MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN启动子甲基化的实验研究

目的:探讨甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化的方法及意义。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态。结果:膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化可行。     

PTEN表达与膀胱移行细胞癌生物学行为关系的研究

目的探讨PTEN表达与膀胱移行细胞癌生物学行为的关系。方法采用免疫组化SP法检测67例膀胱移行细胞癌和12例正常膀胱粘膜组织中PTEN的表达,按照胞浆内着色程度将染色结果分为阴性、阳性、强阳性三个级别,分析PTEN表达与肿瘤病理分级、临床分期、初发多发、初发复发的关系。结果 PTEN在膀胱移行细胞癌组和正常粘膜组的阳性表达率分别为73.1%和100%,差异具有统计学意义(P<0.05)。PTEN表达随肿瘤病理分级、临床分期升高而下降,呈负相关关系(P<0.05),而在初发组与复发组、单发组与多发组中,PTEN表达未见明显差异。结论 PTEN表达与膀胱癌生物学行为关系密切,检测PTEN表达情况,对于准确评估膀胱移行细胞癌的恶性程度、判断预后有一定帮助。     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中转录表达和启动子甲基化的研究

目的探讨RAssF1A（RAS association domain family1A）基因mRNA表达水平和基因启动子区CPG岛甲基化的关系。方法：用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术鉴测37例膀胱移行细胞癌（bladdert tansitional cell Carcinoma,BTCC）组织和8例正常膀胱组织中RASSFIA基因mRNA表达水平;用甲基化特异性PCR（Methylation—Specific PCR,MSP）。方法研究膀胱移行细胞癌组织和正常膀胱组织中的RASSF1A基因启动子区CPG岛甲基化状态。结果RASSF1 AmRNA在8份正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中的表达率为35．1％（13／37）,二组间表达差异有显著性（P〈0．05）,但在各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性（P〉0．05）。在正常膀胱组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化,但在BTCC组织中RASSFIA基因启动子甲基化频率为51．3％（19／37）。二组间表达差异有显著性（P〈0．05）。在19份启动子异常甲基化的BTCC标本中,有16份同时伴有RASSF1AmRNA表达缺失．,两者存在明显相关性（P〈0．05）。结论RASSFIA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1AmRNA表达缺失或下调,从而使RASSF1A基因失活,参与了肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关。     

膀胱尿路上皮癌中PTEN甲基化与PI3K/Akt信号通路的关系

目的探讨膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子甲基化与PI3K/Akt信号传导通路的关系。方法应用甲基化特异性PCR MSP、Western Blot方法,检测41例膀胱尿路上皮癌和18例正常膀胱组织中PTEN基因启动子甲基化状态,并进一步分析其与PI3K/Akt信号转导通路的相关性。结果膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子甲基化率为53.66%(22/41),明显高于正常膀胱组织的0%(0/18),2组间差异有统计学意义(P0.01);在41例膀胱尿路上皮癌组织中,PTEN甲基化阳性组P-Akt的相对表达量为(1.86±0.13),显著高于阴性组(0.92±0.11),二者差异有统计学意义(P0.05),而2组间Akt的相对表达量则无明显差异。结论膀胱尿路上皮癌中PTEN基因启动子存在高甲基化状态,且与PI3K/Akt信号转导通路蛋白表达呈正相关。     

Survivin和bcl-2在膀胱移行细胞癌中表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及与bcl-2蛋白表达的相关性。方法应用免疫组织链酶卵白素-过氧化物酶复合物（SP）方法，检测40例膀胱移行细胞癌组织标本中Survivin、bcl-2蛋白的表达，并与15例正常膀胱粘膜移行细胞进行对照研究。结果40例膀胱移行细胞癌中，Survivin蛋白的阳性表达率为58．14％，而正常膀胱粘膜组织中未见Survivin蛋白阳性表达（P〈0．01）。Survivin蛋白表达与膀胱移行细胞癌的WHO肿瘤分级有相关性。根据Spearman相关分析表明Survivin与bcl-2蛋白表达正相关（P〈0．01）。结论Survivin基因可通过抑制膀胱移行细胞癌细胞凋亡，对膀胱移行细胞癌的发生发展起重要作用。Survivin的表达与膀胱癌组织中bcl-2蛋白的异常表达密切相关。     

