间歇低氧对大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

目的通过检测间歇低氧大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白（PTEN）及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的表达水平,探讨肝脏细胞PTEN、P-AKT在间歇低氧相关胰岛素抵抗中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠24只,随机分成3组,即慢性间歇空气对照组（CIA组）、慢性间歇低氧4周组（CIH4组）和慢性间歇低氧8周组（CIH8组）。检测3组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、肝细胞中PTEN及p-AKT的表达,用胰岛素敏感指数（IsI）以及稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）系统评价胰岛素抵抗。以平均灰度值表示PTEN及p-AKT的蛋白表达量,灰度值越高表示蛋白质表达越少。结果与CIA组比较,CIH4组、CIH8组ISI下降有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组下降比CIH4组明显（P〈0．05）;CIH4组、CIH8组HOMA—IR升高有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组升高较CIH4组明显（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组PTEN蛋白表达量升高有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组PTEN蛋白表达量升高亦有统计学意义（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组p-AKT蛋白表达量下降有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组p-AKT蛋白表达量下降亦有统计学意义（P〈0．05）。间歇低氧大鼠肝细胞中PTEN的表达随着IsI的下降和HOMA—IR的升高有显著升高趋势,且随间歇低氧时间的延长而显著性增加;间歇低氧大鼠肝细胞中p-AKT随着IsI的下降和HOMA—IR的升高表达下降,且随着间歇低氧时间的延长而更加明显。结论慢性间歇低氧暴露使大鼠空腹血糖及胰岛素水平升高,发生胰岛素抵抗,并且随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。间歇低氧大鼠肝细胞PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达减少,且与ISI、HOMA．IR具有明显的相关性,表明该蛋白可能在间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的发生     

慢性间歇低氧对大鼠肝CXC趋化因子配体10表达的影响及抗氧化剂的干预作用

目的：通过大鼠模型观察慢性间歇低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)对肝的损伤及其对肝CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)表达的影响,并探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)干预作用及机制。方法：21只健康雄性Spraque-Dawley大鼠随机分为正常对照组、慢性间歇低氧组(CIH组)和慢性间歇低氧+N-乙酰半胱氨酸组(CIH+NAC组),每组7只。对照组置于空气循环舱内,其余两组置于间歇低氧舱内,每日8 h,共5周;对照组及CIH组每日均给予生理盐水灌胃,CIH+NAC组每日给予NAC溶液灌胃。5周后处死大鼠,测定大鼠肝组织MDA含量和SOD活力,采用HE染色法观察各组大鼠肝组织病理改变,免疫组织化学法比较各组大鼠肝CXCL10的表达水平。结果：与对照组相比,CIH组、CIH+NAC组大鼠肝MDA水平均升高(均P<0.05),SOD活力均降低(均P<0.05);与CIH组比较,CIH+NAC组大鼠肝MDA降低,SOD活力升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较,CIH组和CIH+NAC组大鼠肝脂肪变程度及炎症反应均增加(均P<0.01);CIH+NAC组大鼠肝损伤较CIH组减轻(P<0.05)。与对照组相比较,CIH组和CIH+NAC组大鼠肝组织CXCL10表达均增强(均P<0.01);CIH+NAC组较CIH组减弱(P<0.01)。结论：CIH可导致大鼠肝组织损伤,并使大鼠肝组织CXCL10表达增加;NAC可以减轻CIH导致的大鼠肝氧化应激和炎症反应,部分改善大鼠肝损伤。     

