RNA干扰研究进展

RNA干扰能使特异基因沉默，目前RNA干扰研究成为热点，并成功的在哺乳动物细胞和小鼠体内抑制部分基因的表达，本文介绍了目前RNA干扰作用机理，导入技术和应用的研究进展，可以预见RNA干扰技术在基因功能研究，细胞信号转导以及疾病的基因治疗等方面有着良好的应用前景。     

甲状腺癌RNA分子研究进展

甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%。目前在DNA水平研究甲状腺癌的发病机制已经相对成熟,但mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等不同RNA分子在甲状腺癌发病机制中的作用尚不清楚。已有研究表明,mRNA、lncRNA和circRNA等RNA分子共同构成动态的分子网络,主要包括lncRNA-miRNA-mRNA与circRNA-miRNA-mRNA两种调控网络,调节基因表达,参与肿瘤细胞的增殖、浸润、迁移和凋亡等过程,调节甲状腺癌的发生与进展。然而,不同类型的RNA分子在甲状腺癌中的具体作用机制尚不清楚。本文将重点对mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA、ceRNA等RNA分子与甲状腺癌的关系进行综述,旨在深入阐明甲状腺癌发病相关RNA分子机制,从而为甲状腺癌的诊断和治疗提供新思路。     

环状RNA在肿瘤中的研究进展

摘 要：环状RNA（circRNA）是一类不同于线性RNAs,可形成共价闭锁环结构,在哺乳动物体内具有巨大基因调控功能的非编码RNAs,其主要来源于外显子或内含子,经索尾插接或套索内含子方式产生,具有数量巨大,进化保守、在细胞质中稳定性高等特点,具有microRNA分子海绵、结合RNA相关蛋白形成RNA-蛋白质复合物和基因转录调控等作用。CircRNA可与肿瘤相关的miRNA形成circRNA-miRNA轴参与肿瘤相关信号通路的调控。全文从circRNA的种类、成环机制、功能及其在肿瘤中的作用及最新进展等方面作一综述。     

环状RNA在肿瘤中的研究进展

摘 要：环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是长链非编码RNAs,与线性RNAs不同,它是共价闭合环路,没有5 ′、3 ′极性和腺苷的尾巴。它们具有种类丰富、进化保守、在细胞质中相对稳定的特性。circRNAs的这些特性带来许多潜在的功能,如作为微小RNA(microRNA,miRNA)的海绵,结合RNA相关蛋白质形成RNA-蛋白质复合物,然后调节基因的转录。重要的是,circRNAs突变或异常表达与各种肿瘤的发生、发展密切相关,可以作为肿瘤的分子标志物或潜在治疗靶点,为肿瘤的早期诊断、疗效评价、预后预测和肿瘤基因治疗提供一个新的靶点。     

甲状腺肿瘤与循环RNA研究进展

甲状腺癌是内分泌系统最常见的肿瘤。研究发现,外周血循环RNA含量在多种恶性肿瘤患者血清中特异性表达,是潜在的肿瘤诊断的生物学标志和药物治疗靶点。血清甲状腺特异mRNA(包括促甲状腺受体mRNA和甲状腺球蛋白mRNA)被报道在甲状腺肿瘤患者中异常表达,可以作为肿瘤诊断及其复发转移的分子标志物。近年研究显示,非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)在细菌、真菌和哺乳动物等多种生物体的活动中可作为癌基因或抑癌基因,对肿瘤的发生、发展发挥调控作用,并且在循环血中稳定存在,ncRNA有希望成为肿瘤诊断的新型无创标志物。该研究介绍与甲状腺肿瘤相关的循环RNA最新研究进展,并着重讨论循环mRNA、微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding,lncRNA)及环状RNA(circRNA)在甲状腺肿瘤发生、转移中的作用。     

RNA类药物在疾病治疗中的研究进展

RNA类小分子可作为治疗性药物应用于各类疾病的治疗.这类小分子主要包括基因表达抑制剂、基因修复剂、蛋白拮抗剂及RNA疫苗,目前已有多种反义RNA和核酶作为基因表达抑制剂正在进行各期临床试验,它们主要用于心血管疾病、肿瘤、药物代谢性疾病、病毒性肝炎和艾滋病等疾病的治疗.蛋白拮抗剂aptamers已作为治疗老年性黄斑和血栓药物进入临床Ⅱ,Ⅲ期试验.RNA疫苗作为免疫调节剂治疗前列腺癌和肾癌的临床试验也在进行中.     

