脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成

目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05);与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调;与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.     

鞘内注射硫酸镁对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射硫酸镁( MgSO4)对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3 H/HeJ小鼠56只,8 ～10周龄,体质量18～22 g,随机分为7组(n=8):假手术Sham组(S组)、癌痛模型对照Control组(C组)和MgSO4及吗啡Treat组(T1 -T5组).C组和T组(T1-T5组)小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×105个NCTC 2472纤维肉瘤细胞的20μl α-MEM,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC2472细胞的20μl α-MEM.在接种肿瘤细胞后第14天S组和C组鞘内注射5μl人工脑脊液,T1 -T5组分别鞘内注射溶于人工脑脊液的MgSO4 14.4 μg/5μl、43.2 μg/5μl、86.4 μg/5μl、吗啡0.36 μg/5μl、MgSO414.4μg-吗啡0.36 μg/5 μl.各组于给药前0.5h及给药后的0.5h、2h、4h、8h检测小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).结果 鞘内给予MgSQ 14.4 μg、吗啡0.36 μg对骨癌痛小鼠痛行为无影响,鞘内给予MgSO4 43.2 μg、86.4 μg能剂量依赖性减轻小鼠痛行为反应,同时MgSO4 14.4μg-吗啡阈下剂量0.36μg组合也减轻小鼠痛行为反应,给药后0.5h各组小鼠自发抬足次数[(10.08±1.66)次、(7.35±1.36)次、(10.54±1.32)次]比C组[(13.05±2.06)次]降低,PWMT[ (0.81±0.22)g、(1.33±0.19)g、(0.93±0.26)g]、PWTL[ (10.57±1.53)s、(13.12±1.71)s、(11.46±1.83)s]比C组[(0.42±0.23)g、(8.87±1.27)s]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).作用2h达到高峰,维持到4h左右,8h后基本消失.结论 鞘内注射MgSO4能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为;同时MgSO4可增强阈下剂量吗啡的镇痛作用.     

艾芬地尔鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的改善作用

目的 在小鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂艾芬地尔的镇痛效果.方法 将含2×105个纤维肉瘤细胞NCTC 2472的最小必需培养基(α-MEM)注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n =10),注入不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠均于接种前1 d,接种后第3,5,7,10,14天检测痛行为学指标,包括自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).骨癌痛模型制作成功的T组小鼠在接种后第14天,进一步分为艾芬地尔 2.5 μg、5.0 μg、10.0 μg组(I1、I2、I3 组,n =10)和对照组(C组,n =10),I1～I3组鞘内注射相应剂量的艾芬地尔,C组及S组给予溶媒,注药体积均为5.0 μl,鞘内注射后2 h、12 h、24 h再进行行为学检测.结果 与S组[(2.44±0.79)次]和术前基础值[(2.20±0.85)次]相比,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足[(13.16±1.78)次]显著增多( P ＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.70±0.31)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低( P ＜0.05),PWTL[(10.01±1.42)s]较S组[(17.62±1.07)s]和基础值[(18.32±1.57)s]缩短( P ＜0.05);给药后2 h、12 h,与C组及14 d 给药前比较,I2和I3组自发性抬足次数减少( P ＜0.05),PWMT增高( P ＜0.05),PWTL延长( P ＜0.05),且I3组比I2组对痛行为学的改善更显著( P ＜0.05);I1组给药后痛行为学无明显变化( P ＞0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.     

鞘内注射大麻素受体2激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射大麻素受体2(CB2)激动剂JWH015对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 雄性C3H/HeN小鼠32只随机分为4组(n=8):空白组(C),假手术组(s),DMSO(D,二甲基亚砜)组和JWH015(J)组.D组和J组在小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种溶于最小必需培养基(α-MEM)的NCTC2472谘骨性纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;s组接种不含细胞的α-MEM;c组不予任何处理.在接种肿瘤细胞后的第14天按照分组D组和J组分别鞘内注射DMSO 5μl和溶于20%DMSO的JWH015 1 μg;S组注射DMSO.各组于接种前,接种后的3d、5d、7d、10d、14d以及给药后的1h、6h、24h、48h、72h测定小鼠的机械性缩足阈值(FWMT)和热缩腿潜伏期(FWTL).结果 与术后14d给药前的基础值[PWMT(0.45±0.09)g,PWTL(11.87±1.1)s]相比,鞘内注射JWH015后6h小鼠骨癌痛即缓解[PWMT(1.20±0.21)g,PWTL(15.35±2.42)s](P<0.05);24h缓解作用达到高峰[PWMT(1.85±0.28)g,PWTL(18.80±2.93)s](P<0.05);在72h作用衰退到给药前水平[PWMT(0.48±0.10)g,PWTL(11.83±1.19)s]P>0.05).结论 鞘内注射JWH015能够显著改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