慢性间歇低氧对大鼠肝fractalkine表达的影响

目的：利用大鼠模型观察慢性间歇低氧（chronic intermittenthypoxia,CIH）对肝的损伤以及对肝趋化因子fractalkine表达的影响,并探讨其可能的机制。方法：利用间歇低氧大鼠模型模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS）的CIH的病理生理过程。30只雄性Spraque—Dawley大鼠随机分为5％慢性间歇低氧组、s％慢性间歇低氧复氧组和正常对照组,每组10只。5％慢性间歇低氧组给予间歇性低氧处理3周,低氧频率均为20次／h,每次循环180s,8h／d;s％慢性间歇低氧复氧组给予间歇性低氧处理3周,低氧频率均为20次／h,每次循环180s,8h／d,3周后继续正常气体环境饲养3周。处死大鼠后采用HE染色法观察各组大鼠肝组织病理改变,免疫组织化学法比较各组大鼠肝fractalkine的表达水平。结果：1）与正常对照组相比,5％慢性间歇低氧组和5％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝脂肪变程度及炎症反应均增加（均P〈0．01）;s％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝损伤较5％慢性间歇低氧组显著减轻（P〈0．01）。2）与正常对照组相比,5％慢性间歇低氧组和5％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝组织fractalkine表达均显著增强（均P〈O．01）;5％慢性间歇低氧复氧组较5％慢性间歇低氧组显著减弱（P〈0．01）。结论：CIH可诱导大鼠肝组织损伤及大鼠肝组织趋化因子fractalkine表达增加。     

大鼠Sesn2/AMPK信号介导肝脏的自噬在间歇低氧和复氧致糖代谢异常中的作用

目的 探讨大鼠Sesn2/AMPK信号介导肝脏的自噬在间歇低氧和复氧致糖代谢异常中的作用。方法 48只大鼠随机分为对照组(NC)与慢性间歇低氧(CIH)组,每组24只,CIH组置于间歇低氧舱8 h/d,持续8周,随后予常氧饲养4周;NC组始终常氧饲养。两组大鼠分别在基线、间歇低氧8周、复氧4周时检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肝脏Sesn2、AMPK、p-AMPK蛋白及mTOR、LC3 mRNA水平。结果 基线时,两组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);间歇低氧8周时,与NC组比较,CIH组FBG、FINS、HOMA-IR、mTOR水平增高,Sesn2、p-AMPK/AMPK、LC3水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）;复氧4周后,两组上述指标差异无统计学意义（P> 0.05）。结论慢性间歇低氧可以导致大鼠FBG、FINS增高,可能是通过抑制Sesn2/AMPK介导肝脏的自噬引起胰岛素抵抗。     

间歇低氧相关高血压大鼠模型中血浆血管内皮生长因子的变化

目的建立慢性间歇低氧（CIH）诱发的大鼠高血压模型,探讨血浆内皮生长因子（VEGF）与大鼠血压的关系。方法 16只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组：空白对照组（UC）8只、间歇低氧诱发高血压大鼠组（IH）8只。UC组大鼠不予任何处理;IH组大鼠每天7 h进行间歇低氧处理28d,以大鼠尾动脉压力值证实建立高血压大鼠模型成功。测定2组大鼠血浆VEGF浓度。结果 （1）IH组大鼠血压水平及血浆VEGF水平较UC组升高（P〈0.05）。（2）大鼠血压值和血浆VEGF表达水平呈正相关（r=0.729,P〈0.05）。结论使用间歇低氧舱制作的大鼠高血压模型血浆VEGF水平较对照组显著升高。     

