两首活血化瘀方干预急性心肌缺血心肌细胞凋亡与Bcl—2、Bax表达的实验研究

目的观察两首活血化瘀方对心肌细胞调亡与相关蛋白表达干预的作用。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌缺血模型，20条犬随机分成对照组、心肌缺血组、桃红四物汤以及丹参饮组，每组5条。分别采用HE染色、DNA末端标记法（TUNEL）以及免疫组化法观察心肌组织病理变化、心肌细胞凋亡与相关蛋白表达的变化。结果对照组无细胞变性与坏死，仅见极少量凋亡阳性细胞；心肌缺血组有明显心肌组织坏死，心肌细胞凋亡增多，Bcl-2的表达明显减少，Bax的表达明显增多，与对照组比较有统计学意义；桃红四物汤以及丹参饮组心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻，Bcl-2的表达明显增多，Bax的表达明显减少，与心肌缺血组比较有统计学意义。结论桃红四物汤以及丹参饮可影响Bcl-2和Bax的表达，有效地抑制心肌细胞坏死及凋亡，减轻心肌细胞损伤，对缺血心肌有保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（EGB）对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注模型,分别以缺口末端标记法（TUNEL）及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Bcl-2、Bax基因的蛋白表达的变化。结果缺血再灌注（IR）组心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组（P〈0.0 1）,EGB组心肌细胞凋亡明显受到抑制（P〈0.0 1）。IR组和EGB组Bax、Bcl-2、P5 3基因蛋白表达均明显增加（P〈0.01）;EGB明显促进Bcl-2基因表达,同时抑制Bax、P53基因表达（P〈0.01）,Bcl-2和Bax的比值也随之升高。结论 EGB可明显下调Bax和P53基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,从而显著抑制心肌缺血再灌注损伤（MIRI）后心肌细胞凋亡。     

Bax、Bcl-2、p53蛋白在心络绌急大鼠心肌中的表达

目的 探讨心络绌急大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2 蛋白表达情况.方法 采用垂体后叶素大剂量静脉注射建立心络绌急大鼠模型,运用TUNEL 法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化法检测心肌Bax、Bcl-2、p53 蛋白表达.结果 与正常组相比,模型组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高（P 〈0.01）,Bax、p53 蛋白表达显著增加（P 〈0.05 或P 〈0.01）,Bcl-2 蛋白表达无明显变化,Bax/ Bcl-2 显著升高（P 〈0.01）.结论 细胞凋亡是心络绌急心肌损伤的重要原因,p53、Bax、Bcl-2 表达的变化参与了心络绌急心肌细胞凋亡的调控.     

血府逐瘀汤对结扎冠脉所致缺血大鼠心肌细胞凋亡及ICAM-1蛋白表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对结扎冠脉所致缺血大鼠心肌细胞凋亡及ICAM-1(intercellularadhesionmolecule-1)表达的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌缺血模型,运用DNA末端标记法(TUNEL)和免疫组化技术分别观察心肌细胞凋亡及ICAM-1蛋白表达的变化。结果假手术组仅见极少量凋亡阳性细胞;心肌缺血组有明显心肌细胞凋亡增多,与假手术组比较差异显著(P<0.01);血府逐瘀汤组、地奥心血康组心肌细胞凋亡均显著减少,与心肌缺血组比较差异显著(P<0.01,P<0.05)。同时ICAM-1蛋白的阳性表达支持心肌细胞凋亡的情况。结论血府逐瘀汤与地奥心血康可有效抑制心肌细胞坏死凋亡,下调ICAM-1表达,减轻心肌细胞损伤,对缺血心肌有保护作用。     

益气养血化瘀汤对实验性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:观察益气养血化瘀汤对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:采用盐酸异丙基肾上腺素小剂量、多次尾静脉注射法复制大鼠心肌缺血模型。60只健康Wistar大鼠,随机分为空白对照组(以下简称空白组)、模型组,低剂量组、中剂量组、高剂量组、地奥心血康阳性对照组(以下简称对照组)6组。分别采用HE染色、DNA末端标记法(TUNEL)以及免疫组化法观察心肌组织病理变化、心肌细胞凋亡与相关蛋白表达的变化。结果与结论:益气养血化瘀汤可影响心肌缺血大鼠Bcl-2和Bax蛋白的表达,有效地抑制心肌细胞坏死及凋亡,减轻心肌细胞损伤,对缺血心肌有保护作用。     

葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞的影响

目的观察葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、葛根素后处理组,每组8只。制备大鼠心肌缺血再灌注模型,假手术组只穿线,不结扎左冠状动脉;缺血再灌注组缺血45 min,后再灌注120 min;葛根素后处理组,结扎左冠状动脉45 min,后再灌注120 min。再灌注前3 min和再灌注后2min内静脉注入葛根素1.25 mg/kg。应用免疫组化SP法观察Bcl-2和Bax蛋白表达率,采用TUNEL法观察各组心肌细胞的凋亡率,并在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果与心肌缺血再灌注组相比,假手术组和葛根素后处理组心肌凋亡细胞数较低（P〈0.05）,Bax表达较低（P〈0.05）,Bcl-2表达较高（P〈0.05）。结论葛根素后处理可以影响心肌细胞Bcl-2、Bax的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用。     

冠心平对急性缺血犬心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究冠心平对冠脉结扎导致心肌缺血犬心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:36头Beagle犬,分成假手术组,心肌缺血模型组,心可舒组,小、中及大剂量冠心平组。前两组分别给予空白胶囊,其他各组每日两次口服相应剂量的药物,连续给药10天,10天后进行冠状动脉结扎实验。结扎180min后取心肌切片保存,检测心肌细胞凋亡指数(AI),并用免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与模型组相比,心可舒组及冠心平小、中、大剂量组的心肌凋亡指数水平均有所下降,Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减少,与模型组比较均具有统计学意义(P0.01)。结论:冠心平具有减轻缺血心肌细胞凋亡,提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值的作用。提示冠心平对缺血犬具有抑制心肌细胞凋亡,减轻细胞凋亡对缺血心肌的损伤的作用。     

持续输注瑞芬太尼对犬心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的影响

目的探讨持续输注瑞芬太尼对犬心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法24只健康杂种犬随机分为4组，每组6只。假手术组（A组）：开胸后在冠状动脉左前降支下穿线不结扎；缺血再灌注组（B组）：开胸后结扎冠状动脉左前降支，缺血30min再灌注2h；低剂量瑞芬太尼持续输注组（C组）：在B组的基础上，于结扎前30min，微泵持续输注瑞芬太尼[0．5μg／（kg·min）]至再灌注2h；高剂量瑞芬太尼持续输注组（D组）：在B组的基础上，于结扎前30min，微泵持续输注瑞芬太尼[1Mg／（kg·min）]至再灌注2h。结果心肌细胞凋亡指数：B组、C组、D组显著高于A组（P〈0．05），C组D组显著高于B组（P〈0．05）．C组与D组之间差异无统计学意义。Bcl-2蛋白表达：B组、C组、D组显著高于A组（P〈0．05），C组D组显著高于B组（P〈0．05）。Bax蛋白的表达：B组、C组、D组显著高于A组（P〈0．05），但C组D组明显低于B组（P〈0．05）。结论持续输注瑞芬太尼可上调Bcl-2蛋白表达，下调Bax蛋白的表达，抑制心肌细胞凋亡，减轻缺血再灌注损伤。     

和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法以皮下大量注射异丙肾上腺素（ISO）的方法制备慢性心衰大鼠模型，随机分为模型对照组，卡托普利组，参麦注射液组，和营安心大、中、小剂量组。另设正常对照组，用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，用免疫组化方法检测心肌细胞Bax，Bcl-2蛋白表达，计算Bcl-2／Bax比值。结果模型对照组TUNEL法心肌细胞凋亡严重，棕褐色细胞核明显增多，免疫组化图像分析Bax表达明显升高，Bcl-2，Bcl-2／Bax比值明显下降。与模型对照组比较，和营安心方组心肌细胞凋亡数量明显减少，Bax蛋白表达明显下降，Bcl-2，Bcl-2／Bax比值明显升高。结论和营安心方有减抑慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的作用。     

