舒芬太尼对培养大鼠乳鼠缺氧心肌细胞损伤保护作用的研究

目的探讨舒芬太尼对原代培养心肌细胞缺氧损伤的影响。方法将原代培养成活48h的大鼠乳鼠心肌细胞分为3组：A组为对照组（氰化钠造成心肌细胞细胞内缺氧模型）,B组为sufl组（缺氧＋0．1ng／／mL舒芬太尼）,C组为suf2组（缺氧＋0．2ng／mL舒芬太尼）。比较3组心肌细胞形态学（倒置相差显微镜,透射电镜观察）的变化及吸光度A值的改变。结果缺氧12h后,对照组细胞搏动功能变化明显,呈散在性搏动,而实验组搏动频率减慢。随着时间的延长,细胞形态学变化逐渐明显,对照组较实验组变化更显著。结论舒芬太尼对原代培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧损伤有一定的保护作用。     

鱼腥草素对乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞增殖的影响

目的:研究鱼腥草素对乳鼠离体培养的心肌细胞及成纤维细胞增殖及抗氧化作用的影响。方法:取新生SD乳鼠左心室,采用差速贴壁法分离心肌细胞及成纤维细胞,培养在96孔培养板中,在培养成功的心肌细胞及成纤维细胞培养液中加入异丙肾上腺素(ISO)造模,采用不同浓度的鱼腥草素干预,孵育培养2天,采用MTT法测定成纤维细胞的增殖,采用考马斯亮兰试剂测定心肌细胞中蛋白质含量,并测定其一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果:心肌细胞培养液中,10-5mol/L ISO能诱导心肌细胞肥大,SOD及GSH-Px活力明显降低(p<0.05);10-5～10-4mol/L鱼腥草素组蛋白含量则显著降低(p<0.05),SOD活力及GSH-Px均较模型组显著升高(p<0.05);成纤维细胞培养液中,10-5mol/L ISO能诱导成纤维细胞增殖,SOD、NO及GSH-Px含量明显降低(p<0.05);鱼腥草素对成纤维细胞的增殖有抑制作用,对SOD、NO及GSH-Px含量较模型组显著升高(p<0.05)。结论:10-5～10-4mol/L鱼腥草素对ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞的增殖有一定对抗作用,其抗心肌肥大作用可能与其抗氧化及影响NO水平有关。     

新生SD大鼠心肌细胞的原代培养

目的探讨新生SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,并进行鉴定。方法取24h以内的新生SD大鼠,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法分离心肌细胞,进行两次差速贴壁法并加用化学抑制剂5-溴脱氧尿嘧啶纯化心肌细胞,采用Actin免疫组化对心肌细胞进行鉴定。结果本实验方法心肌细胞的存活率为93．83％,最早在6h内观察到心肌细胞搏动,24h内大部分心肌细胞搏动,但搏动频率不同,48h后见心肌细胞相互连接,第5天见心肌细胞铺展成片或成细胞簇,搏动频率基本一致。结论本实验方法是较为稳定理想的培养心肌细胞的方法。     

当归对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究

目的 探讨当归对缺氧损伤的体外培养心肌细胞的保护作用.方法 将乳鼠心肌细胞原代单层培养至4～5 d,制备心肌缺氧模型后,加入当归水提取物,继续培养12 h后,组织化学染色方法观察PAS反应、琥珀酸脱氢酶及酸性磷酸酶的变化;透射电镜观察心肌细胞的形态学变化;生化检测方法测定SOD活性、MDA含量.结果 与模型对照组比较,实验组及药物对照组心肌细胞的PAS反应和SDH活性明显增强,ACP活性明显减弱;SOD活性明显增强,MDA含量明显降低;心肌细胞的线粒体损伤得到明显修复.结论 当归对缺氧心肌细胞具有抗氧化作用;当归对缺氧心肌细胞具有一定的保护作用.     

