应用激光扫描共聚焦显微镜体外观察结肠癌细胞的定向转移

目的应用激光扫描共聚焦显微镜体外观察结肠癌细胞的定向转移,探讨一种激光扫描共聚焦显微镜观察肿瘤细胞体外转移的方法。方法以肝转移性低分化结肠腺癌lovo细胞株为模型,采用激光扫描共聚焦显微镜结合Transwell小室模型在体外观察了lovo细胞在趋化因子自细胞介素8作用下的侵袭和迁移的特征。结果在白细胞介素8作用下lovo细胞侵袭能力增强,呈现出阿米巴样的变形迁移方式。提示在激光扫描共聚焦显微镜下观察到的结肠腺癌lovo细胞的转移呈现一种类白细胞趋化的特征。结论激光扫描共聚焦显微镜是研究肿瘤细胞转移的一个新的研究工具。     

一种制备培养细胞整装内质网共聚焦激光扫描显微镜标本的新方法

一种制备培养细胞整装内质网共聚焦激光扫描显微镜标本的新方法黄集前，李家滨，苏若萍，宋今丹（中国医科大学卫部细胞生物学重点实验室沈阳ｌ１０００１）喹啉蓝活染细胞内质网时，荧光的快速粹灭是影响共聚焦激光扫描显微镜（ＣｏｎｆＯｃａｌｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎ...     

运用图像处理软件将同视野两种单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法研究

探讨以计算机图像处理技术将普通荧光显微镜采集的同视野单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法。应用AdobePhotoshop7.0和ImageJ两个图像处理软件,将普通荧光显微镜采集的同视野单标记荧光图像叠加处理成双标记荧光图像,并同激光扫描共聚焦显微镜获得的同一双标记免疫荧光图像进行比较。普通荧光显微镜采集的单标记荧光图像在分辨率及清晰度上逊于激光扫描共聚焦显微镜采集的单标记图像,但显示的脊髓室管膜细胞形态更为完整,细胞突起较长且更连续。因此,在没有激光扫描共聚焦显微镜时,可用AdobePhotoshop7.0或ImageJ图像处理软件将普通荧光显微镜采集的同视野两种单标记免疫荧光图像合成为保持原有特点、简便而清晰的双标记荧光图像。     

激光共聚焦显微镜在肿瘤研究方面的应用

激光共聚焦显微镜(LSCM)是当今世界上最先进的分子细胞生物学分析仪器。它在荧光成像基础上加装激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，利用紫外光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。目前在形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学都有广泛地应用，在肿瘤研究中更是成为新一代强有力的研究工具。     

激光扫描共聚焦显微镜观察免疫组化染色标本

激光扫描共聚焦显微镜 (ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉ ｃｒｏｓｃｏｐｙ ,ＬＳＣＭ )是近代发展起来的一种新型高精度的显微镜系统 ,它在显微镜成像的基础上加装激光扫描装置 ,利用计算机进行图像处理 ,对于组织内或细胞内部微细结构的观察以及生物样品的定性、定量和定位观察均有很大的优越性〔1,2〕。目前文献报道多限于活细胞生物样品的检测 ,对于固定的组织和细胞 ,特别是免疫组化染色后标本的观察很少涉及。作者拟就免疫组化染色后标本在激光扫描共聚焦显微镜的观察作一简单介绍。1　材料与方法1.1　细胞涂片　用利…     

共聚焦激光扫描显微镜在病理学中的应用(摘要)

共聚焦激光扫描显微镜在病理学中的应用（摘要）刘健（第四军医大学中心实验室，西安７１００３２）共聚焦激光扫描显微镜系统（ＣＬＳＭ）是将光学显微镜技术、激光技术和计算机图像处理技术结合在一起的高技术设备。其主要性能和优点是：（１）分辨率比普通光学显微镜高...     