中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤（MIRI）心肌细胞相关凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组。采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注2h复制大鼠MIRI模型,分别以HE染色、TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌组织病理学、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞Bcl-2、Bax的阳性表达。结果 MIRI组与假手术组比较心肌细胞凋亡指数值显著升高（P〈0.01）,而冠心康组明显降低（P〈0.01）;抑凋亡因子Bcl-2在MIRI后表达明显降低,而促凋亡因子Bax表达则明显升高,冠心康可明显升高Bcl-2的表达,同时降低Bax的表达（P〈0.01）。结论中药复方冠心康对大鼠MIRI心肌细胞具有明显的保护作用,其作用机制与调控心肌细胞的凋亡因子Bcl-2、Bax的表达有关。     

冠心病心绞痛寒凝血瘀证大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达

目的:探讨冠心病心绞痛寒凝血瘀证大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达情况。方法:采用垂体后叶素大剂量静脉注射建立冠心病心绞痛寒凝血瘀证动物模型,运用TUNEL法检测细胞凋亡凋亡指数;免疫组化法检测心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达;透射电镜观察大鼠心肌细胞的超微结构改变。结果:与正常组相比,模型组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),Bax蛋白表达显著增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达无明显变化,Bax/Bcl-2显著升高(P<0.01),透射电镜下可见部分心肌细胞核固缩,染色质边集,线粒体聚集、肿胀,部分膜破裂,嵴降解。结论:心肌细胞凋亡参与了冠心病心绞痛寒凝血瘀证心肌缺血损伤的病理过程,Bax/Bcl-2表达失衡激活线粒体途径参与了冠心病心绞痛寒凝血瘀证心肌细胞凋亡的调控。     

芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax的影响

目的 探讨芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达的影响.方法 心肌缺血45 min,再灌注2 h制备缺血再灌注模型.随机分为正常组、假手术组、生理盐水缺血再灌注组、溶剂对照组、美托洛尔阳性对照组及芹菜素低、中、高剂量组,每组8只.除假手术组外,余各组在缺血前10 min分别股静脉给药.再灌注2 h后迅速取出心脏,用RT-PCR测Bcl-2及Bax基因的mRNA表达;实验时记录心率（HR）、平均动脉压（MAP）、心电图S-T段并计算心律失常Lambeth评分.结果 芹菜素组与生理盐水缺血再灌注组比较,Bcl-2 mRNA表达量增加,Bax mRNA表达量减少,均呈剂量依赖性（P＜0.05）;心律失常Lambeth评分芹菜素组低于假手术组 （P〈0.05）;芹菜素能缩短再灌注心律失常持续时间（P〈0.05）.结论 芹菜素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2基因表达和下调Bax基因表达有关.     

右美托咪啶后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注的影响

目的 探讨右美托咪啶后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只成功制备Langendorff离体灌注模型,随机分为4组各12只：假手术组（C组）,缺血再灌注组（I/R组）、右美托咪啶10nmol/L组（DⅠ组）、右美托咪啶100nmol/L组（DⅡ组）,离体心脏经K-H液平衡灌注20min后,除C组外均采用全心停灌40min再灌注120min的方法,制备离体心脏缺血再灌注模型.DⅠ组和DⅡ组于再灌注即刻分别灌注含10nmol/L右美托咪啶和100 nmol/L右美托咪啶的K-H液20 min,然后继续用K-H液再灌注120 min.用多通道生理信号采集处理系统分别记录各个时刻的冠脉流出量（CF）、心率（HR）和左心室发展压（LVEDP）、室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）和室内压最大下降速率（-dp/dtmax）.再灌注结束即刻取心尖组织,免疫组化法检测Bcl-2和 Bax蛋白的表达,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况.结果 与I/R组比较,DⅠ组和DⅡ组在t3、t4、t5时LVDP和±dp/dtmax均升高（P均＜0.05）,CF在t4、t5升高（P均＜0.05）;Bcl-2蛋白表达增高,Bax蛋白表达降低（P均〈0.05）;DⅠ组和DⅡ组凋亡细胞比I/R 组明显减少.结论 右美托咪啶后处理能够改善缺血再灌注左心室功能,减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与右美托咪啶可上调心肌Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少心肌细胞凋亡有关.     