七厘散含药血清对乳鼠毛囊成纤维细胞增殖的影响

目的:七厘散是促进皮肤愈合的经典方药,本文旨在探讨七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞增殖的影响。方法:无菌条件下分离SD乳鼠触须部完整毛囊,植块法培养真皮细胞,并利用免疫荧光技术进行鉴定。SD大鼠行七厘散灌胃,分别于灌胃后3d、5d、7d行腹主动脉取血,制备含药血清,用不同体积百分比的含药血清检测其对毛囊真皮细胞增殖的影响。结果:分离培养的毛囊真皮细胞呈成纤维状,免疫荧光鉴定为成纤维细胞。3d和5d七厘散含药血清对毛囊真皮成纤维细胞的促增殖作用较7d组强。3d组中以体积百分比为5%的含药血清组促增殖作用最强。结论:3d组体积百分比5%的七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞有较强的促增殖作用,本实验为进一步探讨中药促毛囊真皮成纤维细胞增殖的分子机制提供实验基础。     

刺五加叶皂苷单体Sc3对培养大鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位的影响

目的：观察刺五加皂苷单体Ｓｃ３（ＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘＳｅｎｔｉｃｏｓｉｄｅＣ３）对培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位电参数的影响。方法：将５０～８００μｇ／ｍｌＳｃ３，分别加入到培养４～６ｄ后的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞的培养液中，依次记录加药前、后自发性搏动及动作电位电参数的变化。结果：Ｓｃ３可剂量依赖性地抑制被培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞的自发性搏动及动作电位的电参数，其作用与０．４μｇ／ｍｌ尼莫地平相似，而该作用被８０μｇ／ｍｌＣａ２＋所反转。结论：Ｓｃ３能够阻滞Ｃａ２＋通道     

参附青注射液对培养心肌细胞搏动的影响(摘要)

参附青注射液由人参、附子、青皮三味中药的提取物混合而成,本药已在临床和动物实验中获得了明显的升压、抗休克、改善微循环等作用。在这基础上,我们观察了参附青注射液对体外培养的乳鼠心肌细胞搏动的影响。分析在不受神经体液干扰下,对心肌细胞的直接作用及探讨该药的作用机制,摘要报告如下。材料和方法取新生的 Wistar 种乳鼠,生后3～     

刺五加叶皂苷单体Sc3对培养大鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位的影响

 目的：观察刺五加皂苷单体Sc₃(Acanthopanax Senticoside C₃)对培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位电参数的影响。方法：将50～800μｇ／ml Sc₃，分别加入到培养4～6d后的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞的培养液中，依次记录加药前、后自发性搏动及动作电位电参数的变化。结果：Sc₃可剂量依赖性地抑制被培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞的自发性搏动及动作电位的电参数，其作用与0.4μｇ／ml尼莫地平相似，而该作用被80μｇ／ml Ca^２+所反转。结论：Sc₃能够阻滞Ca^２+通道。     

提高新生大鼠原代心肌细胞纯度方法的探讨

目的:探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法。方法:应用0.08%心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次;收集的细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基中和。用差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育2天,无血清同步化1天。结果:分离1只乳鼠获得的心肌细胞产量约为1.2×106个,有活力心肌细胞占90%以上,心肌细胞纯度>90%,3-4天后心肌细胞融合成片,并出现自发性节律性搏动。结论:该方法在保证心肌细胞产量和心肌细胞活性的同时,能大幅度提高心肌细胞纯度。     

乳鼠心肌细胞的培养

目的：原代培养乳鼠心肌细胞及进行形态学观察。方法：胰蛋白酶和Ⅱ型胶原分离消化心肌组织，差速贴壁和化学方法纯化心肌细胞。结果：12h心肌细胞基本贴壁，1—3天形成细胞簇，并出现同步搏动。结论：胰蛋白酶和胶原酶混合使用可以分离出数量较多、状态良好的心肌细胞。     

脂联素受体在正常SD大鼠乳鼠心肌细胞的分布和表达

目的通过体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,研究脂联素受体1（AdipoR1）、脂联素受体2（AdipoR2）及T-钙黏蛋白（Tcadherin）三种脂联素受体在大鼠乳鼠心肌细胞上的分布和表达。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过a-肌动蛋白免疫荧光法对原代培养的心肌细胞进行鉴定,并在倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。选用原代培养96h的单层心肌细胞进行实验,使用RT—PCR和细胞免疫组织化学方法检测AdipoR1、AdipoR2、Tcadherin的mRNA和蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均检测到了AdipoR1、AdipoR2、T—cadherin的mRNA和蛋白表达,其中以AdipoR1和Tcadherin的mRNA和蛋白表达量高,与AdipoR2的表达量相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论脂联素受体1、脂联素受体2和T钙黏蛋白,三种脂联素受体在SD大鼠乳鼠心肌细胞上均有表达,并以脂联素受体1和T-钙黏蛋白的表达为主,脂联素受体2表达量较少。     