环状RNA与肿瘤研究进展

目的 环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一种不同于线性RNA的新型RNA,其广泛存在于各种生物细胞中.本研究总结了环状RNA的生物起源、作用机制以及其在肿瘤发生发展中的作用.方法 应用中国知网和PubMed中英文数据库,以“circRNAs和肿瘤”等为关键词,检索2014-2016年的相关文献.纳入标准:(1) circRNAs的生物学合成;(2)circRNAs的作用机制;(3) circRNAs在肿瘤发生发展中的作用.根据纳入标准,符合分析的文献35篇.结果 circRNA是一类新型非编码RNA,共价闭合环路所形成的环状结构是它的特征.这类具有组织特异性的转录本主要来自宿主基因的外显子或内含子序列.尽管已提出circRNAs多种生物起源模式,但是对circRNAs的了解还只是冰山一角.circRNAs的表达与多种痰病有关,并且可能作为该疾病新型诊断或预后预测的生物标志物.circRNAs可以调节与肿瘤相关的miRNAs的表达,这种circRNA-miR-NA-mRNA轴可以调控与癌症相关通路,既可促进也可以桔抗肿瘤的发生发展.结论 深入研究环状RNA在肿瘤的发生发展中所起的作用,有望在肿瘤的诊断和靶向治疗以及顸后判断方面提供新的思路.     

环状RNA在消化系统肿瘤中的研究进展

环状RNA(circular RNA,circRNA)作为非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)家族中的新成员,具有诱捕微小RNA(microRNA,miRNA)、调控相关基因表达、参与转录拼接等重要功能.近年来,随着对circRNA的研究不断深入,其在诸多疾病发生发展过程中所发挥的重要作用不断被揭示.消化系统肿瘤作为发病隐匿且预后相对较差的一大类疾病一直威胁着人类健康.随着对消化系统肿瘤认识的加深,关于其分子水平的诊断和治疗研究逐步成为新热点.本文将就circRNA与消化系统肿瘤的相关性,以及其潜在临床价值做一简要综述.     

非编码RNA在口腔癌中的研究进展

口腔癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤,其发病的分子机制复杂且尚需进一步探索。非编码RNA占人类转录本的95%以上,是口腔癌发生发展机制研究的重要切入点,非编码RNA中数量庞大的microRNA、lncRNA和circRNA通过不同的途径参与了生物体内绝大部分的生理病理进程,与mRNA和蛋白质共同构成了一个复杂的调控体系。本文总结了口腔癌相关非编码RNA的研究文献及最新进展,从microRNA、lncRNA和circRNA三个方面为口腔癌的研究及防治提供参考。     

长链非编码RNA作为竞争性内源RNA在食管癌中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)具有与DNA、RNA、蛋白质直接相互作用的能力,在基因表达调控中具有促进或抑制作用。大量的研究表明,lncRNA在多种肿瘤中表达失调,且对肿瘤的发生、发展具有重要作用。然而,lncRNA在食管癌中的作用机制仍然不清楚。近期的一些研究表明,lncRNA可与微小RNA(miRNA)结合,作为其竞争性内源RNA(ceRNA)发挥作用,调控其靶基因的表达,从而参与基因表达的调控。这为揭示lncRNA在食管癌中的分子机制提供了新的思路,也为食管癌的诊断、治疗、预后评估提供了新的生物标志物。本文就lncRNA作为ceRNA在食管癌中的研究进展作一综述。     

