妊娠期肝内胆汁郁积症患者胎盘细胞凋亡及调控基因的研究

通过观察妊娠期肝内胆汁郁积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡及其调控基因P53、bcl-2、bax在胎盘中的表达,探讨细胞凋亡基因在胎盘凋亡中的作用。方法采用光镜检查、原位末端标记法(TUNEL)和免疫组化法对32例ICP患者的胎盘组织中的P53、bcl-2、bax及凋亡指数进行检测,并以18例正常妊娠妇女的胎盘组织作为对照。结果①ICP患者胎盘发生梗死率明显高于正常妊娠组;②ICP患者胎盘细胞中细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞的凋亡指数分别为:42.72±23.73;45.34±21.97;23.03±27.10;34.13±22.49,明显高于正常妊娠组的9.80±9.06;11.20±8.39;4.33±7.69;5.53±7.65,P<0.01。③调控基因P53、bcl-2、bax的表达在两组中无显著性差异。结论①ICP患者胎盘组织中梗死及细胞凋亡明显增加,提示ICP患者围生儿不良结局可能与胎盘组织凋亡水平升高有关;②ICP患者胎盘组织的细胞凋亡是非P53依赖型,并与bcl-2、bax的表达无关。     

妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘细胞凋亡的研究

目的 研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡与胆酸水平的关系,初步探讨ICP患者胎儿预后不良的原因.方法 采用原位末端标记法(TUNEL)检测ICP组和正常妊娠组胎盘细胞凋亡指数,免疫组织化学方法检测两组凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3的表达水平,通过对细胞凋亡指数和凋亡相关基因的检测,了解胎盘细胞的凋亡情况,探讨ICP患者发生胎儿预后不良是否与胎盘细胞凋亡有关.结果 ICP组胎盘细胞凋亡率明显高于正常妊娠组(P＜0.05),且促进细胞凋亡基因bax、caspaae-3表达增加,抑制细胞凋亡基因bcl-2表达降低;随着胆酸水平的升高,bax/bcl-2比例升高,细胞凋亡增加.结论 ICP患者存在胎盘细胞过度凋亡现象,并与血清胆酸水平有相关性;胎盘细胞过度凋亡使胎盘功能减退,导致胎儿预后不良.     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

姬松茸多糖对运动力竭小鼠肾脏的保护作用研究

目的 探讨姬松茸多糖对运动力竭小鼠肾脏的保护作用.方法 将36只昆明种小鼠按数字表法随机分为对照组、力竭组及姬松茸多糖干预组.力竭运动24 h后,处死小鼠取肾脏,一部分肾脏的匀浆液用于检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;另一部分用于实时定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达水平,并计算bcl-2/bax值.结果 与对照组相比,力竭组SOD活性明显降低(P＜0.01),MDA含量明显升高(P＜0.01);而姬松茸多糖组与力竭组相比,力竭SOD活性明显升高(P＜0.01),MDA水平显著降低(P＜0.05).凋亡基因检测结果表明,力竭组与对照组相比,bcl-2的表达水平明显降低(P＜0.01),Bax表达明显升高(P＜0.05),bcl-2/bax比值明显降低(P＜0.01);姬松茸多糖组与力竭组相比,bcl-2表达水平显著升高(P＜0.05),而bax表达水平无明显变化(P＞0.05),bcl-2/bax比值明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姬松茸多糖可以提高肾脏细胞的抗氧化能力,并能通过调节凋亡相关基因的表达水平来增强肾脏细胞抗凋亡的能力.     

重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与HSP70, bax的表达

目的: 观察重度妊高征(SPIH)胎盘组织细胞凋亡现象,研究热休克蛋白70(HSP70)及bax在胎盘组织细胞凋亡中的作用.方法: 随机选取SPIH患者及正常晚孕胎盘组织各25例,用光镜、电镜观察细胞凋亡现象.免疫组化观察HSP70, bax在正常妊娠及SPIH胎盘组织中的表达,Western blot检测HSP70在二者之间的蛋白表达差异. 结果: 在晚孕胎盘组织中可见到凋亡细胞,SPIH组细胞凋亡发生率的中位数及四分位数范围为0.36 %(0.20%-0.46%),正常对照组为0.15%(0.09%-0.21%).二者之间有显著性差异(P<0.05). HSP70在SPIH组与对照组的阳性表达率分别为100%和93%,无显著性差异.但在表达强度上有明显的差别(P<0.01).Western blot的结果显示HSP70在SPIH胎盘组织中的表达增强.bax在SPIH组的阳性率为84%,对照组为43%,有显著性差异(P<0.01).结论: SPIH胎盘组织细胞凋亡增多与bax的表达上调有一致性;HSP70不能抑制胎盘细胞凋亡,可能对胎盘的组织细胞有保护调节的作用.     

