经典瞬时受体电位通道蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达

背景与目的 经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道蛋白是一种非选择性阳离子通道蛋白家族,主要位于细胞膜表面,对钙离子具有通透性.研究认为,TRPC可能构成钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)并介导钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE),从而参与细胞的增殖、迁移、基因转录等生命活动.本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中TRPC mRNA及蛋白质的表达情况,初步探讨TRPC与NSCLC的可能关系.方法 建立TRPC1-7等7个家族成员的荧光定量PCR检测方法,对24例NSCLC患者的肿瘤组织进行了TRPC mRNA的定量检测,并通过蛋白质免疫印迹法对TRPC在蛋白质水平的表达进行了验证.结果 在NSCLC患者癌组织检测到TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA的表达,未检测到TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA的表达.肺癌组织中TRPC表达丰度为:TRPC1≈TRPC6＞TRPC3＞TRPC4.蛋白质免疫印迹证实了非小细胞肺癌组织中TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6在蛋白质水平的表达.结论 非小细胞肺癌组织在mRNA和蛋白质水平均表达TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,其中主要表达TRPC1和TRPC6,它们在构成肺癌细胞中SOCC、介导产生SOCE中的作用有待进一步研究.     

miR-374a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况。采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975,采用RT-PCR检测各组细胞转染效率。分别采用CCK8细胞增殖实验、平板克隆实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测转染前后非小细胞肺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力变化情况。结果与正常肺上皮细胞CCD-8L比较,非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a呈稳定高表达(P<0.05)。miR-374a mimic、miR-374a inhibitor可分别瞬时过表达、低表达非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a表达情况(P<0.05)。过表达miR-374a可促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);靶向抑制miR-374a表达可抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),组间差异显著,具有统计学意义。结论miR-374a在非小细胞肺癌细胞A549、H1975中呈稳定高表达,过表达miR-374a可明显促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭。     

HuR siRNA对肺腺癌A549 细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探讨HuR siRNA 对人肺腺癌A549 株细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能机制。方法：HuR siRNA 瞬时转染肺腺癌A549 细胞24 h 后,CCK-8 实验、集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,qPCR和Western blotting 检测HuR及基质金属蛋白酶（MMP）-9 基因mRNA和蛋白质表达。结果：HuR siRNA能够抑制人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移及侵袭;HuR siRNA 显著降低A549 细胞HuR、MMP-9 mRNA和蛋白表达（P＜0.01）。结论：下调HuR能抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其机制与下调MMP-9 有关。     

敲低WTAP基因对肺腺癌A549 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms?s? tumor 1- associating protein,WTAP）对人肺腺癌A549 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选用人肺腺癌A549 细胞和HEK293T,设计两组shWTAP干扰序列,构建慢病毒载体质粒,在HEK293T细胞中包装慢病毒后感染人肺腺癌A549 细胞,对照组感染277 空载体质粒。用qPCR和WB实验检测A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白的表达水平,用BrdU 实验、细胞划痕愈合实验、Transwell 实验分别检测A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：成功构建shWTAP-1 和shWTAP-2 两种慢病毒质粒,感染A549 细胞后,与对照组比较,A549 细胞中WTAP mRNA和蛋白表达水平显著下调（均P<0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低（均P<0.05）。结论：敲低WTAP 基因的表达对人肺腺癌A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力有显著抑制作用,WTAP基因的表达与肺腺癌的发生发展相关,WTAP可能是肺腺癌诊疗的一个潜在靶标。     

GOLM1在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨高尔基磷蛋白2(Golgi phosphoprotein 2,GOLPH2,又称为GP73或GOLM1)在肺腺癌组织中的表达及对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响.方法:从GEPIA数据库分析肺腺癌组织中GOLM1 mRNA表达情况及与肺腺癌患者预后的相关性;利用慢病毒siRNA技术下调人肺腺癌A549细...     

shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的 研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C, Cys C）表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法 采用短发夹RNA（sh-RNA）干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。用CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。此外,还采用Western blot检测侵袭和迁移关键蛋白表达的变化。结果 shRNA干扰Cys C,明显下调Cys C的表达;与对照组相比,发现shRNA介导的Cys C沉默显著抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭。此外,还发现Cys C的下调可以显著抑制基质金属蛋白酶（MMP9、MMP14）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结论 shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,明显下调Cys C的表达,Cys C的下调可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移。     

非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达及其对肺癌细胞增殖转移的调控机制

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中circ_0006692的表达与临床病理特征的关系及机制。方法 收集50对NSCLC和癌旁组织，qRT-PCR法检测癌和癌旁组织中circ_0006692的表达，并分析其与临床病理特征之间的关系。构建过表达、敲低的circ_0006692的A549肺癌细胞株，MTS、克隆形成实验、划痕创伤愈合实验和Transwell侵袭实验检测circ_0006692表达变化对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qRT-PCR和Western blot检测circ_0006692表达变化对EMT相关基因表达的影响。结果 非小细胞肺癌组织中circ_0006692表达水平高于癌旁组织（P<0.05），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关（P<0.05）。circ_0006692敲低抑制细胞增殖、侵袭和转移，过表达可促进细胞增殖、侵袭和转移。qRT-PCR和Western blot结果显示circ_0006692敲低抑制A549肺癌细胞EMT相关基因CDH2和MMP7促进CDH1表达。结论 非小细胞肺癌组织中circ_0006692的表达上调与肿瘤大小、TNM分期及肺膜侵犯密切相关；circ_0006692表达可调节A549肺癌细胞增殖、侵袭、转移以及EMT进展。     

