K562细胞7种珠蛋白基因mRNA水平的研究

目的：研究K562细胞α、β、Gγ、Aγ、ζ、ε、δ珠蛋白基因mRNA水平。方法：采用RT-PCR在相同条件下同时扩增成功7种珠蛋白mRNA，比较K562细胞内各珠蛋白mRNA水平。结果：α基因簇中α-mRNA水平明显高于ζ-mRNA,β基因簇mRNA表达水平依次为Gγ、Aγ、ε、δ，K562细胞不表达β-珠蛋白mRNA。结论：转录后水平的调控可能在K562细胞α基因簇的表达中起重要作用，β-基因簇各珠蛋白mRNA水平和蛋白质水平基本相符。     

K562细胞7种珠蛋白基因 mRNA水平的研究

目的研究K562细胞α、β、Gγ、Aγ、ζ、ε、δ珠蛋白基因mRNA水平。方法采用RT-PCR在相同条件下同时扩增成功7种珠蛋白mRNA,比较K562细胞内各珠蛋白mRNA水平。结果α基因簇中α-mRNA水平明显高于ζ-mRNA,B基因簇mRNA表达水平依次为Gγ、Aγ、ε、δ,K562细胞不表达B-珠蛋白mRNA。结论转录后水平的调控可能在k562细胞α基因簇的表达中起重要作用,B基因簇各珠蛋白mRNA水平和蛋白质水平基本相符。     

RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。     

miRNA-17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期调控机制研究

【目的】探讨miRNA(miR)-17-92基因簇对大肠癌HT29细胞周期的调控机制,为大肠癌临床诊断和治疗提供潜在靶点。【方法】体外培养人结肠癌HT29细胞,转染miR-17-5p和miR-20a后,采用实时荧光定量PCR验证转染效果,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布情况,Western印记法检测E2F1蛋白表达水平。【结果】miR-17-5p和miR-20a分别以50、100 nmol/L浓度转染24 h后的HT29细胞用于后续实验;两者均可促进HT29细胞的增殖,具有时间依赖性;能够将细胞阻滞在S期,抑制靶基因E2F1蛋白的表达水平。【结论】miR-17-92基因簇通过抑制E2F1的翻译促进大肠癌细胞的增殖,提示miR-17-92基因簇在大肠癌细胞周期调控中可能发挥癌基因的作用。     

化疗耐药及敏感卵巢癌细胞差异表达microRNA的筛查与组织鉴定

 目的探讨microRNA在卵巢浆液性癌化疗耐药及敏感组织的差异表达,为卵巢浆液性癌化疗耐药的研究提供理论依据。方法应用microRNA表达谱基因芯片,研究紫杉醇耐药卵巢癌细胞skov3-tr30及其敏感细胞skov3基因表达谱,获得表达差异的microRNA后, 选取部分差异表达的microRNA用实时聚合酶链反应方法对化疗耐药与敏感卵巢浆液性癌组织各20例进行验证。结果通过microRNA表达谱基因芯片方法筛选出171个与卵巢癌细胞化疗耐药相关microRNA,基因表达增高（上调趋势）69个,为miR-17、miR-19b、miR-92-1、miR-210、miR-1307等;基因表达降低（下调趋势）102个,为miR-134、miR-34、miR-196b等。miR-17~92是与卵巢癌耐药最相关的microRNA之一。miR-17~92基因簇在化疗耐药卵巢浆液性癌组织中表达水平显著高于敏感组织,具有非常显著统计学意义（P <0.01）。miR-17~92基因簇表达与卵巢浆液性癌及化疗耐药卵巢浆液性癌患者绝经前后、手术病理分期、组织学分级、是否行淋巴结清扫术和有无淋巴结转移均无明显相关性（均P >0.05）。结论microRNA表达谱基因芯片可筛查出化疗耐药及敏感卵巢癌细胞的差异表达基因,miR-17~92基因簇与卵巢浆液性癌化疗耐药有关。     

链霉菌沉默生物合成基因簇激活策略的研究进展

微生物次级代谢产物因其显著的生物活性一直是新药发现与开发的重要来源之一,激增的基因组信息表明,链霉菌中存在着巨大的生物合成潜力。但目前从链霉菌中挖掘的具有新骨架或新结构单元的活性次级代谢产物数量远低于生物合成基因簇的数量,原因主要在于很多生物合成基因簇在常规实验条件下表达微弱或转录沉默。从预测生物合成基因簇的生物信息学工具入手,本文重点阐述了在天然宿主和异源宿主中激活链霉菌沉默生物合成基因簇的经典方法和最新策略,包括转录因子诱捕、报告子导向的高通量筛选以及多重CRISPR-TAR等,为挖掘链霉菌新型次级代谢产物提供了方法学参考。     

