TNFα组小鼠的阳性染色较之明显减弱,TNFα抗体组occludin的阳性反应与Ns对照组比较无明显减弱。Westernblot结果与免疫组织化学结果相一致,FHF组及TNFα组小鼠9h时occludin蛋白含量明显下降,与NS对照组相比差异有统计学意义（0．36±0．05,0．48±0．02比0．71±0．09,P〈0．05）,TNFα抗体组与NS对照组相比差异无统计学意义（0．74±0．03比0．71±0．09,P〉0．05）。实时定量PCR结果显示,FHF组与TNFα组小鼠6h时occludinmRNA水平最低,与NS对照组相比差异有统计学意义（0．72±0．04,0．81±0．03比1．00±0．05,P〈0．05）,TNFα抗体组与Ns对照组相比差异无统计学意义（1．01±0．10比1．00±0．05,P〉0．05）。结论 在小鼠暴发性肝衰竭过程中,TNFα介导大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的下降。     

腹腔脂肪组织脂肪细胞因子mRNA表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨腹腔脂肪组织脂肪细胞因子mRNA表达与新疆维吾尔族肥胖及T2DM的相关性。 方法 选取腹部择期手术的维吾尔族患者114例,分为正常对照（NC） 组50名,肥胖 （Ob） 组48例和T2DM组16例,术时取网膜脂肪组织,采用RT-PCR方法检测各组APN、TNF-α、MCP-1 mRNA表达情况。 结果 NC组APN高于Ob、T2DM组,TNF-α低于Ob、T2DM组,MCP-1低于T2DM组（P〈0.05）。APN mRNA相对拷贝数与BMI、DBP、FPG、TG、LDL-C水平及TNF-α、MCP-1表达量呈负相关（P〈0.05）。TNF-α mRNA相对拷贝数与BMI、FPG、TG呈正相关（P〈0.05）。MCP-1 mRNA相对拷贝数与体重、BMI、WC呈正相关（P〈0.05）。 结论 腹腔脂肪组织脂肪细胞因子APN、TNF-α、MCP-1 mRNA异常表达可能是新疆维吾尔族肥胖及T2DM发生的危险因素。     

Role of substance P in viral myocarditis in mice

Substance P (SP) is widely expressed in the central nervous system and in peripheral tissues such as myocardial nerves. We examined SP in viral myocarditis in mice induced by encephalomyocarditis virus (EMCV). Localization of SP in the hearts was examined immunohistochemically, and concentrations of SP in hearts and sera were measured by enzyme immunoassay. Substance P levels and density of SP-containing cells in murine hearts on day 6 after EMCV inoculation were decreased compared with those in normal controls. There was a negative correlation between SP levels in the hearts and ratio of heart weight to body weight of the mice at 6 days. Circulating SP levels were decreased in mice on day 6 after EMCV inoculation, and further decreased on day 14. Substance P in hearts and sera is decreased in viral myocarditis in mice, suggesting that SP may play a role in the pathogenesis of viral myocarditis, and that interaction of the neuropeptide nervous system and mast-cell immune system is important in the pathogenesis of viral myocarditis.     

冠状动脉微栓塞后MCP-1变化的实验研究

目的经导管建立急性冠状动脉微栓塞模型，检测微栓塞后单核细胞趋化因子-1（monocyte chemotactic protein．1，MCP-1）的变化情况。方法12只小型猪，通过导管方法建立急性冠脉微栓塞模型，观察急性期（微栓塞前、微栓塞后2h、6h）及慢性期（微栓塞前、微栓塞后1周）血清中MCP-1浓度变化，RT-PCR观察心肌组织中MCP-1及粒细胞变化。结果MCP-1随时间变化逐渐增加，MCP-1存2h有明显增加，与基础相比P〈0．05；6 h MCP-1与基础相比P〈0．01。1周时，而MCP-1与微栓塞前相比没有明艟变化（P〉0．05），心肌组织RT．PCR显示MCP-1 mRNA表达只在6h明显升高（P〈0．05），1周时不再升高（P〉0．05）。微栓塞1周后前壁心肌组织病理切片计数测得粒细胞为（103．0±49．4），后壁测得为（43．9±24．0），两者相比有显著差异性（P〈0．05）。结论冠脉微栓塞后m【清MCP一1呈现先升高后下降趋势，心肌组织MCP-1 mRNA只在微栓塞后6h升高。     

