抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与卵巢癌的关系

目的:探讨抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与卵巢上皮性癌发生的关系。方法:以卵巢癌组织及卵巢癌细胞系为研究对象。MSP检测RIZ1基因甲基化状况;RT-PCR、蛋白印迹分别检测RIZ1mRNA及蛋白表达;细胞增殖实验检测5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理卵巢癌细胞前后细胞的增殖状况。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的甲基化率分别为25.8%、40%、0%和0%。5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理RIZ1基因发生甲基化的卵巢癌细胞系后,RIZ1基因重新获得表达;且去甲基化处理后,卵巢癌细胞生长均减慢。结论:抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与上皮性卵巢癌的发生有关,DNA甲基化是其表达缺陷的原因之一。     

5-氮-2’脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响

目的分析探讨5-氮-2’脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH1基因甲基化的影响。方法5-Aza-dC处理培养的HL-60细胞，用甲基化特异性PCR（MSP）法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态，RT—PCR法检测用药前后细胞中CDH1mRNA表达的变化。结果HL-60中CDH13启动子区发现甲基化，应用5-Aza—dC能使CDH1基因启动子区CpG岛去甲基化，而且经药物处理后CDH13mRNA的表达较前明显增强。结论5-Aza—dC能逆转CDH13基因甲基化状态，从而调控CDH13基因表达。     

卵巢上皮性肿瘤中RIZ1基因表达缺陷的临床意义

目的:探讨抑癌基因RIZ1在卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢癌细胞系中的表达及其表达变化与卵巢癌发生的关系。方法:以卵巢肿瘤组织及卵巢癌细胞系为研究对象。RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平;蛋白印迹检测RIZ1蛋白表达。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性肿瘤组织及正常卵巢组织中RIZ1 mRNA相对含量的平均值分别为0.42±0.16、0.34±0.12、0.68±0.12及1.17±0.08,RIZ1蛋白相对含量的平均值分别为0.48±0.11、0.38±0.08、0.82±0.11及1.56±0.14。卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性卵巢肿瘤组织分别与正常卵巢组织比较,RIZ1基因的表达差异均有统计学意义(P<0.05);良性卵巢肿瘤组织与卵巢癌组织比较,RIZ1基因的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RIZ1基因表达缺陷与上皮性卵巢癌的发生密切相关。     

5-氮杂脱氧胞苷对肿瘤细胞p16基因甲基化及表达的影响

[目的]探讨甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对肿瘤细胞p16基因的甲基化状态及其表达的影响.[方法]利用5-Aza-CdR（106 mol/L）处理肿瘤细胞株（SPC-Al、BIU-87、T-24、Hep-G2）9 d,甲基化特异性PCR法（MSP）检测了用5-Aza-CdR处理前后4株肿瘤细胞p16基因的甲基化状态,同时利用RT-PCR检测了5-Aza-CdR处理前后p16基因的表达水平差异.[结果]除BIU-87外,其他3种肿瘤细胞p16基因都有不同程度的甲基化,用5-Aza-CdR处理后比处理前p16 mRNA的表达有显著升高（P＜0.01）.[结论]p16基因的过甲基化是导致其表达失活的一个重要机制,而5-Aza-CdR可显著抑制肿瘤细胞p16基因的过甲基化.     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对HL-60细胞株Galectin-1基因的表达及甲基化影响

目的 探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对HL-60细胞Galectin-1基因表达的影响,并进一步分析药物处理后Galectin-1基因启动子区域甲基化状态的改变. 方法用5 μmol/L的5-aza-2dC处理HL-60细胞,采用Real-Time RT-PCR检测Galectin-1基因在药物处理与未处理组中的mRNA表达水平,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)榆测Galectin-1基因启动子区域在药物处理与未处理HL-60细胞中的甲基化水平.结果 Real-Time RT-PCR结果显示Galectin-1在处理后的HL-60细胞中表达上调,MSP结果显示,HL-60细胞Galectin-1基因启动子区存在高甲基化,经5-aza-2dC处理后能够使Galectin-1基因去甲基化.使其甲基化水平下降. 结论启动子区域高甲基化是Galectin-1基因低表达的原因之一,5-aza-2dC能够使Galectin-1基因去甲基化,逆转Galectin-1基因的表达,5-aza-2dC可能在抗急性髓系白血病中发挥重要作用.     