RASSF1A基因启动子区甲基化与膀胱移行细胞癌

目的探讨RASSF1A(RAS association domain family1A)基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果在正常膀胱组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化,在BTCC组织中RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),两组间表达差异有显著性意义(P＜0.05).结论RASSF1A基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中转录表达的研究

目的探讨RASSF1A(RAS association domain fanaly1A)基因mRNA表达水平与膀胱移行细胞癌发生、发展的关系.方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测37例膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell Carcinoma,BTCC)组织和8例正常膀胱组织中RASSFlA基因mRNA表达水平.结果RASSF1A mRNA在8份正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中的表达率为35.1%(13/37),且表达量低于正常膀胱组织,两组间表达差异有显著性(P＜0.05),但在各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无显著性(P＞0.05).结论RASSF1A mRNA表达缺失或下调,参与了肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子甲基化的检测及临床意义

目的检测肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子的甲基化状态，探讨它与该肿瘤相关临床特征间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链（MSP）技术，检测40例肝细胞癌患者血浆中PTEN基因启动子的甲基化状态。结果在肝细胞癌患者血浆中，PTEN启动子甲基化率为32．5％（13／40），而在正常健康人的血浆中未检测到其启动子的甲基化（0／10）（P〈0．01）；且PTEN启动子甲基化率在不同大小肿瘤间差异也有统计学意义（P〈0．05）。结论PTEN基因启动子的异常甲基化可能在肝细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用，并对该肿瘤的生物学行为产生较大影响；血浆中PTEN基因甲基化的检测有助于肝细胞癌的诊断和预后判断。     

Survivin及Caspase-3在浅表性膀胱移行细胞癌中表达及临床意义

目的 Survivin及Caspase-3在浅表性膀胱移行细胞癌表达及其临床意义.方法 应用S-P免疫组织化学法检测47例行TUR-BT术切除膀胱移行细胞癌标本中Survivin和Caspase-3表达的情况,结合临床资料进行分析.所有标本均经病理证实为T1期内.10例正常膀胱黏膜为对照.结果 Survivin在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为68.1%(32/47),而正常对照组中无一例呈阳性表达;Caspase-3在膀胱移行细胞癌标本中的表达阳性率为38.3%(18/47),与对照组阳性率90%(9/10)相比差异有统计学意义(P<0.05).Survivin的表达与膀胱移行细胞癌的组织学分级、初发和复发有关(P<0.05),但与肿瘤数目无关;Caspase-3的表达与膀胱移行细胞癌的初发复发有关,但与组织学分级、肿瘤数目无关.膀胱移行细胞癌中Survivin的表达与Caspase-3表达呈负相关.结论 Survivin及Caspase-3蛋白在膀胱癌组织中选择性表达与膀胱移行细胞癌的分化程度有关,Survivin及Caspase-3蛋白对于判断膀胱移行细胞癌预后有重要临床指导意义.     

实时荧光定量PCR检测膀胱癌TWIST1基因启动子的甲基化状态

目的建立针对TWIST1基因启动子甲基化状态的荧光定量检测方法,进而评估其在膀胱癌临床研究的应用前景。方法应用实时荧光定量PCR方法检测南通地区50例确诊膀胱癌患者和25例非膀胱癌的健康对照者的尿液标本中TWIST1基因启动子的甲基化和非甲基化含量,对其甲基化率进行对比。结果正常人的TWIST1启动子的甲基化率为8.1%～17.3%,平均值为12.3%,膀胱癌患者的甲基化率为25.2%～48.3%,平均值为38.2%,膀胱癌患者的TWIST1基因启动子甲基化率有明显的增高(P<0.05)。结论 TWIST1基因启动子区在膀胱癌中异常甲基化,能够作为有效检测膀胱癌的基因。     