胎盘细胞凋亡与妊娠肝内胆汁瘀积症关系的研究

目的 :从胎盘细胞凋亡的表达差异探讨妊娠肝内胆汁瘀积症 (intrahepaticcholestasisofpregnancy ,ICP)围产儿死亡原因。方法 :2 9例妊娠肝内胆汁瘀积症胎盘和 5例正常胎盘 ,分别进行光镜检查、原位细胞凋亡标记实验和 p5 3基因mRNA原位细胞杂交实验。结果 :正常胎盘的细胞凋亡率为 9 11% ,ICP的细胞凋亡率为 2 8 47% ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;p5 3基因在ICP胎盘组织中未见阳性表达。结论 :妊娠肝内胆汁瘀积症胎盘组织的细胞凋亡水平明显高于正常胎盘组织 ,ICP围产儿死亡率高的原因可能与其胎盘组织的细胞凋亡水平增加有关 ;ICP胎盘组织的细胞凋亡可能是非 p5 3基因依赖的。     

创伤性颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因表达的实验研究

目的 探讨不同程度颅脑损伤后bcl-2、bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 将100只SD大鼠分为轻、中、重度损伤组和对照组 ,通过改进的Feeney自由落体损伤装置制作脑损伤模型 ,然后用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法以及免疫组织化学方法 ,对各组大鼠脑组织中的凋亡细胞和bcl-2、bax免疫反应阳性细胞进行检测和统计。 结果 各损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞标记指数 (LI)明显高于未损伤的对照组(均P<0.05) ,bcl-2、bax阳性细胞LI也有所增加 (均P<0.05) ,同时 ,各损伤组bax/bcl-2阳性细胞LI的比值均大于对照组 (均P<0.05) ;轻度、中度组与重度组之间各项指标的差别大多有显著性意义 ,损伤程度重者指标升高明显。结论 bcl-2和bax表达的比例对颅脑损伤后促进细胞凋亡可能起重要的调控作用 ,其表达水平与损伤程度成正比。     

细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织中的表达与意义

目的研究肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织细胞凋亡抑制基因bcl-2和促进基因bax在肾上腺髓质增生发病机制中的作用。方法用免疫组化SP法对肾上腺髓质增生大鼠和正常对照组大鼠的肾上腺组织细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的表达进行检测。结果bcl-2的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(89.3±10.86)个,正常对照组为(21.2±7.65)个(P<0.05)。bax的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(16.1±4.62)个,正常对照组为(54.8±9.31)个(P<0.05)。结论细胞凋亡调控基因参与了肾上腺髓质增生的病理过程。在此调控网络中,bcl-2基因发挥了较为重要的作用,bax基因的表达减少。     

神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.     

胎儿生长受限胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达

目的探讨胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bax、bcl-2的表达及意义。方法收集2014年3月～2017年6月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩患者的胎盘,其中正常妊娠晚期(对照组)、FGR(实验组)各50例。应用免疫组化S-P法检测两组胎盘滋养细胞凋亡相关因子P53、bcl-2、bax的表达。结果实验组bax蛋白表达明显高于对照组,差异有显著性(P0.05),实验组bcl-2蛋白表达低于对照组,差异有显著性(P0.05)。P53蛋白在正常妊娠晚期、FGR组均未见表达或仅有个别细胞表达,差异无显著性(P0.05)。结论 FGR患者胎盘滋养细胞凋亡是非P53依赖的凋亡,凋亡相关因子bax、bcl-2蛋白可能共同介导FGR胎盘滋养细胞的凋亡。     