核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高脂喂养小鼠肝脏炎性因子和肝脏胰岛素抵抗的影响

目的研究核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）基因沉默对肝脏炎性因子表达的影响,探讨S6K1在肝脏胰岛素抵抗中的作用机制。方法将48只体重12．6～14．8g的6周龄雄性C57BL／6J小鼠按随机数字表法分为4组：普食对照组[普通饲料（ND）＋含U6启动子空载体腺病毒组（pU6Ax组）,即ND＋pU6Ax组]、普食实验组[ND＋S6K1短发夹RNA（shRNA）重组基因腺病毒组,即ND＋S6KIAx组]、高脂对照组[高脂饲料（HFD）’pU6Ax组,即HFD＋pU6Ax组]、高脂实验组（HFD＋S6K1Ax组）,分别喂养16周。实验组和对照组尾静脉分别注射S6K1Ax、pU6Ax（均为普食实验组及对照组90ml,高脂实验组及对照组120ml,效价为2．0×10^10pfu／m1）。注射后第6天过夜饥饿后,4组各随机抽取6只行葡萄糖耐量实验,剩余的小鼠处死取肝脏,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝脏炎性因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10mRNA的表达,Western blotting观察肝脏蛋白S6K1、S6K1苏氨酸389（S6K1-thr389）、胰岛素受体底物1（IRS1）丝氨酸1101（IRS1-ser1101）、IRS1丝氨酸636／639（IRS1-ser636／639）、蛋白激酶B丝氨酸473（Akt—ser473）、c—Jun氨基末端激苏氨酸183／酪氨酸185（JNK—thr183／tyr185）表达。两组比较采用t检验,多组问比较采用单因素方差分析。结果肝脏S6KI基因沉默后,与高脂对照组相比,HFD＋S6K1Ax组小鼠炎性因子MCP-1、TNF-α、IL-1βmRNA均表达下降（分别为0．549±0．016比0．871±0．081、0．635±0．079比0．905±0．059、0．642±0．042比1．327±0．025;t=9．55、6．71、34．07,均P〈0．05）。IL-6mRNA未表现出组间差异（P〉0．05）,抗炎因子IL-10mRNA在HFD＋S6KIAx组肝脏S6K1基因沉默后升高（0．773±0．076比0．436±0．046,t=9．27,P〈0．05）。Western blotting显示与HFD＋pU6Ax组相比,HFD＋S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后,IRS1－serll01、IRS1-ser636／639、S6K1-thr389、JNK—thr183／tyr185表达下降,Akt—ser473表达增强（t=6．59、8．44、5．37、3．15、6．52,均P〈0．05）。结论高脂喂养可引起肝脏低度炎症并介导胰岛素抵抗的发生,肝脏S6K1可能通过促进炎症因子、抑制抗炎因子表达参与了肝脏胰岛素抵抗发生。     

果蝇样受体4介导游离脂肪酸调节人血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞MCP．1mRNA表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测MCP-1蛋白表达,观察软脂酸调节MCP-1表达的剂量依赖关系和时间效应;采用蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制剂wortmannin、神经酰胺抑制剂myriocin和核因子KB（NF—KB）抑制剂parthenolide分别处理细胞30min,再加入软脂酸（400μmol/L）处理细胞6h后,实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA的表达水平,ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平,研究软脂酸调节MCP-1表达依赖的信号通路;构建TLR4短发夹RNA（shRNA）腺病毒pGSadeno-TLR4并感染HA—VSMC沉默TLR4基因表达,实验同时设空白对照组（PBS缓冲液）和对照病毒（pGSadeno-GFP）组。细胞感染96h后更换培养基,再加入软脂酸（400μmoL／L）处理细胞6h,采用实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA表达水平,ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平。提取细胞核蛋白,采用ELISA检测NF—KBp65亚基活性,观察TLR4／NF-KB通路在软脂酸调节HA-VSMCMCP-1基因表达中的作用。组间均数比较采用单因素方差分析。结果采用软脂酸处理细胞6h后,对照组及100、200和400μmoVL软脂酸组MCP-1mRNA表达分别为1．00±0．02、3．30±2．84、8．21±4．31和11．25±2．73（F=7．57,P〈0．05）;MCP-1蛋白表达分别为（127±10）、（147±10）、（163±18）和（194±14）ng／L（F=7．81,P〈0．05）。软脂酸可促进HA-VSMCMCP-1mRNA和蛋白表达且具有明显的剂量依赖关系。细胞培养12h和24h后,随着软脂酸浓度的增加,MCP-1mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增加趋势,但时间效应则不明显。采用不同的信号通路抑制剂和软脂酸处理细胞6h后,对照组、软脂酸组、软脂酸＋parthenolide组、软脂酸＋白屈菜红碱组、软脂酸＋wortmannin组和软脂酸＋myriocin组MCP-1mRNA表达分别为1．00±0．02、10．80±1．23、3．49±0．28、10．84±0．24、11．24±0．27和10．62±0．36（F=1313．07,P〈0．05）;MCP-1蛋白表达分别为（132±8）、（218±12）、（152±4）、（213±12）、（225±7）和（226±9）ng／L（F=106．83,P〈0．05）。成功地构建并获得TLR4shRNA腺病毒pGSadeno—TLR4,采用pGSadeno-TLR4感染HA—VSMC阻断TLR4信号后,软脂酸＋pGSadeno．TLR4组的NF—KB065结合活性、MCP-1mRNA和蛋白表达均显著低于软脂酸组[分别为0．48±0．12比1．24±0．16、1．88±0．33比10．80±1．23、（154±10）比（218±12）ng／L;F=591．86、659．16、118．37,均P〈0．01]。而对照病毒pGSadeno．GFP对软脂酸诱导的NF—KB065结合活性和MCP：I表达均无明显影响。结论TLR4／NF—KB信号通路介导了软脂酸诱导的人主动脉血管平滑肌细胞MCP-1基因表达。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞MCP-1表达的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法体外培养大鼠主动脉VSMCs。实验分组：空白对照组（A组）;1×10^-7mol/L ADM组（B组）;1×10^-7mol／LAngⅡ组（C组）;1×10^-8mol／L ADM＋1×10^-7mol／L AngⅡ组（D组）;1×10^-7mol／LADM＋1×10^-7mol／LAng Ⅱ组（E组）。采用逆转录聚合酶链反应技术测定细胞中MCP-1 mRNA的表达量。结果C组MCP-1 mRNA的表达量高于A组（P〈0．05）。D组、E组MCP-1 mRNA的表达量低于C组（P〈0．05）。结论ADM对Ang Ⅱ诱导的大鼠主动脉VSMCs MCP-1的表达起明显的抑制作用,这可能是其发挥抗炎、心血管保护作用机理中的一个重要途径。     