温阳益心中药预处理对缺血大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的观察温阳益心中药预处理和心肌缺血预处理对缺血再灌注48h缺血大鼠心肌Bcl-2、Bax、细胞凋亡率的影响。方法选用雄性Wistar大鼠,随机分为4组,其中3组正常喂食,1组灌胃中药悬液,10d后选各组健康大鼠行冠脉结扎,建立大鼠心肌缺血模型。假手术组:完成全部手术操作,只穿线不结扎冠脉;心肌缺血-再灌注组(IR组):模型建立后,心肌缺血45min后再灌注48h;温阳益心中药预处理缺血-再灌注组(中药组):模型建立后,心肌缺血45min后再灌注48h;预适应处理缺血-再灌注组(IP组):模型建立后,心肌缺血5min,再灌注5min,重复3次,之后心肌缺血45min,再灌注48h。采用免疫组化检测Bcl-2、Bax阳性细胞表达,原位杂交检测Bcl-2、BaxmRNA阳性表达;流式细胞仪测定细胞凋亡率(AP)。结果 IP组和中药组AP较IR组低,Bcl-2阳性表达心肌细胞数与Bcl-2mRNA表达率比IP组高,Bax阳性表达心肌细胞数与BaxmRNA表达率比IR组低(P0.05)。结论 IP与温阳益心中药对IR的心肌保护均具有抑制心肌细胞凋亡的功能,且有等效性。     

萎胃康及其拆方治疗慢性萎缩性胃炎的分子机制研究

目的:对萎胃康治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的分子机制进行拆方研究。方法:70只Wistar大鼠随机分为正常组和造模组,造模组采用水杨酸钠灌胃为主复制CAG大鼠模型。确定造模成功的50只大鼠随机分为模型组、全方组、补益组、祛邪组、西药组,分别灌胃生理盐水、萎胃康水煎液、拆方I号水煎液、拆方II号水煎液和维霉素混悬液,1次/d。给药30 d后,观察大鼠胃黏膜组织形态学变化及Bcl、Bax的表达。结果:各治疗组大鼠胃黏膜组织形态明显改善,其中以全方组效果最好。模型组Bcl-2、Bax的平均光密度分别为18.36±1.24、8.94±0.65,较正常组的(11.19±0.82)、(16.98±0.96)分别明显升高和降低(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组大鼠胃黏膜Bcl-2表达降低,Bax表达显著升高(P<0.01),以全方组大鼠胃黏膜Bcl-2的平均光密度(11.93±1.17)最低,较补益组(14.68±1.16)、西药组(14.19±1.64)和祛邪组(13.00±0.94)均有显著性差异(P<0.01或P<0.05);Bax的平均光密度(14.43±0.57)最高,较西药组(11.56±0.76)有显著性差异(P<0.01)。结论:萎胃康能明显改善CAG大鼠胃黏膜萎缩的情况,推测其分子机制与促进细胞凋亡有关。     

温阳通脉方对大鼠心肌缺血再灌注RISK通路机制研究

目的：观察温阳通脉方对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用及其可能机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组（IR组）、心肌缺血预适应组（IP组）、温阳通脉方组（WY组）。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（IR）模型及心肌缺血预适应（IP）模型。检测各组大鼠血清心肌坏死标记物肌钙蛋白T （cTnT）含量,免疫组化法检测心肌bax、bcl-2蛋白表达, western-blot检测akt、 p-akt表达。结果 WY组、 IP组血清cTnT含量低于IR组（P 〈0.05）,高于假手术组（P〈0.05）。 WY组、 IP组bax表达低于IR组（P〈0.05）。 WY组和IP组bcl-2、 akt蛋白表达高于IR组（P〈0.05）。 WY和IP组血清cT-nT含量及心肌bcl-2、 bax、 akt表达比较无统计学差异（P〉0.05）。结论温阳通脉方预处理具有心肌保护作用,其保护机制可能与激活akt通路,上调bcl-2,抑制bax蛋白表达有关。     