低氧训练对大鼠肝组织bax、bcl-2与HIF-1α的影响

目的:探讨"高住低练"肝细胞凋亡调控基因,凋亡调控基因与HIF-1α之间关系。方法:健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为6组。低氧暴露组(HE)和高住低练组(Hilo)每天低氧暴露(氧浓度12.6%,相当于海拔4000m)8h和12h,5d/w,共4w;常氧运动组和高住低练组每天均以25m/min的速度训练1h,5d/w,共4w。采用免疫组织化学方法和计算机显微图像分析系统分析bax、bcl-2和HIF-1α阳性表达、阳性物质的定位及定量。结果:(1)Hilo组的bax蛋白表达与HE组和T组相比显著增加(P<0.05),随着低氧暴露时间的延长,呈增长趋势;TUNEL与bax呈正相关(r=0.693,P<0.01);(2)HE组bcl-2蛋白表达显著高于C组,12hHE组的bcl-2蛋白表达比8hHE组显著下降(P<0.05);12Hilo组bcl-2蛋白表达比8Hilo组显著下降,但明显高于C组(P<0.05);(3)肝组织bax/bcl-2值显示,C组与12hHE组和12Hilo组相比具有显著性意义P<0.05);T组与Hilo组相比具有非常显著性意义(P<0.01);(4)HIF-1α与bax呈高度正相关(r=0.958,P<0.01)。结论:bax、bcl-2与HIF-1α基因参与调控肝细胞的凋亡;HIF-1α可能调控bax和bcl-2,并与bax呈高度正相关,调控bax高表达而促进肝细胞凋亡。     

THE ROLES OF bcl-2 GENE FAMILY IN THE PULMONARY ARTERY REMODELING OF HYPOXIA PULMONARY HYPERTENSION IN RATS

Objective. To investigate the roles of apeptosis in the pulmonary artery remodeling of pulmonary hypertension secondary to hypoxia and illustrate the relative genes expression. Methods. Thirty rats were divided into hypoxia group(10%O2, 8h/d) and normal control group. On the 15th day of hypoxia, pulmonary artery pressure and fight ventricular hypertrophy index were measured and pulmonary artery vessels were studied by light microscope. Then terminal deoxynucleotidyl transferase-mediateddUTP nick-end labeling(TUNEL)technique was used to detect nucleosomal DNA fragmentation of apeptotic cells.In situ hybridization and RT-PCR were used to detect the expression level of bel-2 and bax. Results. The pulmonary artery pressure and right ventricular hypertrophy index of hypoxia group were increased significantly, the pulmonary artery wall of hypoxic group become incrassate than control group. Apeptotic cells can be found in lung with hypoxia or without hypexia. Compared with control group, apeptotic index of hypoxic group decreased significantly. Through the methods of in situ hybridization and RT-PCR, we found the expression of bel-2 increased whereas bax decreased significantly in the hypoxic group. Conclusion. The alternation in bel-2 and bax expression induced by hypoxia play an important role in the pulmonary artery remodeling which is the main pathologic change of p~monary hypertension secondary to hypoxia.     

妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘组织中血管内皮生长因子的表达

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)在妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘中的表达.方法采用免疫组织化学方法,检测25例正常妊娠胎盘(对照组)和25例ICP胎盘(ICP组)中VEGF的水平.结果 VEGF在正常妊娠胎盘和ICP胎盘中分布基本一致,分布在滋养细胞、血管及绒毛间质.在ICP组VEGF为轻度表达占76%,中度表达占24%,无重度表达;而在对照组VEGF轻度表达占24%,中度表达占44%,重度表达占32%.ICP组中VEGF表达明显低于对照组(P＜0.01).结论 VEGF在胎盘中主要由绒毛滋养细胞分泌,ICP胎盘中VEGF的减少可能与胎盘血管生成减少及胎盘滋养叶细胞浸入异常有关,在ICP发病中占有一定的地位.     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响