下调ZEB-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探讨ZEB-1对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。方法:构建干扰ZEB-1的质粒,转染至A548细胞株,运用体外增殖、迁移、侵袭实验来观察ZEB-1表达下调后对非小细胞肺癌细胞株A549生物学行为的影响。结果:下调ZEB-1的表达可降低A549细胞株的增殖、迁移和侵袭能力。结论:ZEB-1表达水平与非小细胞肺癌侵袭转移的能力显著相关。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wt-p53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

HDAC1 siRNA转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的:多项研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株有抑制增殖和诱导凋亡作用.而HDAC抑制剂对HDAC Ⅰ型和Ⅱ型均有抑制作用,在非小细胞肺癌细胞株中尚未明确HDACs中哪一类受抑制能影响肿瘤生长.本研究通过HDAC1 siRNA转染肺腺癌细胞株A549,观察HDACs中HDAC1对肺腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,明确HDAC1在肺腺癌细胞生长中的作用.方法:MTT法检测不同时间点HDAC1 si RNA转染对A549细胞体外增殖的影响,流式细胞术检测RNA干扰后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化.结果:HDAC1 siRNA转染A549细胞后,HDAC1在转录和表达水平均下降,组蛋白H4乙酰化表达增高.siRNA干扰后A549细胞的体外生长抑制呈时间依赖性,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论:HDAC1 siRNA转染能有效地抑制HDAC1在A549细胞中的表达,增加A549细胞中组蛋白的乙酰化,并影响A549细胞相关生物学行为,抑制肺腺癌细胞的生长,为HDAC1基因治疗应用于肺腺癌奠定了基础.     

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2（thrombospondin 2,THBS2）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验（Western blot）检测THBS2在人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达（P＜0.001）。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中均显著表达（P＜0.001）。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异（P＜0.01）;过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加（P＜0.01）;相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少（P＜0.01）。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）;THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

miR-492对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-492对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法:RT-qPCR检测NSCLC组织及细胞株（Calu-1、A549、H1650和H1299）中miR-492的表达。A549细胞瞬时转染miR-492 mimics或miR-492 inhibitors，并通过划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验证实miR-492调控的靶基因。结果:NSCLC组织及细胞株中miR-492表达明显升高。将miR-492 mimics转染A549细胞后，细胞的迁移和侵袭能力明显增强。将miR-492 inhibitors转染A549细胞后，细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。PTPN9是miR-492的直接靶基因。结论:miR-492可能通过调节靶基因PTPN9，从而促进NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

SOCE and cancer: Recent progress and new perspectives

Ca²⁺ acts as a universal and versatile second messenger in the regulation of a myriad of biological processes, including cell proliferation, differentiation, migration and apoptosis. Store‐operated Ca²⁺ entry (SOCE) mediated by ORAI and the stromal interaction molecule (STIM) constitutes one of the major routes of calcium entry in nonexcitable cells, in which the depletion of intracellular Ca²⁺ stores triggers activation of the endoplasmic reticulum (ER)‐resident Ca²⁺ sensor protein STIM to gate and open the ORAI Ca²⁺ channels in the plasma membrane (PM). Accumulating evidence indicates that SOCE plays critical roles in cancer cell proliferation, metastasis and tumor neovascularization, as well as in antitumor immunity. We summarize herein the recent advances in our understanding of the function of SOCE in various types of tumor cells, vascular endothelial cells and cells of the immune system. Finally, the therapeutic potential of SOCE inhibitors in the treatment of cancer is also discussed.     

热休克蛋白HDJ1影响肺腺癌细胞侵袭和迁移能力的研究

目的：研究热休克蛋白HDJ1在人肺腺癌组织、肺腺癌细胞株以及正常肺上皮细胞株中的表达情况,探讨HDJ1对肺腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：采用免疫组织化学法检测HDJ1在人肺腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况;Western blot检测HDJ1在人肺腺癌细胞A549、H1299、H292及正常肺上皮细胞Bease-2B中的表达情况;使用pMagic 7.1-HDJ1-KD慢病毒转染A549细胞构建HDJ1稳定下调表达的细胞模型,并通过划痕实验、Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果：HDJ1在人肺腺癌组织中呈高表达;HDJ1在A549细胞中呈高表达;细胞划痕实验结果显示,与对照组细胞比较,HDJ1表达下调的A549细胞迁移率下降（P < 0.05）;Transwell实验结果表明,相对于对照组细胞,HDJI表达下调的A549细胞在侵袭和迁移实验中的穿膜细胞数均减少（P < 0.05）。结论：HDJ1在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,并促进肺腺癌细胞的侵袭和迁移能力。