骨刺消巴布剂对大鼠急性软组织损伤细胞凋亡的影响

目的：观察骨刺消巴布剂对大鼠急性软组织损伤细胞凋亡和凋亡调控基因Bcl-2及其抑制基因Bax的影响,探讨骨刺消巴布剂对急性软组织损伤细胞的保护作用是否与抑制细胞凋亡及调节Bcl-2、Bax的表达有关。方法：选用SPF级SD大鼠40只,随机分成4组：骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组、空白对照组、正常组。骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组、空白对照组,通过局部打击来制备大鼠急性软组织损伤模型,骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组外敷相应药物,空白对照组、正常组不做任何处理,给药3周后处死动物,TUNEL法检测软组织损伤细胞的凋亡指数,免疫组化法检测组织细胞中Bcl-2、Bax水平。结果：骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组细胞凋亡率明显低于空白对照组护〈0．05）,Bcl-2在骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组中的表达高于空白对照组（P〈0．05）,Bax的表达低于空白对照组（P〈0．05）,骨刺消巴布剂组、奇正消痛贴组比较无统计学意义。结论：Bcl-2、Bax是细胞凋亡的2个调控基因,骨刺消巴布剂对损伤的软组织细胞的影响机制可能是通过上调Bcl-2的表达,下调Bax的表达来抑制细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗急性软组织损伤的机制之一。     

利心冲剂对心衰大鼠血流动力学和凋亡相关基因表达的影响

目的观察利心冲剂对心衰大鼠血流动力学的影响,探讨其抑制心肌细胞凋亡的分子机制。方法50只Wistar大鼠随机分为5组：正常组、模型组、卡托普利治疗组、利心冲剂低剂量组、利心冲剂高剂量组。采取腹腔注射阿霉素（ADR,4mg／kg,每5天一次,共3次）复制大鼠心衰模型,观察心肌细胞病理学、血流动力学及凋亡相关基因Bcl—2、Bax表达的变化。结果与模型组比较,利心冲剂治疗组光镜下心肌损伤明显减轻;左室收缩压明显升高,左室舒张末压明显降低;抑制凋亡作用的Bcl-2基因表达增高、Bax／Bcl—2降低（P〈0．05）。结论利心冲剂能改善心衰大鼠心功能及抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl—2基因表达及降低Bax／Bcl-2比值有关。     

Survivin、Bcl-2和Bax在肝外胆管异型增生组织和癌组织中的表达及意义

目的探讨Survivin、Bcl-2和Bax在肝外胆管癌发生发展中的作用和临床意义。方法用免疫组化S—P法检测27例肝外胆管癌组织、10例异型增生组织和5例正常组织中Survivin、Bcl-2和Bax的表达。结果Survivin在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中阳性表达率分别为20％,50％和74％,正常组织和癌组织中Survivin表达差异有统计学意义（P=0．037〈0．05）。Bcl-2在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中阳性表达率分别为0,10％和37％,表达差异无统计学意义（P=0．092〉0．05）。Bax在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织中阳性表达率分别为40％,30％和74％,异型增生组织和癌组织中表达差异有统计学意义（P=0．023〈0．05）。Survivin与Bcl-2在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织的表达有明显相关性（P=0．039〈0．05）。Bcl-2和Bax在肝外胆管正常上皮组织、异型增生组织和癌组织的表达有明显相关性（P=0．005〈0．05）。Survivin、Bcl-2和Bax的表达与肝外胆管癌组织病理学特征和临床分期无关。结论Survivin、Bcl-2和Bax凋亡相关基因参与了肝外胆管癌的发生发展,凋亡在其发生发展中起重要作用。