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。     

错配修复基因启动子甲基化对食管癌发生的作用

目的探讨食管癌组织中错配修复基因1(hMLH1)启动子区甲基化状态及与食管癌发生、发展的关系。方法应用甲基化特异性PCR和免疫组织化学链霉菌抗亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S—P法)，检测92例人食管癌组织中hMLH1启动子甲基化状态及蛋白表达。结果92例食管癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化有30例，占32．6％。HMLH1基因启动子区甲基化与食管癌的临床病理无明显相关性；hMLH1基因蛋白表达阳性率为76．1％；hMLH1基因蛋白表达阴性的22例病例中，17例发生了甲基化(77．6％)；而70例hMLH1基因蛋白表达阳性者中，只有13例发生甲基化(18．6％)。结论食管癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化与hMLH1基因蛋白表达缺失密切相关，是导致其错配修复功能缺陷的重要原因之一，hMLH1基因启动子区甲基化可能在食管癌的发生和发展过程中发挥重要作用。     

5-氮杂胞苷对宫颈癌细胞FHIT基因去甲基化及抑制增殖作用

目的:探讨5-氮杂胞苷对Hela宫颈癌细胞脆性组氨酸三联基因(Fragile histidine triad gene,FHIT)启动子去甲基化作用及对其增殖的影响。方法:采用低浓度和高浓度5-氮杂胞苷作用Hela宫颈癌细胞,分别采用BSP和RT-PCR检测处理前后FHIT基因启动子甲基化状态和mRNA表达,应用MTT法检测细胞增殖改变。结果:Hela宫颈癌细胞FHIT基因启动子表现高度甲基化状态(CG位点甲基化率为80%～100%),mRNA表达完全受到抑制,细胞呈指数增殖状态;低浓度5-氮杂胞苷作用后的甲基化率显著降低(10%～40%),细胞增殖速度降低;高浓度组FHIT基因启动子甲基化状态被完全逆转,mRNA表达明显高于低浓度组,细胞增殖速度显著低于正常组和低浓度组。结论:5-氮杂胞苷可逆转Hela宫颈癌细胞FHIT基因甲基化状态,使基因恢复表达而抑制细胞增殖,去甲基化和抑制增殖作用随5-氮杂胞苷剂量增加而增加。     

促性腺激素释放激素对人卵巢癌细胞系OVCAR3体外生长调控作用的研究

目的观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系OVCAR3中的表达,并研究促性腺激素释放激素激动剂（Triptorelin）对卵巢癌细胞体外生长调控作用。方法采用免疫组化SP法检测卵巢癌细胞系OVCAR3 GnRH I受体的表达;分别应用不同浓度Triptorelin作用于细胞,MTT法检测细胞生长抑制率。结果人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRH I受体,Triptorelin可明显抑制GnRH I受体阳性的OVCAR3细胞生长。结论促性腺激素释放激素激动剂Triptorelin通过与人卵巢癌OVCAR3细胞株GnRH I受体结合,发挥抗增殖的作用。     

LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制

目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。     

人端粒酶逆转录酶调控的CD基因对卵巢癌细胞株的选择性杀伤作用研究

[目的]构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的自杀基因—胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶(CD-TK/5-FC)系统对人卵巢细胞及正常细胞株的体外杀伤作用。[方法]应用脂质体转染法将hTERT核心启动子启动质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC系统对上述3种细胞不同的杀伤作用;利用RT-PCR技术检测转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的不表达情况。[结果]卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为23.2%,与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显著增强,对于端粒酶阴性正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;pBTdel-279-TK转染后,3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性。[结论]人端粒酶逆转录酶启动子调控下的CD自杀基因对卵巢癌细胞株选择性杀伤作用治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗方式。     