四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞细胞凋亡的影响,探讨其心肌细胞保护作用。方法采用胰蛋白和胶原酶联合消化的方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧／复氧模型。实验分为正常组、模型组和药物干预组（予四妙勇安汤合生脉饮）。采用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组及药物干预组心肌细胞凋亡率均升高（P〈0．05）。与模型组比较,药物干预组心肌细胞凋亡率下降（P〈0．05）。结论四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧后心肌细胞凋亡有保护作用。     

木犀草素对大鼠肺成纤维细胞增殖的作用

目的：研究木犀草素对乳鼠肺成纤维细胞增殖作用的影响。方法：取3d内出生的乳大鼠肺组织制备肺成纤维细胞,经纯化,接种于96孔培养板上,细胞分为正常对照组、醋酸泼尼松龙组、4×10^-4、4×10^-5、4×10^-6、4×10^-7mol·L^-14个不同浓度的木犀草素实验组,培养一段时间后,观察肺成纤维细胞的形态变化,测定肺成纤维细胞的生长曲线、增殖情况及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果：木犀草素浓度在4×10^-5、4×10^-6mol·L^-1时,可明显抑制肺成纤维细胞的生长和增殖,且细胞密度减小,细胞间隔变大,这种作用与药物浓度呈正相关性,且使肺成纤维细胞内蛋白质的含量减少,所有木犀草素给药组均可使肺成纤维细胞内SOD活力随剂量的增加而增加,且与正常对照组比较差异均有统计学意义。结论：木犀草素对大鼠肺成纤维细胞的增殖有抑制作用。     

生川乌配不同比例生半夏对乳鼠心肌细胞的毒性作用

目的:以半数抑制浓度及细胞搏动频率为指标,评价生川乌与生半夏合用对原代乳鼠心肌细胞的毒性影响及与生半夏比例的关系.方法:分离出生3d内的SD乳鼠心肌细胞进行原代培养.生川乌组(Ⅰ组),生川乌配生半夏1∶0.25(Ⅱ组),1∶0.5(Ⅲ组),1∶1(Ⅳ组)分别以生川乌终质量浓度0,0.016,0.078,0.235,0.392,0.548,0.705,0.861,1.018 g·mL-1(高效液相色谱法测得乌头碱含量分别为0,1,5,15,25,35,45,55,65 mg·L-1)染毒心肌细胞,分别培养1,2,4,12h,观察各时间点细胞搏动频率,以MTT法检测培养12h时细胞存活率,应用概率单位法计算半数抑制浓度(IC50).结果:①染毒12h,生川乌组抑制率(CI)显著高于其他配伍组(P＜0.01),且随着生半夏比例的提高,抑制率降低.②Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组的IC50分别为0.446,0.460,0.530,0.575 g·mL-1.③在生川乌终质量浓度0.016 ～0.078 g·mL-1内,1～2h细胞搏动频率增高,4～12h搏动频率降低.在0.235 ～0.861 g·mL-1内,1h时细胞搏动频率降低,2h时搏动频率高于1h,但低于正常水平,4～12 h频率低于1h.给药1.018 g·mL-1,细胞立即停搏.结论:生半夏配伍生川乌降低了生川乌的毒性,且有明显的剂量依赖关系.     