早期人胚羊膜共聚焦激光扫描光学切片及F-肌动蛋白的研究

目的　建立羊膜组织共聚焦激光扫描显微镜光学切片的方法 ,探讨早期人胚羊膜细胞结构、分层及细胞骨架的空间结构。　方法　采用共聚焦激光扫描光学切片和荧光探针双重标记技术对妊娠 7～ 9周早期人胚羊膜进行形态观察、细胞F 肌动蛋白表达定量分析、细胞分层及厚度计算。　结果　羊膜由两层不同类型的细胞组成 ,内层细胞为多边形扁平细胞 ,外层细胞为长梭形细胞 ;内层细胞胞质中的F 肌动蛋白表达量较低 ,外层细胞胞质中的F 肌动蛋白表达量明显高于内层细胞 ,两者差异有统计学意义 ;7～ 9周人胚羊膜厚度为 30± 2 μm。其中 ,上皮层厚度为 10 μm± 2 μm ,间充质层厚度为 14μm± 2 μm。　结论　 1 早期人胚羊膜由两层细胞即内层的上皮细胞层和外层的间充质细胞层组成 ,胞质中F 肌动蛋白的表达量间充质细胞高于上皮细胞 ;2 通过共聚焦激光扫描连续光学切片可以计算出羊膜各层的厚度 ;3 共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合FITC 鬼笔环肽和碘化丙啶双重标记技术是观察和分析羊膜组织细胞立体结构的良好方法。     

大黄素收缩大鼠结肠平滑肌细胞信号机制研究

目的　观测大黄素对结肠平滑肌细胞收缩、胞浆钙离子浓度和蛋白激酶Cα的影响 ,探讨大黄素发挥作用的细胞内信号转导机制。方法　取Wistar大鼠远端结肠 ,采用含 0 1%Ⅱ型胶原酶、0 0 1%大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液消化 ,收集分离的细胞供实验用。应用图象分析系统随机测定 5 0个细胞的长度计算收缩反应。Fluo 3AM标记平滑肌细胞钙后 ,采用激光扫描共聚焦显微镜动态观测平滑肌细胞内钙离子浓度改变。免疫荧光方法标记蛋白激酶Cα后 ,采用激光扫描共聚焦显微镜观测静息时和大黄素刺激后蛋白激酶Cα的空间分布变化。结果　分离的结肠平滑…     

探索双重荧光染色并利用两种不同显微镜在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值

目的 探索荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜以及双重荧光染色法在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式的临床价值.方法 选取临床上抗核抗体呈阳性的血清样本结合到抗原片上,先后用异硫氰酸荧光素(FITC)和4 ',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)两种荧光染料孵育,之后在两种不同的显微镜下观察.结果 FITC荧光出现的部位是抗原抗体结合处,DAPI荧光出现的部位为细胞核,当通过DAPI荧光对细胞核定位后,可使得FITC的荧光模式更易于观察.本实验通过利用两种荧光标记的方法在两种显微镜上分别观察了斑点型、均质型、着丝点型、核点型、核膜型、胞浆颗粒型——抗高尔基体抗体.结论 综合各种因素,利用双荧光染色法染色,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察,对于在Hep-2细胞上观察抗核抗体荧光模式最具临床价值.     

共聚焦激光扫描显微镜活体观测大脑皮质血管构筑及大脑皮质内微循环的研究

共聚焦激光扫描显微镜活体观测大脑皮质血管构筑及大脑皮质内微循环的研究庄明华，常立功，李进（中国医科大学解剖教研室沈阳１１０００１）黄集前，宋今丹（中国医科大学细胞生物教研室沈阳１１０００１）既往研究资料表明，大脑皮质血管构筑的研究多采用各种灌注手段，...     

小檗碱抗肿瘤新生血管形成作用机制的研究

目的：研究小檗碱对bFGF活化人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响，探讨其对肿瘤新生血管形成作用的机制。方法：MTT法检测小檗碱对bFGF活化HUVEC的增殖作用；流式细胞仪检测用药后细胞周期的变化；激光共聚焦扫描显微镜下观察药物对细胞形态、细胞内钙的影响；流式细胞仪检测小檗碱对细胞凋亡的作用。结果：小檗碱能明显抑制bFGF活化的HUVEC增殖，且存在剂量依赖关系；使细胞在G0-G1期的比例明显增多；使细胞核浓缩、甚至裂解成碎块，同时使细胞内钙增多；并诱导活化HUVEC发生细胞凋亡。结论：小檗碱可能通过将bFGF活化的HUVEC细胞周期阻滞在G0-G1期，抑制活化HUVEC的增殖：诱导活化HUVEC细胞发生凋亡等机制，阻止新生血管形成，发挥其抗肿瘤作用。     