慢性间歇低氧大鼠肺组织中C/EBP同源蛋白的表达变化及依达拉奉的干预作用

目的探讨慢性间歇低氧大鼠肺组织中C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达变化以及依达拉奉的干预作用和可能机制。方法采用随机数字表法将120只成年雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组(UC组)、慢性间歇低氧组(CIH组)、依达拉奉干预组(NE组)和生理盐水组(NS组),以上4组又分别随机分成5个时间亚组,分别为3 d、7 d、14 d、21 d、28 d亚组,每个时间亚组6只大鼠。采用苏木精–伊红染色法光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态变化。采用免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织中CHOP的表达变化。结果苏木精–伊红染色法观察发现,UC组大鼠肺组织未见明显病理改变,CIH组大鼠肺组织上皮细胞出现明显水肿、充血,肺泡间隔增宽,局部可见炎性细胞浸润,且随间歇低氧时间延长,病理损伤越严重;NE组亦出现病理变化,但肺组织损伤程度明显低于CIH组;NS组病理改变与CIH组比较无明显变化。免疫组织化学法结果显示,CHOP的表达在CIH组较UC组明显升高,且随时间延长表达增多;NE组亦较UC组表达增多,但仍明显低于CIH组;NS组CHOP的表达较CIH组无明显变化。结论慢性间歇低氧大鼠肺组织中CHOP蛋白表达增强,CHOP蛋白的高表达对慢性间歇低氧大鼠并发肺组织损伤起到一定作用。依达拉奉可能通过抑制CHOP的表达对慢性间歇低氧大鼠肺组织损伤起到一定保护作用。     

CHOP在慢性间歇低氧大鼠肺组织表达水平变化

目的建立慢性间歇低氧大鼠模型,探讨内质网应激标志蛋白CHOP在慢性间歇低氧大鼠肺组织表达水平变化。方法选取Wistar雄性大鼠48只随机分成慢性间歇低氧组（CIH组）和对照组（UC组）,每组各自分成4个时间亚组,分别为自实验之日起1周、2周、3周、4周,每个时间亚组6只大鼠。采用HE染色法及免疫组织化学法,观察比较CIH组与UC组大鼠肺组织病理形态变化及CHOP蛋白的表达变化。结果CIH组大鼠肺泡结构破坏,肺泡壁间隔增宽,可见间质水肿,少量炎性细胞浸润,部分肺泡融合;UC组肺组织未见明显病理形态改变。免疫组织化学法检测结果提示,CHOP蛋白的表达主要集中于肺泡上皮细胞,CIH组大鼠肺组织CHOP蛋白表达较UC组明显增多,且随低氧时间延长,CHOP表达呈逐渐增多趋势（P < 0.01）。结论CHOP在慢性间歇低氧大鼠肺组织中表达水平升高。     

慢性间歇性低氧对大鼠认知功能及前额叶皮层神经元的影响

目的 观察慢性间歇性低氧对大鼠认知功能及前额叶皮层神经元的影响。 方法 将成年雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、50 mL/L间歇低氧组（50 mL/L CIH组)。50 mL/L CIH组采用低氧舱模拟间歇低氧环境制造低氧模型,在间歇低氧7 d、14 d、21 d、28 d时间点采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆功能,免疫印迹法检测观察前额叶皮层半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8（caspase-8）蛋白表达的变化,TdT介导的脱氧核甘酸切口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡。 结果 与对照组相比,50 mL/L CIH组逃避潜伏期在14 d、21 d、28 d时间点均延长,差异有统计学意义（ P<0.05）;跨越目标象限时间亦缩短,差异有统计学意义（ P<0.05）; 50 mL/L CIH组内不同时间点比较,从14 d起随低氧时间延长大鼠逃避潜伏期延长,跨越目标象限时间缩短,差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组相比,50 mL/L CIH组额叶皮层神经元caspase-8的表达在各个时间点均增加,于28 d达高峰,差异有统计学意义（ P<0.05）;额叶皮层神经元出现明显结构受损、神经元密度明显减少;神经细胞凋亡指数增高（ P<0.05）,且神经细胞凋亡指数的变化具有时间依赖性,随时间的延长逐渐升高（ P<0.05）。 结论 重度慢性间歇性低氧可以引起大鼠前额叶皮层的病理学改变,可能通过促进促凋亡因子caspase-8阳性表达,引起神经细胞凋亡,从而导致大鼠认知功能降低。     