人脐静脉内皮细胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高与MCP-1表达的关系

目的探讨胞内S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)聚集损伤血管内皮细胞的分子基础,为阐明膳食高蛋氨酸摄入促进心血管疾病的病理机制提供实验依据。方法以永生化的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,经不同浓度的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)强效抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24,48或72 h后,利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定HUVEC内炎性分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量,荧光定量-PCR法(qRT-PCR)检测MCP-1 mRNA的相对表达量,甲基化特异PCR法(MSP)分析MCP-1基因启动子甲基化状态。结果HUVEC经DZA处理后,与正常对照相比,胞内MCP-1的含量升高,mRNA的相对表达量上调,但其启动子甲基化方式并不发生改变。结论内皮细胞SAH升高上调MCP-1的表达可能是膳食高蛋氨酸摄入促进心血管疾病的分子机制,但这种作用与MCP-1基因启动子的甲基化状态无关。     

5-氮-2'脱氧胞苷逆转人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因的表达

目的:观察甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne RIZ1基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨人卵巢癌细胞系OVCAR3和AnglneRIZ1基因失活的机制及5-Aza-CdR对RIZ1基因表达的调控。方法:用5-Aza-CdR(浓度为5μmol/L)处理体外培养的人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne后,采用MSP法检测用药前后细胞中RIZl基因的甲基化状态,RT-PCR及Western-blot法检测用药前后细胞中RIZ1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:在人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中,RIZ1基因启动子区呈异常甲基化状态,RIZ1基因mRNA及蛋白表达缺失,经过5-Aza-CdR处理后,RIZ1基因启动子区呈非甲基化状态,其mRNA及蛋白重表达。结论:5-Aza-CdR可改变人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因甲基化状态,从而调控癌细胞中RIZ1基因的表达。     

PTEN、P53、ER、PR与子宫内膜癌的关系

目的:研究抑癌基因PTEN、P53在子宫内膜中的表达,探讨其临床意义。方法:采用免疫组化法,对正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生各20例,子宫内膜癌50例及子宫内膜癌旁组织50例中PTEN及P53的表达进行检测。结果:PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌旁组织及子宫内膜癌中表达缺失率逐渐上升,表达缺失率与组织学分级、ER、PR有关,P<0.05,差异有显著性。P53蛋白表达在子宫内膜癌中阳性率达44%,P53蛋白阳性与组织学分级、临床分期有关,P<0.05,差异有显著性。结论:PTEN、P53二者皆为抑癌基因,皆参与子宫内膜癌的发生、发展,雌孕激素可能调控PTEN的表达。     

5-氮杂胞苷对宫颈癌细胞FHIT基因去甲基化及抑制增殖作用

目的:探讨5-氮杂胞苷对Hela宫颈癌细胞脆性组氨酸三联基因(Fragile histidine triad gene,FHIT)启动子去甲基化作用及对其增殖的影响。方法:采用低浓度和高浓度5-氮杂胞苷作用Hela宫颈癌细胞,分别采用BSP和RT-PCR检测处理前后FHIT基因启动子甲基化状态和mRNA表达,应用MTT法检测细胞增殖改变。结果:Hela宫颈癌细胞FHIT基因启动子表现高度甲基化状态(CG位点甲基化率为80%～100%),mRNA表达完全受到抑制,细胞呈指数增殖状态;低浓度5-氮杂胞苷作用后的甲基化率显著降低(10%～40%),细胞增殖速度降低;高浓度组FHIT基因启动子甲基化状态被完全逆转,mRNA表达明显高于低浓度组,细胞增殖速度显著低于正常组和低浓度组。结论:5-氮杂胞苷可逆转Hela宫颈癌细胞FHIT基因甲基化状态,使基因恢复表达而抑制细胞增殖,去甲基化和抑制增殖作用随5-氮杂胞苷剂量增加而增加。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、30、100、200、500和1000μmol/L),并孵育72h,以MS-PCR分析MTHFR启动子区域甲基化状态,采用RT-PCR测定MTHFR mRNA的表达水平。结果不同浓度Hcy处理人血管平滑肌细胞后,其MTHFR基因启动子区域出现去甲基化,甲基化水平明显降低。RT-PCR结果显示MTHFR mRNA表达增加。结论Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR启动子区域去甲基化,并使MTHFR mRNA表达增加。     