比较3种形态学方法观察成骨细胞矿化结节的应用价值

背景：矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志,以往观察方法多采用茜素红等特殊染色法。 目的：比较茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜3种形态学观察成骨细胞矿化结节的方法,分析各自的特点及在骨病研究中的应用价值。 方法：将大鼠成骨细胞株UMR-106正常培养、每天换液,连续培养14 d,分别采用茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜观察矿化结节的形态结构,并利用扫描电镜结合能谱仪原位定量分析钙元素;此外,在培养中加入可抑制成骨细胞增殖、分化的肿瘤坏死因子α作为对照实验。 结果与结论：3种观察方法均可观察到正常成骨细胞矿化结节的形态结构。对于肿瘤坏死因子α抑制成骨细胞产生矿化结节的情况,经茜素红染色-光镜观察法,未见明显的矿化结节;而四环素荧光染色-激光扫描共聚焦显微镜观察法,可见清晰、稀少的矿化结节;扫描电镜观察法明显可见较少而细小的矿化结节,提示后二种方法灵敏度较高。此外,扫描电镜可将观察成骨细胞分泌钙质、形成矿化结节的亚细胞结构,与能谱元素分析结合,可实现矿化结节的定位与定量,在骨病研究中值得推广应用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

骨髓间充质干细胞在纳米晶胶原基骨内生长以及成骨潜能

背景：纳米晶胶原基骨修复材料是根据仿生原理制备的纳米骨框架材料,其微结构和成分两方面都与天然骨有相似性 ,具有良好的生物相容性。 目的：研究兔骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨修复材料体外复合培养的结合程度,以及构建组织工程骨的可行性。 方法：分离兔骨髓间充质干细胞,体外培养、纯化,取第3代骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨修复材料体外复合培养,第3,7,20天后激光共聚焦和扫描电镜观察二者复合程度。 结果与结论：骨髓间充质干细胞和纳米晶胶原基骨修复材料复合良好,共聚焦显微镜和环境扫描电镜观察均可见细胞生长;纳米晶胶原基骨修复材料能够作为良好的支架,它能使骨髓间充质干细胞在其内稳定生长。提示骨髓间充质干细胞在纳米晶胶原基骨修复材料内能很好的生长,并且具有成骨潜能。     

Platelet adhesion and fusion to endothelial cell facilitate the metastasis of tumor cell in hypoxia-reoxygenation condition

To investigate the relevant molecular mechanisms of platelet in promoting metastasis of tumor cell. The adhesion of fluorescence dye labeled-platelet to human liver sinusoidal endothelial cell (LSEC) line and tumor cell lines were detected by fluorescence microscope and fluorescence plate reader or laser scanning confocal microscope. The relevant adhesion molecules were analyzed by the antibody blockage experiment. The immune colloidal gold transmission electron microscope (TEM), flow cytometry and dye transfer were used to decipher the adhesion and fusion of platelet and LSEC. The tumor cells adhesion to vessels in ischemia condition was analyzed on mouse mesenteric vessels and the metastasis and neovascularization of metastatic foci in pulmonary tissue were also detected after tumor cells injected into nude mice via tail veil. After hypoxia-reoxygenation, tumor cell or LSEC markedly increased its adhesion with platelet, which could be blocked by different antibodies to platelet adhesion molecules. Platelet increased adhesion of tumor cell to LSEC in dose-dependent manner. The fusion of platelet and LSEC was demonstrated by translocation of fluorescent dye from platelet into the adherent LSEC; gpIIb emerged on the LSEC; and confirmed by TEM. The morphological examination found platelet presented between tumor cell and LSEC. Animal experiment indicated that the tumor adhesion to vessels was seldom in normal condition, but increased in ischemia-reperfusion condition, and further significantly enhanced by platelets. The number of tumor metastatic foci and the density of blood vessels within metastatic foci in lung were markedly increased by tumor cell pre-adhered with platelet. The adhesion or fusion of platelet to endothelial cell mediated by platelet surface adhesion molecules, which could promote the adhesion of tumor cell with endothelial cells and the tumor metastasis.     

共聚焦激光扫描显微镜及其在神经科学研究中的应用

目的:共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)是一种新兴的显微图像检测技术,能够进行光学切片、活体检测、三维重构等,并且能够获得较之普通光学显微镜更高的空间分辨率。本文旨在讨论CLSM及其在神经科学中的应用。方法:通过大量调研文献,从细胞、亚细胞及分子水平上详细阐述了CLSM在神经科学领域中的应用。结果:相比传统光学显微镜,CLSM更适合在神经科学的细胞等层次上进行成像和活体观测试验。结论:CLSM作为一种精密的观察工具,已广泛应用于神经科学研究,为推动神经科学的发展做出了贡献。新的双光子共聚焦显微镜由于其自身的优点在神经科学研究中将具有很大的发展空间。     