CD105和 ki67在人卵巢癌细胞中的表达并确定表达部位

目的：检测CD105和Ki67在人卵巢癌细胞中的表达情况及确定其表达部位。方法采用Western blot筛选出6种人卵巢癌细胞系中CD105和Ki67均高表达的细胞系;并用免疫荧光染色法明确CD105和Ki67在细胞内的表达部位。结果CD105和Ki67在人卵巢癌OVCAR3细胞中均高表达;CD105主要表达于OVCAR3细胞的细胞质和细胞膜, Ki67主要表达于OVCAR3细胞的细胞核。结论人卵巢癌OVCAR3细胞中CD105和ki67均呈高表达,CD105定位于细胞质和细胞膜,ki67定位于细胞核,为进一步研究CD105和ki67在卵巢癌发生发展中的作用机制奠定基础。     

达沙替尼联合卡铂对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨达沙替尼单独及联合卡铂应用对人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞生长的影响及可能的分子机制。方法:MTT法检测达沙替尼联合卡铂对人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测达沙替尼联合卡铂处理OVCAR3、HO8910细胞的凋亡率。Western blot检测EphA2蛋白表达变化。结果:达沙替尼单独及联合卡铂应用均可显著抑制人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞的增殖,其作用呈现剂量依赖性,且两药联合作用时抑制率显著增高(P<0.05),显示两药有协同作用;流式细胞术检测显示达沙替尼能使卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞凋亡率随用药浓度增加而增加。结论:体外人卵巢癌OVCAR3、HO8 910细胞对达沙替尼联合卡铂具有药物敏感性;EphA2蛋白的表达可能是达沙替尼联合卡铂诱导卵巢癌细胞的机制。     

DHA but not AA Enhances Cisplatin Cytotoxicity in Ovarian Cancer Cells

Clinical and epidemiological studies show that docosahexaenoic acid (DHA) and arachidonic acid (AA) exert multiple effects on ovarian cancer. While DHA seems to inhibit growth and prevent carcinogenic processes, stimulation of leukotriene B4 receptors BLT1 and BLT2 by several eicosanoids derived from AA plays an important role in mediating cisplatin resistance in ovarian cancer cells. We examined whether DHA and AA exerted antiproliferative effect on epithelial ovarian cancer cells and whether these polyunsaturated fatty acids could alter their susceptibility to cisplatin. Using SKOV3 and OVCAR3 cell lines, we found that DHA but not AA suppressed the cells viability, proliferation, enhanced cell death, and induced activation of caspase-3/7 in the concentration- and time-dependent manner. The OVCAR3 cells were less susceptible to cisplatin than SKOV3 cells. DHA but not AA significantly potentiated cisplatin cytotoxicity in SKOV3 and OVCAR3 cells. We did not observe any significant influence of AA on the above mentioned processes in both cell lines. Similar effect can occur in ovarian cancer patients treated with cisplatin and supplemented with DHA.     

甲基化抑制剂对肾癌细胞株中γ—caenin蛋白表达的影响

目的研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人肾癌A498细胞增殖及^γ-连环蛋白（γ—catenin）表达的影响。方法使用不同浓度（10^-7、10^-6、10^-5mol／L）的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza—CdR处理A498肾癌细胞株。MTT检测5-Aza—CdR对。肾癌细胞株A498抑制作用。细胞免疫化学检测5-Aza—CdR处理A498肾癌细胞株后^γ—catenin表达的变化。结果5-Aza—CdR能明显抑制肾癌细胞的增殖,且与药物浓度及作用时间有关。药物处理后γ-连环蛋白表达增加。结论γ-catenin蛋白表达受甲基化的抑制,提示5-Aza—CdR可使γ-catenin基因去甲基化而抑制A498肾癌细胞株增殖。