艾芬地尔重复鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的影响

目的 观察艾芬地尔重复鞘内注射对小鼠骨癌痛的影响.方法 96只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤给药组(T组)、肿瘤对照组(C组)和假手术组(S组).将含2 ×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.T组在术后第14天开始,鞘内注射艾芬地尔5μl(10μg),每天1次,连续3天.C组和S组在相同时间点分别给予相同体积的溶媒.各组于接种前l天,接种后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第17天、第19天和第23天检测痛行为学指标,包括小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).按照分组在相应时间点处死小鼠,用Western-blotting方法检测脊髓腰膨大NR2B蛋白表达水平.结果 肿瘤细胞接种后第14天,和S组及术前基础值相比,T组小鼠自发性抬足[ (12.88 ±1.64)次]显著增加,PWMT(0.39 ±0.17)g和PWTL( 11.59±1.67)s明显下降(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白(2.12 ±0.13)显著增加(P＜0.05).肿瘤细胞接种后第17天,第19天,第23天,和第14天及C组相比,T组自发性抬足[(5.13±1.38)次,(4.70±1.58)次,(5.64±1.17)次]明显减少,PWMT[ (1.10 ±0.65)g,(0.95 ±0.56) g,(1.05 ±0.26)g]和PWTL[ (15.17±1.27)s,(15.93 ±2.18)s,(16.28±1.48)s]显著增加(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白[(1.42±0.17),(1.67±0.53),(1.14±0.79)]显著减少(P＜0.05).结论 重复鞘内注射艾芬地尔能显著改善骨癌痛小鼠的痛行为,降低脊髓NR2B蛋白.     

鞘内注射m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响

目的 观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响.方法 SD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组(每组n=6):假手术对照Sham组(S组)、坐骨神经结扎模型对照Control组(C组)、m-AIP组.C组和m-AIP组制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,S组仅显露坐骨神经不结扎.术后7dS组和C组鞘内注射0.9％NaCl20μl,m-AIP组鞘内注射溶于0.9％ NaCl的m-AIP 0.5 nmol/20μl.各组于给药后1.5h行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验(Place escape/avoidance paradigm,PEAP),给药前及给药后2h、4h、8h检测大鼠的热缩足反射潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械性缩足反射阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).结果 鞘内给予m-AIP 0.5 nmol能够改善大鼠痛行为反应,减少位置逃避行为.给药后2h、4hm-AIP组PWTL[(11.45±2.04)s,(10.26±1.48)s],PWMT[(21.15±4.32)g,(20.45 ±4.09)g]比C组PWTL[(9.63±1.65)s,(9.30±0.73)s],PWMT[(13.87±2.36)g,(14.80±3.12)g]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).给药前及给药后8h m-AIP组PWTL,PWMT与C组PWTL,PWMT相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ在坐骨神经痛的感觉分辨和情绪体验中起重要作用,鞘内注射m-AIP能够改善CCI大鼠痛行为和痛相关负性情绪.     

鞘内注射钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN93对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响