Gene expression of cardiac mast cell chymase and tryptase in a murine model of heart failure caused by viral myocarditis.

This study examined the gene expression of mouse mast cell proteases to clarify their role in the pathophysiology of viral myocarditis. Male DBA/2 mice were inoculated intraperitoneally with the encephalomyocarditis virus and the gene expression of mast cell chymase, mouse mast cell protease (mMCP)-4 and -5, and tryptase, mMCP-6, matrix metalloproteinase (MMP)-9 and type-I procollagen was measured by real-time quantitative RT-PCR analysis. The gene expression of mMCP-4, -5 and -6 mRNA was increased at 5 days, and continued to increase to day 14, coinciding with a prominent inflammatory reaction and extensive myocardial necrosis and fibrosis. The gene expression of MMP-9 was also increased, and there was a significant correlation between upregulation of mast cell proteases and MMP-9. The gene expression of type-I procollagen was increased at 5 days and continued to increase to day 14, suggesting that a fibrotic process had already begun during the acute stage of viral myocarditis. These findings suggest that mast cell chymase and tryptase participate in the acute inflammation and remodeling process of viral myocarditis.     

淫羊藿苷提高SIRT6酶活性及抑制小鼠NF-kB炎症信号通路的实验研究

目的观察淫羊藿苷（Icrrin,ICA）对组蛋白去乙酰化酶SIRT6的激活作用及对老年小鼠体内NF-kB（p65）、SIRT6蛋白表达及NF—kB信号通路下游炎症细胞因子表达的影响。方法以体外酶学实验观察ICA对SIRT6的激活作用并绘制不同剂量浓度激活效率曲线。选取24月龄老年组（N=11）、24月龄＋ICA干预组（N=12）和3月龄青年组小鼠（N=10）的心、肝、肌肉组织,用Westernblot检测NF-kB（p65）和SIRT6蛋白表达水平;采用ELISA法柃测小鼠血清中肿瘤坏死网子α（TNF—α）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-6（IL-6）的含量。结果体外酶学实验显尔ICA随着药物浓度的下降,对SIRT6逐渐呈现激活效应,在10。mol／L浓度时达到最大激活效应为142％。小鼠实验显示ICA干预后,心脏、肝脏与肌肉组织中NF—kB（p65）蛋白表达与老年小鼠比较呈现下调趋势,而SIRT6蛋白表达较老年小鼠则呈现上调趋势;与青年小鼠比较,老年小鼠血清中炎症细胞TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显上调（P〈0．05、P〈0．01）;与老年小鼠比较,ICA干预后小鼠血清中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。结论ICA对SIRT6的酶活性具有显著的激活效应,且在极低的药物浓度下仍对SIRT6有激活作用;ICA能上调老年小鼠组织中SIRT6蛋白表达,抑制NF—kB（p65）蛋白表达及下调下游炎症细胞因子的产生,提示ICA延缓炎性衰老的作用机制及干预新靶点与NF—kB信号通路和组蛋白去乙酰化酶SIRT6密切相关。