DNA甲基化与β珠蛋白基因簇表达调控

许多研究表明,DNA甲基化是调节动物细胞基因活性的重要因素,其依据是:特定的细胞基因表达与DNA去甲基化之间有明显相关性;许多基因序列在体外经甲基化修饰后导致其表达抑制;用5—氮胞苷(一种强力去甲基化药物)处理细胞,可引起基因表达活化。本文简要概述DNA甲基化与β珠蛋白基因簇表达调控关系。     

miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

 目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17~92基因簇的表达,初步探讨miR-17~92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela/Siha、Ishikawa/HEC-1A、HO-8910/HO-8910PM、SKOV3/SKOV3-TR30/SKOV3-DDP、COC1/COC1-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17~92基因簇的表达水平;应用miRWalk数据库、miR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17~92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比,miR-17~92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9.86,P<0.001）;在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10.35,P<0.005）;与人正常卵巢细胞系IOSE386相比,miR-17~92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COC1、COC1/DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3/DDP均呈上调表达（F=12.64,P<0.001）。预测得出miR-17~92基因簇的靶基因为ABCA1、ARHGAP21、BAP1、C10orf46、CCND1、CD4等共30个;通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17~92基因簇参与的生物学过程共8个,KEGGpathway分析得出miR-17~92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17~92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达,且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17~92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。     

多个GEO芯片联合分析筛选鼻咽癌易感基因

目的：筛选鼻咽癌的关键基因，探讨鼻咽癌发病机制。方法：从公共基因芯片数据库（GEO）搜索有关鼻咽癌表达的数据，联合R语言分析鼻咽癌组织与正常鼻咽组织差异表达的基因；利用基因本体（GO）数据库和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路数据库对差异表达的基因进行富集和功能注释。基于STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络，分析其关键基因簇及网络节点。结果：共纳入3套鼻咽癌基因芯片数据，选出在≥3个数据集中有交集的差异表达基因116个，其中上调基因69个，下调基因47个。差异表达基因GO富集分析发现细胞分裂异常、蛋白结合改变，纺锤体装配异常、细胞外泌体功能改变与鼻咽癌发生发展相关；鼻咽癌组织细胞内部分信号通路发生显著改变，包括DNA修复、细胞外基质受体相互作用、细胞周期、小细胞肺癌、人T细胞白血病病毒1感染等。蛋白质相互作用网络提示存在3个重要的基因簇及4个关键基因。结论：利用生物信息学方法能有效筛选目标基因和信号通路，为鼻咽癌的治疗提供新的策略。     

预示前列腺癌转移的新蛋白质

美国波士顿的研究人员现鉴别出一种在前列腺癌细胞中表达的蛋白,这种蛋白质可能有助于瘤细胞移动,因此,促使癌细胞转移。这种新蛋白质(脑腺素β15)在正常的前列腺的细胞或良性肥大的前列腺的细胞中不表达。但瘤细胞表达胸腺素β15,要严重的是,在分化不良的瘤细胞和转移可能性较高的细胞系中其表达力特别高。本文作者Bruce Zetter认为,细胞能动性是确定细胞转移可能性的关键因素。在正常细     

非霍奇金淋巴瘤Ig和TCRβ链基因重排与相关抗原的表达

用１４种抗人白细胞的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）与２种克隆抗体（ＰｃＡｂ）和人类免疫球蛋白（Ｉｇ）基因簇重链（ＩｇＨ）ＪＨ、Ｃｕ、轻链（ＩｇＬ）Ｃｘ、Ｃλ以及Ｔ细胞受体β链（ＴＣＲβ）基因作为探针，以ＡＢＣ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹交法对１１例非霍奇金恶性淋巴瘤（ＮＨＬ）的抗原表达与Ｉｇ基因簇、ＴＣＲβ基因重排作了研究。结果显示：抗原表达和基因重排具有非常明确的相关性（Ｐ＝０．００２）。从ＩｇＬ的ｘ链重排中     