目的 观察鞘内注射钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)抑制剂KN93对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响.方法 SD雄性大鼠60只按随机数字表法分为5组:空白对照组(C组,n=12)、切口痛(Ⅰ组,n=12)、瑞芬组(R组,n=12)、二甲基亚砜组(DMSO组,n=12)以及KN93组(n=12).除空白对照组外均做切口痛模型,瑞芬组、DMSO组及KN93组切皮同时经皮下泵注瑞芬太尼(0.04 mg/kg,1 mg溶于40 ml生理盐水)30 min.DMSO组及KN93组术前30 min分别鞘内给予10％ DMS0 20μl和KN9320μl(50 μg溶于20 μl 10％ DMSO中).各组分别在术前24h及术后2h、6h、24h、48h检测术侧热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)及机械缩足阈值(Paw mechanical withdrawal threshold,PMWT).结果 与C组相比,Ⅰ组术后各时间点PWTL[( 11.24 ±0.69)s,(10.36±0.29)s,(11.29±1.12)s,(12.21±0.75)s]及PMWT[ (25.5±1.20)s,(24.92±1.98)s,( 25.47±1.54)s,(27.14±1.04)s]明显降低(P＜0.05);与Ⅰ组相比,R组术后PWTL[(8.48±0.72)s,(8.58±0.45)s,(8.46±0.92)s,(9.07±0.79)s]及PMWT[ (21.2±2.42)s,(19.58±1.12)s,(21.87±1.56)s,(22.26±1.64)s]明显降低(P＜0.05);与R组相比,KN93组术后各点PWTL[( 13.32±0.73)s,(11.79±0.32)s,(11.86±0.98)s,(12.76±0.82)s]及PMWT[ (29.75±1.38)s,(28.27±1.16)s,(26.5±1.02)s,(27.79±1.22)s]明显升高(P＜0.05).结论 鞘内注射KN93能够缓解瑞芬太尼诱发的痛觉过敏.     

鞘内注射赛庚啶缓解小鼠骨癌痛

目的: 观察鞘内注射SET domain containing lysine methyltransferase 7/9 (SET7/9)抑制剂赛庚啶对骨癌痛模型小鼠机械性痛觉过敏阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)及脊髓背角SET7/9表达的影响。方法: 选择88只雄性C3H/HeJ小鼠,体质量20～25 g。实验分为2部分：第1部分实验将小鼠随机均分为假手术组及骨癌痛组,每组8只,观察两组小鼠术前1 d及术后5、7、12、15 d PWMT的变化;采用蛋白质印迹法检测两组小鼠(n=4)术前1 d及术后15 d脊髓背角SET7/9的表达。第2部分实验将小鼠随机分为假手术组、骨癌痛组、骨癌痛+赛庚啶 10 nmol组、骨癌痛+赛庚啶 20 nmol组、骨癌痛+ SET7/9 0.2 μg组、骨癌痛+SET7/9 0.2 μg+赛庚啶20 nmol组及骨癌痛+氯苯那敏 200 μg组,每组8只;观察鞘内给药前(0 h)及鞘内给药后1、3、6 h 各组PWMT的变化;蛋白质印迹法测定骨癌痛组(n=4)及骨癌痛+赛庚啶 20 nmol组(n=4)鞘内给药前(0 h)及鞘内给药后6 h脊髓背角SET7/9的表达。结果： 与假手术组相比,骨癌痛组小鼠术后7～15 d PWMT显著降低(P <0.05或0.01),15 d脊髓背角SET7/9明显增加(P<0.01)。与骨癌痛组相比,骨癌痛+赛庚啶10 nmol组、骨癌痛+赛庚啶20 nmol组鞘内注射3 h后PWMT明显增加(P<0.05或0.01),骨癌痛+赛庚啶20 nmol组小鼠脊髓背角SET7/9表达明显降低(P<0.01)。 结论： 鞘内注射赛庚啶可明显提高15 d骨癌痛小鼠PWMT及降低骨癌痛小鼠脊髓背角SET7/9的表达;脊髓SET7/9可能参与小鼠骨癌痛的发展过程。     

腹腔注射沙利度胺对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察腹腔注射沙利度胺对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 36只C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤组(n=18)和假手术组(n=18),每组抽取6只小鼠用于观察肿瘤细胞接种后小鼠痛行为学的变化.将含2×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型,假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.在接种前1 d,肿瘤组再分为两组(n=6):肿瘤+Thalidomide组,肿瘤+Vehicle组;假手术组相应分为假手术+Thalidomide组,假手术+Vehicle组.肿瘤+Thalidomide组和假手术+Thalidomide组在术后第1天到第7天,每天腹腔注射50 mg/kg的沙利度胺;肿瘤+Vehicle组和假手术+Vehicle组于同一时间注射等量体积的溶剂.各组于接种前1 d,接种后第3天、5天、7天、10天、14天检测痛行为学指标,包括机械缩足阈值(PWMT)和热缩足潜伏期(PWTL).结果 (1)接种肿瘤细胞后第7天,肿瘤组小鼠PWMT(1.07±0.30)g与假手术组(1.70±0.33)g相比,显著降低(P＜0.05);接种后第10天,肿瘤小鼠的PWTL(12.60±1.69)s较假手术小鼠(17.70±1.54)s明显缩短(P＜0.05),肿瘤小鼠的痛行为学随时间逐渐加重;(2)接种肿瘤细胞后第7天,肿瘤+Thalidomide组小鼠PWMT(1.53±0.39)g与肿瘤+Vehicle组(1.07±0.39)g相比,显著升高(P＜0.05);接种后第10天,肿瘤+Thalidomide组小鼠的PWTL(16.48±1.13)s较肿瘤+Vehicle组小鼠(12.64±1.56)s明显延长(P＜0.05).结论 腹腔注射沙利度胺能够显著改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

