微RNA与间充质干细胞软骨分化调控机制研究进展

微RNA（microRNA，miRNA）是一类由内源基因编码、长度为22个核苷酸左右的单链RNA。相关研究表明，在细胞增殖、分化、凋亡以及疾病发生过程中微RNA发挥巨大作用，越来越多地引起人们的关注。MSC（mesenchymal stem cell，间充质干细胞）软骨分化过程中，微RNA在转录后水平调控软骨分化相关靶基因的表达，以此调控间充质干细胞软骨分化。     

RNA干涉基本原理及其应用前景

RNA干涉（RNA interference，RNAi）的发现源于偶然。1995年康耐尔大学的Guo等试图用反义技术特异性阻断秀丽线虫中par—1基因的表达以研究其功能．但实验发现给线虫注射par—1的反义RNA时，如预期那样阻断了该基因的表达．但当在对照组注射正义RNA时以期待观察到该基因表达增强时．却发现该基因同样被抑制．该研究小组一直没能给出合理的解释。直到1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire和马萨诸塞州大学的Mello才解出谜底——他们将体外转录得到的单链RNA（正义RNA或反义RNA）纯化后注射给秀丽线虫．结果基因抑制效应很微弱，而将正义链和反义链混合的双链RNA纯化后给予线虫．却发现这种双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）比单独的正义RNA或反义RNA具有更高效的特异性基因沉默效应，且几个dsRNA分子就足以实现整个同源基因的完全沉默。还会在子代中也引起相应的基因沉默．至此他们将这种现象称作RNAi。     

MicroRNA与肾脏

MicmRNAs（miRNAs）是一类真核生物高度保守的内源性非编码单链小分子RNA,长度约21～24个核苷酸。由具有发夹结构的约70～90个碱基大小的单链RNA前体（pre2miRNA）经过Dicer酶（an RNase Ⅲ enzyme,核糖核酸Ⅲ酶）加工后生成,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对,引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译,从而在转录后水平调控基因的表达,其基因表达具有时序性和组织特异性。转录后调节,     

微RNA调控间充质干细胞软骨分化的机制研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是软骨组织工程的一种理想种子细胞,体外条件下诱导MSCs软骨分化,将直接影响组织工程修复软骨的成败。微RNA（microRNA, miRNA）是一类由内源基因编码、长度为22个核苷酸左右的单链RNA,在细胞增殖、分化、凋亡以及疾病发生过程中发挥重要的调控功能,其在转录后水平调控与软骨分化相关转录因子及信号通路靶基因的表达,以此调控MSCs软骨分化。本文就miRNA调控MSCs软骨分化的机制研究进展作一综述。     

长链非编码RNA及微小RNA在增生性瘢痕中的研究进展

增生性瘢痕是皮肤受到创伤后所引起的成纤维细胞异常增殖和细胞外基质（extracellular matrix, ECM）过度沉积而发生的畸形愈合。尽管目前对于增生性瘢痕的治疗方法有手术、压迫疗法以及光电治疗等多种方法,但治疗效果往往均不尽人意。长链非编码RNA(long non-coding RNA, Lnc RNA)是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白编码RNA。微小RNA(micro RNA,mi RNA)则是由内源基因编码的长度为18～25个核苷酸不等的单链非编码RNA分子。随着基因表达调控研究的兴起,大量的Lnc RNA及mi RNA被发现广泛参与人体的各项生理和病理过程的基因表达与调控过程。诸多迹象表明,Lnc RNA和mi RNA有望成为增生性瘢痕治疗的靶点。现就Lnc RNA和mi RNA在增生性瘢痕中的研究进展作一综述。     

微RNA和心血管疾病的研究进展

微RNA（microRNA,miRNA）是一类长度很短的非编码蛋白质的单链小分子RNA,广泛存在于多细胞生物和病毒体内,是一种起负调控作用的分子,主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上,抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA。目前越来越多的研究结果显示,miRNA的表达及功能失调可能导致心血管疾病的发生。现将对这方面的最新研究进展综述如下。     

RNA干扰及其在乳腺癌研究中的应用

RNA干扰（RNAi）是由双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）引起的，广泛存在在于动植物中的序列特异性转录后基因沉默，从而抑制其相应基因表达的过程。作为高效、特异的调节基因表达的技术，RNAi已成为基因功能研究的有力工具。     