何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究

目的观察何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的影响。方法将W istar系大鼠乳鼠心肌细胞原代单层培养5 d,建立“缺氧”损伤模型,通过生化检测及组织化学等方法,研究何首乌对缺氧培养心肌细胞的保护作用。结果实验组及对照组心肌细胞PAS反应和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性明显增强而酸性磷酸酶(ACP)活性减弱;实验组及对照组超氧化物歧化酶(SOD)活性较模型对照组增强而丙二醛(MDA)含量明显降低(P<0.01)。结论何首乌对缺氧心肌细胞具有良好的保护作用。     

竹节参总皂苷对H2 O2致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察竹节参总皂苷(SPJ)对心肌细胞的保护作用.方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2),SPJ低剂量组(50 mg·L-1),SPJ高剂量组(100 mg·L-1).H2O2诱导心肌细胞氧化损伤2h后SPJ孵育24 h,显微镜下观察细胞搏动频率,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶( LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛( MDA)含量.结果:SPJ(50,100 mg·L-1)可明显增加心肌细胞搏动频率,降低H2O2所致乳鼠心肌细胞LDH释放量,升高SOD,CAT,GSH-Px活性,降低MDA含量(P＜0.01或P＜0.05).结论:SPJ对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用.     

四逆汤含药血清对阿霉素诱导心肌细胞损伤机制影响的研究

目的:观察四逆汤含药血清对阿霉素(ADR)引起的培养乳鼠心肌细胞毒性的影响。方法:采用原代培养的Wister大鼠乳鼠心肌细胞,以1.0μg/mL的ADR造成急性心肌细胞中毒模型,测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、心肌细胞丙二醛(MDA)含量、心肌细胞搏动频率及MTT分析法测定心肌细胞活力,测定过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、超氧化物歧化酶(Cu-SOD),观察大鼠生存率的变化。结果:四逆汤含药血清对ADR引起的心肌细胞损伤可减少LDH漏出量和心肌细胞内MDA含量,并改善心肌细胞活力和搏动频率,改善Cu-SOD的活性,延长大鼠生存期。结论:四逆汤含药血清对ADR引起的心肌细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制与其抑制ADR引起的脂质过氧化损伤有关。     

内脂素在心肌细胞中的表达

目的观察新生SD大鼠心肌细胞内脂素的表达情况,为临床心肌病治疗的新靶点奠定理论基础。方法出生2～3 d的SD乳鼠,提取并培养原代心肌细胞,培养48 h后换为无血清的培养基继续培养24 h,之后应用RT-PCR、Western-Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况。结果心肌细胞中内脂素mRNA和蛋白均有表达。结论除脂肪组织、活化的淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、胎膜上皮细胞以及骨骼肌等细胞以外,心肌细胞也能够表达内脂素。     

石菖蒲挥发油对心肌细胞形态学及细胞活力的影响

目的:观察石菖蒲挥发油对正常心肌细胞形态学及细胞活力的影响.方法:采用胰酶冷消化法消化培养心肌细胞,用免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞纯度;将不同浓度石菖蒲挥发油与心肌细胞作用24h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,并用MTT比色法检测细胞活力.结果:原代培养的乳鼠心肌细胞纯度达95%以上;不同浓度的石菖蒲挥发油能降低正常心肌细胞的搏动频率;终浓度为100～160 mg/L的石菖蒲挥发油能提高心肌细胞活力D(λ)值,与基质组比较有统计学差异,其量效关系是以140 mg/L剂量组D(λ)值为顶点的抛物线.结论:一定浓度的石菖蒲挥发油有降低心肌细胞搏动频率、提高心肌细胞活力的作用.     

人参皂苷Rb1经ERK1／2对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究人参皂苷Rbl（Gs—Rbl）对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能的作用机制。方法原代乳鼠心肌细胞培养,H202诱导造成细胞损伤,实验分为6组,空白对照组、模型组、原花青素组（100／~mol／L）和Gs—Rbl低（50vmol／L）剂量、中剂量（100μmol／L）、高剂量（200／xmol／L）组。采用MTT法检测心肌细胞活性,Tunnel法检测心肌细胞凋亡率,Westernblot检测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化表达水平。结果与空白对照组相比,模型组心肌细胞活力明显下降（P〈0．01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）,心肌细胞P—ERK1／2表达明显减少（P〈0．01）;与模型组比较,原花青素组以及Gs—Rbl低、中和高剂量组心肌细胞活力明显提高（P〈0．05）,细胞凋亡率显著下降（P〈0．05）,原花青素组和Gs—Rbl高剂量组心肌细胞P—ERKl／2表达明显增加（P〈0．05）。结论Gs—Rbl对H202诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与激活ERK信号通路相关。