酸敏感离子通道抑制剂阿米洛利对切口痛大鼠痛行为的影响

目的 探讨酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)抑制剂阿米洛利(amiloride)对大鼠切口痛模型痛行为的影响及其机制.方法 成年雄性SD大鼠58只,按随机数字表法选取4只用于足底皮肤ASIC3免疫荧光检测,30只用于痛行为学检测,24只用于Western blot检测脊髓背角pERK1/2表达.痛行为学和Western blot检测的大鼠随机分为3组:对照组(C组)、切口痛模型组(I组)和阿米洛利组(A组),术毕A组大鼠切口局部浸润amiloride溶液200 μg(20 μl).检测各组大鼠术前24 h和术后2h、4h、8h、12 h、24 h时间点的机械缩足阈值(PWMT)和热缩足潜伏期(PWTL)值及术后4h脊髓pERK1/2表达.结果 ASIC3表达在大鼠足底皮肤真皮层及表皮层深部.术前3组大鼠基础PWMT值和PWTL值分别为:C组[ (23.15±5.10)g,(11.32±1.21)s],I组[(23.26±5.69)g,(11.75±2.01)s],A组[(23.63±4.96)g,(11.47±1.96)s] (P＞0.05).术后2h、4h、8h、12 h、24 h,I组和A组大鼠PWMT值和PWTL值均小于C组(P＜0.05);术后2h、4h、8h,A组大鼠PWMT值和PWTL值分别为[(13.75±3.25)g,(9.96±1.32)s]、[(14.05±3.75)g,(9.17±2.11)s]、[(9.75±2.74)g,(8.11±1.22)s],较I组明显增高(P＜0.05).术后4h,I组大鼠脊髓pERK1/2表达较C组增加(P＜0.05);A组大鼠脊髓pERK1/2表达较I组降低(P＜0.05).结论 ASIC3通过激活ERK1/2信号通路介导大鼠切口痛模型术后疼痛,其作用可以被阿米洛利抑制.     

细胞周期素依赖蛋白激酶-5抑制剂Roscovitine对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响

目的 探讨预先鞘内注射细胞周期素依赖蛋白激酶-5(Cdk5)抑制剂Roscovitine对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响.方法 SD雄性大鼠45只,随机数字表法分成5组(n=9):对照组(C)、切口痛组(Ⅰ)、瑞芬太尼组(R)、Roscovitine组(ROS)、Roscovitine+瑞芬太尼组(ROS+ R).ROS,ROS+R组术前30 min鞘内给予Roscovitine10μl(50μg),余组给予20％ DMSO10μl.除C组外均制作切口痛模型;R和ROS+R组切皮同时皮下泵注瑞芬太尼0.4ml (0.04mg/kg) 30 min.于术前24h、术后2h、6h、24h、48h检测大鼠术侧足底机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 与C组相比,Ⅰ组术后PWMT、PWTL明显降低(P＜0.01).与Ⅰ组相比,R组术后PWMT,PWTL明显降低(P＜0.01);而ROS组术后PWTL明显升高[2h:(20.26±1.33)s,(17.97±0.47) s;48h:(22.15±0.60)s,(19.89±1.27)s] (P＜0.05).ROS+R与R组相比,术后2h PWTL[ (19.13±1.72)s,(14.41±2.30)s]及PWMT[(10.4±1.95)g,(6.38±0.91)g]开始升高,分别持续至48h[(19.24±2.80)s,(14.87±1.95)s]和24h[ (8.88±1.41)g,(6.83 ±0.80)g] (P＜0.05).结论 Roscovitine能减轻大鼠切口引起的热痛敏,并能缓解瑞芬太尼诱发的切口痛大鼠痛觉过敏.     