RNA干扰沉默蛋白激酶B基因表达对血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的 构建靶向蛋白激酶B（PKB／Akt）基因的逆转录病毒RNA干扰表达载体，观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖活性的影响。方法 针对大鼠PKB／Akt基因序列（NM_033230）设计多个短发夹环RNA（shRNA）序列，化学合成法合成单链寡核苷酸序列，pGEM—T载体克隆后双酶切，将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN，脂质体介导转染包装细胞PT67后获得PKB／Akt的重组逆转录病毒RNA干扰载体，感染血管平滑肌细胞（VSMC），Northern blot和Western blot法检测Akt及其下游底物-核糖体蛋白S6激酶（p70s6k）等表达的变化，流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化，噻唑盐（MTT）比色法检测VSMC增殖活性的改变。结果 shRNA序列经T载体克隆，酶切确定该片段为PKB／Akt基因shRNA序列；感染VSMC，证实其能够显著抑制PKB／Akt的mR—NA和蛋白产物表达，下游的p70s6k表达相应减少；被感染VSMC的分裂、增殖过程受阻，更多细胞停滞在C0／G1期。结论 成功构建PKB／Akt基因逆转录病毒shRNA载体，感染VSMC能够明显抑制其分裂、分化和增殖。     

Medl9基因与肿瘤关系的研究进展

中介体（Mediator）是真核生物转录起始过程中的基因特异调控蛋白和RNA聚合酶Ⅱ重要的转录组成部分，最早发现于酵母菌中，是由多个蛋白质亚基组成的生物大分子复合物，属于RNA聚合酶Ⅱ通用转录装置的基本组分，在真核生物mRNA合成的活化和抑制中发挥关键作用，对RNA聚合酶Ⅱ活力进行调节。Medl9基因在酵母中又名ROX3（或SSN7、RMRl等），最初是在研究CYC7基因突变体中发现的。野生型ROX3基因的克隆序列表示，它编码一个220个氨基酸的蛋白质。Medl9基因在人体又称肺癌转移相关蛋白（LCMRl），定位于染色体chrllq2．1，蛋白由244个氨基酸组成，基因全长1605bp。Medl9（Rox3）是中介体的一个亚单位，构成了酵母RNA聚合酶Ⅱ的头部组件，在转录激活和抑制中发挥重要作用。本文就Medl9基因的特点、功能及其与肿瘤等关系的最新研究进展作一综述。     

环状RNA在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌是预后最差的消化道恶性肿瘤, 其发生发展机制仍待研究。环状RNA(circRNA)是一类具有连续、共价闭合的环状结构的单链RNA, 其生物学功能包括作为微小RNA的海绵、调节基因转录、影响同源信使RNA(mRNA)剪接、与蛋白质交互作用、翻译蛋白质等。研究显示circRNA在胰腺癌中表达失调, 通过多种途径影响肿瘤进展, 并调节胰腺癌的肿瘤微环境。本文综述circRNA的生物学功能及其对胰腺癌恶性表型的调控作用, 为其临床应用及基础研究提供新的思路。     

siRNA沉默Ppif基因表达对大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响

目的：应用小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）抑制大鼠基因Ppif的表达,探讨其对大鼠肾细胞（NRK）增殖和凋亡的影响。方法：体外化学合成针对Ppif基因的siRNA序列,在脂质体介导下转染NRK细胞,RT—PCR检测PpifmRNA表达水平,Westernblot检测Ppif蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡状况,MTT法检测细胞增殖活性。结果：PpifsiRNA转染NRK细胞24h后,所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比,起始于405、556位点的sIRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应（P〉0．05）;起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75．25％（P〈0．05）;蛋白水平下降72．13％（P〈0．05）。MTT结果显示NRK细胞增殖能力显著增加,转染24h后,siRNA1～siRNA4细胞抑制率分别为（68．6±3．6）％、（5．3±4．3）％、（7．6±6．3）％和（4．1±4．5）％,凋亡率明显下降。结论：体外化学合成的PpifsiRNA（起始于198位点）可以有效地抑制NRK细胞Ppif的表达,从而抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。     