Snail沉默和过表达对ADM诱导MDR作用的研究

目的:研究乳腺癌细胞MCF-7中Snail表达与多柔比星(ADM)诱导的多药耐药(MDR)的关系,揭示上皮-间质转化(EMT)对乳腺癌细胞多药耐药的影响.方法:构建snail真核表达载体pCDNA-Snail和RNA干扰载体pSUPER-siRNA,将载体转染乳腺癌细胞MCF-7;用多柔比星对细胞进行诱导.利用细胞毒性实验和多柔比星外排实验,对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术测量耐药细胞中P-糖蛋白(P-gP)表达,Real-Time PCR测量耐药细胞中MDR1、Snail mRNA的表达.结果:细胞毒性实验和多柔比星外排实验结果显示,细胞转染pCDNA-Snail和pSUPER-siRNA后经多柔比星诱导相对耐药指数(RR)分别为111. 3和13.7,细胞内药物荧光强度分别为9.30±0.97和87.40±9.13;Real-Time PCR显示相对于未转染细胞,转染pCDNA-Snail后MDR1,Snail mRNA的表达明显升高,P＜0.01,P-gp表达也显著升高,P＜0.01;转染pSUPER-siRNA细胞则出现相反变化(P＜0.01).结论:Snail沉默和过表达分别使乳腺癌细胞的耐药能力降低或升高.     

Antisense long non-coding RNA PCNA-AS1 promotes tumor growth by regulating proliferating cell nuclear antigen in hepatocellular carcinoma

About 61–72% of transcribed regions possess long noncoding RNAs in antisense orientation (Antisense long noncoding RNAs, aslncRNAs). However, the function of aslncRNAs in HCC remains unclear. We found numerous aslncRNAs were deregulated and might be involved in regulatory gene-net of HCC. The PCNA-AS1, antisense to PCNA, is significantly up-regulated in HCC and could promote tumor growth in vitro and in vivo. The effects of PCNA-AS1 rely on regulation of PCNA via forming RNA hybridization to increase PCNA mRNA stability. We concluded that aslncRNAs might act as upstream regulators in HCC and PCNA-AS1 could serve as a novel therapeutic target.     

RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HER2的表达

[目的] 研究短发夹状RNA（short hairpin RNA；shRNA）对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2表达的影响。[方法] 将编码针对HER2的shRNA的寡核苷酸克隆入哺乳动物表达载体psilencer3．1-H1，形成pshRNA-HER2重组质粒，在多胺的介导下转染SKBr3，RT-PCR分析HER2 mRNA的表达，免疫细胞化学的方法检测蛋白的表达。[结果] DNA测序证实了表达质粒构建成功，与对照相比，shRNA可使HER2 mRNA的水平降低60％。[结论] 构建的pshRNA-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达。     

microRNA及其在淋巴瘤中的表达

 micro RNA（miRNA）是一类长度大约为22 nt的非编码小片段RNA，其进化保守，通过与mRNA的3'UTR相互作用进而调控mRNA的翻译，广泛作用于发育、炎症、凋亡和肿瘤等各个生物学过程。在T淋巴瘤中发现miR-106a和miR-17-92过度表达；在弥漫性大B细胞淋巴瘤和滤泡细胞淋巴瘤中的miR-155，miR-221和miR-21表达上调，并与肿瘤的亚型有关。miR-17 簇过度表达可使凋亡水平下降，表明这些miRNA的主要作用是抑制细胞的死亡。miRNA既可促进肿瘤的发生，又能抑制肿瘤，但其确切机制尚不明。随着研究的深入，miRNA的遗传表型调节功能将会越来越清楚。     

RNA转染树突状细胞肿瘤疫苗研究进展

与DNA疫苗相比,RNA核酸疫苗在安全性和可操作性方面更具有优势.树突状细胞(DC)作为人体内功能强大的抗原递呈细胞,在肿瘤免疫治疗中的作用已得到广泛认可.现就RNA转染DC这一新型治疗型肿瘤核酸疫苗研究和应用进展作一综述.     

结直肠癌外周血和腹膜腔微转移影响因素分析

目的 探讨结直肠癌患者外周血和腹膜腔微转移及其影响因素.方法 收集施行手术治疗的90例结直肠癌患者和25例结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液,RT-PCR方法检测CK-20mRNA和CEAmRNA表达;手术切除标本常规病理学分析.结果 (1)结直肠癌患者外周血CK-20mRNA和CEAmRNA表达率分别为45.6%(41/90)和54.4%(49/90),两者联合检测表达的阳性率为64.4%(58/90);腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA表达阳性率分别为51.1%(46/90)和58.9%(53/90),两者联合检测表达的阳性率为68.9%(62/90);上述指标均随肿瘤的浸润深度、PS因素的递进,以及淋巴结及肝脏转移而增高(P<0.05);在结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液标本中均未检出CK-20mRNA和CEAmRNA的表达.(2)腹腔灌洗液中CK-20mRNA和(或)CEAmRNA表达的阳性率与同一指标在外周血中的表达相比无差异;外周血及腹腔灌洗液中CEAmRNA的表达与CK-20mRNA表达相比也无差异.结论 采用RT-PCR方法检测结直肠癌患者外周血和腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA的表达,有助于筛选亚临床转移和预测病理分期;两者的联合检测更有意义.     