Comparative effects of retinoic acid, vitamin D and resveratrol alone and in combination with adenosine analogues on methylation and expression of phosphatase and tensin homologue tumour suppressor gene in breast cancer cells

Aberrations in DNA methylation patterns have been reported to be involved in driving changes in the expression of numerous genes during carcinogenesis and have become promising targets for chemopreventive action of natural compounds. In the present study, we investigated the effects of all-trans retinoic acid (ATRA), vitamin D? and resveratrol alone and in combination with adenosine analogues, 2-chloro-2'-deoxyadenosine (2CdA) and 9-β-d-arabinosyl-2-fluoroadenine (F-ara-A), on the methylation and expression of phosphatase and tensin homologue (PTEN) tumour suppressor gene in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells. The present results showed that in non-invasive MCF-7 cells, ATRA, vitamin D? and resveratrol possess high efficacy in the reduction of PTEN promoter methylation. It was associated with PTEN induction as well as DNA methyltransferase down-regulation and p21 up-regulation after treatments with vitamin D? and resveratrol, suggesting a complex regulation of the DNA methylation machinery. Vitamin D? and resveratrol improved the inhibitory effects of 2CdA and F-ara-A on PTEN methylation in MCF-7 cells; however, only the combined action of vitamin D? and 2CdA boosted the induction of PTEN expression, suggesting a cooperation of these compounds in additional processes driving changes in PTEN expression. In contrast, in highly invasive MDA-MB-231 cells, only vitamin D? reduced PTEN methylation and induced its expression without notable effects in combined treatments. The present results suggest that natural compounds can find application in epigenetic anticancer therapy aimed at inhibition of promoter methylation of tumour suppressor genes and induction of their expression at early stages of carcinogenesis.     

维吾尔族妇女子宫颈癌CCNA1基因甲基化检测

目的:探讨CCNA1基因启动子区域甲基化与维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法,对40例子宫颈癌患者手术切除肿瘤组织及其40例正常子宫颈组织CCNA1基因启动子区域甲基化进行检测。结果:CCNA1基因在40例子宫颈癌中甲基化率为87.5%,正常子宫颈组织中甲基化率为2.5%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CCNA1基因启动子甲基化与维吾尔族妇女子宫颈癌发生相关。     

PTEN蛋白在子宫内膜癌中的表达和预后关系的研究

目的:探讨子宫内膜腺癌和子宫正常组织及癌前病变组织中抑癌基因PTEN的表达,研究它的表达与子宫内膜腺癌的临床病理学特征及预后的关系。方法:采用免疫组化法,检测10例正常子宫内膜、12例单纯子宫内膜增殖、13例复杂子宫内膜增殖、20例不典型增生和74例子宫内膜腺癌组织中PTEN蛋白的表达,评价其与临床、病理因素和生存率的相关性。结果:抑癌基因PTEN在正常子宫内膜、单纯子宫内膜增殖、复杂子宫内膜增殖、不典型增生和子宫内膜腺癌中阳性表达率呈明显的下降趋势。在不典型增生和子宫内膜腺癌组中PTEN蛋白阳性表达均显著低于正常子宫内膜和单纯子宫内膜增生组(P<0.01)。癌组中PTEN阳性表达的缺失与组织学分级与临床手术分期及生存率有关(P<0.05),与肌层浸润深度无关(P>0.05)。结论:抑癌基因PTEN表达减少与子宫内膜病变的过程密切相关,PTEN蛋白的表达与临床、病理因素有关,对判断子宫内膜腺癌预后有意义。抑癌基因PTEN在子宫内膜癌及癌前病变中是有价值的分子标记物。