磷酸化蛋白激酶样内质网激酶、C/EBP同源蛋白在慢性间歇低氧大鼠肺组织中的表达变化及意义

目的  探讨慢性间歇低氧（CIH）大鼠肺组织中磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶（p-PERK）、CCAAT增强子结合蛋白（C/EBP）同源蛋白（CHOP）表达变化及意义。方法  将60只大鼠随机分成正常组（UC组）、CIH组,每组各自分成3、7、14、21和28 d 5个时间亚组。采用HE法观察UC组和CIH组大鼠肺组织病理形态变化;采用免疫组织化学法检测p-PERK、CHOP蛋白表达及两者的相关性;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测两组大鼠肺组织CHOP mRNA表达。结果  ①CIH组肺泡壁及间质轻度水肿,少量炎症细胞浸润,肺泡结构紊乱,部分肺泡融合;UC组大鼠肺组织无明显病理变化。②CIH组肺组织p-PERK、CHOP蛋白表达高于UC组,于21 d表达最高。③CIH组肺组织CHOP mRNA表达高于UC组,于21 d表达最高。④P-PERK、CHOP表达的上调呈正相关。结论  慢性间歇低氧可引起肺组织损伤,而p-PERK、CHOP蛋白的活化表达在慢性间歇低氧大鼠肺组织的损伤中可能存在一定的作用。

     

Orexin A对慢性间歇低氧大鼠颏舌肌长时程易化的影响

目的:探讨慢性间歇低氧(CIH)对大鼠颏舌肌长时程易化(LTF)的影响和Orexin A/Orexin A受体拮抗剂对慢性间歇低氧大鼠颏舌肌长时程易化的调控。方法:30只合格成年大鼠采用随机数字表法随机分为6组,每组5只:常氧对照组,慢性间歇性低氧组,生理盐水组,Orexin A低浓度组,Orexin A高浓度组,Orexin A受体拮抗组,后5组大鼠放置于慢性间歇低氧动物仓中,常氧对照组放置于常氧动物仓中,每天8h,连续4周。最后给各组大鼠大脑中缝背核分别注射生理盐水(0.1μl),低浓度Orexin A(50nmol,0.1μl),高浓度Orexin A(100μmol,0.1μl)和Orexin A受体拮抗剂(10μmol,0.1μl),分别记录其颏舌肌放电幅度。结果:慢性间歇低氧组颏舌肌放电幅度较常氧对照组明显增强(P<0.05,n=5),生理盐水组颏舌肌放电幅度较慢性间歇低氧组无明显变化(P>0.05,n=5)。Orexin A低浓度组和Orexin A高浓度组颏舌肌放电幅度较慢性间歇低氧组均有增强(P<0.05,n=5),且与药物浓度成正比。Orexin A受体拮抗剂组颏舌肌放电幅度较慢性间歇性低氧组有所降低(P<0.05,n=5)。结论:慢性间歇低氧可诱导大鼠颏舌肌长时程易化,Orexin A/Orexin A受体拮抗剂对慢性间歇低氧大鼠颏舌肌长时程易化有具有调控作用:Orexin A可增强慢性间歇低氧大鼠颏舌肌长时程易化,且与药物浓度成正比;Orexin A受体拮抗剂可减弱慢性间歇低氧大鼠颏舌肌长时程易化。     

慢性间断性低氧大鼠脑皮层GAP-43表达的时间变化

目的观察慢性间断性低氧(CIH)大鼠脑皮层生长相关蛋白(GAP-43)表达的时间变化,探讨这些变化与缺氧性脑损伤修复间的关系。方法成年雄性SD大鼠40只,随机均分为对照组、CIH 1周、CIH 3周和CIH 5周组。CIH组大鼠在自制缺氧舱内每天缺氧8小时,连续缺氧1、3和5周。利用免疫组化方法检测大脑皮层神经元生长相关蛋白的表达。结果与对照组比较,慢性间断性低氧大鼠脑皮层神经元GAP-43阳性表达增多,表达高峰出现在1周后(P<0.05),3周后表达逐渐减少(P>0.05),5周后表达接近对照组水平(P>0.05)。结论慢性间断性低氧大鼠脑皮层生长相关蛋白的表达呈现时间变化,这可能与缺氧性脑损伤后的修复有关。     