非霍奇金淋巴瘤Ig和TCR_β链基因重排与相关抗原的表达

用１４种抗人白细胞的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）与２种多克隆抗体（ＰｃＡｂ）和人类免疫球 蛋白（Ｉｇ）基因簇重链（ＩｇＨ）ＪＨ、Ｃμ、轻链（ＩｇＬ）Ｃκ、Ｏλ以及Ｔ细胞受体β链（ＴＣＲβ）基因作为 探针，以 ＡＢＣ及 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法对１１例非霍奇金恶性淋巴瘤（ＮＨＬ）的抗原表达与 Ｉｇ基因簇、ＴＣＢβ基因重排作了研究。结果显示：抗原表达和基因重排具有非常明确的相关性（Ｐ ＝０．００２）。从ＩｇＬ的κ链重排中还显示了基因的重排早于基因的表达。研究证实基因重排的检测能更敏感地反映ＮＨＬ的亚型以及肿瘤的分化阶段。     

TAR克隆技术及其在微生物次级代谢产物研究中的应用

微生物次级代谢产物结构多样、种类丰富,是新药发现的重要来源。微生物次级代谢产物由特定生物合成基因簇编码合成,通常与微生物的生长繁殖无关。由于实验室可培养微生物的数量较少,而且多数可培养微生物存在基因簇沉默的现象,严重阻碍了微生物来源药物的研究和开发。微生物生物合成基因簇的异源表达及生物合成相应的次级代谢产物已逐渐成为发现新颖活性化合物的有效手段之一。作为研究微生物次级代谢产物的重要工具,基于TAR(transformation associated recombination)克隆技术的异源表达策略可实现绝大多数基因簇的完整异源表达。本文从TAR克隆技术的原理、应用和策略改进3个方面,总结了基于TAR克隆技术的微生物次级代谢产物异源生物合成的研究进展,为研究和开发新型微生物来源药物提供方法学借鉴。     

miR-1/133基因簇与肝癌临床表型相关性及对HepG2生长的影响

目的:探讨miR-1/133基因簇(miR-1/133cluster)在肝癌组织中的表达、与临床表型的相关性及miR-1对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响。方法:检测38例肝癌及相应癌旁组织中miR-1及miR-133b的表达,并分析表达水平与临床表型的相关性。分别将miR-1-3p模拟物(miR-1-3p mimics)、模拟物阴性对照(mimics NC)转染至HepG2,CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖、活力与凋亡水平。结果:miR-1-3p、miR-133b在肝癌组织中较癌旁组织降低(P=0.001,0.028)。miR-1-3p、miR-133b与肝癌TNM分期负相关(P=0.016,0.027),miR-133b与肝癌肿瘤个数负相关(P=0.001)。miR-1-3p mimics转染至HepG2细胞,较NC组的细胞增殖降低、细胞凋亡增加,且细胞周期阻滞于S期。结论:肝癌低表达的miR-1-3p及miR-133b与肝癌分期、肿瘤个数负相关,miR-1抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡,miR-1/133基因簇在肝癌中发挥抑癌作用。     

miRNA-497与miRNA-195基因簇在宫颈癌组织中的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的探讨miRNA-497-195基因簇在宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miRNA-497-195基因簇在宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础。方法收集2010年3月～2012年3月在广西壮族自治区人民医院就诊患者的宫颈标本,利用miRNA芯片技术检测宫颈病变组织中miRNA表达谱,用real-time RT-PCR进行验证;采用real-time RT-PCR检测miRNA-497和miRNA-195在宫颈病变组织中的表达情况,并用Spearman法进行miRNA-497与miRNA-195相关性分析。通过生物信息学预测miRNA-497和miRNA-195的靶基因,并对其靶基因进行GO（gene ontology）功能富集分析及信号转导通路富集分析。结果芯片结果显示,宫颈癌及高度鳞状上皮内瘤变中miRNA-195和miRNA-497表现为下调（均P〈0.05）。real-time RT-PCR结果显示,miRNA-497和miRNA-195在宫颈癌组织中表现为下调,且表达存在显著性相关（r=0.983,P〈0.05）。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因大量重合,且集合功能也大量重合,并富集于细胞周期调控、生物学过程调控、转录调控、基因表达及核苷酸代谢过程等生物学过程,以及蛋白结合、核酸结合、蛋白激酶活性、连接酶活性等分子功能（P〈0.01）;KEGG通路分析涉及癌症通路、p53信号通路、GnRH信号通路、细胞外因子信号通路等信号传导通路及直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、慢性粒细胞性白血病、非小细胞肺癌等疾病通路（P〈0.05）。结论 miRNA-195和miRNA-497在宫颈癌组织中呈现低表达,二者表达呈显著正相关,miRNA-497-195基因簇可能是宫颈癌的抑制因子。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因功能大量重合,并显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。     