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞缝隙连接Cx43介导的细胞间通讯

RNA干扰技术的效应分子是小分子短链RNA（siRNA）。本实验拟通过转染Cx43特异性siRNA检测平滑肌细胞Cx43基因表达和细胞间通讯（GJIC）功能。探讨RNA干扰技术在血管平滑肌细胞缝隙连接功能研究中的应用。     

RNAi表达载体对膀胱癌细胞Livin基因表达的抑制作用

目的观察RNA干扰（RNAi）表达载体对膀胱癌BIU-87细胞Livin基因的抑制作用。方法构建针对Livin基因的RNAi质粒表达载体，脂质体法转染膀胱癌BIU-87细胞株，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测其对Livin mRNA及蛋白表达的影响。结果构建的表达质粒在膀胱癌BIU-87细胞株中均抑制了Livin mRNA及蛋白表达。与空白载体组细胞作对照，前者产生的小干扰RNA（siRNA）在对Livin mRNA的抑制率24、48h分别为（81．28±9．21）％、（55．88±6．27）％，蛋白抑制率24h为（64．75±7．55）％。结论RNAi表达载体可以有效地抑制膀胱癌细胞Livin基因的表达。     

环状RNA在脑缺血性损伤中作用机制的研究进展

环状RNA（circular RNA, circRNA）是广泛存在于生物体内的一种非编码RNA,具有闭合环状结构,经过特殊剪切机制形成,在基因转录后水平发挥重要调控作用。哺乳动物中枢神经系统中存在大量circRNA,与神经细胞增殖、分化、凋亡及脑缺血后神经细胞损伤密切相关。有研究表明脑缺血性疾病发生时,circRNA表...     

RNAi与肿瘤相关基因及在肿瘤治疗中的研究

RNA干扰（RNA interfcrence，RNAi），是一种在动植物中广泛存在的通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因沉默的过程，随着对RNAi研究的不断深入，其作用机制正在逐步被阐明；同时作为阻断基因表达的新手段，RNAi技术也日趋完善和成熟。而恶性肿瘤基因学说也越来越得到重视，肿瘤相关基因的研究更加细致深入。本文就RNAi技术的基本原理、肿瘤相关基因的概念以及RNAi技术在肿瘤尤其是泌尿系肿瘤相关基因研究中的应用作一综述。     

RNA干扰技术在前列腺癌病因学研究及治疗中的应用

RNA干扰技术（RNAi）是一种双链RNA分子在mRNA水平上诱发的转录后基因沉默机制.它在分析和研究基因功能、抗肿瘤及抗病毒研究方面发挥了重要作用.本文综述其在前列腺癌病因学研究及前列腺癌的基因治疗中的应用.     

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞血管内皮生长因子C表达的实验研究

目的 构建针对血管内皮生长因子C（VEGF-C）的RNA干扰质粒表达载体pSIH1-H1-copGFP,并评价其转染胃癌细胞后对VEGF-C表达的抑制作用.方法 设计并合成针对VEGF-C基因mRNA序列的3条短发夹RNA及1条阴性对照序列,克隆到pSIH1-H1-copGFP载体,重组构建RNA干扰质粒,并将其转染胃癌细胞（SGC7901）,采用RT-PCR分析转染后VEGF-C基因的表达情况.结果 重组构建pSIH1-H1-copGFP载体经双酶切及插入片断序列分析,表明其成功插入设计位点,并且序列完全一致.3种siRNA质粒表达载体的转染效率均为60%～70%,对VEGF-C mRNA表达的抑制率分别为35.4%、33.8%和81.5%.结论 RNA干扰质粒表达载体介导对VEGF-C基因的RNA干扰可明显抑制胃癌细胞中VEGF-C的表达,可能成为抑制胃癌淋巴管生成的一种有效手段.     

RNA干扰在器官移植中的基因治疗靶位点

RNA干扰（RNAi）是指双链RNA（dsRNA）分子在mRNA水平关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程，是一种序列特异性的转录后基因沉默。RNAi广泛存在于生物界中，从低等原核生物到植物、真菌、无脊椎动物，甚至近来在哺乳动物中也发现了此种现象。鉴于RNAi技术的高效性和特异性，目前RNAi技术已广泛应用于基因组学、