An appraisal of the banded and paracrystalline cytoplasmic inclusions induced in cymbidium mosaic potexvirus- and odontoglossum ringspot tobamovirus infected orchid cells using confocal laser scanning microscopy

Summary The cymbidium mosaic potexvirus (CyMV) banded inclusions and the odontoglossum ringspot tobamovirus (ORSV) paracrystalline inclusions were studied in flowers and leaves of nine orchid cultivars using the confocal laser scanning microscope. The inclusions varied in length and width and were mostly located adjacent to the cell walls. Some ORSV inclusions fully extended across entire infected cells. We propose that the CyMV banded inclusion was formed from virus aggregates which aligned as periodical stacked layers, appearing as cross bands. The virus aggregates were folded into flexible inclusions, giving rise to various shapes and forms. The ORSV paracrystalline inclusions were observed as needle-like crystals. The confocal laser scanning microscope is an effective tool for the study of the three-dimensional structures of plant virus induced inclusions.     

Identification of Focal Viral Infections by Confocal Microscopy for Subsequent Ultrastructural Analysis

A correlative microscopy method for the ultrastructural analysis of focal viral tissue infections is presented. Using a confocal scanning laser microscope, foci of infection are identified in tissue sections prior to embedment; a variety of techniques can be employed for viral detection, including staining with standard histochemical reagents and fluorescently labeled antibodies. Areas of infection identified using confocal microscopy are excised from the tissue sections, embedded, and examined by transmission electron microscopy. Applications of this technique in both diagnostic and basic research settings are described.     

The Quarterly Case Retroperitoneal Tumor with Liver Metastases in a 38-Year-Old Female

A correlative microscopy method for the ultrastructural analysis of focal viral tissue infections is presented. Using a confocal scanning laser microscope, foci of infection are identified in tissue sections prior to embedment; a variety of techniques can be employed for viral detection, including staining with standard histochemical reagents and fluorescently labeled antibodies. Areas of infection identified using confocal microscopy are excised from the tissue sections, embedded, and examined by transmission electron microscopy. Applications of this technique in both diagnostic and basic research settings are described.     

Endocytic pathways: combined scanning ion conductance and surface confocal microscopy study

We introduce a novel high resolution scanning surface confocal microscopy technique that enables imaging of endocytic pits in apical membranes of live cells for the first time. The improved topographical resolution of the microscope together with simultaneous fluorescence confocal detection produces pairs of images of cell surfaces sufficient to identify single endocytic pits. Whilst the precise position and size of the pit is detected by the ion conductance microscope, the molecular nature of the pit, e.g. clathrin coated or caveolae, is determined by the corresponding green fluorescent protein fluorescence. Also, for the first time, we showed that flotillin 1 and 2 can be found co-localising with ~200-nm indentations in the cell membrane that supports involvement of this protein in endocytosis. A. Shevchuk and P. Hobson contributed equally to this work.     

筋膜成纤维细胞与纤维蛋白凝胶的体外生物相容性

背景：纤维蛋白凝胶是一种天然可降解的生物支架材料,具备可用于组织工程支架的共性,被越来越多地用做种子细胞载体应用于组织工程修复。 目的：观察兔筋膜成纤维细胞与纤维蛋白凝胶的体外生物相容性。 方法：采用组织块贴壁法培养新西兰大白兔皮下固有筋膜组织成纤维细胞,以胰酶消化法对其进行传代。将第4代成纤维细胞悬液与纤维蛋白凝胶共培养,以倒置相差显微镜动态观察纤维蛋白凝胶表面成纤维细胞的形态及增殖情况;共培养5 d时,以免疫荧光染色激光共聚焦显微镜鉴定成纤维细胞,扫描电镜观察成纤维细胞的生长贴附情况。 结果与结论：倒置相差显微镜下显示,纤维蛋白凝胶表面的成纤维细胞形态与单纯培养成纤维细胞无明显差别;扫描电镜显示,成纤维细胞在纤维蛋白凝胶表面伸展充分,伸出的“伪足”与纤维蛋白凝胶有很好的贴附并分泌基质样物质,可见纤维蛋白凝胶并未改变成纤维细胞的形态学特征;激光共聚焦显微镜显示,成纤维细胞波形蛋白呈阳性表达,证明成纤维细胞种植在纤维蛋白凝胶表面后性质未发生变化,未被诱导分化。表明筋膜成纤维细胞与纤维蛋白凝胶在体外有很好的生物相容性。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程