核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高脂喂养小鼠肝脏炎性因子和肝脏胰岛素抵抗的影响

目的研究核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）基因沉默对肝脏炎性因子表达的影响，探讨S6K1在肝脏胰岛素抵抗中的作用机制。方法将48只体重12．6～14．8g的6周龄雄性C57BL／6J小鼠按随机数字表法分为4组：普食对照组普通饲料（ND）＋含U6启动子空载体腺病毒组（pU6Ax组），即ND＋pU6Ax组]、普食实验组ND＋S6K1短发夹RNA（shRNA）重组基因腺病毒组，即ND＋S6KIAx组]、高脂对照组高脂饲料（HFD）’pU6Ax组，即HFD＋pU6Ax组]、高脂实验组（HFD＋S6K1Ax组），分别喂养16周。实验组和对照组尾静脉分别注射S6K1Ax、pU6Ax（均为普食实验组及对照组90ml，高脂实验组及对照组120ml，效价为2．0×10^10pfu／m1）。注射后第6天过夜饥饿后，4组各随机抽取6只行葡萄糖耐量实验，剩余的小鼠处死取肝脏，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝脏炎性因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10mRNA的表达，Western blotting观察肝脏蛋白S6K1、S6K1苏氨酸389（S6K1-thr389）、胰岛素受体底物1（IRS1）丝氨酸1101（IRS1-ser1101）、IRS1丝氨酸636／639（IRS1-ser636／639）、蛋白激酶B丝氨酸473（Akt—ser473）、c—Jun氨基末端激苏氨酸183／酪氨酸185（JNK—thr183／tyr185）表达。两组比较采用t检验，多组问比较采用单因素方差分析。结果肝脏S6KI基因沉默后，与高脂对照组相比，HFD＋S6K1Ax组小鼠炎性因子MCP-1、TNF-α、IL-1βmRNA均表达下降（分别为0．549±0．016比0．871±0．081、0．635±0．079比0．905±0．059、0．642±0．042比1．327±0．025；t=9．55、6．71、34．07，均P〈0．05）。IL-6mRNA未表现出组间差异（P〉0．05），抗炎因子IL-10mRNA在HFD＋S6KIAx组肝脏S6K1基因沉默后升高（0．773±0．076比0．436±0．046，t=9．27，P〈0．05）。Western blotting显示与HFD＋pU6Ax组相比，HFD＋S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后，IRS1－serll01、IRS1-ser636／639、S6K1-thr389、JNK—thr183／tyr185表达下降，Akt—ser473表达增强（t=6．59、8．44、5．37、3．15、6．52，均P〈0．05）。结论高脂喂养可引起肝脏低度炎症并介导胰岛素抵抗的发生，肝脏S6K1可能通过促进炎症因子、抑制抗炎因子表达参与了肝脏胰岛素抵抗发生。

Ribosomal protein $6 kinase 1 partakes hepatic insulin resistance by regulating expression of inflammatory cytokines