鞘内注射miR-212反义锁核酸对骨癌小鼠痛行为的影响

目的研究骨癌痛发展和维持过程中小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律及连续鞘内注射miR-212反义锁核酸LNA．anti—miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响。方法本实验分为两个部分：（一）骨癌痛小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律：C3H／HeJ雄性小鼠36只,随机分为假手术组（sham组,n=18）和肿瘤组（T组,n=18）。sham组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的仪一MEM,T组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射纤维肉瘤细胞NCTC2472,建立骨癌痛模型。在术前1d,术后4d、7d、10d、14d、21d,sham组和T组各随机取三只小鼠处死,取脊髓腰膨大标本,用Real-timePCR的方法检测脊髓水平miR一212的表达情况。（二）连续鞘内注射LNA—anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响：C3H／HeJ雄性小鼠24只,随机分为四组：L组（鞘内注射LNA-anti—miR一212,n=6）、L’组（鞘内注射LNA＇-negativecontrol,n=6）、C组（鞘内注射溶媒无核酸酶水,n=6）和S组（假手术处理,n=6）。L组、L’组和C组小鼠在右侧股骨远端注射纤维肉瘤细胞NCTC2472,S组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的仪一MEM。所有小鼠于术前1d、术后4d、7d、10d、14d测小鼠痛行为指标,包括自发抬足次数和机械缩足阈值（PWMT）,术后14d,L组、L’组、C组小鼠分别鞘内注射LNA—anti—miR-21212pmol／5山、LNA＇-negativecontrol12pmol／5I＊1和无核酸酶水5I＊1,连续鞘内注射7d,1次／d,每天测小鼠痛行为指标,至术后第21天。结果miR-212的表达变化表现为：与基础值相比,sham组和T组小鼠在术后第4天,脊髓水平miR一212明显升高（P〈0．05）;与基础值和sham组相比,T组小鼠脊髓水平miR-212在术后7d、10d、14d、21d均明显升高（P〈0．05）。连续鞘内注射LNA—anti—miR-212改善骨癌痛小鼠痛行为：术后19d至21d,与L’组和c组相比,L组小鼠PWMT[19d（1．07-4-0．16）g,20d（1．13±0．21）g,21d（1．27±0．21）g）]明显升高（P〈0．05）,自发抬足次数明显降低[19d（6．674-1．04）,20d（6．62±1．39）,21d（6．47±1．17）]（P〈0．05）。与14d给药前相比,L组小鼠术后19d至21d的PWMT明显升高（P〈0．05）,自发抬足次数明显降低（P〈0．05）。结论骨癌痛发展过程中,脊髓水平miR-212表达量升高。连续鞘内注射LNA-anti—miR一212可以缓解骨癌小鼠痛行为。     

鞘内注射驱动蛋白17反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10和NR2B蛋白表达的影响

目的 探讨鞘内重复注射驱动蛋白17（Kinesin superfamily 17,KIF17）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10（mammalian orthologue of the caenorhabditis elegans LIN-10,mLin10）和NR2B（the 2Bsubunits of N-methyl-D-aspartate Receptor,NR2B）蛋白表达的影响.方法 56只雄性C3H/HeJ小鼠,4～6周龄,体质量20～25 g,随机数字表法分为假手术组（S组,n=20）和骨癌痛组（T组,n=36）.T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射约含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必须培养基（α-MEM）20μl制备骨癌痛模型,S组小鼠注射不含肿瘤细胞的α-MEM 20μl.各组于接种前（base）、接种后第4,7,10,14天行痛行为学测试并在相应时间点取24只小鼠用western blot法测定脊髓KIF17、mLin10和NR2B蛋白含量.再将T组剩余24只小鼠随机分为T1,T2,T3组,每组8只.接种后第14天起,连续6d同一时间行鞘内穿刺给药,S组和T1组注射5μl生理盐水,T2组和T3组分别注射KIF17正义、反义寡核苷酸5μg/5μl.连续给药,第2～6天行痛行为学测试,第6天再次测定脊髓相关蛋白含量.结果 接种后7～14d,与S组和基础值相比,T组小鼠自发抬足次数增多,机械缩足阈值降低（P＜0.05）,与基础值[（0.65±0.15）、（1.06±0.06）、（1.01±0.14）]相比,T组小鼠脊髓水平KIF17、mLin 10和NR2B蛋白表达[14 d：（1.13±0.06）、（2.17±0.37）、（1.85±0.32）]增多（P＜0.05）;给药期间,与T1和T2组相比,T3组小鼠自发抬足次数减少,机械缩足阈值升高（P＜0.05）,给药后脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[（0.88±0.08）、（0.96±0.11）、（1.03±0.08）]减少（P＜0.05）.结论 重复鞘内注射KIF17反义寡核苷酸能明显改善骨癌痛小鼠的痛行为,并抑制了脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达上调.     

鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响

目的 观察脊髓水平氟代柠檬酸(fluorocitrate)对骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏的影响,探讨脊髓星形胶质细胞在伤害性信息传递中的作用.方法 C3H/HeJ 小鼠48只,随机分为6组(n = 8) :假手术组( Sham组),骨癌组,骨癌 生理盐水组,骨癌 氟代柠檬酸0.25 nmol/5 μl、0.50 nmol/5 μl、0.75 nmol/5 μl组.骨癌组和Sham组测定术前及术后7、12、17、21天小鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);骨癌各剂量组在第17天鞘内给予不同剂量的氟代柠檬酸,测定给药前和给药后15 min、30 min、1 h、2 h MWT和TWL值.结果 骨癌组从术后12天开始直到本实验观察的术后21天,MWT和TWL均明显降低,与Sham组相比具有显著性差异( P＜0.01＝;骨癌 生理盐水组小鼠在各个时间点上与给药前相比MWT和TWL无明显改变( P＞0.05);骨癌 氟代柠檬酸各个剂量组小鼠在给药后MWT和TWL均逐渐增加,具有剂量依赖性,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平;骨癌 氟代柠檬酸0.75 nmol/5 μl组在给药后30 min时作用最明显,与给药前和盐水组相比 P＜0.01.结论 鞘内注射氟代柠檬酸能明显减轻骨癌痛小鼠机械痛敏和热痛敏,提示星形胶质细胞在脊髓水平参与疼痛信息传递.     

Akt3基因敲除对坐骨神经结扎小鼠痛行为学的影响

目的 探讨Akt3基因敲除对坐骨神经结扎小鼠神经病理性痛行为学的影响.方法 C57BL/6小鼠分为Akt3基因敲除组(Akt3-/-,n=12)和野生组(WT,n=12).随机编号后,在小鼠右侧制作坐骨神经慢性挤压(CCI)模型.观察术前1d,术后1,3,5,7,10,14,17,21 d小鼠机械缩足阈值(Pawwithdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 两组小鼠基础PWMT[右侧:(1.09 ±0.20)g,(1.17±0.22)g;左侧:(1.17±0.15)g,(1.22±0.23)g,P＞0.05]和PWTL[右侧:(6.18±1.11)s,(6.20±1.25)s;左侧:(5.82±0.91)s,(5.92±1.71)s,P＞0.05]差异无统计学意义.术后1d,与基础值相比,Akt3-/-组和WT组小鼠右侧足PWMT和PWTL明显降低(P＜0.05),并持续到术后第21天.Akt3-/-组小鼠右侧足PWMT[第3天:(0.42±0.22)g,(0.72±0.36)g;第17天:(0.29±0.15)g,(0.49±0.19)g;第21天:(0.27±0.18)g,(0.56±0.15)g,P＜0.05]和PWTL[第5天:(2.43±0.68)s,(3.13±0.52)s;第17天:(2.43±1.26)s,(3.84±1.29)s;第21天:(2.14±1.23)s,(4.07±1.26)s,P＜0.05]明显低于WT组.Akt3-/-组左侧足PWMT和PWTL与WT组小鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05).但是与左侧足相比,Akt3-/-组和WT组小鼠右侧足PWMT和PWTL均明显降低(P＜0.05).结论 Akt3基因敲除后,小鼠坐骨神经结扎诱发的神经病理性疼痛加重.     