大鼠慢性间歇性缺氧后c-fos的表达与神经细胞凋亡的关系

目的观察凋亡相关基因c-fos在慢性间歇性缺氧（CIH）大鼠大脑皮质及海马区中的表达,探讨其与睡眠呼吸暂停综合征（SAS）脑部病变的关系。方法取健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组,即对照组、CIH4周组和CIH8周组,每组10只。分别用原位末端标记法（TUNEL）和免疫组织化学方法 （MaxVision^TM一步法）检测大鼠脑组织中的凋亡细胞和c-fos蛋白,比较3组的神经细胞的凋亡及c-fos蛋白的表达变化情况。结果 c-fos表达阳性细胞及凋亡细胞主要分布在大脑皮质深层和海马区。CIH4周组的c-fos阳性细胞数（19.25±3.61）及凋亡细胞数（4.57±0.76）均比对照组明显增高（P〈0.01）;与其余两组比较,CIH8周组的c-fos阳性细胞数（28.65±5.26）及凋亡细胞数（7.29±0.79）也均比其余2组明显增高（P〈0.01）。结论 CIH引起了c-fos蛋白的表达增强,并可诱导神经细胞凋亡;c-fos蛋白的表达可能与CIH后神经细胞凋亡有关。     

慢性间歇缺氧心房重构模型的建立

目的:通过慢性间歇缺氧的方法建立大鼠心房颤动（AF）纤维化模型。方法:16只SD雄性大鼠随机分为慢性间歇缺氧组（模型组）和空白对照组,每组8只,慢性间歇缺氧组大鼠置于低压氧舱中,循环充入氮气与氧气,每次循环时间为300 s,其中充入氮气时间为210 s,充入氧气时间为90 s,使舱内氧浓度波动于8％～21％之间。空白对照组普食喂养,未作干预。第31天称重后行超声心动图检查评价心功能并处死大鼠,留取组织进行相应实验,Masson染色并分析心房纤维化程度。结果:模型组大鼠心房纤维化程度与对照组相比明显增加（P＜0.05）,模型组大鼠肺动脉压力与对照组相比明显升高。结论:慢性间歇缺氧可导致大鼠心房纤维化,其可以被用来作为研究 AF与心房结构重构的重要研究平台。     

儿茶酚雌激素介导慢性间歇低氧诱导OSAHS雌性大鼠遗尿模型的建立

目的：利用慢性间歇低氧（CIH）诱导建立阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）遗尿雌性大鼠模型,并探讨儿茶酚雌激素（CE）在CIH诱导的OSAHS遗尿中的作用。方法：选取6周龄SD雌性大鼠16只,随机分成CIH组和对照组,每组8只。实验组置于常压间歇低氧舱,对照组置于同等条件下的空气模拟对照舱,均放置4周。监测24 h进水及排尿量;测定血清中CE,儿茶酚胺类化合物如肾上腺素（Adr）、去甲肾上腺素（NA）和多巴胺（DA）含量及其儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）活性;测定排尿阈;留取膀胱行HE及Weigert染色,光镜下观察组织学变化。结果：CIH组大鼠氧舱外进水量及排尿量与对照组比,差异无统计学意义（P＞0.05）。但CIH组大鼠氧舱内排尿量明显增加,血清中CE、Adr、NA和DA含量明显增高,而COMT的活性明显降低,排尿阈明显降低,膀胱组织光镜下显示膀胱逼尿肌肌束排列紊乱、疏松,部分肌束断裂。结论：CIH可诱导雌性大鼠发生遗尿,伴有排尿量增多,排尿阈降低,血清中儿茶酚胺类化合物含量增高,而COMT的活性降低,与儿童OSAHS诱发遗尿的临床症状相似,提示通过CIH诱导建立OSAHS遗尿雌鼠模型基本可行。