质粒转染对HEK293和DDT1-MF2细胞天然β2-肾上腺素受体表达的影响

目的:观察质粒转染对细胞天然β2-肾上腺素受体(β2-AR)表达量的影响.方法 :将不携带外源目的基因的pREP4质粒和携带α1B-AR或β1-AR cDNA的p REP4质粒,采用脂质体和磷酸钙沉淀法转染HEK293和DDT1-MF2细胞.结果:相同质粒载体,无论有无外源目的基因 ,或目的基因是否相同,均可使HEK293细胞天然表达的β2-AR密度及其介导的cAMP蓄积效应增加.而用同样方法在DDT1-MF2细胞转染pREP4质粒则对β2-AR表达无影响. 结论:转染携带或不携带目的基因的质粒对HEK293细胞天然表达β2-AR的密度及其介导的功能效应均有影响,且提示这种效应可能具有细胞特异性.     

代谢调控技术在放线菌生物合成抗生素的应用进展

放线菌的次级代谢产物丰富多样,一直是抗生素及其先导化合物的主要来源之一。通过遗传操作来改造放线菌,代谢调控其抗生素的生物合成也是近年来微生物次级代谢的研究热点。结合近年来的研究成果,从调节调控基因表达,增加基因簇拷贝数及基因簇的异源表达,过表达抗性基因和转运基因,提高前体代谢通量和核糖体工程等方面综述了代谢调控技术在放线菌生物合成抗生素的应用进展。     

rhGM—CSF联合rhIL—4对髓性白血病细胞B7分子表达的上调作用

目的 探讨GM－CSF联合IL－4对髓性白血病细胞表面B7分子表达的上调作用。方法 从初诊急性或慢性髓性白血病患者的外周血中分离出单个核细胞（PBMNC）,用rhGM-CSF联合rhIL-4共同孵育7－10d;通过流式细胞仪检测细胞因子诱导前后细胞表面B7分子的表达。结果 未经细胞因子诱导的白血病细胞表面B7分子低表达或缺如,经过GM－CSF联合IL－4 7－10d的诱导,可显著上调B7分子的表达。结论 髓性白血病细胞表面存在B7分子表达缺陷;用GM－CSF联合IL－4进行诱导是纠正这种缺陷的一条途径。     

Eph受体在卵巢癌中的研究进展

促红细胞生成素肝细胞(erythropoietin-producing hepatocellular,Eph)受体是酪氨酸受体家族中的一员,广泛表达于人类多种组织或细胞中,具有调节细胞生长、迁移及血管形成的潜在作用。近年来研究发现,EphA2、EphB2、EphB4在卵巢癌中呈现高表达,这种高表达与肿瘤的增殖、转移、血管形成和侵袭性相关,与患者预后负相关,有可能成为卵巢癌患者的预后指标或治疗靶点。     

Genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3诱导内皮细胞迁移的作用及机制探讨

目的:研究Genistein对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3诱导人内皮细胞系ECV-304迁移的作用,以探讨Genistein抑制血管生成作用的机理.方法:采用微孔滤膜培养小室及双室联合细胞培养方法,观察在0.5%BS培养条件下,SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移以及Genistein对SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移的影响;用免疫组化方法检测血管生长因子VEGF、bFGF及TGFβ-l蛋白的表达水平.结果:SKOV3细胞或其条件培养基对内皮细胞均有较强的趋化作用,Genistein对SKOV3细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移有呈剂量依赖性的抑制作用.20μmol/L Genistein处理ECV-304细胞48h后,VEGF、bFGF蛋白的表达水平降低,而TGFβ-1蛋白的表达水平升高.结论:GenIStein可明显抑制人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3及其条件培养基对人内皮细胞系ECV-304细胞的诱导迁移作用Genistein可能通过抑制促血管生成调节因子VEGF和bFGF的蛋白表达,增强血管生成的负性调节因子TGFβ-1的蛋白表达来抑制这种迁移诱导作用.