鞘内注射AG-490对骨癌痛小鼠脊髓水平星形胶质细胞活化和热痛觉的影响

目的：探讨脊髓水平IL-6-酪氨酸激酶-2( Janus kinase 2,JAK2)信号通路调控星形胶质细胞活化的机制及其 对骨癌痛的影响。方法：将NCTC 2472纤维肉瘤细胞注入C3H/HeNCrlVr雄性小鼠股骨骨髓腔制作骨癌痛模型,以 不含纤维肉瘤细胞的等体积α-MEM培养基行骨髓腔内注射制作假手术模型。采用热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)评估疼痛水平。取腰段脊髓组织(L3~L5水平),分别应用Real-time RT-PCR和Western印迹检测脊髓水平 星形胶质细胞中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和JAK2 mRNA与蛋白表达变化。鞘内注射给予JAK2 拮抗剂AG-490,观察小鼠痛行为学及脊髓水平GFAP mRNA和蛋白表达的变化。结果：骨癌痛模型组小鼠术后10, 14,21 d的PWL均较假手术组显著缩短(P<0.05);骨癌痛模型组的脊髓组织GFAP和JAK2 mRNA和蛋白表达显著增加 (P<0.05);鞘内注射30或90 nmol AG-490可以显著缩短骨癌痛模型组小鼠PWL,同时可以抑制脊髓组织GFAP mRNA和 蛋白的表达(P<0.05)。结论：脊髓水平IL-6-JAK2信号通路可能在骨癌痛的维持中发挥重要作用;IL-6-JAK2信号转导通 路可能通过抑制星形胶质细胞的活化来发挥镇痛作用。     

大麻素受体2激动剂JWH015对瑞芬太尼诱发痛觉过敏的影响

目的 探讨大麻素受体2( cannabinoid receptor 2,CB2R)激动剂JWH015对瑞芬太尼诱发的切口痛模型大鼠痛觉过敏的影响.方法 60只雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分成2大组:鞘内给药组和腹腔给药组.每大组又随机分为5小组:鞘内给药组分为对照组1(C1组)、切口痛组1(I1组)、瑞芬太尼组1(R1组)、切口痛+JWH015组(QI组)、切口痛+瑞芬太尼+JWH015组(QR组);腹腔给药组分为对照组2(C2组)、切口痛组2(I2组)、瑞芬太尼组2(R2组)、切口痛+JWH015组(FI组),切口痛+瑞芬太尼+ JWH015组(FR组),每组6只.QI组与QR组在造模前30 min鞘内注射10μg JWH015,C1、I1、R1组均鞘内给予20％的二甲基亚砜(DMSO)溶液,容积均为10μl;而FI组与FR组在造模前30 min腹腔注射100 μg JWH015,C2、I2、R2组均腹腔给予4％的DMSO溶液,容积均为0.5ml.除C1/C2组外,其余各组均制作切口痛模型,R1/R2组、QR组和FR组在造模的同时皮下泵注瑞芬太尼0.04 mg/kg,其余组皮下泵注生理盐水,容积均为0.4ml,30 min泵完.测量术前24h及术后2,6,24,48 h大鼠手术切口同侧后爪的机械缩足反射阈值(PWMT)及热缩足潜伏期(PWTL).结果 与C1/C2组和基础值比较,I1/I2组术后PWMT和PWTL均降低(P＜0.01);与I1/I2组比较,R1/R2组术后PWMT和PWTL均明显降低(P＜0.05);与R1/R2组相比,QR组从术后6h的PWMT[ (7.78±1.09)g]和PWTL[( 17.28±1.58)s]开始明显升高(P＜0.05),与FR组在术后6h、24h和48 h的PWMT[ (7.79 ±0.72)g,(9.50±1.17)g,(7.86±1.16)g]和PWTL[ (16.23±1.50)s,(19.53±1.63)s,(18.10 ±0.93)s]升高的结果一致.结论 鞘内及腹腔注射JW H015均可以有效缓解由瑞芬太尼诱发的切口周围组织痛觉过敏.     

骨癌痛小鼠脊髓水平CREB转录共激活因子1表达的变化

目的 探讨骨癌痛小鼠脊髓水平CREB转录共激活因子1（CRTC1）表达的变化.方法 采用随机数字表法,46只C3H/HeJ雄性小鼠随机分为假手术组（Sham组,n=23）和肿瘤组（Tumor组,n=23）,Tumor组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔接种溶于α-MEM的NCTC2472纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型,Sham组小鼠接种不含肿瘤细胞的α-MEM.两组在术前1d、术后4d、7d、10 d、14 d、21 d检测痛行为学,并于相应时间点痛行为学检测后,分别随机选取3只小鼠处死,取脊髓L3-L5节段,采用Western Blot法检测CRTC1的蛋白表达水平.结果 与Sham组比较,Tumor组接种后各时间点机械缩足阈值[（1.35±0.14）g,（1.10±0.28）g,（0.78±0.25）g,（0.47±0.16）g,（0.34±0.16）g]明显降低（P＜0.05）,自发抬足次数[（3.12±0.74）次,（6.02±0.67）次,（7.42±1.22）次,（10.82±0.98）次,（12.48±1.06）次]明显增加（P＜0.05）.与基础值相比,Sham组和Tumor组脊髓水平CRTC1的表达在术后4d升高（P＜0.05）;与基础值和Sham组相比,Tumor组脊髓水平CRTC1的表达在术后7d、10d、14d、21 d均升高（P＜0.05）.结论 骨癌痛小鼠脊髓水平CRTC1的蛋白表达上调,该变化可能参与了骨癌痛的发生和维持.     