目的研究在体外染毒条件下硒对镉转化人支气管上皮细胞系16HBE凋亡和癌基因表达的影响。方法用0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞24h,用流式细胞术检测凋亡,用RT-PCR检测p53,bcl-2和bax表达。结果 0.625、1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠染毒镉转化16HBE细胞后,随硒剂量升高细胞凋亡率增高,相关系数r=0.987 9(P<0.01),并且在1.25、2.5和5.0μmol/L亚硒酸钠剂量组的凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。亚硒酸钠可以抑制镉转化16HBE细胞p53和bcl-2的表达(P<0.05或P<0.01),bax表达虽有所增强但P>0.05。进行相关性分析,细胞凋亡与p53和bcl-2表达呈负相关,相关系数r分别为-0.923 6(P<0.01)和-0.862 1(P<0.05),而细胞凋亡与bax表达呈正相关,相关系数r=0.781 8(P<0.05)。p53表达和bcl-2表达呈正相关,相关系数r=0.894 1(P<0.05)。p53、bcl-2表达和bax表达之间呈显著负相关,相关系数分别为-0.822 2(P<0.05)和-0.961 3(P<0.01)。结论亚硒酸钠处理镉转化16HBE细胞,通过使p53和bcl-2表达下调、bax表达上调,诱导细胞凋亡从而起到抑制细胞恶性转化的作用。     

生长抑素与大肠癌细胞凋亡及调控基因bcl-2、bax及p53关系的研究

目的　探讨生长抑素 (SS)与大肠癌细胞凋亡指数 (AI)和凋亡调控基因p5 3、bcl 2、bax的关系。方法　采用免疫组织化学SABC法和分子生物学细胞原位凋亡检测技术中的TUNEL法 ,检测 6 2例大肠癌组织中SS、p5 3、bcl 2、bax及细胞凋亡的表达情况。结果　在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组 (P <0 .0 1) ;p5 3、bcl 2、bax阳性表达率在SS低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别 (P <0 .0 5 ) ,其中bax在SS高表达组、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;bcl 2与其相反。p5 3在SS高表达组的阳性表达率明显低于低表达组 (P <0 .0 5 ) ;而p5 3在SS中表达组表达的阳性表达率低于低表达组 ,但其统计无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论　生长抑素对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 p5 3、bcl 2、bax基因的异常表达有关     

乙肝表面抗原阳性孕妇胎盘组织中bcl-2、bax和HBcAg的表达

目的 通过检测乙肝表面抗原（HBsAg）阳性孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax基因及HBcAg的表达，探讨bcl-2、bax与HBcAg之间的关系。方法 46例HBsAg阳性孕妇足月产胎盘（排除其他疾病）为HBV组，25例HBsAg阴性（HBV-DNA阴性）足月产妇胎盘做为对照组。HBV组中根据HBcAg结果分为阳性组和阴性组。采用免疫组化法测定两组孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax、HBcAg的表达。结果 （1）HBV组和对照组比较bcl02基因表达无统计学意义（P〉0．05），bax基斟表达阳性率明显高于对照组，两者比较有统计学意义（P〈0．05）；（2）胎盘组织细胞中HBcAg的表达：HBcAg阳性信号表达于胎盘各层细胞中，滋养层细胞感染率为41．3％，绒毛问质细胞感染率为15．2％，绒毛毛细血管内皮细胞感染率为6．5％；（3）HBcAg阳性组与HBcAg阴性组中bcl-2基因表达比较无统计学意义（P〉0．05），bax基因表达在HBcAg阳性组明显高于HBcAg阴性组，有统计学意义（P〈0．05）。结论 HBV感染孕妇胎盘组织中bax表达明显升高，提示bax可能参与了胎盘组织细胞凋亡的过程；HBsAg阳性孕妇胎盘中HBcAg可能是逐层感染胎盘各型细胞，且胎盘组织中HBcAg阳性者bax表达与HBcAg关系密切。     

大肠癌组织中bcl-2和bax基因蛋白表达及临床意义

目的　探讨bcl- 2和bax蛋白在大肠癌表达及其与肿瘤发生、浸润及预后的关系。方法　应用免疫组化催化信号放大系统(CSA)检测 90例大肠癌bcl- 2和bax蛋白的表达状况。结果　大肠癌组织bcl- 2阳性率显著高于正常大肠粘膜组织 (67.8%比36 .7% ,P <0 .0 5) ;bax蛋白表达阳性率显著低于正常大肠粘膜组织 (43 .3 %比 66 .7% ,P <0 .0 5)。结论　大肠癌组织中有不同水平的bcl- 2蛋白高表达和bax蛋白的低表达 ,两者通过参与调节细胞凋亡而与大肠癌的发生及化疗效果有关 ,但与大肠癌病理类型、浸润程度、临床分期及患者生存状态无关。