不同转移能力肺癌细胞株差异非编码RNA的鉴定

目的:探讨不同转移能力的肺癌细胞株中miRNA表达差异,并分析miRNA在肺癌转移过程中的功能及意义.方法:利用非编码小RNA芯片技术,检测高转移肺癌细胞株(PGBE1)与低转移肺癌细胞株(PGLH7)间miRNA的表达差异,并通过qPCR鉴定.结果:非编码小RNA芯片分析显示,在不同转移能力肺癌细胞中得到4条差异表达的miRNA,分别为hsa-mir-34b、hsa-mir-23a、hsa-mir-23b和hsa-mir-199a-5p.实时定量PCR对差异的miRNA进行鉴定,4条差异的miRNA在低转移细胞株(PGLH7)中的丰度均高于其在高转移细胞株(PGBE1)中的丰度,P<0.05,与芯片结果吻合.结论:4条miRNA可能与肺癌转移相关,对miRNA功能探讨将有助于研究肺癌转移的分子机制.     

胃癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达及其临床意义分析

目的：探讨胃癌患者外周血癌胚抗原（CEA）mRNA表达及其与相关病理因素、近期疗效、预后的关系。方法：应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测58例胃癌患者化疗前、后20例健康对照者外周血癌胚抗原CEAmRNA表达；同时采用化学发光法测定胃癌患者血清CEA水平。患者随访2年。结果：胃癌患者外周血CEAmRNA阳性率为56．89％（33／58），显著高于健康对照组，二者差异有统计学意义（P〈0．001）；胃癌患者外周血CEAmRNA表达与肿瘤浸润深度（P=0．035）、淋巴结转移（P=0．042）、远处转移（P=0．006）和血清CEA水平相关（P=0．001）；多因素Logistic回归分析表明：淋巴结转移和血清CEA水平是影响胃癌患者外周血CEAmRNA表达的独立因素；血清CEA阳性率31．03％（18／58），胃癌患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于CEA蛋白水平（Χ^2=7．873，P=0．005），TaqMan定量RT—PCR与化学发光法检测CEA的符合率为88．89％（化学发光法检测阳性的病例TaqMan定量RT—PCR检测阳性率）；化疗后CEAmRNA阳性率略有下降，但不显著。近期疗效无效的患者外周血CEAmRNA的阳性率显著高于近期疗效有效的患者（Χ^2=9．992，P=0．002）。平均随访2年后，CEAmRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别是33．33％和77．27％，差异具有显著性（P=0．002）。结论：外周血CEAmRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志；定期监测胃癌患者外周血CEAmRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。肿瘤浸润深度和血清CEA蛋白水平与外周血肿瘤细胞微转移相关。CEAmRNA的检测优于蛋白水平的检测，有助于胃癌的早期诊断。     

RNA干扰沉默PPARγ对人胃癌细胞生长的影响

目的:采用RNA干扰技术探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARγ)表达在人胃癌中的作用.方法:根据人 PPARγ基因序列设计获得3个小干扰RNA(small interfering nRNA,siRNA)靶位点,并构建了3个针对靶位点的一个载体编码一个短发夹状RNA(shRNA)的质粒表达载体(Y1、Y2和Y3),同时合成了1个阴性对照质粒表达载体(HK),采用阳离子脂质体将质粒转染人胃癌MGC803细胞,FCM法观察转染效率.分别采用RT-PCR和Western印迹法检测PPARγ mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,相差倒置显微镜、Hoechst33342染色和FCM检测细胞凋亡.结果:RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默PPARγ表达后抑制人胃癌MGC803细胞增殖并诱导其凋亡.结论:PPARγ高表达可能通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡促进人类胃癌的形成,PPARγ有望成为治疗胃癌的新靶点.