大鼠切口痛模型中右美托咪定对瑞芬太尼诱发的痛觉过敏的影响

目的 研究大鼠切口痛模型中右美托咪定(DEX)对瑞芬太尼诱发的痛觉过敏的影响.方法 60只雄性SD大鼠随机均分成5组:对照组(C),切口痛组(I),切口痛+瑞芬太尼组(R),切口痛+DEX组(ID),切口痛+瑞芬太尼十DEX组(RD).ID、RD组于七氟醚麻醉前10min腹部皮下注射DEX50 μg/kg.除C组外均需制作切口痛模型.切口痛制作方法:右后爪跖肌位置纵行切开1 cm长的皮肤和筋膜,皮肤行褥式缝合.各组均测定并计算出术前24h(T0),术后6h(T),24h(T2),48h(T3)大鼠右后爪的机械缩足反射阈值(PMW)及热缩足反射阈值(PWTL).结果 在T1、T2、T3时点,与I组[(7.70±0.67)g,(10.79±1.83)g,(10.97±1.87)g]相比,R组[(3.72±0.71)g,(6.54±1.27)g,(7.27±1.53)g]的PMW明显降低(P＜0.05);与Ⅰ组[(20.74±2.72)s,(16.56±1.38)s,(22.55±2.01)s]相比,R组[(11.81±2.52)s,(11.27±2.30)s,(12.30±2.21)s]的PWTL明显降低(P＜0.05).与Ⅰ组相比,ID组只能缓解T1时点PMW的降低(P＜0.05).与R组相比,RD组可以缓解T1[(14.03±1.01)g]、12[(14.27±1.33)g]、T3(14.26±1.58)g]时点的PMW值的降低(P＜0.05)及T1[(23.56±1.53)s]、T2[(16.54±3.24)s]时点的PWTL值的降低(P＜0.05).结论 大鼠切口痛模型中,瑞芬太尼可以诱发切口周围组织的痛觉过敏;右美托咪定可以预防瑞芬太尼诱发的痛觉过敏.     

鞘内注射CREB反义寡核苷酸对坐骨神经结扎小鼠疼痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸(ODN)对坐骨神经结扎小鼠痛行为的影响.方法 鞘内置管成功C57BL/6雄性小鼠24只,体质量20 ～25g,随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组),CREB同义寡核苷酸组(S组),CREB错义寡核苷酸组(M组),CREB反义寡核苷酸组(A组).制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,造模后第1～6天,4组分别鞘内给予生理盐水5μl、同义寡核苷酸5μg／5μl、错义寡核苷酸5μg/μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,每天1次.于造模前、后第1,3,5,7,10,14,17,21天测量CCl小鼠同侧足底机械刺激痛阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).结果 A组小鼠1～7d内的疼痛阈值维持在基础值水平[第7天,PWMT:(0.81±0.20),(1.00±0.19)g,P＞0.05;PWTL:(5.96±0.69),(6.93±1.08)s,P＞0.05].在小鼠CCI后的第10天,A组损伤侧足出现疼痛[第10天,PWMT:(0.56 ±0.19),(1.00±0.19)g,P＜0.05;PWTL:(3.93±0.28),(6.93±1.08)s,P＜0.05],但是与NS组[第10天,PWMT:(0.56±0.19),(0.37±0.08)g,P＜0.05; PWTL:(3.93±0.28),(3.14±0.45)s,P＜0.05]、S组、M组相比,疼痛明显减轻,并且持续到术后第21天.结论 在CCI诱导的神经病理性疼痛的发展阶段连续鞘内注射CREB反义寡核苷酸可以完全抑制给药期内痛行为表现,并且在停止给药后15d仍有明显缓解疼痛的作用.